نصف بروتوكولا لقياس التلامسات بين الخلايا في الطبقات الظهارية المجاورة في الأقراص الخيالية لجناح ذبابة الفاكهة الحية باستخدام نهج قائم على إعادة تكوين GFP.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نظام التعبير المزدوج القائم على تكميل GFP لتقييم ملامسة الخلية الخلوية بوساطة السيتونيمات في الأقراص الخيالية لجناح ذبابة الفاكهة الحية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يتم التحكم في نمو الأنسجة الجنينية ونمذجها إلى حد كبير عن طريق الإشارات المتبادلة محليا بين مجموعات الخلايا داخل الأنسجة نفسها. Cytonemes هي نوع من filopodia الإشارات التي تم تحديدها لأول مرة في ذبابة الفاكهة والتي تربط وتتوسط التبادل بين الخلايا المنتجة للإشارات والخلايا المستقبلة للإشارة. في القرص الخيالي لجناح ذبابة الفاكهة النامي ، تشارك السيتونيمات في تبادل الإشارات بين مجموعات متميزة من الخلايا داخل ظهارة القرص المناسب (DP) ، والتي ستشكل الجناح البالغ ، وكذلك بين خلايا DP والخلايا في الأنسجة المجاورة المرتبطة بالقرص. تتشابك Cytonemes مع الخلايا المستهدفة لتشكيل اتصالات غشائية حميمة.
هنا ، نقدم بروتوكولا لقياس الاتصال بوساطة السيتونيم بين خلايا DP وخلايا ظهارة الغشاء المحيط بالقبل المجاورة (PerM) ، والتي يتم فصلها عن خلايا DP بواسطة تجويف القرص ، باستخدام نهج إعادة تكوين GFP في أقراص الجناح الحي. باستخدام أنظمة GAL4-UAS و LexA-LexAop ، يتم التعبير عن الأجزاء التكميلية من انقسام GFP (spGFP1-10 ، spGFP11) ، كل منها مدمج في مجال الغشاء ل CD4 ، على جانبي تجويف القرص. ثم يتم استخدام تصوير مضان GFP المعاد تشكيله في مستحضرات قرص الجناح الحي بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر لإنشاء أكوام صور يمكن من خلالها توطين مضان GFP المعاد تشكيله وقياسه كميا. باستخدام هذا النظام ، من الممكن التعبير المشترك عن الجينات المعدلة وراثيا لترميز البروتين أو تداخل الحمض النووي الريبي في الخلايا المنتجة للسيتونيم أو الخلايا المستهدفة لقياس تأثيرها على ملامسات خلايا DP-PerM. هذا النظام ، القابل للتكيف بسهولة مع الأنسجة الأخرى ، وبالتالي يمكن من تحديد العوامل المهمة لتكوين السيتونيم أو وظيفته.
المقدمة
يتم التحكم في تطور الأنسجة الجنينية بواسطة الخلايا الموجودة في "مراكز التنظيم" التي تشير إلى الخلايا البعيدة داخل الأنسجة ، وتتحكم في قراراتها بالتكاثر (أي النمو والانقسام) أو تبني مصائرمعينة 1. يتم التوسط في هذه الإشارات غير المستقلة للخلية بواسطة الروابط التي تنتجها تنظيم الخلايا المركزية التي تشكل تدرجات تركيز عبر الأنسجة وتثير استجابات تعتمد على التركيز. في كثير من الحالات ، يتم تسليم هذه الروابط أو التقاطها من خلال خيطة إشارات طويلة قائمة على الأكتين تسمى cytonemes التي تربط الخلايا المرسلة والمستقبلة للإشارات في الأنسجة2،3. تم اكتشاف السيتونيمات لأول مرة في ذبابة الفاكهة الجناح الخيالي4 ، كما تم التعرف على السيتونيمات في الثدييات والفقاريات الأخرى5،6،7،8،9. يعد الفهم الأفضل لدور السيتونيمات في إشارات الخلايا غير المستقلة ، بينما في مرحلة مبكرة ، أمرا بالغ الأهمية لفك تشفير كيفية تواصل الخلايا للتنظيم في الأنسجة وكيف يتم تعديل خطوط الاتصال هذه في مختلف الظروف المرضية ، بما في ذلك التشوهات التنموية والسرطان.
