يقدم هذا البروتوكول إجراء للتسريب الموجه بالصور في نظام شجرة الأقنية للغدة الثديية للأرانب. نوضح التسريب المتحكم فيه لمحلول استئصال قائم على الإيثانول يحتوي على عامل تباين بالأشعة السينية في جميع فتحات الحلمة عن طريق التصوير في الوقت الفعلي بالتنظير الفلوري.
مقالة منهجية
تصور الأشعة السينية للتسريب الاستئصالي القائم على الإيثانول داخل القناة للوقاية من سرطان الثدي في نماذج الأرانب
Katlyn Pavlik1,2 , Kendra Eagleson3 , Katarzyna Kempinska1,2 , Jacquelyn Del Valle3 , Rachel Griffin3 , Elizabeth Phelps1 , Sarah Marei1 , Matti Kiupel4 , Rebecca Linton5 , Lorenzo F. Sempere1,2
1Precision Health Program, Michigan State University, 2Department of Radiology, College of Human Medicine, Michigan State University, 3Campus Animal Resources, Michigan State University, 4Veterinary Diagnostic Laboratory, College of Veterinary Medicine, Michigan State University, 5Veterinary Medical Center, College of Veterinary Medicine, Michigan State University
يفتح في علامة تبويب جديدة
في هذه المقالة
ملخص
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
الملخص
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
سرطان الثدي هو السبب الرئيسي الثاني للوفاة بين النساء. في حين أن هناك عددا قليلا من التدخلات الاستباقية للنساء ذوات الخطورة المتوسطة ، فإن استئصال الثدي الوقائي هو التدخل الأكثر فعالية وتقليل المخاطر للنساء المعرضات لمخاطر عالية. ومع ذلك ، فإن استئصال الثدي الوقائي هو إجراء جراحي يزيل جميع الخلايا الظهارية الثديية جنبا إلى جنب مع السدى المحيطة والأنسجة الدهنية و / أو العضلات. هدفنا البحثي العام هو تطوير إجراء توصيل غير جراحي داخل القناة (ID) يقتل محليا الخلايا الظهارية الثديية عن طريق ملء شجرة الأقنية بأكملها بمحلول استئصالي. لقد أثبتنا سابقا أن توصيل معرف الإيثانول كحل استئصالي فعال في نماذج القوارض (الفئران والجرذان). يقدم هذا البروتوكول توصيلا معرفيا لمحلول الإيثانول بنسبة 10-70٪ يحتوي على iohexol (90-300 مجم / مل) كعامل تباين للأشعة السينية في نظام الشجرة متعددة القنوات للغدة الثديية للأرانب. الغدة الثديية للأرنب (Oryctolagus cuniculus) ذات نظام متعدد القنوات متشابهة مع الثدي البشري أكثر من تلك الموجودة في الكبيرة الأخرى (مثل الأبقار والأغنام). يعالج بروتوكول الأرانب هذا التحديات الفنية لقابلية التوسع والتصوير في الوقت الفعلي وتسليم الهوية إلى نظام شجرة متعدد القنوات في نموذج وسيط للحيوانات الكبيرة. يحدد هذا البروتوكول توصيلا متعدد القنوات موجه بالتنظير الفلوري مع الأدوات والمواد والكواشف التي يمكن تطبيقها مباشرة في العيادة. يتيح تحليل الأنسجة تحسين تركيز الإيثانول لتحقيق أقصى قدر من الاستئصال الظهاري والحد الأدنى من تلف الأنسجة الجانبية كنقطة انطلاق للتقييم المستقبلي الأول في الإنسان لهذا الإجراء الاستئصالي للوقاية الأولية من سرطان الثدي.
المقدمة
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
سرطان الثدي (BC) هو أكثر الوفيات المرتبطة بالسرطان شيوعا وثاني أعلى معدل للوفيات المرتبطة بالسرطان للنساء في الولايات المتحدة. تقدر التوقعات لعام 2025 أنه سيكون هناك 316,950 حالة جديدة من سرطان الثدي ، وستموت 42,170 امرأة من كولومبياالبريطانية 1. حاليا ، يعد استئصال الثدي الوقائي الثنائي هو الإجراء الأكثر فعالية للوقاية من BC. ومع ذلك ، فإن هذا إجراء شديد التوغل يتضمن إزالة كاملة للخلايا الظهارية ، التي ينشأ منها سرطان الثدي ، والأنسجة المحيطة. نظرا لغزوه بالإضافة إلى التأثير النفسي والاجتماعي لهذا الإجراء ، فإن أقل من 50٪ من النساء المعرضات لمخاطر عالية يخضعن لاستئصال الثدي لتقليل المخاطر2. لقد طورنا نحن وآخرون إجراءات التوصيل داخل القناة (ID) للوقاية الأولية و / أو العلاج الموضعي لسرطان الثدي في نماذج القوارض2،3 كبديل للوقاية والعلاجات الحالية. يحتوي الإيثانول (EtOH) على سمية منخفضة وسلامة ثابتة وتستخدم في تطبيقات سريرية متعددة ، مثل عوامل التصلب لعلاج التشوهات الوريدية وكعامل استئصال للعلاج الموضعي لبعض أنواع السرطان3. عادة ، يتم حقن عدة ملليلتر من EtOH أو توصيلها بتركيز 90-100٪ في هذه الإجراءات السريرية. في عملنا السابق ، كان توصيل 70٪ من EtOH مباشرة إلى نظام شجرة الأقنية لنماذج الفئران والفئران فعالا في استئصال الخلايا الظهارية الثديية كيميائيا مع تلف محدود للأنسجة الطبيعية المجاورة ، وفي منع تكوين ورم الثدي4،5،6،7. نظرا لأن هذا الإجراء يتم توسيع نطاقه إلى نظام شجرة القنوى المجاري الأكبر للأرنب ذو الحجم اللمعي الأكبر لنسبة مساحة سطح الخلية الظهارية اللمعة ، فإننا نستكشف الخصائص الاستئصالية لمحلول بنسبة أقل من EtOH (10٪ إلى 70٪). من خلال البحث عن الترجمة السريرية ، فإننا نفكر في أن أقل نسبة من الإيثانول الفعالة في استئصال الخلايا الظهارية ستكون الأكثر تحملا وتتمتع بأفضل ملف تعريف أمان.
