يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل واستزراع الخلايا الصفراوية الأولية من الفئران المصابة بمرض الكبد المتعدد الكيسات باستخدام طريقة الهضم المكونة من خطوتين

913 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68202

⸱

مايو 16, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Oncology, Tianjin First Central Hospital, School of Medicine, Nankai University, 2The Province and Ministry Co-sponsored Collaborative Innovation Center for Medical Epigenetics, Key Laboratory of Immune Microenvironment and Disease (Ministry of Education), State Key Laboratory of Experimental Hematology, Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول طريقة هضم محسنة من خطوتين لعزل الخلايا الصفراوية الأولية عالية النقاء وعالية الجدوى من الفئران والفئران البرية المصابة بمرض الكبد المتعدد الكيسات.

الملخص

في هذا البروتوكول ، قمنا بتحسين طريقة الهضم المكونة من خطوتين لعزل خلايا الأقنية الصفراوية الأولية عالية النقاء وعالية الجدوى من الفئران والفئران من النوع البري المصابة بمرض الكبد المتعدد الكيسات (PLD). بعد تخدير الفئران ، تم تخثر الكبد من خلال الوريد الأجوف السفلي مع 50 مل من المحلول أ ، متبوعا ب 30 مل من المحلول ب عند 37 درجة مئوية لهضم أنسجة الكبد إنزيميا. تم إجراء التفكك الميكانيكي والاهتزاز والتشريح المجهري لإزالة الخلايا المتني الملتصقة ، وترك شجرة صفراوية سليمة. ثم تم فرم الشجرة الصفراوية جيدا وهضمها مع الرج لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية. تم جمع المعلق أحادي الخلية الناتج باستخدام مصفاة خلية 70 ميكرومتر. تم تنقية الخلايا الصفراوية باستخدام العزل المناعي المغناطيسي. تم تحضين تعليق الخلية بجسم مضاد مضاد ل EpCAM تحت الدوران لمدة 45 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، متبوعا بإضافة حبات البروتين G ومزيد من الدوران لمدة 45 دقيقة أخرى عند 4 درجات مئوية. بعد ثلاث غسلات باستخدام PBS ، تم جمع الخلايا الصفراوية باستخدام فاصل مغناطيسي. تم تعليق الخلايا الصفراوية الأولية المنقاة في وسط زراعة الخلايا الصفراوية وزرعها في أطباق زراعة الخلايا المغلفة بكولاجين ذيل الفئران من النوع الأول 1 ملغم/مل. تم تأكيد نقاء الخلايا الصفراوية عن طريق التلوين المناعي للعلامة الخاصة بالخلايا الصفراوية السيتوكيراتين -19 (CK19). على الرغم من أن هذه الدراسة ركزت على عزل الخلايا الصفراوية الأولية من الفئران البرية و PLD ، إلا أننا واثقون من أنه يمكن تطبيق البروتوكول على نماذج الفئران الأخرى المرضية أيضا. تسهل طريقة الهضم المفصلة المكونة من خطوتين إجراء دراسات مختبرية لاعتلال القنوات الصفراوية وتطوير العلاجات المستهدفة.

المقدمة

تشكل الخلايا الصفراوية ، وهي الخلايا الظهارية المبطنة للشجرة الصفراوية داخل الكبد ، طبقة أحادية الطبقة وتشكل ما يقرب من 3-5٪ من إجمالي خلايا الكبد1. تتصل هذه الخلايا داخل الكبد لإنشاء شبكة مجاري معقدة ثلاثية الأبعاد2. في ظل الظروف العادية ، تؤدي الخلايا الصفراوية وظائف حيوية ، بما في ذلك الإفراز والامتصاص وإصلاح الإصابات والعمل كحاجز مناعي ، وبالتالي تلعب دورا مهما في فسيولوجيا الكبد وعلم الأمراض. ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي ضعف الخلايا الصفراوية إلى أمراض مختلفة ، بما في ذلك مرض PLD ، والتهاب الأقنية الصفراوية المصلب الأولي ، وسرطان القنوات الصفراوية ، وإصابة الكبد الصفراوية3،4،5.