يمكن أن تمتد السيتونيمات من خلايا المصدر لتوصيل الروابط إلى الخلايا المستهدفة أو من الخلايا المستهدفة لتلقي روابط قريبة من مصادرها2،3. تقوم Cytonemes بإجراء اتصالات حميمة مع أهدافها ، حيث يعتقد أنها تشكل هياكل شبيهة بالمشبك ، حيث يمكن أن يحدث نقل الترابط3،10،11. يمكن أن يحدث هذا الاتصال بين أطراف السيتونيمات المصدر والهدف أو بين السيتونيمات وأجسام الخلايا3. على الرغم من عدم تمييزه على نطاق واسع ، إلا أن التصاق الخلية من خلال جزيئات الالتصاق أو من خلال تفاعلات المستقبل والترابط ، في بعض الحالات ، ضروري للتنشيط المناسب لأحداث الإشارات النهائية12،13،14 ، مما يجعل هذا جانبا مهما من بيولوجيا السيتونيم.
طبقت العديد من الدراسات تقنية "إعادة تشكيل GFP عبر الشركاء المتشابكين" (GRASP) لتحليل جهات اتصال cytoneme. تم تطوير هذه الطريقة لتحديد ورسم خرائط الشركاء المشبكيين في الأجهزة العصبية المعقدة15. يعتمد على التعبير عن الجزأين التكميليين من انقسام GFP (spGFP1-10 و spGFP11) ، كل منهما يندمج في المنطقة خارج الخلية لمجال الغشاء (على سبيل المثال CD4) ، في مجموعات مختلفة من الخلايا. إذا اتصلت أغشية البلازما للخلايا في هاتين المجموعتين بشكل مباشر ، فإنها تجلب المجالات التكميلية ل spGFP على مقربة ، مما يؤدي إلى إعادة تكوين مضان GFP. تم استخدام هذا النهج في ذبابة الفاكهة لتحديد وجود اتصالات السيتونيم بين الخلايا داخل قرص الجناح وبين قرص الجناح والأنسجة الأخرى القريبة12،16،17،18،19،20،21.
تصف هذه الورقة تطبيق GRASP على توصيف التلامسات بين طبقتين ظهاريتين متميزتين شكليا من القرص الخيالي لجناح ذبابة الفاكهة ، القرص المناسب (DP) والغشاء المحيط (PerM). تشكل هذه الطبقات الظهارية كيسا يحيط بالتجويف المركزي ، مع وجود خلايا DP العمودية الكاذبة على جانب واحد وخلايا PerM الحرشفية على الجانب الآخر ، وكلاهما مع أغشية قمي متجهة للداخل باتجاه التجويف (الشكل 1 أ). هناك بعض الأدلة على الإشارات العرضية بين الطبقتين22،23،24،25 ، وقد وثقنا مؤخرا إشارات من DP للتحكم في تكاثر خلايا PerM التي يتم بوساطتها بواسطة السيتونيمات القمية في DP21. يتضمن هذا البروتوكول استخدام أنظمة التعبير الجينات المعدلة وراثيا GAL4 / UAS و LexA / LexAop للتعبير عن الأجزاء التكميلية من spGFP المدمجة في CD4 على أغشية خلايا DP و PerM. يستخدم مضان GFP المعاد تكوينه لقراءة ملامسة الغشاء بين مجموعتي الخلايا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتم استخدام برنامج تشغيل nubbin-GAL4 للتعبير عن CD4-spGFP1-10 على وجه التحديد في منطقة كيس الجناح في DP (الشكل 1 أ). يتم استخدام برنامج تشغيل PerM-LexA21 للتعبير عن CD4-spGFP11 على وجه التحديد في PerM (الشكل 1 أ). هذان النظامان للتعبير مستقلان عن بعضهما البعض ، مما يسمح بالتعبير المتزامن والمحدد للجينات المعدلة وراثيا المختلفة في DP و PerM (الشكل 1 ب ، ج).
