يصف هذا البحث العملية الآلية لإنتاج [68Ga] Ga-3BP-3940 باستخدام مركب GAIA V2 ، لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لبروتين تنشيط الخلايا الليفية. كما يتم عرض نتائج اختبارات مراقبة الجودة التي أجريت على ثلاث دفعات اختبار.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التحضير الآلي ل [68Ga] Ga-3BP-3940 على وحدة توليف لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني للبيئة المكروية للورم
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تم تطوير طريقة سريعة وفعالة على وحدة تخليق GAIA للوسم الإشعاعي الآلي للغاليوم -68 ل 3BP-3940 ، وهو مسبار تصوير جزيئي يستهدف بروتين تنشيط الخلايا الليفية لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني للبيئة المكروية للورم. تضمنت ظروف التفاعل عازلة الأسيتات (التركيز النهائي: 0.1 م) ، والميثيونين كعامل مضاد للتحلل الإشعاعي (التركيز النهائي: 5.4 مجم / مل) ، و 30 ميكروغرام من 3BP-3940 ، مع تسخين لمدة 8 دقائق عند 98 درجة مئوية. كانت خطوة التنقية النهائية على خرطوشة C18 ضرورية للحصول على منتج ذو علامات إشعاعية عالية النقاء. في المقابل ، تم استخدام 68Ga المنتج من المولد مباشرة دون خطوة تركيز على خرطوشة التبادل الكاتيوني. أكد إنتاج ثلاث دفعات للتحقق من موثوقية الطريقة ، مما سمح بتخليق [68Ga] Ga-3BP-3940 في 22.3 ± 0.6 دقيقة بنقاوة كيميائية إشعاعية عالية (RCP) ، على النحو الذي حددته كل من radio-HPLC (99.1٪ ± 0.1٪) و radio-TLC (99.2٪ ± 0.1٪). كان متوسط العائد الكيميائي الإشعاعي ، بناء على قيم RCP المقاسة بواسطة HPLC الراديوي ، 74.4٪ ± 3.3٪. تم إثبات ثبات المنتج الملصق بالإشعاع لمدة تصل إلى 4 ساعات بعد التحضير. يوفر هذا البروتوكول منهجية موثوقة وسريعة وفعالة لإعداد [68Ga] Ga-3BP-3940 ، والتي يمكن نقلها بسهولة إلى بيئة سريرية.
المقدمة
في السنوات الأخيرة ، اجتذب استهداف البيئة المكروية للورم (TME) اهتماما كبيرا بالتطبيقات التشخيصيةوالعلاجية 1. توفر وفرة أنواع الخلايا وجزيئات الإشارات والجزيئات الكبيرة خارج الخلية (ECM) داخل TME مجموعة واسعة من الأهداف الجزيئيةالمحتملة 2. من بين الخلايا المضيفة المقيمة والمتسللة ، تشكل الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) مجموعة فرعية مميزة من الخلايا الليفية داخل TME ، والتي تختلف ظاهريا عن الخلايا الليفية الطبيعية. تلعب CAFs أدوارا حاسمة في تطور الورم ، والورم الخبيث ، والتهرب المناعي ، ومقاومة العلاج من خلال الخصائص الخلوية والجزيئيةالفريدة 3. تظهر هذه الخلايا الوسيطة نمطا ظاهريا نشطا يتمي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: يتضمن هذا البروتوكول العمل مع النظائر المشعة. يجب أن يكون أي شخص يقوم بهذا الإجراء مدربا بشكل صحيح على التعامل مع المواد المشعة غير المختومة ويجب أن يحصل على موافقة من مسؤول السلامة الإشعاعية في مؤسسته. يجب وضع المركب الآلي في خلية ساخنة محمية مخصصة. يجب أيضا تنفيذ أي إجراءات يدوية تنطوي على مواد مشعة في خلية ساخنة محمية أو خلف الحماية الإشعاعية المناسبة.