من بين الأمراض المرتبطة باعتلال القنوات الصفراوية ، يبرز مرض PLD كاضطراب وراثي يتميز بتكوين العديد من الخراجات المملوءة بالسوائل التي تنشأ من خلايا القنوات الصفراوية. يؤدي التضخم التدريجي لهذه الخراجات إلى تقليل نوعية حياة المرضىبشكل كبير 6. لا تزال خيارات العلاج الحالية ل PLD غير كافية ، وتقدم فعالية محدودة بينما غالبا ما ترتبط بمعدلات تكرار عالية ومضاعفات7. هذا يسلط الضوء على الحاجة الملحة لتطوير استراتيجيات علاجية آمنة وفعالة لتلبية المتطلبات السريرية غير الملباة في إدارة PLD.

تم إعاقة البحث في آليات اعتلال القنوات الصفراوية ، بما في ذلك PLD ، بشكل كبير بسبب عدم وجود خطوط خلوية مناسبة. لمعالجة هذا القيد ، أثبت استخدام نماذج الفئران المرضية وعزل الخلايا الصفراوية الأولية عن هذه النماذج للتجارب في المختبر أنه لا يقدر بثمن للكشف عن الآليات الجزيئية الكامنة وراء اعتلال القنوات الصفراوية وتحديد الاستراتيجيات العلاجية المحتملة.

في دراستنا الأخيرة8 ، نجحنا في إنشاء نموذج فأر PLD باستخدام فئران الضربة القاضية المشروطة Pkd1 (KO). لوحظت تكيسات الكبد في وقت مبكر من شهر واحد بعد حذف Pkd1 وزاد حجمها تدريجيا بمرور الوقت. في حين أن بروتوكولات عزل الخلايا الصفراوية من الفئران والبشر موثقة جيدا9،10 ، فإن عزل الخلايا الصفراوية الأولية عن الفئران لا يزال يمثل تحديا خاصا نظرا لصغر حجمها والبنية المعقدة للوريد البابي والجهاز الصفراوي. تواجه الأساليب الحالية قيودا كبيرة ، بما في ذلك نقاء الخلايا المنخفض ، وضعف الجدوى ، والإجراءات المعقدة ، والتكاليفالمرتفعة 11،12.

تقدم هذه المخطوطة بروتوكولا مفصلا لعزل الخلايا الصفراوية الأولية عالية النقاء من الفئران باستخدام طريقة الهضم المكونة من خطوتين. يهدف هذا النهج الأمثل إلى دعم الدراسات المختبرية ، وتسهيل التحقيق في الآليات الجزيئية الكامنة وراء اعتلال الأقنية الصفراوية وتعزيز تطوير استراتيجيات علاجية جديدة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية والعناية بالفئران من قبل اللجنة الأخلاقية لجامعة تيانجين الطبية (رقم الوثيقة: TMUa-MEC 2022016).

1. إعداد المعدات والحلول

  1. تعقيم الأدوات الجراحية (المقص والملقط ومقابض المشرط) عن طريق التعقيم قبل يوم واحد على الأقل من عزل الخلايا.
  2. قبل يوم واحد على الأقل من عزل الخلايا ، قم بإعداد وسط ثقافة الخلايا الصفراوية باستخدام الكواشف المدرجة في الجدول 1. قم بتعقيم وسط ثقافة الخلايا الصفراوية عن طريق تصفيتها من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر.
  3. قبل يوم واحد على الأقل من عزل الخلايا ، قم بإعداد الحل A والمحلول B باستخدام الكواشف المدرجة في الجدول 2 لتروية كبد الفئران. قم بتعقيم المحلول A والمحلول B عن طريق التعقيم أو الترشيح من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر وضبط درجة الحموضة إلى 7.35 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم المعقم تحت التحريك اللطيف.
    ملاحظة: يمكن تخزين وسط ثقافة الخلايا الصفراوية والمحلول A والمحلول B عند 4 درجات مئوية لمدة شهر واحد على الأقل.
  4. قبل بدء التجربة ، أضف مسحوق الكولاجيناز II إلى المحلول B واخلطه برفق للحصول على تركيز نهائي يبلغ 0.5 مجم / مل. قم بتسخين كل من المحلول A والمحلول B في حمام مائي 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
  5. مباشرة قبل بدء التجربة ، قم بإعداد أطباق 6 سم مليئة ب PBS المعقم وضعها على الثلج لإبقائها باردة أثناء العملية.