يعد تأكيد ملء شجرة الأقنية الكاملة أمرا ضروريا لضمان أن المحلول الاستئصالي قد كان على اتصال مباشر بالخلايا الظهارية الثديية. في دراساتنا السابقة في نماذج القوارض ، تم استخدام التصور بالأشعة السينية لشجرة (شجر) الأقنية المنقوعة بواسطة التصوير المقطعي المحوسب بعد العملية. نظرا للمرور اللازم للوقت لتخدير ونقله وضبطه ووضعه للتصوير ، لم تكن Omnipaque المعتمدة من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (iohexol) أو عوامل التباين المماثلة المحتوية على اليود سريعة الانتشار مناسبة لتصور شجرة الأقنية في القوارض6،8. وجدنا أن عوامل التباين القائمة على الجسيمات النانوية ، خاصة تلك التي تحتوي على بلورات أكسيد التنتالوم النانوية ، كانت أبطأ في الانتشار وأكثر ملاءمة لتصور شجرة القناية في القوارض6،7،8،9. ومع ذلك ، فإن هذا التأكيد الخلفي عن طريق التصوير المقطعي المحوسب لا يسمح لنا بمراقبة أو التحكم في كمية الحجم المنقوع وينحرف عن إجراءات التشخيص المعمول بها سريريا ، مثل تصوير قناةالقناة 10،11 ، لتصور شجرة الأقنية. وبالتالي ، فإن الخطوة الرئيسية لإثبات الجدوى الفنية لترجمة إجراء المعرف هذا إلى البشر هي إظهار تصور التنظير الفلوري في الوقت الفعلي لشجرة القنية المنقوعة في نموذج حيواني بزيادة حجم وتعقيد الغدد الثديية. يعمل هذا البروتوكول على توسيع نطاق هذا الإجراء الاستئصالي من القوارض 4,5 إلى نماذج الأرانب. من الناحية التطورية والتشريحية والفسيولوجية ، تشبه الغدد الثديية للأرانب ثدي الإنسان أكثر من تلك الموجودة في القوارض أو النماذج الحيوانية الكبيرة الأخرى ، مثل الأبقار والأغنام12،13،14. تحتوي إناث الأرانب على أربعة أزواج من الغدد الثديية ، يحتوي كل منها على أربع أشجار قنية ، في حين أن القوارض لديها شجرة قنية واحدة فقط لكل غدة ثديية. يمكن تقنية حلمات الأرانب15،16 باستخدام إجراء مشابه لإدارة معرف عامل التباين في تصوير المجاري السريرية في البحوث السريرية الأولى في الإنسان. لذلك ، توفر الأرانب نموذجا عمليا وذهارا للحيوانات الكبيرة وسيطة ذات صلة للتطبيق الانتقالي لهذا الإجراء الاستئصالي للمعرف على البشر. يعالج هذا البروتوكول التحديات التقنية لتسليم الهوية والتصوير في الجسم الحي لنظام شجرة متعدد القنوات لم يكن من الممكن معالجته في نماذج القوارض. يستخدم هذا البروتوكول الأدوات والكواشف والمواد المتوافقة مع الممارسة السريرية الحالية لتصور أشجار القنوية. وبالتالي ، يمكن تنفيذ الإجراء الموصوف للتسريب الموجه بالتنظير الفلوري للمحلول الاستئصالي القائم على الإيثانول المحتوي على الإيوهيكسول بسهولة وتقييمه في التجارب السريرية الأولى في الإنسان.
تم تنفيذ هذه الطريقة في مختبرنا ليتم قنية جميع أشجار الأقنية الأربع لغدة ثديية واحدة أو أكثر في أرنب بنجاح وضعها بالتتابع ، في جلسة واحدة ، بمحلول استئصال قائم على الإيثانول يحتوي على عامل تباين (الشكل 1 ، الشكل 2 ، الشكل 3). تتضمن هذه الطريقة غرس محلول الاستئصال مباشرة في فتحة الحلمة المقنية بإبرة 27 جرام غير حادة من أرنب (عذراء تبلغ من العمر 4 أشهر) على طاولة التنظير الفلوري. يتم تنفيذ هذا الإجراء على تحت التخدير العام (الأيزوفلوران) مع العلاج المضاد للالتهابات في محيط الإجراء وبعده (كيتوبروفين ، دواء مضاد للالتهابات غير الستيرويدي). يسمح لنا التصوير بالتنظير الفلوري بمراقبة ملء شجرة القناة في الوقت الفعلي ، والتحكم في معدل ومقدار الحجم الموزع ، و / أو تحديد مدى نجاح تسليم الهوية في كل نظام شجرة فردي (الأشكال 1 ، الشكل 2 ، الشكل 3). تقترب تقنية التنظير الفلوري هذه بشكل أقرب إلى التطبيق السريري المقصود لتوجيه الصور للعلاج الاستئصالي ويمكن أن تساعد في الحد من جرعة الإشعاع الإجمالية المفروضة على المريض. يوضح هذا البروتوكول أن Omnipaque المعتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (iohexol) هو عامل تباين مناسب لتصور الملء الأولي لشجرة قنية الأرانب (الشكل 3). تظهر الملاحظات من خلال الفحص الإجمالي والتحليل النسيجي أن تركيز الإيثانول بنسبة 70٪ يسبب تلفا سريعا للأنسجة داخل وخارج شجرة القنوية ويمتد إلى ما وراء بنية الغدة الثديية (الشكل 3). يوفر تركيز الإيثانول في نطاق 10-40٪ استئصال كاف للخلايا الظهارية مع تلف الأنسجة الجانبية أقل من 70٪ الإيثانول (الشكل 4). ستكون هناك حاجة إلى دراسات طولية باستخدام هذا الإجراء مع حجم المجموعة المدعوم بشكل مناسب لكل محلول استئصال ومجموعات الأنسجة الموقوتة لتحديد المعلمات المثلى للمحلول الاستئصالي لتقييمه السريري في المرضى من البشر.