يتضمن المخطط الجيني الأساسي عبور الذباب لتوليد يرقات من النمط الجيني nub-GAL4 / UAS-CD4-spGFP1-10. PerM-LexA / LexAop-CD4-spGFP11. كعنصر تحكم سلبي ، نترك الجين المعدل LexAop-CD4-spGFP11 . يمكن التعبير عن الجينات المعدلة وراثيا الأخرى (على سبيل المثال ، ترميز البروتين ، الحمض النووي الريبي المزدوج الشريطة) حسب الرغبة في طبقة DP (تحت سيطرة تسلسلات UAS ) أو في PerM (تحت سيطرة مشغل LexA).
هذا بروتوكول تصوير مباشر لا يمكن مقاطعته. يقدر تحضير المواد ب ~ 10 دقائق. لا ينبغي إجراء التشريح لأكثر من 20 دقيقة في المرة الواحدة قبل التصوير. يستغرق التصوير ~ 30 دقيقة ويجب ألا يستمر أكثر من ~ 1 ساعة. بالنسبة للحالات المتعددة أو العدد الكبير من العينات ، يجب تنفيذ الإجراء في جولات متعددة لضمان أفضل النتائج.
1. تحضير المواد
- قبل التشريح ، ملاقط نظيفة ، صفيحة بقعة زجاجية مكونة من 9 آبار (أو حاوية أخرى مناسبة لجمع اليرقات وتنظيفها) ، وطبق بتري مطلي بسيلجارد (السيليكون) القابل لإعادة الاستخدام يستخدم للتشريح بنسبة 70٪ من الإيثانول.
- قم بإعداد شرائح المجهر عن طريق غسل الإيثانول بنسبة 70٪ ثم لصق فاصل التصوير بالشريحة المجففة. قطع الآبار الفردية من الشريط المكون من 8 آبار بالمقص وقطعها إلى نصفين (الشكل 2 أ). قم بإزالة الدعامة الواقية من جانب واحد من كل نصف وألصق الفواصل على الشريحة ، متباعدة قليلا لإنشاء مساحة محمية في المنتصف حيث سيتم وضع الأقراص (الشكل 2 ب).
ملاحظة: في تجربتنا ، يبسط هذا تركيب العينة لأن الحجم الدقيق للوسيط المنقول إلى الشريحة أقل أهمية. أي حجم زائد صغير سوف يتدفق ببساطة عبر الفجوة عند التغطية. نظرا لأننا نصور لفترة قصيرة نسبيا فقط (بشكل عام ~ 1 ساعة) ، لم نواجه أي مشاكل في التجفيف المتوسط. - قم بإذابة الثلج في وسيط التصوير الحي ( ذبابة الفاكهة من شنايدر غير المكملة المخزنة في حصصات مجمدة سعة 10 مل) واحتفظ بها في متناول اليد بسهولة في دلو ثلج.
- في أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 2 مل ، امزج 1.5 مل من الوسط مع 20 ميكرولتر من 200 ميكروغرام / مل Hoechst 33342 (التركيز النهائي 2.7 ميكروغرام / مل). احتفظ بالأنبوب على الجليد.
ملاحظة: يتم استخدام هذا الشكل المحدد من صبغة Hoechst لأنه شديد النفاذية للغشاء. تنبيه: يجب استخدام القفازات عند التعامل مع Hoechst 33342. يجب غسل الأدوات بعد الاستخدام.
2. تشريح قرص الجناح وإعداد الشريحة
- بعد العبور الجيني والتربية عند 25 درجة مئوية ، اختر يرقات الطور الثالث المتجولة من الأنبوب واغسلها في وسط تصوير حي بارد في صفيحة بقعة زجاجية مكونة من 9 آبار.
ملاحظة: Cytonemes هشة للغاية. في الخطوات التالية ، يجب توخي الحذر لمعالجة الأنسجة حول الأقراص ، في محاولة لتجنب الاتصال المباشر بين الأقراص وأدوات التشريح. نقوم بإعداد ثلاث أو أربع يرقات في وقت واحد ، حيث لا مفر من إتلاف بعض الأقراص ، وقد يصبح هذا ملحوظا فقط أثناء خطوات التصوير. - تحت مجهر التشريح ، انقل اليرقات إلى قطرة من وسط التصوير الحي على طبق بتري مغطى بالسيليكون وابدأ في التشريح باستخدام ملقطين للتشريح. للقيام بذلك ، أمسك أولا الرأس والجزء الأمامي من الجسم بثبات عن طريق الضغط على اليرقات بزوج واحد من الملقط عند حوالي ثلث طول الجسم (من الأمامي). باستخدام الزوج الثاني من الملقط ، اضغط على الجسم خلف الملقط الأول. بعد ذلك ، اسحب الجزء الخلفي من اليرقات بعيدا لعزل "النصف" الأمامي.