2. نضح هضم أنسجة الكبد

  1. تخدير الفأر باستخدام جرعة زائدة من استنشاق الأيزوفلوران. ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف وثبته بشريط لاصق لتسهيل الإجراء.
  2. افتح تجويف البطن للفأر بعد تعقيم البطن بنسبة 75٪ من الإيثانول ثم اربط عقدة حول الوريد الأجوف السفلي باستخدام إبرة متأرجحة. اشطف قسطرة وريدية 24 جم بالمحلول A باستخدام حقنة سعة 20 مل.
  3. أدخل القسطرة الوريدية في الوريد الأجوف السفلي أسفل العقدة المنزلقة ، وقم بتأمين العقدة المنزلقة ، وثبت القسطرة في مكانها بشريط لاصق.
  4. قم بتنقية الكبد ب 50 مل من المحلول A من خلال الوريد الأجوف السفلي باستخدام حقنة سعة 20 مل ، وشق الوريد البابي الكبدي لتصريف محلول التروية. حافظ على معدل التروية عند 10 مل / دقيقة.
  5. استمر في التروية باستخدام 30 مل من المحلول B الذي يحتوي على الكولاجيناز II بمعدل تدفق 3.5 مل / دقيقة باستخدام مضخة تمعجية.
    ملاحظة: هذه الخطوة مخصصة لهضم أنسجة الكبد.
  6. قم بإزالة أنسجة الكبد التي تم إغراقها بنجاح وضعها في طبق 6 سم مليء ب PBS المعقم البارد.

3. عزل الخلايا الصفراوية

ملاحظة: نظرا لأن عدد الخلايا الصفراوية في الفئران العادية منخفض نسبيا ، فمن المستحسن استخدام مجموعة من 2-6 فئران لهذا الإجراء. ومع ذلك ، بالنسبة لنماذج أمراض الفئران ذات التكاثر غير الطبيعي للخلايا الصفراوية ، مثل PLD ، فإن الخلايا الصفراوية من فأر واحد كافية. ما لم ينص على خلاف ذلك ، يجب دائما حفظ العينات والكواشف على الجليد ، ويجب تنفيذ جميع الإجراءات في خزانة السلامة البيولوجية.

  1. قم بفصل أنسجة الكبد ورجها ميكانيكيا باستخدام ملقط منحني. بعد ذلك ، قم بإجراء تشريح مجهري تحت مجهر تشريح لإزالة الخلايا المتني الملتصقة ، وترك شجرة صفراوية سليمة. قم بإزالة أنسجة المرارة قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
    اغسل الأنسجة 2x باستخدام PBS.
  2. قم بفرم الشجرة الصفراوية جيدا باستخدام شفرة جراحية ، وهضمها في 3 مل من محلول الهضم (الجدول 3) لكل فأر مع الرج (90 دورة في الدقيقة) عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. عند علامة 30 دقيقة، قم بسحب الخليط برفق باستخدام طرف ماصة لخلطه جيدا.
    ملاحظة: يجب تحضير محلول الهضم طازجا قبل الاستخدام.
  3. مرر معلق الخلية عبر مصفاة خلية 70 ميكرومتر. استخدم مكبس حقنة سعة 5 مل أو 10 مل للضغط برفق على تعليق الخلية من خلال المصفاة. اغسل المصفاة باستخدام PBS.
  4. جهاز الطرد المركزي لتعليق الخلية عند 500 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. اغسل الخلايا 3 مرات باستخدام وسيط RPMI.
  5. جهاز الطرد المركزي مرة أخرى عند 500 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  6. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في 900 ميكرولتر من وسط RPMI الذي يحتوي على 40 وحدة / مل DNase I. أضف 2 ميكروغرام من الجسم المضاد المضاد ل EpCAM واحتضن التعليق على دوار (20 دورة في الدقيقة) عند 4 درجات مئوية لمدة 45 دقيقة.
  7. جهاز طرد مركزي عند 500 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  8. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في 1 مل من وسط RPMI الذي يحتوي على 40 وحدة / مل DNase I. حبات البروتين G المسبق مع 1 مل من وسط RPMI. أضف 20 ميكرولتر من حبات البروتين G إلى تعليق الخلية واحتضانها بالدوران (20 دورة في الدقيقة) عند 4 درجات مئوية لمدة 45 دقيقة أخرى.
    ملاحظة: يمكن أيضا احتضان الجسم المضاد ل EpCAM مسبقا باستخدام حبيبات البروتين G لإنشاء مركب الأجسام المضادة للحبة قبل إدخال تعليق الخلية.
  9. اغسل الخلايا 3x باستخدام PBS باستخدام فاصل مغناطيسي.
  10. قم بإجراء عد الخلايا وتقييم صلاحية الخلايا باستخدام تلطيخ التربان الأزرق (0.04٪ ، 3 دقائق) على مقياس كثافة الدم.
    ملاحظة: ليست هناك حاجة لإزالة الخرزات من الخلايا الصفراوية ، فسوف تنفصل بشكل طبيعي بمجرد بدء الزراعة ولن تتداخل مع زراعة الخلايا.