1. تحضير الكواشف
ملاحظة: تم تحضير الكواشف المطلوبة للإنتاج الآلي ل [68Ga] Ga-3BP-3940 (انظر جدول المواد) في وحدة تحضير المستحضرات الصيدلانية المشعة (غرفة نظيفة GMP من الدرجة C). يمكن تحضير الكواشف بأي ترتيب وحتى....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تسمح عملية التوليف التي تم تطويرها على وحدة GAIA بوضع العلامات الراديوية بسرعة 68Ga ل 3BP-3940 في 21-22 دقيقة. تم تصميم هذا البروتوكول للعمل مع مولد GALLIAD 68Ge / 68Ga من الدرجة الصيدلانية ، والذي ينتج 1.1 مل من 68Ga eluate في 0.1 M HCl. تم ضبط حجم وموليارتية المخزن المؤقت للتفاعل بدقة وفقا لهذه الكمية من الحمض للحصول على درجة حموضة تفاعلية بين 3.5 و 4 ، وهو أمر ضروري للوضع الإشعاعيالأمثل 45. وهكذا ، تم استخدام أسيتات الصوديوم ذات المولارية النهائية 0.1.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يقدم هذا العمل بروتوكول تحضير آلي متوافق مع GMP لتوليف [68Ga] Ga-3BP-3940 باستخدام وحدة GAIA ومولد GALLIAD. تم تكييف هذه الطريقة من البروتوكولات المستخدمة في مركزنا للوسم الإشعاعي بالغاليوم 68 للنواقل مثل روابط PSMA44 ومثبطات FAP الأخرى43،46 للتصوير السريري بالإصدار البوزيتروني ، مع تعديلات طفيفة.
تم تصميم عملية الإنتاج لتكون بسيطة ومباشرة ويمكن تقسيمها إلى ثلاث مراحل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين شراكات تجارية أو مصادر تمويل من شأنها أن تؤدي إلى تضارب حقيقي أو متصور في المصالح فيما يتعلق بهذا العمل للإفصاح عنه.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون ياسمين سوالي وستيفان رينو وإيلودي غافن على مساعدتهم في إعداد تفاعلات الملصقات الإشعاعية المعروضة في هذه المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.2 & مرشحات صغيرة | VWR | 514-0515 | لترشيح المحاليل العازلة ومضادات الأكسدة ومنتج الملصقات الإشعاعية النهائي |
| Acetonitrile ل HPLC | Sigma Aldrich | 34851-2.5L | للتحكم في HPLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي |
| أسيتات الأمونيوم | Sigma Aldrich | 238074 | لإعداد إحدى المراحل المتنقلة لعمود التحكم TLC |
| C18 ل HPLC | VWR | EQV-3C18-1503 | للتحكم في HPLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي |
| معاير الجرعة المعايرة (CRC25) | Capintec | - | لقياس النشاط الإشعاعي للمنتج النهائي والمكونات المختلفة للوحدة بعد التوليف |
| عازلة السترات ، درجة الحموضة 4 | Thermofisher | 258585000 | المرحلة المتنقلة لضوابط TLC |
| أنبوب Eppendorf 5 مل Biopur | Sigma Aldrich | EP0030119479 | لتحضير المحاليل العازلة ومضادات الأكسدة |
| خط التمديد (30 سم) | Vygon | 1159.03 | لتوصيل المولد بمجموعة الأنابيب |
| مولد الغاليوم -68 | IRE Elit-For | في الموقع توليد [68Ga] كلوريد الغاليوم | |
| عداد جاما (Hidex AMG) | Hidex-لتقييم | نصف العمر والنقاء الكيميائي الإشعاعي | |
| HPLC | Shimadzu | - | للتحكم في HPLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي |
| لوحات iTLC-SG | Agilent | SGI0001 للتحكم في TLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي | |
| L-methionine | AppliChem | A1340 | لتحضير محلول مضاد للأكسدة |
| محول ذكر / ذكر | Vygon | 893.00 | لتوصيل المولد بمجموعة الأنابيب |
| الميثانول | Sigma Aldrich | 320390-1L | لإعداد إحدى المراحل المتنقلة لإبر التحكم في TLC |
| (21G ، Sterican) | B Braun | 4657543B | لنقل المحلول قبل وضع العلامات الراديوية |
| على ورق الأس الهيدروجيني | VWR | 85409.600 | لاختبار درجة الحموضة لمنتج الملصقات الراديوية |
| Pipette 1000 & micro ؛ L (جيلسون بيبتمان) | فيشر Scientific | 12346132-1000 | لقياس السائل بدقة ونقل |