البروتوكول
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تم إجراء جميع التجارب الموصوفة بموجب بروتوكولات وافقت عليها لجنة رعاية واستخدامها المؤسسية في جامعة ولاية ميشيغان. تم الاعتناء بالأرانب (Oryctolagus cuniculus) وفقا لدليل رعاية واستخدام المختبر وقانون رعاية التابع لوزارة الزراعة الأمريكية في منشأة معتمدة من AAALAC.
ملاحظة: أجريت هذه الطريقة على نيوزيلندية بيضاء عذراء (غير مولود) ومتقاعدة (متعددة الولاد) تتراوح أعمارها (4 أشهر إلى > سنة واحدة) ووزنها (2.6 إلى 4.2 كجم) تم الحصول عليها من مصادر تجارية. في تجربتنا ، فإن حجم الذي يحدده الوزن أكثر موثوقية من عمر للتنبؤ بحجم الحلمات. بشكل عام ، التي يزيد وزنها عن 3.3 كجم موجودة مع حلمات مناسبة للقنية. يركز البروتوكول الموضح أدناه على البكر التي تتراوح أعمارها بين 4-5 أشهر ووزنها أكثر من 3.3 كجم ، لأنها أكثر ملاءمة لدراسات الفعالية والتئام الجروح والسمية والسلامة على المدى الطويل.
1. التحضير قبل الجراحة
- تأقلم في المنشأة الجديدة لمدة أسبوع واحد على الأقل عند الوصول ، خاصة للحيوانات المعدة لإجراءات التعافي والدراسات طويلة الأجل. خلال هذا الأسبوع الأول ، قم بمراقبة / فحص الأرانب يوميا وتوفير المكافآت ، والإثراء الغذائي على النحو الموصى به في الإرشادات المؤسسية ، للمساعدة في عملية التأقلم.
- احصل على الأرنب (~ 4 أشهر نيوزيلندا أبيض) من المنشأة السكنية المعتمدة. سجل وزن الجسم قبل العملية.
ملاحظة: يمكن تسجيل وزن الجسم في اليوم السابق للإجراء لإعداد الحسابات المطلوبة للتخدير. يمكن أيضا استخدام المربين المتقاعدين (> 1 سنة ، > 3.5 كجم) لأن لديهم حلمات أكبر وتسمح بأسهل قنية القنوات الفردية (الشكل 3). لهذه الأسباب ، يمكن استخدام المربين المتقاعدين في التجارب الأولية للتعرف على الإجراء داخل القناة وتحسينه. - يتم حقن 35 ملغ/كغ من الكيتامين و5 ملغ/كغ من الزيلازين في العضل قبل 20 دقيقة من إعطاء الأيزوفلوران لتخدير.
ملاحظة: يتم إعطاء التخدير بناء على وزن الأرنب ونطاقات كل دواء هي كما يلي: 15-35 مجم / كغ للكيتامين ، و 2-5 مجم / كغ للزيلازين. تأكد من تخدير قبل الانتقال إلى إزالة الشعر والتنبيب. هذا من أجل رفاهية وسلامة والموظفين. بعد تأكيد التخدير ، يمكن بعد ذلك وضع الأرنب ظهريا على طاولة التصوير / العمليات. - حقن 5 مجم / كغ من الكيتوبروفين تحت الجلد للتسكين بعد ظهور علامات التخدير السريرية (أي السلوك الهادئ ، والعيون المغلقة جزئيا والوردية اللون).
ملاحظة: يتم إعطاء التسكين بناء على وزن الأرنب ونطاق الكيتوبروفين هو 2-5 مجم / كجم. - قم بتنبيب الأرنب بالمعدات المناسبة (على سبيل المثال ، أنبوب القصبة الهوائية أو جهاز مجرى الهواء فوق الرغام) وقم بتوصيله بجهاز الأيزوفلوران (1-2٪ إيزوفلوران ، 1.0 لتر / دقيقة أكسجين) تم اختباره واعتماده بشكل كاف لتخدير الأرنب. راقب تنفس بعناية لضمان الحفاظ على التخدير عند 1-2٪ من الأيزوفلوران. راقب الأرنب بحثا عن تشبع الأكسجين عبر SpO2 ومعدل ضربات القلب ومعدل التنفس ودرجة الحرارة طوال العملية.
ملاحظة: يعتمد حجم أنبوب التنبيب على وزن وحجم الأرنب. ومع ذلك ، فإن نطاق الحجم ليس دقيقا دائما ، لذلك من المفيد أن يكون لديك مجموعة متنوعة من الأحجام لمعرفة أيها يناسب هذا الأرنب المعين. يمكن أيضا استخدام قناع مخروط الأنف بدلا من أنبوب القصبة الهوائية لأغراض التخدير17 ، مع العلم أن هذا القناع لا يوفر حماية مجرى الهواء للحيوان الذي يوفره التنبيب. يتم وضع البطانيات المتداولة بالماء الدافئ (بطانيات الاحترار) على 37 درجة مئوية تحت المناشف للحفاظ على درجة حرارة جسم الأرنب. - ضع قسطرة وريدية 25 جرام في وريد الأذن الهامشي وتثبيتها للسماح بإعطاء الدواء في حالات الطوارئ.
ملاحظة: يمكن استخدام نطاق قياس من 24 إلى 26 اعتمادا على حجم وريد الأرنب. - ضع مادة تشحيم العين على كلتا العينين لمنع تهيج العين وجفاف القرنية.
- احلق الفراء حول الزوجين الثاني والثالث من الحلمات باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. استخدمي قضيب قطن لنشر كريم إزالة الشعر على منطقة الحلمة. اترك الكريم يتلامس مع المنطقة لمدة 15 ثانية.
ملاحظة: يجب توخي الحذر الشديد حتى لا تتلف أي حلمات بماكينة الحلاقة. يمكن أيضا استخدام المكنسة الكهربائية اللاسلكية للمساعدة في الحفاظ على منطقة إجراء نظيفة. - بلل ضمادة شاش بمحلول ملحي معقم واستخدمها لشطف الكريم وفك الفراء من بعد 15 ثانية من تطبيق كريم إزالة الشعر. تأكد من الرؤية الجيدة والوصول إلى منطقة الحلمة التي تمت إزالة الفراء منها. كرر إذا لزم الأمر.
ملاحظة: يجب أن يبقى الكريم على الأرنب لأقصر فترة ممكنة ، بين 10 - 30 ثانية ويتم إزالته تماما لتجنب الحروق الكيميائية للجلد.