4. ثقافة الخلايا الصفراوية

ملاحظة: قم بإعداد أطباق زراعة الخلايا الطازجة المطلية بالكولاجين من ذيل الفئران من النوع الأول قبل زراعة الخلايا الصفراوية. قم بتبريد جميع الكواشف على الجليد.

  1. باتباع تعليمات الشركة المصنعة ، امزج DDHالمعقم 2O و 10x PBS و 1 N NaOH وكولاجين ذيل الفئران من النوع الأول لتحقيق تركيز نهائي يبلغ 1 مجم / مل من النوع الأول من كولاجين ذيل الفئران في 1x PBS. قم بتغطية أطباق زراعة الخلايا بالتساوي بالخليط ، وضع الأطباق في حاضنة على حرارة 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة 30 دقيقة للسماح للكولاجين بالتصلب.
  2. اغسل أطباق زراعة الخلايا المطلية بالكولاجين من النوع الأول باستخدام PBS الدافئ مسبقا.
  3. أعد تعليق الخلايا الصفراوية في وسط ثقافة الخلايا الصفراوية الدافئ مسبقا. قم بزرع معلق الخلية على أطباق زراعة الخلايا المغلفة بالكولاجين من النوع الأول من ذيل الفئران 1 مجم / مل واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2. استبدل الوسيط كل يومين.

5. مرور الخلايا الصفراوية وحفظها بالتبريد

  1. اغسل الخلايا الصفراوية مرتين باستخدام PBS ، ثم احتضن الخلايا في 0.25٪ تربسين عند 37 درجة مئوية لمدة 5-10 دقائق.
  2. أضف كمية متساوية من وسط ثقافة الخلايا الصفراوية لتحييد التربسين ، ثم جهاز الطرد المركزي عند 500 × جم لمدة 5 دقائق.
  3. قم بإعداد أطباق زراعة الخلايا المطلية بالكولاجين من النوع الأول كما هو موضح في الخطوة 4.1.
  4. اتبع الخطوتين 4.2 و 4.3.
  5. إذا كان الحفظ بالتبريد مطلوبا ، فقم بتعليق الخلايا الصفراوية في وسيط التخزين (9: 1 FBS: DMSO) وتخزينها في فريزر -80 درجة مئوية أو نيتروجين سائل. قم بإذابة الخلايا حسب الحاجة للاستخدام في المستقبل.

6. التحقق من صحة الخلايا الصفراوية

ملاحظة: تم تقييم نقاء الخلايا الصفراوية عن طريق تلطيخ علامة الخلايا الصفراوية CK19.