- اقلب النصف الأمامي عن طريق تثبيته بزوج واحد من الملقط على جانبي الطرف المقطوع ودفع الرأس مع الزوج الآخر (مثل قلب الجورب من الداخل إلى الخارج) ، لفضح الهياكل الداخلية ، بما في ذلك الأقراص الخيالية والقصبة الهوائية والغدد اللعابية والجسم الدهني والأمعاء.
- قم بإزالة الغدد اللعابية والجسم الدهني والأمعاء بعناية ، مع الحرص على عدم إزعاج الجذوع الجانبية للقصبة الهوائية ، والتي يجب أن تغطي أقراص الجناح وتحميها.
- استخدم الملقط لنقل النصفين الأماميين النظيفين بعناية مع أقراص الجناح المرفقة إلى قطرة من وسط التصوير الحي النظيف باستخدام Hoechst ، الموضوعة بين الفواصل على شريحة معدة (الشكل 2 ج). اعزل أقراص الجناح عن بقية الأنسجة عن طريق تشريحها برفق بعيدا عن الفروع الدقيقة للقصبة الهوائية التي تتصل بالقرص ، باستخدام شفرة واحدة من ملقط التشريح أو سلك تنجستن ناعم متصل بحامل إبرة تشريح. تخلص من باقي الذبيحة.
- قم بتوجيه الأقراص باستخدام شفرة واحدة من ملقط التشريح أو إبرة تشريح سلك التنغستن. نظرا لشكلها المسطح الذي يشبه قطرة الدموع ، ستسقط أقراص الجناح مع توجيه DP أو PerM لأعلى. بالنسبة لهذا البروتوكول ، قم بتوجيه جميع الأقراص بحيث يكون جانب PerM لأعلى.
- اضبط الحجم المتوسط لملء البئر بالكامل ، إلى أعلى قليلا من مستوى فاصل التصوير ، إما عن طريق إضافة أو إزالة الوسيط حسب الحاجة. قم بإزالة الدعامة الواقية من الجانب العلوي لكل نصف فاصل تصوير ثم قم بخفض الغطاء بعناية فوق العينة. اضغط برفق على الغطاء حيث يلامس فواصل التصوير (على سبيل المثال ، مع الطرف المستدير لملقط التشريح) للتأكد من أن الغطاء يلتصق بالفاصل.
ملاحظة: يجب أن يكون المستوى المتوسط أعلى قليلا من ارتفاع الفاصل لتجنب احتجاز فقاعات الهواء ، ولكن ليس مرتفعا لتوليد تدفق كبير عند خفض الغطاء.
3. التصوير
- صور عينات في درجة حرارة الغرفة باستخدام مجهر متحد البؤر (ليزر أيون الأرجون بطول موجي 488 نانومتر ل GFP ، ليزر الأشعة فوق البنفسجية بطول موجي 350 نانومتر ل Hoechst) مزود بعدسة غمر بالزيت 40x / 1.30 NA وبرنامج الفحص المجهري. احصل على مجموعات صور بحجم خطوة 1 ميكرومتر تمتد من أعلى مستوى من PerM (حيث يتضاءل مضان Hoechst) إلى الجانب القاعدي من DP ، والذي يعمل بشكل عام على أكثر من 100 صورة لكل مكدس. احصل على مجموعات صور متكررة لإنشاء أفلام بفاصل زمني.