2. التسريب داخل القناة
- قم بإعداد محلول استئصال عن طريق خلط الكميات المناسبة من محاليل المخزون في ظروف معقمة في غطاء زراعة الأنسجة BSL2.
ملاحظة: يجب تخزين Iohexol (350 ملغ يود/مل) في منطقة مظلمة بسبب حساسية الضوء. تم استخدام مجموعة من تركيزات EtOH خلال هذه التجربة. لاختبار النسب المئوية الأخرى من EtOH ، قم بتخفيف محاليل المخزون إلى التركيز الضروري للمحلول الاستئصالي. للحفاظ على نفس تركيز اليود في محلول الاستئصال بنسب مختلفة من EtOH أو PBS أو الماء المعقم يمكن استخدامه لملء فرق الحجم. - على سبيل المثال ، قم بإعداد محلول استئصال طازج بنسبة 10٪ EtOH ، 280 مجم من اليود / مل من اليود ، 1٪ صبغة طعام في أنبوب سعة 5 مل. للحصول على حجم نهائي يبلغ 5 مل ، أضف 4 مل من مخزون iohexol (350 مجم يود / مل) ، 500 ميكرولتر من 100٪ EtOH (200 برهان) ، 450 ميكرولتر من PBS ، 50 ميكرولتر من لون الطعام الأزرق.
ملاحظة: يمكن ملء كل شجرة قنية بما يصل إلى 400 ميكرولتر ، ولكن عادة ما تكون 250-350 ميكرولتر للحيوانات التي يقل وزنها عن 3.5 كجم. يمكن استخدام Evans Blue بنسبة تصل إلى 0.2٪ بدلا من صبغة الطعام. قد يكون Evans Blue خيارا مفضلا إذا كان المقصود من التركيب الكامل أو تحليلات الأنسجة الأخرى مباشرة بعد التسريب (التسريب). - قم بإزالة أي جلد ميت يغطي فتحات القنوى بملقط مدبب ناعم.
ملاحظة: يمكن أن يكون للأرانب سدادة مقرنة بارزة من الحلمة يمكن أن تمنع القنية الناجحة إذا لم تتم إزالتها. يمكن أيضا تطبيق الليدوكائين الموضعي حول الحلمة للمساعدة في تقليل التهيج حول موقع الحقن (الجدول 1). - امسح موقع التسريب باستخدام ضمادات شاش الكلورهيكسيدين.
ملاحظة: يستخدم الكلورهيكسيدين كعامل تطهير لتطهير موقع الحقن قبل القنية (الجدول 1). - أدخل شطبة إبرة 28 جم (الطول: 12.7 مم) في جانب الحلمة وحقن ببطء 200 ميكرولتر من محلول ملحي 0.9٪ بمعدل 200 ميكرولتر / دقيقة. هذا يسمح بتصور أفضل لفتحات القناة.
ملاحظة: قد لا تحتاج كل 200 ميكرولتر من المحلول الملحي إلى الحقن في الحلمة. توقف عن الحقن بمجرد رؤية المحلول الملحي يخرج من فتحة واحدة أو أكثر من فتحات الأقنوال. - استنشاق 1 مل من محلول الاستئصال المحضر باستخدام حقنة قفل Luer سعة 1 مل. قم بتوصيل المحقنة بالطرف الأنثوي "المجنح" لخط التمديد ذكور وأنثى مقاس 12 بوصة. قم بتوصيل إبرة ذات طرف حاد 27 جم (الطول: 12.7 مم) بحذر بالطرف الذكري لخط التمديد. قم بتجهيز الخط بالمحلول. امسح الإبرة نظيفة باستخدام وسادة شاش كحولية. أيضا ، احرص على عدم قلب المحقنة بمحلول الاستئصال لأن هذا قد يتسبب في تكوين فقاعات هواء.
ملاحظة: هذه هي الأحجام الموصى بها التي تهدف إلى ملء شجرة (شجرات) قنية بالكامل: ما يصل إلى 300 ميكرولتر في كل شجرة وما يصل إلى 1.2 مل لكل غدد ثديية عنق الرحم و / أو الأربية(1 و 4 أزواج) ، حتى 400 ميكرولتر في كل شجرة وما يصل إلى 1.6 مل لكل غدد ثديية صدرية و / أو بطنية (2 و 3 أزواج). بالنسبة للتطبيقات الأخرى ، قد يكون من المناسب استخدام أحجام أصغر أو أكبر بناء على المتطلبات التجريبية و / أو إرشادات التنظير الفلوري لتجنب الملء الزائد لشجرة القنوية. يسمح خط التمديد بمزيد من التحكم في معدل التدفق والتسريب المتزامن والتصوير الفلوري الحي. للمقارنة ، فإن الأحجام الموصى بها من التسريب داخل القناةفي طرازات الفئران 4 التي يبلغ عمرها 9-12 أسبوعا هي: ما يصل إلى 30 ميكرولتر في عنق الرحم والإربية وما يصل إلى 50 ميكرولتر في الغدد الثديية الصدرية والبطنية ، ونماذج الفئران5: ما يصل إلى 100 ميكرولتر في عنق الرحم والإربية وما يصل إلى 300 ميكرولتر في الغدد الثديية الصدرية والبطنية. - استخدم مصباحا مكبريا 10x للمساعدة في تحديد موقع فتحات القناة. أمسك الحلمة برفق باستخدام الأصابع وقم بإدخال الإبرة في فتحة القناة. استمر في إدخال إبرة الطرف الحاد 27 جرام برفق حتى يصبح الطرف داخل الحلمة بالكامل. لاستيعاب الإبرة في الحلمة ، ارفع الحلمة لأعلى باتجاه الإبرة بدلا من دفع الإبرة لأسفل في الحلمة. احرص على اتباع مسار فتحة القناة.