  1. اغسل الخلايا الصفراوية 2x باستخدام PBS ، ثم ثبت الخلايا في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 15 دقيقة.
  2. اغسل الخلايا الصفراوية باستخدام PBS ، ثم تخلل الخلايا بنسبة 1٪ Triton X-100 لمدة 8 دقائق.
  3. اغسل الخلايا الصفراوية باستخدام PBS ، ثم قم بسد الخلايا في 5٪ BSA لمدة 1 ساعة.
  4. اغسل الخلايا الصفراوية باستخدام PBS ، ثم احتضن الخلايا بالجسم المضاد الأساسي ضد CK19 (التخفيف 1:12 مع 2٪ BSA) طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  5. اغسل الخلايا الصفراوية 2x باستخدام PBS ، ثم احتضن الخلايا بالجسم المضاد الثانوي Alexa Fluor 488 المضاد للفئران (التخفيف 1: 1,000 مع PBS) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
  6. اغسل الخلايا الصفراوية باستخدام PBS ، وصمة عار ب 4 '، 6-diamidino-2-phenylindole لمدة 15 دقيقة ، وراقبها تحت المجهر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يظهر مخطط سير العمل لعملية الهضم المكونة من خطوتين المستخدمة لعزل الخلايا الصفراوية في الشكل 1. يستغرق الإجراء بأكمله ~ 5 ساعات. أولا ، يتم غرق الكبد بالمحلول A من خلال الوريد الأجوف السفلي لإزالة الدم ، كما يتضح من شحوب الكبد. ثم يتم حشو الكبد بالمحلول B الذي يحتوي على الكولاجيناز II لبدء هضم الأنسجة. خطوة الهضم الأولية هذه حساسة للوقت ، ويتضح الهضم الناجح من خلال أن تصبح الأنسجة ناعمة بشكل ملحوظ. بعد ذلك ، يساعد التفكك الميكانيكي والاهتزاز اللطيف باستخدام م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوفر هذا البروتوكول طريقة مفصلة لعزل الخلايا الصفراوية الأولية عالية النقاء من الفئران باستخدام عملية هضم من خطوتين ، مما يتيح دراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء اعتلال الأقنية الصفراوية. هناك العديد من الخطوات الحاسمة ضرورية لضمان العزلة الناجحة لخلايا القنوات الصفراوية.

تتمثل الخطوة الحاسمة الأولى في ضمان التروية والهضم الفعالين باستخدام الحل A والمحلول B. تم تأكيد التروية الناجحة مع المحلول A من خلال شحوب الكبد ، وتم تأكيد الهضم الناجح مع المحلول B من خلال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال منح من لجنة التعليم في بلدية تيانجين (2022ZD054 إلى LZ)

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.22 & م فلترPALL4612
0.25٪ TrypsinGibco25200-056
10 مل حقنةKONSMED10 مل 1.2 * 30TWLB
20 مل حقنةKONSMED20 مل 1.2 * 30TWLB
24 G قسطرة وريديةWEGO24GX19   مم / Y-G
3،3 '، 5-triiodo-L-thyronineSigmaT55161.7 مجم / مل مخزون
4٪ بارافورمالديهايدSolarbioP1110
5 مل حقنةKONSMED5 مل 0.7 * 30TWLB
أطباق 6 سمThermo Scientific150462
70 & micro ؛ مصفاة الخلايا mCorning352350
الأجسام المضادة المضادة ل CK19DSHBTROMA-III
الأجسام المضادة ل EpCAMDSHBG8.8
BSASolarbioA8020
CaCl2< / sub>Sangon BiotechA5013302M مخزون
تركيز الدهون المحدد كيميائيا (100x)Gibco11905-031
كولاجيناز الثانيورثينجتونLS004176
كولاجيناز XIسيجماC76573.2 مجم / مل مخزون
ديكساميثازونسيجماD175610 مجم / مل مخزون
مجهر تشريحلايكاEZ4
DMEM / F12 (1: 1)VivaCell biosciencesC3130-0500
DMSOSigmaD2650
DNase ISigmaD451310 U/μ L مخزون
الحمار المضاد للفئران Alexa Fluor 488 الجسم المضاد الثانويInvitrogenA21208
EGTASolarbioE805050 ملي مولار (PH = 8) مخزون
عامل نمو البشرة (1 مجم / مل)سيجماSRP3196
إيثانولامينسيجماE9508
مصل الأبقار الجنينيVivaCell biosciencesC04001-500
فورسكولينسيجماF391720 ملي أسهم
محلول الجنتاميسين / الأمفوتريسين (500x)جيبكوR01510
مقياس الدمQIUJINGXB. ك 25.
هيبسسيجماH4034
هيالورونيدازسيجماH350610 مجم / مل مخزون
الأنسولين - ترانسفيرين - السيلينيوم (100x)جيبكو41400045
إيزوفلورانRWDR510-22-10
KClسانجون للتكنولوجيا الحيويةA100395
L-Glutamine (200 ملم)SigmaG7513
مغناطيسيPromegaZ5342
MEM أحماض أمينية غير أساسية (100x) محلولفيتامين Gibco11140050
MEM (100x) Gibco11120052
MgCl2< / sub> SangonBiotechA1002881.5 M
مخزون Na Pyruvate  (100 مل)Gibco11360070
Na2< / sub>HPO4< / sub>Sangon BiotechA600487
NaClSangon BiotechA610476
NaOHSangon BiotechA6206171 N مخزون
PBSVivaCell biosciencesC3580-0500
PBSSolarbioP1010
البنسلين ستربتومايسين (100x)Gibco15140-122
مضخة تمعجيةBaodingRongbaiYZ1515PPS
حبات البروتين GInvitrogen10004D
RotatorKylin-BellQB-528
RPMIVivaCell biosciencesC3010-0500
مثبط التربسين فول الصوياSigmaT652210 مجم / مل مخزون
إبرة متأرجحةJinhuan MedicalHM601
Triton X-100SolarbioT8200
Trypan blueSigmaT614610 مجم / مل مخزون
النوع الأول ذيل الفئران الكولاجينBD354236
فاصل