ملاحظة: نقوم بتصوير شريحة لمدة لا تزيد عن ~ 1-2 ساعة. - بالنسبة لإعدادات برنامج المجهر ، احصل على صور باستخدام ترميز 8 بت ، ومتوسط الخط 2 ، وكسب الكاشف بشكل عام بين 650 و 750 ، ومسارات القنوات المنفصلة لتقليل نزيف الإشارة. استخدم إعدادات الليزر والكاشف المتطابقة لجميع الحالات ، المحددة مسبقا من خلال إجراء الاختبارات على كل حالة مسبقا.
ملاحظة: عند التكبير 40x ، تبلغ دقة صورنا 5.0386 بكسل لكل ميكرومتر (حجم البكسل: 0.1985 × 0.1985 ميكرومتر2). في إعدادنا ، تضمنت إعدادات المجهر متحد البؤر المثلى أعلى كثافة ليزر ممكنة (دون الإضرار بالأنسجة) لالتقاط أكبر قدر ممكن من الإشارة ، بينما في نفس الوقت تعطي القليل من التشبع أو معدومه. وأقل ضوضاء ممكنة كما تم تقييمها على عناصر التحكم السلبية ، والتي يتم تحقيقها عن طريق تقليل إزاحة الكاشف وسرعة الاستحواذ (إذا لزم الأمر). نستخدم بشكل عام أقل من 5٪ من طاقة الليزر وسرعة رأس المسح القصوى ("9" في إعدادات برنامج Zen). عادة ما تستغرق مكدس الصور الفردي ~ 1 دقيقة و 45 ثانية للحصول عليها ، ويتم التقاط الصور كل 2-3 دقائق لتحليلات الفاصل الزمني.
4. تحليل الصور
- مكدسات المشروع باستخدام وظيفة الإسقاط القصوى للكثافة لحزمة برامج ImageJ (انقر على الصورة | مكدسات | Z project، حدد الحد الأقصى للكثافة في القائمة).
- في صور MIP ، حدد مساحة كيس الجناح بناء على نمط طي قرص الجناح (باستخدام قناة Hoechst) باستخدام اختيار المضلع. استخدم نفس التحديد على قناة GFP باستخدام وظيفة Clear Outside (انقر فوق تحرير | امسح من الخارج) لتعيين كل قيمة بكسل خارجية على 0.
- في صور MIP ، استخدم قناة Hoechst لتنظيف صور GFP ، وتحديدا قم بإزالة أي بقع مصطلحة تظهر في كلتا القناتين عن طريق تعيين قيمة البكسل المعنية إلى 0 (انقر فوق تحديد المضلع ، ثم تحرير | مسح).
- في صور MIP التي تم تنظيفها ، استخدم وظيفة الرسم البياني (انقر فوق تحليل | الرسم البياني | List) للحصول على قائمة بجميع قيم البكسل ونسخها إلى جدول في جدول بيانات.
- قم بتعيين قيمة عتبة بناء على تحليل إشارة الخلفية في عناصر التحكم السلبية (ثم التحقق منها في عينات أخرى ؛ انظر المناقشة).
- احسب النسبة المئوية للسطح الإيجابي ل GFP باستخدام الصيغة التالية:
٪ سطح إيجابي GFP =
× 100 - قم بتطبيع البيانات في النهاية بقسمة كل قيمة على متوسط الشرط المرجعي (الذي تم تعيينه على 1).
ملاحظة: بكسل صالح = بكسل بقيمة ≥ 1، يتجاهل فعليا أي بكسل محذوف تم تعيين قيمته على 0. لا تحدث قيم البكسل 0 بشكل طبيعي. - لتحديد مكان توطين إشارة GFP المعاد تشكيلها في الأقراص ، استخدم XZ-reslices لمكدسات الصور للنظر في المحور القاعدي لظهارة القرص. قم بإجراء عمليات إعادة التقطيع في فيجي دون الاستيفاء ، وقم بزيادة ارتفاع الصورة في المحور Z باستخدام وظيفة المقياس مع الاستيفاء ثنائي الخط لتحسين الرؤية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لاختبار فائدة إجراء GRASP لقياس التلامس بين خلايا DP و PerM ، قمنا بفحص أقراص الجناح لأربعة أنماط وراثية مختلفة: أقراص التحكم السلبي من النوع البري (النمط الجيني: w1118) والتي ستعرض فقط مستويات الخلفية من التألق الذاتي في قناة GFP. الأقراص التي تعبر عن CD4-spGFP1-10 في طبقة DP ، ولكنها تفتقر إلى الجين المعدل CD4-spGFP11 ، والذي سيظهر مستوى التألق الناتج عن GFP1-10 وحده (والذي توقعنا أن يكون ضئيلا ، حيث لا ينبغي أن يتألق GFP1-1026) ؛ الأقراص التي يتم فيها التعبير عن CD4-spGFP1-1...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تلعب السيتونيمات دورا مهما في توزيع الروابط ، والتحكم في نمو وتنظيم الأنسجة النامية. يحدث تبادل الإشارة حيث تقوم أطراف cytoneme بإجراء اتصالات غشائية حميمة مع أهدافها. في هذا البروتوكول ، نصف طريقة بسيطة لتحليل التلامسات بوساطة السيتونيم بين الطبقات الظهارية في قرص الجناح باستخدام تقنية GRASP.