ملاحظة: في بعض الأرانب ، قد تشعر بمقاومة عند محاولة إدخال الإبرة في فتحة (فتحات) الحلمة. ضع ضغطا طفيفا بعناية لاختراق طبقة الخلية الظهارية العلوية. في تجربتنا ، يلزم وجود جهاز تكبير لتحديد فتحة قناة القنية بوضوح. قد يكون هذا مصباحا مكبرا أو عدسة أو عدسة أو عدسة أو جهازا مشابها. - قم بنقع 300 ميكرولتر من المحلول ببطء بمعدل ثابت يبلغ حوالي 200 ميكرولتر / دقيقة بمجرد إدخال الإبرة بالكامل. انتظر لمدة 30 ثانية بعد التسريب لإزالة الإبرة من الشجرة المقنية ؛ هذا يضمن بقاء الحجم المحقون داخل شجرة القنية ويقلل من احتمالية التسرب.
ملاحظة: عادة ما يكون هناك باحث واحد يقوم بقنية الإبرة وإمساكها ، بينما يحمل باحث ثان المحقنة ويدفع المكبس بالمعدل المطلوب. يمكن استخدام مضخة الحقنة للحصول على معدل تدفق أكثر تحكما ، حيث يمكن أن تؤدي التغيرات المفاجئة في معدل التسريب إلى انفجار أشجار الأقنية أو إتلافها. - نظف أي محلول مسكوب بشاش مبلل أو منديل EtOH لتجنب محلول التباين الدخيل في الصور.
3. التصوير بالتنظير الفلوري
- التقط صور التنظير الفلوري بعد غرس كل شجرة قنوية. معلمات التنظير الفلوري هي: 30 إطارا في الثانية ، 67 كيلو فولت ، و 17.3 مللي أمبير على جهاز الأشعة السينية للتنظير الفلوري. ومع ذلك ، اضبط هذه بناء على احتياجات التجربة والتصوير.
- استخدم صور التنظير الفلوري لتحديد ما إذا كان الحجم الإضافي مطلوبا لملء شجرة القنية بالكامل.
ملاحظة: يمكن إجراء التصوير بالتنظير الفلوري مباشرة في نفس الوقت الذي يتم فيه ضخ محلول الاستئصال. يمكن استخدام الملقط المعدني أو البلاستيكي لتثبيت الحلمة أثناء إجراء التصوير لحماية الموظفين من الأشعة السينية الضارة. هذا يسمح بمراقبة ملء شجرة (شجرة) القنوية. يمكن أن يوجه التنظير الفلوري الحي متى يجب إيقاف التسريب بناء على الحجم المتزايد في نهايات الحويصلات الهوائية. يمكن أن يؤكد التنظير الفلوري بعد التسريب ما إذا كانت شجرة القناة ممتلئة بالكامل أو إذا كان هناك بعض التسرب. عادة ما يتم إجراء التنظير الفلوري التأكيدي بعد ضخ كل قناة داخل نفس الغدة الثديية.
4. رعاية ما بعد الجراحة والتعافي
- يجب إيقاف تدفق الأيزوفلوران بعد آخر تسريب داخل القناة.
- حقن 0.5 ملغ/كغ من أتيباميزول في العضل.
ملاحظة: يختلف وقت الشفاء بين ، ولكن يجب أن يبدأ الأرنب في إظهار علامات التعافي بعد 5-20 دقيقة من الحقن. - توفير الدعم الحراري المستمر للحيوان على بطانية الاحترار حتى يتعافى تماما من التخدير. حافظ على تدفق الأكسجين لمدة تصل إلى 5 دقائق قبل إزالته من التخدير.
ملاحظة: تشمل علامات التعافي حركات الفم مثل المضغ والسعال وارتعاش الأنف و / أو حركة العين. يجب أن يكون للأرانب رد فعل تصحيح وأن تكون قادرة على الحفاظ على نفسها في وضع القص قبل وضعها مرة أخرى في حامل الاسترداد. يتم إعطاء عامل الاسترداد بناء على وزن الأرنب مع مجموعة من 0.1-1 مجم / كجم أتيباميزول. - حقن 5 مجم / كجم من الكيتوبروفين تحت الجلد.
- قم بإزالة القسطرة الوريدية بمجرد أن يتمكن الأرنب من الحفاظ على نفسه في وضع القص. أمسك وسادة شاش إلى مكان إزالة القسطرة لوقف أي نزيف زائد.
ملاحظة: يمكن أن تتم إزالة القسطرة عندما يكون الأرنب في ناقلة النقل. - انقل الأرنب مرة أخرى إلى المنشأة السكنية المناسبة.
- يجب الاستمرار في حقن 5 ملغ/كغ من الكيتوبروفين تحت الجلد لمدة 3 أيام على الأقل بعد العملية.
- راقب الأرنب بحثا عن علامات الانزعاج والضيق والألم وتشويه الذات مرة واحدة يوميا لمدة 3 أيام على الأقل بعد العملية. إذا أظهر الأرنب أيا من هذه العلامات السريرية ، فيمكن تمديد العلاج بالكيتوبروفين. سجل وزن الجسم وراقبه لتقييم علامات فقدان الشهية.
ملاحظة: يتم إعطاء الكيتوبروفين بناء على وزن الأرنب بنطاق 2-5 مجم / كجم. يمكن إعطاؤه كل 24 ساعة لمدة تصل إلى 5 أيام بعد التسريب داخل القناة لتقليل الالتهاب وتقليل التندب. لتقليل الأحداث الضائرة لتقرح الجلد أو المشكلات الأخرى المتعلقة بالتئام الجروح ، ضع الليدوكائين موضعيا على موقع الحقن. يجب القتل الرحيم لأي تظهر عليه علامات مستمرة من الانزعاج أو الضيق أو الألم أو الإصابة بعد العلاج بالكيتوبروفين.
5. تحليل الأنسجة
- يتم تطبيق محلول القتل الرحيم (بنتوباربيتال الصوديوم والفينيتوين الصوديوم) عن طريق الوريد بجرعة 100 ملغ/كغ. بعد 60 ثانية تحقق من علامات الحياة عن طريق قرص إصبع القدم / الأذن ، وعلامات التنفس أو ضربات القلب ، وانعكاس القرنية ، و / أو تحفيز التلميذ.
- قم بإجراء تشريح للحصول على أنسجة (غدد) الثدييات وعملية إجراء تضمين البارافين الروتيني بعد 24-36 ساعة في 10٪ فورمالين مؤيدمخزن 18. بعد ذلك ، قم بإجراء تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) القياسي و / أو صبغة كيميائية مناعية باستخدام علامة خاصة بنوع الخلية للمساعدة في قراءات التحليل المطلوبة18. تخلص من الذبيحة من خلال بروتوكول التخلص المناسب (على سبيل المثال ، الحرق).