المراجع

  1. Wang, Z., et al. Human cholangiocytes form a polarized and functional bile duct on hollow fiber membranes. Front Bioeng Biotechnol. 10, 868857(2022).
  2. Li, P., et al. Three-dimensional human bile duct formation from chemically induced human liver progenitor cells. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1249769(2023).
  3. Fabris, L., et al. Pathobiology of inherited biliary diseases: a roadmap to understand acquired liver diseases. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (8), 497-511 (2019).
  4. Jalan-Sakrikar, N., et al. Central role for cholangiocyte pathobiology in cholestatic liver diseases. Hepatology. , (2024).
  5. Ilyas, S. I., Gores, G. J. Pathogenesis, diagnosis, and management of cholangiocarcinoma. Gastroenterology. 145 (6), 1215-1229 (2013).
  6. Perugorria, M. J., et al. Polycystic liver diseases: advanced insights into the molecular mechanisms. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11 (12), 750-761 (2014).
  7. Masyuk, T. V., Masyuk, A. I., LaRusso, N. F. Polycystic liver disease: Advances in understanding and treatment. Annu Rev Pathol. 17, 251-269 (2022).
  8. Ji, R., et al. Multi-omics profiling of cholangiocytes reveals sex-specific chromatin state dynamics during hepatic cystogenesis in polycystic liver disease. J Hepatol. 78 (4), 754-769 (2023).
  9. Tabibian, J. H., et al. Characterization of cultured cholangiocytes isolated from livers of patients with primary sclerosing cholangitis. Lab Invest. 94 (10), 1126-1133 (2014).
  10. Muff, M. A., et al. Development and characterization of a cholangiocyte cell line from the PCK rat, an animal model of autosomal recessive polycystic kidney disease. Lab Invest. 86 (9), 940-950 (2006).
  11. Nagaya, M., Katsuta, H., Kaneto, H., Bonner-Weir, S., Weir, G. C. Adult mouse intrahepatic biliary epithelial cells induced in vitro to become insulin-producing cells. J Endocrinol. 201 (1), 37-47 (2009).
  12. Karjoo, S., Wells, R. G. Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes. J Vis Exp. (88), e51621(2014).
  13. Kudira, R., et al. Isolation and culturing primary chaolangiocytes from mouse liver. Bio Protoc. 11 (20), e4192(2021).
  14. Ueno, Y., et al. Evaluation of differential gene expression by microarray analysis in small and large cholangiocytes isolated from normal mice. Liver Int. 23 (6), 449-459 (2003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

عزل كبد الفأرالعزل المناعي المغناطيسيالشجرة الصفراويةزراعة الخلاياسيتوكيراتين-19جسم مضاد لـ EpCAMفاصل مغناطيسي

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.