تتطلب التقنية المعروضة هنا ، كحد أدنى ، أربعة مكونات - سائق GAL4 ، وسائق LexA ، والجينات المعدلة وراثيا تشفران اندماج CD4 لشظايا spGFP التكميلية تحت تحكم UAS و ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ مصالح متنافسة يعلنون عنها.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من خلال منحة CIHR (PJT-162109) إلى D.H. M.J. حصل على منحة دكتوراه من مؤسسة معهد أبحاث عيادة مونتريال ومن برنامج البيولوجيا الجزيئية بجامعة مونتريال. يقر المؤلفون بشدة بمساعدة منصة IRCM للفحص المجهري والتصوير.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجهر تشريح Discovery V12 | زييس | مجهر تشريح | |
| دومون # 55 ملقط ، نصائح علم الأحياء | أدوات العلوم الجميلة | 11255-20 | تشريح الملقط |
| EP-Slik (slik20358) | BDSC | Panneton et al. 2015 | سلالة ذبابة للتعبير عن سليك |
| فيجي | Schindelin J. et al. (2012) | برنامج تحليل الصور | |
| Hoechst 33342 | ثيرموفيشر العلمية | [ه3570 ]; | التصوير المباشر للبقع النووية |
| LexAop-CD4-spGFP11 < / م> | BDSC | 93018 | سلالة الذبابة |
| مجهر متحد البؤر LSM 700 ؛ | زييس | مجهر متحد البؤر | |
| nub-GAL4< / em> | مركز بلومنجتون ذبابة الفاكهة (BDSC) | 86108 | سلالة الذبابة |
| PerM-LexA | رامبو ، جوزيف وآخرون ، 2025 | سلالة الذبابة | |
| PYREX 9-منخفض زجاج بقعة لوحة | كورنينج لايف ساينسز | 7220-85 | لجمع وغسل اليرقات |
| ذبابة الفاكهة المتوسطة من شنايدر | ثيرموفيشر العلمية | 21720024 | وسيط التصوير الحي |
| فواصل التصوير SecureSeal ، 8 آبار ، سمك 0.12 مم ؛ | جريس بيو لابز | 654008 | فاصل |
| طقم مطاط صناعي من السيليكون SYLGARD 184 | سيلجارد | 3097358-1004 | لصنع لوحات التشريح |
| UAS-CD4-spGFP1-10 < / م> | BDSC | 93017 | سلالة الذبابة |
| زن بلاك | زييس | برنامج الاستحواذ |
المراجع
- Ng, J. K., Tamura, K., Buscher, D., Izpisua-Belmonte, J. C. Molecular and cellular basis of pattern formation during vertebrate limb development. Curr Top Dev Biol. 41, 37-66 (1999).
- Kornberg, T. B. Cytonemes and the dispersion of morphogens. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 3 (6), 445-463 (2014).
- Daly, C. A., Hall, E. T., Ogden, S. K. Regulatory mechanisms of cytoneme-based morphogen transport. Cell Mol Life Sci. 79 (2), 119(2022).
- Ramirez-Weber, F. A., Kornberg, T. B. Cytonemes: cellular processes that project to the principal signaling center in Drosophila imaginal discs. Cell. 97 (5), 599-607 (1999).
- Hall, E. T., et al. Cytoneme delivery of Sonic Hedgehog from ligand-producing cells requires Myosin 10 and a Dispatched-BOC/CDON co-receptor complex. Elife. 10, e61432(2021).
- Sanders, T. A., Llagostera, E., Barna, M. Specialized filopodia direct long-range transport of SHH during vertebrate tissue patterning. Nature. 497 (7451), 628-632 (2013).
- Stanganello, E., et al. Filopodia-based Wnt transport during vertebrate tissue patterning. Nat Commun. 6, 5846(2015).
- Hall, E. T., et al. Cytoneme signaling provides essential contributions to mammalian tissue patterning. Cell. 187 (2), 276-293.e23 (2024).
- Zhang, C., Brunt, L., Ono, Y., Rogers, S., Scholpp, S. Cytoneme-mediated transport of active Wnt5b-Ror2 complexes in zebrafish. Nature. 625 (7993), 126-133 (2024).
- Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. Glutamate signaling at cytoneme synapses. Science. 363 (6430), 948-955 (2019).
- Wood, B. M., et al. Cytonemes with complex geometries and composition extend into invaginations of target cells. J Cell Biol. 220 (5), e202101116(2021).
- Gonzalez-Mendez, L., Seijo-Barandiaran, I., Guerrero, I. Cytoneme-mediated cell-cell contacts for Hedgehog reception. Elife. 6, e24045(2017).
- Du, L., Sohr, A., Li, Y., Roy, S. GPI-anchored FGF directs cytoneme-mediated bidirectional contacts to regulate its tissue-specific dispersion. Nat Commun. 13 (1), 3482(2022).
- Roy, S., Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. Cytoneme-mediated contact-dependent transport of the Drosophila decapentaplegic signaling protein. Science. 343 (6173), 1244624(2014).
- Feinberg, E. H., et al. GFP Reconstitution Across Synaptic Partners (GRASP) defines cell contacts and synapses in living nervous systems. Neuron. 57 (3), 353-363 (2008).
- Yang, S., et al. Competitive coordination of the dual roles of the Hedgehog co-receptor in homophilic adhesion and signal reception. Elife. 10, e65770(2021).
- Patel, A., et al. Cytonemes coordinate asymmetric signaling and organization in the Drosophila muscle progenitor niche. Nat Commun. 13 (1), 1185(2022).
- Chen, W., Huang, H., Hatori, R., Kornberg, T. B. Essential basal cytonemes take up Hedgehog in the Drosophila wing imaginal disc. Development. 144 (17), 3134-3144 (2017).
- Huang, H., Kornberg, T. B. Myoblast cytonemes mediate Wg signaling from the wing imaginal disc and Delta-Notch signaling to the air sac primordium. Elife. 4, e06114(2015).
- Hatori, R., Kornberg, T. B. Hedgehog produced by the Drosophila wing imaginal disc induces distinct responses in three target tissues. Development. 147 (22), dev195974(2020).
- Rambaud, B., et al. Slik sculpts the plasma membrane into cytonemes to control cell-cell communication. EMBO J. 44 (8), 2186-2210 (2025).
- Gibson, M. C., Schubiger, G. Peripodial cells regulate proliferation and patterning of Drosophila imaginal discs. Cell. 103 (2), 343-350 (2000).
- Gibson, M. C., Lehman, D. A., Schubiger, G. Lumenal transmission of decapentaplegic in Drosophila imaginal discs. Dev Cell. 3 (3), 451-460 (2002).
- Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. Egfr/Ras pathway mediates interactions between peripodial and disc proper cells in Drosophila wing discs. Development. 130 (20), 4931-4941 (2003).
- Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. Signaling interactions between squamous and columnar epithelia of the Drosophila wing disc. J Cell Sci. 118 (Pt 15), 3363-3370 (2005).
- Pedelacq, J. D., Cabantous, S. Development and applications of superfolder and split fluorescent protein detection systems in biology. Int J Mol Sci. 20 (14), 3479(2019).
- Panneton, V., et al. Regulation of catalytic and non-catalytic functions of the Drosophila Ste20 kinase Slik by activation segment phosphorylation. J Biol Chem. 290 (34), 20960-20971 (2015).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