- تحليل أنسجة الغدد الثديية بالتشاور مع أخصائي علم الأمراض. استخدم برنامج كمبيوتر للمساعدة في التقدير الكمي لمعدل الاستئصال وتلف الأنسجة الجانبية.
ملاحظة: تم إجراء تحليل الأنسجة على الأرانب البيضاء النيوزيلندية البالغة من العمر 4 أشهر في غضون ساعة واحدة بعد الحقن (الشكل 4) باستخدام برنامج QuPath المفتوح لتحليل الصور الحيوية (https://qupath.github.io/). يعتمد هذا التحليل فقط على الأنسجة الملطخة ب H & E. يتطلب QuPath أو برنامج كمبيوتر مشابه مدخلات ومعايرة من قبل أخصائي علم الأمراض. قد يتم تصنيف بعض الخلايا بشكل خاطئ باستخدام السمات المورفولوجية فقط (الشكل 4). يمكن استخدام علامات خاصة بنوع الخلية مثل السيتوكيراتين وأكتين العضلات الملساء α لتحسين التصنيف بمساعدة الكمبيوتر6. في النهاية ، يجب تنسيق تحليل تصنيف الخلايا والتحقق من صحته من قبل أخصائي علم الأمراض.
النتائج
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تحتوي كل من الغدد الثديية الثمانية لأنثى الأرنب على 4 أشجار قنية تفتح في فتحات حلمة مستقلة (الشكل 2). نظرا للاختلاف في حجم وعدد أشجار الأقنية لكل غدة ثديية بين القوارض (قناة واحدة فقط لكل غدة ثديية) ، تعد الأرانب نموذجا وسيطا جيدا للترجمة البشرية. يمكننا غرس ما يصل إلى 400 ميكرولتر من محلول 10-70٪ EtOH لملء شجرة القنية بأكملها لأي غدة ثديية من الأرانب البيضاء النيوزيلندية البالغة من العمر 4 أشهر (الشكل 1 ، الشكل 2 ، الشكل 3 ، الشكل 44،8،9). يمكننا غرس ما يصل إلى 4 أشجار قنية في ما يصل إلى 8 غدد ثديية بمحلول الاستئصال في جلسة واحدة. يتكون التصميم التجريبي النموذجي من غرس 2-3 أشجار قنية داخل غدة ثديية واحدة في ما يصل إلى 4 غدد ثديية بمحلول استئصال معين يحتوي على عامل تباين الأشعة السينية القائم على اليود (الشكل 2 ، الشكل 3). بالنسبة للمحلول الاستئصالي المحتوي على اليوهكسول (90-300 مجم من اليود / مل) ، يتم إجراء التنظير الفلوري أثناء و / أو بعد كل تسريب لتحديد النجاح الفردي لغرس كل شجرة قنوية بكمية جزئية أو كاملة من المحلول المنقوع (الشكل 2 ، الشكل 3). يتيح جمع أنسجة الغدة الثديية تقييم كيفية تأثير التغييرات في التركيبة على تدمير الخلايا الظهارية الثديية (الشكل 4). توفر تحليلات التصوير هذه معلومات لفهم الحل الأنسب لتحقيق أقصى قدر من الاستئصال مع تقليل تلف الأنسجة المحيطة. قررنا أن محلول 10٪ EtOH يوفر معدل استئصال مماثل للمحاليل الاستئصالية التي تحتوي على نسبة أعلى من EtOH (الشكل 4).
الشكل 1: سير عمل الإجراء داخل القناة. يتم تمييز الخطوات الرئيسية لإجراء المعرف. يرجى مشاهدة الفيديو لمزيد من التفاصيل. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الخطوات الرئيسية للقنية داخل القنوات والتسريب. (أ) حقن محلول ملحي عمودي على الحلمة لتوسيع فتحات القنوى للقنية (عرض المستوى المتوسط). (ب) يمكن تتبع قنية وملء شجرة قنية (D1) بصبغة زرقاء في محلول الاستئصال (عرض المستوى المتوسط). (ج) يوفر التصوير بالتنظير الفلوري في الوقت الحقيقي مراقبة دقيقة وعالية الدقة لملء شجرة الأقنية (D1) باستخدام iohexol في محلول الاستئصال (عرض المستوى الظهري). يتم ترقيم فتحات الأشجار القنوية من اليسار إلى اليمين ، بدءا من الربع العلوي (D1 ، الربع العلوي الأيسر) وتنتهي في الربع السفلي (D4 ، الربع السفلي الأيمن). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: حجم الحلمة والتسليم الناجح لمحلول الاستئصال إلى قنوات متعددة. عرض نموذجي لأحجام الحلمة في الأرانب البيضاء النيوزيلندية. يختلف حجم الحلمة بناء على وزن وعمر الأرنب. يتم ترقيم الغدد الثديية من أعلى اليسار (L1 ، عنق الرحم الأيسر) إلى أسفل اليمين (R8 ، الأربية اليمنى). يتم عرض جميع الصور في المستوى الظهري. (أ) 2.8 كجم أرنب عذراء (أعلى) مع حلمات أصغر ، يصعب قنية ، 3.5 كجم أرنب عذراء (وسط) مع حلمات مناسبة للقنية ، و 4.1 كجم أرنب متعدد الولادات (أسفل) مع حلمات أكبر ، أسهل بكثير في القنية. (ب) يمكن استخدام لون الطعام الأزرق في المحلول المنقوع كما هو الحال في الجسم الحي دليل على الولادة داخل القناة وملء شجرة الأقنية. يشار إلى التسريب غير الناجح بمخطط أحمر (توصيل وسادة الدهون ، الأعلى) ، والحقن الناجحة بمخطط أزرق (الولادة داخل القناة ، الوسطى والسفلية). يتسبب محلول EtOH بنسبة 70٪ في مزيد من الضرر للجلد (حمامي) بعد دقائق من التسريب (أزرق داكن ، اللوحة الوسطى) مقارنة بمحلول 10٪ (أزرق فاتح ، اللوحة السفلية). (ج) يوفر التنظير الفلوري دليلا في الجسم الحي على الولادة داخل القنوة. التسريب غير الناجح (توصيل وسادة الدهون ، اللوحة العلوية). التسريب المتسلسل الناجح لشجرة القنية D1 الأولى وشجرة القنوى D2 الثانية (اللوحة اليسرى السفلية). يوفر التنظير الفلوري المباشر إرشادات الصورة لملء (الأسهم البيضاء) لشجرة مجاري الهواء D3 (اللوحة اليمنى السفلية) ؛ يمكن أيضا رؤية خط التمديد المملوء بمحلول استئصال يحتوي على iohexol وملقط لتثبيت الحلمة. تتوافق أشرطة المقياس مع 1 سم في الصور بتكبير مختلف. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: تحليل أنسجة الغدد الثديية في نيوزيلندا الأرانب البيضاء بعد إجراء داخل القناة باستخدام محلول استئصال قائم على الإيثانول. (أ-ب) تلطيخ H & E التمثيلي للغدة الثديية الأربية اليمنى لحيوان يبلغ من العمر 4 أشهر بدون علاج استئصالي مقارنة بالغدة الثديية الأربية اليمنى لحيوان آخر مع علاج استئصال EtOH بنسبة 10٪. يتم قطع شرائح الأنسجة على طول المستوى المتوسط ، لذلك يتم تمثيل D1 و D3 (أشجار الأقنية اليسرى) في نفس أقسام الأنسجة. عرض عرض الأنسجة الكاملة (A) وعرض التكبير العالي (B) التأثيرات المورفولوجية واللونية لاستئصال EtOH على صبغة H & E (الألواح العلوية) واستنتاج فئات الخلايا الظهارية واللحمية بناء على مصنف مدرب بمساعدة الكمبيوتر (اللوحات السفلية). شريط المقياس الأسود يتوافق مع 1 مم في A وشريط مقياس أبيض إلى 100 ميكرومتر في B. (ج) يعرض شريط الرسم البياني توزيع فئة الخلية في أشجار الأقنية (ن > 4 لكل مجموعة) المعالجة بتركيزات مختلفة من EtOH أو تركت دون معالجة. تشير العلامات النجمية إلى قيمة p لاختبار Welch t غير المزاوج لكل فئة خلية لكل مجموعة مقارنة بفئة الخلايا المطابقة في المجموعة المعالجة بنسبة 10٪ EtOH (* <0.05 ، ** < 0.01 ، **** <0.0001). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
المناقشة
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
في دراساتنا السابقة ، أظهرنا أن توصيل معرف بنسبة 70٪ EtOH يستئصل الخلايا الظهارية الثديية بينما يتسبب في الحد الأدنى من الضرر للأنسجة المحيطة في القوارض6،7. في هذا الإجراء ، أظهرنا أنه يمكن توسيع نطاق ضخ معرف محلول استئصال إلى نموذج أرنب. على وجه الخصوص ، نوضح في هذا النموذج الأكبر مع نظام شجرة متعدد القنوات أنه يمكن حقن التسريب المتسلسل لجميع القنوات داخل الغدة الثديية بنجاح. يمثل هذا المرحلة التالية في ترجمة هذا الإجراء الاستئصالي إلى بديل قابل للتطبيق لاستئصال الثدي الوقائي للوقاية الأولية لدى الأفراد المعرضين لمخاطر عالية.
يسمح لنا عامل تباين الأشعة السينية المعتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية Omnipaque (iohexol) بتقييم نجاح التسريب ، من خلال التصور المباشر لعملية توصيل المحلول من خلال شجرة القناة. يتوافق استخدام التنظير الفلوري لتصور الغدة الثديية المنقوعة بشكل وثيق مع ما يحتمل أن يكون المعدات والأدوات التي تم نشرها لإحضار هذا الإجراء الموجه بالصور إلى العيادة10،11. ستسمح لنا طريقة التصوير هذه بمعرفة متى نتوقف عن التسريب ، مما يجعل التنظير الفلوري الحي مكونا رئيسيا في التنفيذ السريري لهذا الإجراء الاستئصالي. لقد أنشأنا قابلية التوسع لهذا الإجراء من القوارض إلى أشجار الأقنية الأرانب ، ولكن هناك حاجة إلى مزيد من البحث لتحديد النسبة المئوية ل EtOH التي تستئصل الخلايا الظهارية الثديية بشكل أفضل مع تقليل تلف الأنسجة المحيطة في هذا النموذج الحيواني الأكبر. ركز هذا البروتوكول على جدوى التسريب داخل القناة وتحليل الأنسجة مباشرة بعد الإجراء. يتم تفصيل استراتيجيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها والتلميحات المفيدة في الجدول 1. في حين أن التركيز الرئيسي لهذا البروتوكول ينصب على تقديم حلول استئصالية قائمة على الإيثانول ، يمكن استخدام هذا البروتوكول في تطبيقات أخرى لتقديم كواشف تصوير أخرى محليا ، وأنظمة تعديل الجينات مثل CRISPR / Cas9 ، ونواقل الفيروسات العدسية ، و siRNAs ، وعوامل النمو ، و / أو المواد المسرطنة2،3 لدراسة الجوانب الأخرى لتطور الغدد الثديية وتكوين الأورام في الأرانب.
في الختام ، يوفر هذا البروتوكول أدوات البحث اللازمة لإجراء دراسة منهجية وطولية للتأثيرات المحلية والنظامية لمحاليل الاستئصال المختلفة. ستحدد هذه المعلومات سلامة هذا الإجراء وتحدد أي مخاوف تتعلق بمزيد من التطوير والتقييم السريري في التجارب السريرية الأولى من نوعها.