| ماصة 200 & micro ؛ L (جيلسون بيتمان) | فيشر Scientific | 12326132-200 | لقياس دقيق للسوائل |
| ونقل أطراف الماصة ، 100-1000 مو ؛ L | Charles River | D1000IW | لقياس دقيق للسوائل ونقل |
| أطراف الماصة ، 2-200 & mu ؛ L | نهر تشارلز | D200IW | لقياس السائل بدقة ونقله |
| الكروماتوغراف الإشعاعي | إليسيا-Raytest-للتحكم | في TLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي | |
| مستشعر إشعاعي ل HPLC | Elysia-Raytest-للتحكم | في HPLC في مجموعة الكواشف ذات النقاء الكيميائي الإشعاعي | |
| ABX | RT-101 | يوفر الإيثانول 60٪ ، كلوريد الصوديوم 0.9٪ ، كيس WFI ، خرطوشة C18 ، 0.2 ومايكرو ؛ مرشح طرفي ، إبر تهوية ، إبرة طرفية وقارورة نفايات | |
| حاوية محمية | LemerPax | لتوهين الإشعاع لمنتج الملصقات الراديوية | |
| ملعقة بلاستيكية تستخدم مرة واحدة | Corning | 3005 | لتحضير الكواشف |
| أسيتات الصوديوم ثلاثي هيدرات EMPROVE | Sigma Aldrich | 1.28204 | لتحضير عازلة التفاعل |
| قوارير محكمة الغلق معقمة (نوع الزجاج) 1) | Curium | TC-ELU-5 | للتكييف النهائي لمحاليل العازلة ومضادات الأكسدة والعلامات الراديوية |
| مجموعة الأنابيب المعقمة | ABX | RT-01-H | للتخليق الآلي ل [68Ga] Ga-3BP-3940 |
| المياه المعقمة للري | B Braun | 0082479E | لإعداد إحدى المراحل المتنقلة لوحدة توليف التحكم TLC |
| (GAIA) | Elysia-Raytest | - | للتخليق الآلي ل [68Ga] حقنة Ga-3BP-3940 |
| (1 مل ، حجم ميت منخفض) | B Braun | 9166017V | للببتيد في تكييف المخزن المؤقت وإضافة الميثيونين في كلوريد الصوديوم 0.9٪ |
| محاقن (10 مل) | Becton Dickinson | 309649 | للميثيونين في كلوريد الصوديوم 0.9٪ ومحاقن التكييف |
| (3 مل) | Becton Dickinson | 309658 | للميثيونين والإيثانول 60٪ تكييف |
| خزانات الهجرة TLC | فيشر Scientific | 50-212-281 | للتحكم في TLC في النقاء الكيميائي |
| الإشعاعي حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (مناسب ل HPLC) | Sigma Aldrich | 302031-100ML | للتحكم في HPLC في أنابيب النقاء الكيميائي الإشعاعي |
| لعداد جاما | - | لإعداد فحوصات نصف العمر والنقاء الكيميائي | |
| الإشعاعي حمام بالموجات فوق الصوتية | Selecta | 3000683 | للصوتنة الحلول المعدة |
| جزيء ناقلات (3BP-3940) | MedChemExpress | HY-P10131 ؛ | جزيء المتجه المراد تسميته بالإشعاع |
| قارورة ل HPLC مع إدراج زجاجي | Sigma Aldrich | 29385-u و SU860066 | للتحكم في HPLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي |
| خلاط دوامة | VWR | 444-5900P | لتقليب المحاليل المحضرة |
| ماء ل HPLC | Sigma Aldrich | 34877-2.5L-M | للتحكم في HPLC في النقاء الكيميائي الإشعاعي |
| المياه للحقن ، قوارير 10 مل | Aguettan | 34009 370 641 0 1 | للحلول اعداد |
المراجع
- Xiao, Y., Yu, D. Tumor microenvironment as a therapeutic target in cancer. Pharmacol Ther. 221, 107753(2021).
- Zhang, L., et al. Targets of tumor microenvironment for potential drug development. MedComm Oncol. 3 (1), e68(2024).
- Fouillet, J., Torch....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
الوسم الإشعاعي بالجاليوم 68وحدة التخليق الآليتصوير البيئة الدقيقة للأورامالبروتين المنشط للخلايا الليفيةمسبار التصوير المقطعي بالإصدار البوزيترونيالنقاء الكيميائي الإشعاعيالتنقية باستخدام خرطوشة C18تحليل الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الإشعاعيتحليل الكروماتوغرافيا الطبقية الرقيقة الإشعاعيالتثبيت بالميثيونين
![التحضير الآلي ل [68Ga] Ga-3BP-3940 على وحدة توليف لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني للبيئة المكروية للورم](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F68356.jpg&w=3840&q=75)