الإفصاحات
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تم دعم هذا العمل ، جزئيا ، من قبل منحة المعهد الوطني للسرطان R01 CA258314 إلى LFS. نحن ممتنون للمركز الطبي البيطري بجامعة ولاية ميشيغان لاستخدام أنظمة التصوير والخبرة الفنية (لوك سيبيردا وسوزان روسر) ، والموارد الحيوانية في الحرم الجامعي بجامعة ولاية ميشيغان للمساعدة الفنية (ريبيكا وينجيت) ، وللمنشأة الأساسية لتحليل الأنسجة لبرنامج الصحة الدقيقة بجامعة ولاية ميشيغان ومركز تحليل العناصر الحيوية الكمية ورسم الخرائط (QBEAM) للمساعدة الفنية.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| عدسة مكبرة 10X مع ضوء ومشبك ، معقوفة كبيرة | الامازون | B0D982JCZ2 | لتصور الحلمة |
| محاقن الأنسولين الدولية Exel | فيشر العلمية | 14-841-31 | لحقن المحلول الملحي حول القناة |
| مقياس الإبر الحادة السائبة 27 الطول 0.5 | تقنيات التسريب SAI | B27-50 100 بالجملة | للقنية داخل القناة |
| إيفانز أزرق | سيغما | E2129-50G | لتصور الغدد الثديية |
| نظام التصوير بالأشعة السينية بالمنظار الفلوري | جنرال إلكتريك للرعاية الصحية | DT-C31-01 | للحصول على صور التنظير الفلوري |
| بطانية تسخين هوت دوج البيطرية | الهوت دوغ | WC71V | للإجراء داخل القناة / التحضير قبل الجراحة |
| خطوط تمديد من الذكور والإناث ، بطول 12 بوصة | تقنيات التسريب SAI | تحويلة 12 | للإجراء داخل القناة |
| أومنيباك 500 مل (350 مجم يود / مل) | جنرال إلكتريك للرعاية الصحية | 0407-1414-72 | عامل تباين لتصور الأشعة السينية (التنظير الفلوري) |
| لون طعام أزرق معقم | ماكورميك | 930641 | لتصور الغدد الثديية |
| محلول ملحي معقم بالفوسفات (PBS) | ثيرموفيشر | 14190250 | لتحضير المحلول |
| محاقن | دينار بحريني | 309659 | للتسريب داخل القناة |
| جل على شكل حرف | دوكسينونوفينت | D30001 - 30006 | للتنبيب (يعتمد رقم الكتالوج على حجم V-gel) |
| كيتوبروفين | كوفيتروس | #005488 | للتسكين |
| كيتامين | كوفيتروس | 71069 | للتسكين |
| الليدوكائين الموضعي | كوفيرتوس | 70859 | للتسكين |
| زيلازين | كوفيتروس | 80907 | للتخدير |
| يوثاسول | كوفيتروس | #009444 | للقتل الرحيم |
| زيوت تشحيم العين | كوفيتروس | 75848 | للتخدير |
| أتيباميزول | كوفيتروس | 82124 | للتخدير |
| رقائق الموز | بيو سيرف | #F7161 | للتأقلم |
| الأحجار الكريمة Furity | بيو سيرف | #F5136-1 | للتأقلم |
| قطرات الزبادي | بيو سيرف | #F7200-1 | للتأقلم |
المراجع
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- Siegel, R. L., Kratzer, T. B., Giaquinto, A. N., Sung, H., Jemal, A. Cancer statistics, 2025. CA Cancer J Clin. 75 (1), 10-45 (2025).
- Zaluzec, E. K., Sempere, L. F. Systemic and local strategies for primary prevention of breast cancer. Cancers. 16 (2), 148(2024).
- Sapienza Passos, J., Dartora, V., Cassone Salata, G., Draszesski Malago, I., Lopes, L. B. Contributions of nanotechnology to the intraductal drug delivery for local treatment and prevention of breast cancer. Int J Pharm. 635, 122681(2023).
- Kenyon, E., et al. Intraductal delivery and x-ray visualization of ethanol-based ablative solution for prevention and local treatment of breast cancer in mouse models. J Vis Exp. (182), e63457(2022).
- Kenyon, E., et al. X-ray visualization of intraductal ethanol-based ablative treatment for prevention of breast cancer in rat models. J Vis Exp. (190), e64042(2022).
- Kenyon, E., et al. Ductal tree ablation by local delivery of ethanol prevents tumor formation in an aggressive mouse model of breast cancer. Breast Cancer Res. 21 (1), 129(2019).
- Zaluzec, E. K., et al. Tantalum oxide nanoparticles as versatile and high-resolution x-ray contrast agent for intraductal image-guided ablative procedure in rodent models of breast cancer. NPJ Imaging. 2 (1), 3(2024).
- Chakravarty, S., et al. Tantalum oxide nanoparticles as versatile contrast agents for x-ray computed tomography. Nanoscale. 12 (14), 7720-7734 (2020).
- Robertson, N., et al. Omniparticle contrast agent for multimodal imaging: Synthesis and characterization in an animal model. Mol Imaging Biol. 25 (2), 401-412 (2023).
- Faguy, K. Ductography: When, how, and why. Radiol Technol. 92 (5), 487M-503M (2021).
- Sheiman, L. S., Levesque, P. H. The in's and out's of ductography: A comprehensive review. Curr Probl Diagn Radiol. 45 (1), 61-70 (2016).
- Hughes, K. Comparative mammary gland postnatal development and tumourigenesis in the sheep, cow, cat and rabbit: Exploring the menagerie. Semin Cell Dev Biol. 114, 186-195 (2020).
- Schöniger, S., Degner, S., Jasani, B., Schoon, H. -A. A review on mammary tumors in rabbits: Translation of pathology into medical care. Animals. 9 (10), 762(2019).
- Rawtani, H., et al. Whole mount preparation and analysis of rabbit mammary gland. Reprod Toxicol. 130, 108740(2024).
- Clark, A., Bird, N. K., Brock, A. Intraductal delivery to the rabbit mammary gland. J Vis Exp. (121), e55209(2017).
- Fiddler, T. J., Birkinshaw, M., Falconer, I. R. Effects of intraductal prolactin on some aspects of the ultrastructure and biochemistry of mammary tissue in the pseudopregnant rabbit. J Endocrinol. 49 (3), 459-469 (1971).
- Fusco, A., et al. V-Gel® Guided Endotracheal Intubation in Rabbits. Front Vet Sci. 8, 684624(2021).
- Sempere, L. F., Zaluzec, E., Kenyon, E., Kiupel, M., Moore, A. Automated five-color multiplex co-detection of microRNA and protein expression in fixed tissue specimens. Methods Mol Biol. 2148, 257-276 (2020).
إعادة الطباعة والأذونات
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن