يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التعرف السريع على النيسرية البنية والكلاميديا الحثرية واليوريابلازما يوريتيكوم عن طريق مقايسة التدفق الجانبي لتضخيم الحمض النووي الريبي

698 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68413

⸱

يونيو 20, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First People's Hospital of Foshan

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا يوضح مقايسة التدفق الجانبي لتضخيم الحمض النووي الريبي ونقيم فعاليته للكشف السريع عن النيسرية البنية والكلاميديا الحثرية واليوريابلازما والواقعي.

الملخص

النيسرية البنية (NG) والكلاميديا الحثرية (CT) و Ureaplasma urealyticum (UU) هي مسببات الأمراض الشائعة المرتبطة بالأمراض المنقولة جنسيا (STDs). NG هو العامل المسبب للسيلان ، والذي يمكن أن يؤدي إلى اضطرابات مختلفة في الجهاز البولي التناسلي ، بما في ذلك التهاب البربخ والتهاب البروستاتا والتهاب عنق الرحم والعقم. التصوير المقطعي المحوسب هو كائن حي دقيق مسؤول عن التهاب الإحليل غير المكورات البنية ومرض التهاب الحوض. يرتبط UU بالتهاب الإحليل غير المكورات البنية والتهاب عنق الرحم والتهاب البروستاتا والعقم. غالبا ما تكون التقنيات الجزيئية الحالية لتحليل NG و CT و UU معقدة وتستغرق وقتا طويلا. قد يسهل الاختبار الجزيئي السريع لهذه مسببات الأمراض التشخيص المبكر للأمراض المنقولة جنسيا. مقايسة التدفق الجانبي لتضخيم الحمض النووي الريبي (RGT) هي طريقة لا تتطلب استخراج الحمض النووي. في هذه العملية ، يتم تحلل العينات لإطلاق شظايا الحمض النووي ، والتي يتم تضخيمها بعد ذلك من خلال النسخ العكسي والنسخ. يتم التعرف على منتج الحمض النووي الريبي المضخم والتقاطه بواسطة مجسات محددة ، مما يشكل مركبا مسبارا ذهبيا للكشف عن الحمض النووي الريبي يمكن تثبيته على غشاء النيتروسليلوز عبر التدفق الجانبي لإنتاج نطاقات مرئية. يستغرق الإجراء بأكمله أقل من 1 ساعة. كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم فعالية RGT للكشف السريع عن NG و CT و UU. تم تضمين ما مجموعه 1,416 عينة. كان اتساق NG و CT و UU عند تحليله بواسطة RGT مقارنة بطريقة التحقيق الفلوري لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) 99.03٪ (307/310) و 99.38٪ (159/160) و 99.02٪ (303/306) ، على التوالي. كان اتساق NG و CT و UU عند تحليلها بواسطة RGT مقارنة بالتسلسل الجيني 99.17٪ (238/240) و 98.95٪ (188/190) و 98.30٪ (173/176) ، على التوالي. بالمقارنة مع طريقة ثقافة عزل مسببات الأمراض ، كانت معدلات الكشف عن فحوصات NG و CT و UU 100.00٪ (9/9 ، 17/17 ، 8/8). تجعل الحساسية العالية والخصوصية وسهولة الاستخدام ومتطلبات الوقت المنخفضة هذا الاختبار مثاليا للكشف السريع والدقيق عن NG و CT و UU.

المقدمة

تمثل الأمراض المنقولة جنسيا تحديات عالمية كبيرة في مجال الصحة العمومية، مما يؤدي إلى اعتلال ووفيات خطيرة في الأعضاء التناسليةوالإنجابية1. النيسرية البنية (NG) هي العامل المسبب لمرض السيلان ، حيث يتم الإبلاغ عن حوالي 87 مليون حالة جديدة سنويا في جميع أنحاءالعالم 2. يؤدي هذا العامل الممرض في المقام الأول إلى حدوث التهاب عن طريق غزو الظهارة العمودية للجهاز البوليالتناسلي 3. الكلاميديا الحثرية (CT) ، وهي كائن حي دقيق آخر ، مسؤولة عن التهاب الإحليل غير المكورات البنية والتهابات الحوض ، حيث تمثل حوالي 130 مليون حالة جديدة كل عام4. يوريابلازما يوريتيكوم ، أبسط وأصغر خلية ذاتية التكاثر، تغزو بسهولة أنسجة عنق الرحم التالفة وترتبط بالتهاب الإحليل غير المكورات البندي والتهاب عنق الرحم والتهاب البروستاتا والعقم5. غالبا ما تكون كل هذه العدوى بدون أعراض في كل من المرضى من الإناث والذكور ، ومع ذلك يمكن أن تؤدي إلى مضاعفات خطيرة إذا لم يتم علاجها على الفور. يمكن أن تؤدي عدوى الأمهات إلى نتائج حمل ضارة خطيرة ، بما في ذلك ولادة جنين ميت والإجهاض والولادة المبتسرة والعدوى المباشرة للجنين6. لذلك ، فإن تطوير طريقة سريعة وحساسة ومحددة وسهلة الاستخدام للكشف عن مسببات الأمراض له أهمية قصوى.

يعد الكشف السريع والدقيق لمسببات الأمراض أمرا بالغ الأهمية لتشخيص الأمراض وإدارتها بشكل فعال. وأساليب الاستزراع التقليدية، التي تتطلب عزل مسببات الأمراض وثقافتها وتحديدها، لها عيوب كبيرة، بما في ذلك كونها تستغرق وقتا طويلا وذات حساسية منخفضة. على الرغم من أن التسلسل الجيني يتميز بمعدل دقة عال ، إلا أنه يتطلب بيئة ومعدات معقدة ، مما يجعله مكلفا ويستغرق وقتا طويلا أيضا. تم قبول التقنيات الجزيئية التقليدية لتحليل NG و CT و UU على نطاق واسع. ومع ذلك ، غالبا ما تكون هذه الأساليب معقدة وتستغرق وقتا طويلا ، وتتطلب أجهزة متطورة وفنيين مدربين وأوقات معالجة ممتدة. لذلك ، هناك حاجة ملحة لطريقة تشخيص جزيئية بسيطة وموثوقة لمعالجة قيود الأساليب التقليدية. يوفر مقايسة التدفق الجانبي لتضخيم الحمض النووي الريبي (RGT) بديلا سريعا وحساسا ومحددا دون الحاجة إلى إجراءات معقدة7،8. في هذه الطريقة ، يتم تحلل العينات مباشرة لإطلاق شظايا الحمض النووي دون استخراج الحمض النووي ، ويتم تضخيم هذه الأجزاء من خلال النسخ العكسي والنسخ. ثم يتم التعرف على منتج الحمض النووي الريبي المضخم والتقاطه بواسطة مجسات محددة ، مما يشكل مركبا مسبارا ذهبيا للكشف عن الحمض النووي الريبي ، والذي يمكن تثبيته على غشاء النيتروسليلوز عبر التدفق الجانبي لإنشاء نطاقاتمرئية 9. تستغرق العملية برمتها أقل من 1 ساعة ، مما يجعلها مناسبة للغاية للاختبارات المعملية في حالات الطوارئ.

في هذه الدراسة ، قمنا بتجنيد 1,416 عينة لتقييم استخدام RGT للكشف عن NG و CT و UU. تم تحليل العينات باستخدام RGT ، وفحص مضان تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والتسلسل الجيني ، وطرق زراعة عزل مسببات الأمراض. أشارت النتائج إلى أن طريقة RGT كانت دقيقة ومتسقة مع طرق التشخيص التقليدية. في الختام ، فإن الحساسية العالية والخصوصية وسهولة الاستخدام ومتطلبات الوقت المنخفضة تجعل هذا الاختبار مثاليا للكشف السريع والدقيق عن NG و CT و UU ، مما يشير إلى تطبيقه الواعد في التشخيص الطبي الأولي للأمراض المنقولة جنسيا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية والموافقة الممنوحة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لمستشفى الشعب الأول في فوشان بمقاطعة قوانغدونغ بالصين (وثيقة المراجعة الأخلاقية رقم 10). LR (2025) 136). تم جمع ما مجموعه 1,416 عينة من مسحات الأعضاء التناسلية (716 من المرضى الإناث ، 700 من المرضى الذكور) من الأفراد المشتبه سريريا في إصابتهم بالأمراض المنقولة جنسيا والذين لم يخضعوا للعلاج بالمضادات الحيوية خلال ال 14 يوما السابقة (الجدول التكميلي 1). لكل مشارك ، تم الحصول على مسحات مقترنة في وقت واحد وتحليلها بالتوازي: أحدهما بطريقة الاختبار (RGT) والآخر بالطريقة المرجعية (فحص مضان PCR ، والتسلسل الجيني ، وثقافة عزل مسببات الأمراض ، على التوالي). تم تحديد الاتفاق بين الأساليب باستخدام معامل كابا كوهين (κ) ، مع التفسير الموجه بمعايير لانديس وكوخ.

ملاحظة: يتبع بروتوكول الفحص ل CT و UU خطوات إجرائية مماثلة لتلك الموضحة ل NG ، مع التعديلات التي تقتصر على الكواشف الخاصة بمسببات الأمراض. يتم توفير تركيبات الكاشف التفصيلية في الخطوة 2.1 (الجدول التكميلي 2 ، الجدول التكميلي 3 ، والجدول التكميلي 4).

1. جمع العينات

  1. نوع العينة المطبقة: اجمع مسحات الأعضاء التناسلية (مسحة عنق الرحم الأنثوية ، مسحة مجرى البول الذكرية).
  2. جمع العينات
    1. أدخل مسحة الأعضاء التناسلية في فتحة مجرى البول الذكرية لمدة 2-3 سم أو في فتحة عنق الرحم الأنثوية لحوالي 1-2 سم.
    2. قم بالتدوير مرة واحدة واستمر لمدة 10 ثوان.
    3. قم بإزالة المسحة وإدخالها في أنبوب التجميع الذي يحتوي على 1 مل من المحلول الملحي العادي.
    4. اقطع ذيل المسحة وتخلص منه ، ثم شد غطاء الأنبوب.
    5. سجل وقت التجميع وقم بإجراء الاختبار على الفور.
  3. تخزين العينات ونقلها
    1. نقل العينات في درجة حرارة الغرفة (RT) في غضون 4 ساعات أو عند 2-8 درجات مئوية مع كيس ثلج في غضون 24 ساعة.
    2. قم بتخزين كريات الخلايا المتبقية من العينات المعالجة عند -20 درجة مئوية لمدة 3 أشهر أو -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر إذا تعذر إجراء الاختبارات في الوقت المناسب.

2. التحضير

  1. الكواشف
    1. للحصول على كواشف مقايسة الحمض النووي NG ، راجع الجدول التكميلي 2.
    2. للحصول على كواشف مقايسة الحمض النووي المقطعي المحوسب ، راجع الجدول التكميلي 3.
    3. للحصول على كواشف مقايسة الحمض النووي UU ، راجع الجدول التكميلي 4.
    4. التخزين: قم بتخزين جميع الكواشف في درجات حرارة تتراوح من -40 درجة مئوية إلى -15 درجة مئوية وبطاقات الكشف في درجات حرارة تتراوح بين 2 درجة مئوية و 30 درجة مئوية.
      ملاحظة: يجب موازنة المخزن المؤقت للتضخيم وحل الكشف مع RT قبل الاستخدام، بناء على متطلبات الكشف اليومية. بعد الوصول إلى RT ، يجب تخزينها عند 4 درجات مئوية ويمكن استخدامها للكشف التالي. تجنب التجميد والذوبان المتكررين. يجب تخزين إنزيم التضخيم عند -20 درجة مئوية إلا أثناء العملية التجريبية. يمكن أن تؤدي الزيادة في درجة حرارة التخزين إلى انخفاض أو فقدان نشاط الإنزيم.
  2. متطلبات البيئة التجريبية
    1. قم بإجراء التجربة في أربع مناطق منفصلة جسديا:
      1. منطقة تحضير الكاشف: يحافظ على درجة حرارة 22 ± 1 درجة مئوية مع ضغط هواء إيجابي (معدل تدفق الهواء عالي الكفاءة المفلتر بالهواء الجسيمي (HEPA) ≥ 0.3 م / ث). قم بتخزين الكواشف المقتبسة مسبقا في خزانات معقمة بالأشعة فوق البنفسجية.
      2. منطقة تحضير العينة: قم بإجراء جميع مناولة العينات في خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية المعالجة مسبقا بنسبة 70٪ من الإيثانول.
      3. منطقة التضخيم: قم بتشغيل الدراجات الحرارية على طاولات مضادة للاهتزاز.
      4. منطقة تحليل المنتج: استخدم مقعدا معقما بالأشعة فوق البنفسجية (30 دقيقة من التعرض قبل / بعد الاستخدام).
    2. تنظيم الأفراد وتدفق الهواء في كل قسم لمنع التلوث المتبادل على النحو التالي:
      1. حافظ على تدفق الهواء أحادي الاتجاه من تحضير الكاشف إلى مناطق تحليل المنتج.
      2. تأكد من الضغط السلبي في منطقة تحضير العينة (-5 باسكال بالنسبة للمناطق المجاورة).
      3. تقييد حركة الأفراد. تطهير القفازات بنسبة 75٪ من الإيثانول قبل انتقالات المنطقة.
      4. قم بتركيب أبواب غرفة معادلة الضغط مع أنظمة التعشيق (تأخير 30 ثانية على الأقل بين الفتحات).
    3. استخدم المواد الاستهلاكية الخاصة بالمنطقة (على سبيل المثال، أنابيب أجهزة الطرد المركزي، وأطراف الماصة، وما إلى ذلك) وتخلص من المواد الاستهلاكية بعد الاستخدام الواحد.
    4. الحفاظ على النظافة ومراقبة الجودة:
      1. نظف المقاعد يوميا بنسبة 10٪ هيبوكلوريت الصوديوم متبوعا بنسبة 75٪ من الإيثانول أو الماء المقطر.
      2. التحقق من صحة العقم القابل للاستهلاك عن طريق اختبار السموم الداخلية (مقايسة محللة الخلايا الأميبية ، <0.25 يورو / مل).
      3. راقب جودة الهواء أسبوعيا باستخدام ألواح التسوية (أجار الصويا التربتي [TSA] أجار ، ≤5 وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) / لوحة بعد التعرض لمدة 4 ساعات).
  3. مؤهلات الموظفين
    1. امتلاك شهادات أو مؤهلات تتعلق بتقنية PCR لضمان دقة وموثوقية هذه التجربة.

3. لبزيل الخلايا لاستخراج الحمض النووي الريبي

  1. معالجة العينات
    1. دوامة أنبوب جمع العينات بسرعة 2,600 مرة / دقيقة لمدة 10 ثوان لإخراج الخلايا من رأس المسحة إلى المحلول.
    2. انقل 1 مل من المحلول إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل باستخدام ماصة معايرة مضبوطة على 1000 ميكرولتر.
    3. جهاز طرد مركزي عند 12,000 × جم لمدة دقيقتين عند 25 درجة مئوية.
    4. استنشق 950 ميكرولتر من المادة الطافية دون إزعاج الحبيبات. أعد تعليق الكريات في 25 ميكرولتر من المحلول المتبقي عن طريق سحب الكريات لأعلى ولأسفل 10 مرات باستخدام ماصة معايرة سعة 200 ميكرولتر مضبوطة على 50 ميكرولتر.
  2. تحلل العينات ومواد مراقبة الجودة
    1. المخزن المؤقت لتحلل الخلايا قبل التوازن والتحكم السلبي عند 25 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
    2. الطرد المركزي مواد مراقبة الجودة عند 1000 × جم لمدة 10 ثوان عند 25 درجة مئوية لضمان استقرار جميع المساحيق في قاع الأنبوب.
    3. أضف 30 ميكرولتر من محلول التحلل إلى مواد مراقبة الجودة و 20 ميكرولتر إلى العينات.
    4. احتضن لمدة 10 دقائق عند 25 درجة مئوية.
      ملاحظة: عند استخدام المخزن المؤقت لتحلل الخلية ، من الضروري مزجه جيدا. امزج عن طريق سحب العينات 15 مرة (طرف 200 ميكرولتر) وأضف كل من الجسيمات والسائل إلى الراسب. تعامل مع التحكم الإيجابي في خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية المعالجة بالأشعة فوق البنفسجية متبوعة بإزالة تلوث هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 10٪.

4. تضخيم الحمض النووي الريبي متساوي الحرارة

  1. التوازن المسبق للمخزن المؤقت للتضخيم
    1. قم بإذابة المخزن المؤقت للتضخيم والتوازن عند 25 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
  2. إعداد التحكم
    1. قم بتضمين كل من التحكم الإيجابي والسلبي في كل تشغيل تجريبي.
  3. وضع العلامات على الأنبوب
    1. أنابيب تضخيم الملصقات وفقا لعدد العينات.
  4. تجميع رد الفعل
    1. ماصة 17 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتضخيم في كل أنبوب باستخدام ماصة معايرة سعة 20 ميكرولتر. أضف 2 ميكرولتر من العينة أو تحلل التحكم مباشرة في قطرة العازلة.
      ملاحظة: تأكد من دخول المحللة إلى المخزن المؤقت دون ملامسة جدار الأنبوب (باختصار جهاز طرد مركزي عند 500 × جم لمدة 5 ثوان إذا لزم الأمر). قم بتغطية الأنابيب على الفور لمنع تلوث الهباء الجوي.
  5. التنشيط الحراري
    1. احتضان الأنابيب في جهاز تدوير حراري مسخن مسبقا بموجب البرنامج التالي:
      الخطوة 1: 95 درجة مئوية لمدة دقيقتين (تمسخ)
      الخطوة 2: 42 درجة مئوية لمدة دقيقتين (التلدين التمهيدي).
  6. التضخيم الأنزيمي
    1. أضف 1 ميكرولتر من إنزيم التضخيم إلى كل أنبوب واخلطه عن طريق تحريك الأنبوب 5 مرات متبوعا بالطرد المركزي القصير (500 × جم لمدة 5 ثوان). انقل الأنابيب إلى جهاز تدوير حراري ثان مسخن مسبقا عند 42 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة على الفور.
      ملاحظة: استخدم حاضنات منفصلة لتجنب تقلبات درجات الحرارة ، واحدة على 95 درجة مئوية والأخرى على 42 درجة مئوية. بالنسبة للتشغيل متعدد العينات ، حافظ على أنابيب التضخيم المتبقية عند 42 درجة مئوية مع إضافة إنزيم التضخيم إلى أنبوب التضخيم الأخير.

5. فحص التدفق الجانبي

  1. التوازن المسبق لحل الكشف
    1. انقل محلول الكشف إلى الحاضنة عند 42 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
  2. التجانس
    1. دوامة محلول الكشف عند 2,600 مرة / دقيقة لمدة 15 ثانية حتى يصبح اللون موحدا.
  3. الحفاظ على درجة الحرارة
    1. احتفظ بمحلول الكشف عند 25 درجة مئوية ± 2 درجة مئوية لمدة ≤30 دقيقة قبل الاستخدام.
  4. بدء التفاعل
    1. أضف 30 ميكرولتر من محلول الكشف إلى كل أنبوب تضخيم باستخدام ماصة معايرة 20-200 ميكرولتر.
      ملاحظة: يجب أن يتصل طرف الماصة بجدار الأنبوب بزاوية 45 درجة أثناء الاستغناء عن التوزيع لمنع تكون الفقاعة.
  5. التهجين
    1. امزج المحلول عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل 5 مرات واحتضانه في حاضنة مسخنة مسبقا عند 53 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
  6. تحضير جهاز الفحص
    1. قم بإزالة بطاقات الكشف من أكياس القصدير.
      ملاحظة: تجنب لمس منطقة تطبيق العينة.
  7. نموذج التطبيق
    1. انقل الخليط بالكامل إلى منفذ العينة الخاص ببطاقة الكشف باستخدام ماصة 20-200 ميكرولتر.
    2. ضع بطاقة الكشف على الفور في حاضنة 42 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

6. تحليل النتائج

  1. بيئة خاضعة للرقابة للقراءات
    1. احتفظ ببطاقات الكشف في حاضنة مسخنة مسبقا عند 53 درجة مئوية أثناء الترجمة المرئية لتحقيق الاستقرار في شدة الإشارة.
  2. بروتوكول التفسير البصري
    1. اقرأ نتائج الاختبار مباشرة عن طريق الفحص البصري للأشرطة الموجودة على بطاقات الكشف في غضون 10-20 دقيقة.
      ملاحظة: تصبح النتيجة غير صالحة بعد 20 دقيقة.
  3. للاطلاع على مصفوفة التفسير لتفسير نتائج RGT، يرجى الرجوع إلى الجدول التكميلي 5.
    ملاحظة: يظهر التفسير البصري للنتيجة في الشكل 1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

اتساق طرق الفحص الفلوري RGT و PCR
تم تحليل ما مجموعه 310 عينة من أجل NG ، تتكون من 161 أنثى و 149 ذكرا. وبلغت نسبة المصادفة الإيجابية 98.78٪ (مجال الموثوقية 95٪: 93.39٪-99.97٪)، بينما كانت نسبة المصادفة السلبية 99.12٪ (مجال الموثوقية 95٪: 96.87٪-99.89٪). كان معدل المصادفة الإجمالي 99.03٪ (مجال الموثوقية 95٪: 97.20٪ -99.80٪). كانت قيمة اتساق كابا 0.975 (فاصل الثقة 95٪: 0.947-1.003 ، Z = 17.171 ، ص < 0.05) (الجدول 1). كانت ه...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة ، تم استخدام RGT للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة بالاتصال الجنسي ، بما في ذلك NG و CT و UU. عند إجراؤه بموجب بروتوكولات تشغيلية صارمة ، أظهر اختبار RGT توافقا قويا مع طرق التشخيص المعمول بها مثل فحص مضان تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والتسلسل الجيني ، وتقنيات ثقافة عزل مسببات الأمراض. كانت حساسية وخصوصية مقايسة RGT قابلة للمقارنة أو تجاوزت تلك الخاصة بالمنهجيات المبلغ عنها سابقا ، كما يتضح من التحليلات المقارنة مع المعايير المرجعيةالمعمول بها 10

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

نشكر شركة Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc. على الكواشف والإرشادات الفنية المقدمة لهذه الدراسة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10٪ (وزن / حجم)   تحضير هيبوكلوريت الصوديومفي المختبر.التحضير في المختبر.محلول التبييض المخفف لإزالة التلوث وتعطيل مسببات الأمراض على المعدات أو الأسطح.
75٪ (v / v) الإيثانولAnte Food Co.، Ltd (آنهوي ، الصين)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlمحلول الإيثانول المائي المستخدم لتطهير السطح
ماصة قابلة للتعديل الحجم (0.5 & ndash ؛ 10 و مو ؛ ل)DLAB العلمية المحدودة7010101004ماصة دقيقة أحادية القناة للتعامل الدقيق مع أحجام مقياس الميكرولتر.
ماصة الحجم القابل للتعديل (100 – 1000 مو ؛ ل)DLAB العلمية المحدودة7010101014ماصة أحادية القناة تمت معايرتها لمعالجة السوائل بكميات كبيرة.
ماصة الحجم القابل للتعديل (10 – 100 مو ؛ ل)DLAB العلمية المحدودة7010101008ماصة أحادية القناة محسنة للأحجام المتوسطة، وتستخدم بشكل شائع في بروتوكولات البيولوجيا الجزيئية.
ماصة قابلة للتعديل الحجم (20 – 200 مو ؛ ل)DLAB العلمية المحدودة7010101009ماصة أحادية القناة لعمليات النقل متوسطة الحجم، ومناسبة للتوزيع الدقيق للكواشف.
خزانة السلامة الحيوية (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (هونغ كونغ ، الصين) خزانةHF Safe-1200A من الفئة الثانية تضمن حماية الأفراد والعينة والبيئة أثناء التعامل مع الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض أو مزارع الخلايا.
أنابيب الطرد المركزيHaozhi Medical Devices Co.، Ltd. (قوانغتشو ، الصين)رقم 20210414 ملف الأجهزة الطبية في قوانغتشو Yuexiuلاستخراج الحمض النووي ، وتكوير الخلايا ، والإجراءات المختبرية الأخرى.
مقايسة الحمض النووي Chamydia trachomatis (CT) (مقايسة تضخيم الحمض النووي الريبي - مقايسة التدفق الجانبي)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ووهان ، الصين)A.10.309-STD-RG-002للكشف النوعي عن الحمض النووي الريبي للحمض النووي Chamydia trachomatis في عينات مسحة الأعضاء التناسلية والمسالك البولية.
CO2< / sub> حاضنةThermo Fisher Scientific (آشفيل ، الولايات المتحدة الأمريكية) LLCSN:تستخدم لزراعة الخلايا ، وتوفر بيئة مستقرة مع درجة حرارة يتم التحكم فيها (37 درجة ؛ ج) ، والرطوبة ، وتركيز ثاني أكسيد الكربون 2< / sub> (عادة 5٪) لضمان النمو الأمثل للخلايا.
لوحة الثقافة كورنينج إنكوربوريتد (كورنينج ، الولايات المتحدة الأمريكية)50 مم & حاد ؛ 9 مملزراعة الخلايا الملتصقة وتوسعها.
مجموعة الكشف عن الحمض النووي إلى Chamydia trachomatis (CT) (PCR-Fluorescence Probing) FosunDiagnostics (شنغهاي ، الصين) المحدودةشهادة تسجيل الأجهزة الطبية الصينية رقم 20143402234للكشف النوعي عن الحمض النووي لداء الحثرة الحثرية في عينات مسحة الأعضاء التناسلية والمسالك البولية.
مجموعة الكشف عن الحمض النووي إلى النيسرية البنية (NG) (PCR-Fluorescence Probing) FosunDiagnostics (شنغهاي ، الصين) المحدودةشهادة تسجيل الأجهزة الطبية الصينية رقم 20173401080للكشف النوعي عن الحمض النووي للنيسرية البنية في عينات مسحة الأعضاء التناسلية والمسالك البولية.
مجموعة الكشف عن الحمض النووي إلى Ureaplasma Urealyticum (UU) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (شنغهاي ، الصين) المحدودةشهادة تسجيل الأجهزة الطبية الصينية رقم 20173400536للكشف النوعي عن الحمض النووي ل Ureaplasma Urealyticum في عينات مسحة الأعضاء التناسلية والمسالك البولية.
DMEM متوسطThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكية)11965092لثقافة الكلاميديا الحثرية.
أطراف ماصة المرشح (10 & mu; ل)قوانغتشو Surbiopure التكنولوجيا الحيوية المحدودة (قوانغتشو ، الصين)TF-10-BXLلسحب العينات بدقة في التجارب.
أطراف ماصة المرشح (200 مو ؛ ل)قوانغتشو Surbiopure التكنولوجيا الحيوية المحدودة (قوانغتشو ، الصين)TF-200-BXLلسحب العينات بدقة في التجارب.
مسحة الأعضاء التناسليةHaozhi Medical Devices Co.، Ltd. (قوانغتشو ، الصين)Hz112مسحات قطنية معقمة لجمع العينات السريرية من أسطح الغشاء المخاطي للأعضاء التناسلية.
مصل الأبقار الجنينية من جيبكو (FBS)شركة ثيرمو فيشر العلمية (والثام ، الولايات المتحدة الأمريكية)10270106لثقافة الكلاميديا الحثرية.
الشرائح الزجاجيةHaozhi Medical Devices Co.، Ltd. (قوانغتشو ، الصين)إيداع الأجهزة الطبية في قوانغتشو Yuexiu 20210414زجاجية قياسية مع علاج مضاد للبهتان لإعداد مسحات الخلايا أو أقسام الأنسجة ، متوافقة مع بروتوكولات تلطيخ الجرام.
Goldenstar RT6 cDNA Synthesis Kit Ver2Beijing Tsingke Biotech Co.، Ltd (بكين ، الصين)TSK302Sلتخليق الخيط الأول من (كدنا) في الخطوة الأولى من RT-PCR المكون من خطوتين. يحتوي على جميع الكواشف المطلوبة لتخليق (كدنا) من الحمض النووي الريبي.
Gram Stain KitBaso Diagnostics، Inc. (Zhuhai ، الصين)BA4012مجموعة تلطيخ تحتوي على البنفسج الكريستالي واليود ومزيل اللون والسافرانين للتمييز بين Neisseria Gonorrhoea.
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (New York, USA)الإصدار 25.0لتحليل البيانات.
معقم الأشعة تحت الحمراءHuaxixinrui (تشينغداو) الأدوات التحليلية المحدودةMJ-200Wلإزالة التلوث الفوري لحلقات التلقيح أو الملقط ، مما يقلل من التلوث المتبادل في خزانات السلامة الحيوية.
حلقة التلقيحBKMAM Biotechnology Co.، Ltd. (Hunan ، الصين)110306002لنقل العينات الميكروبية أو الخطوط أو التلقيح.
المجهر المقلوب (IX-51)شركة أوليمبوس (طوكيو ، اليابان)رمز أصول المختبر:  71807101لمراقبة الخلايا الملتصقة أو ديناميكيات الخلايا الحية في أطباق الاستزراع.
نظام قياس الطيف الكتلي الميكروبي الآلي MALDI BiotyperBruker Daltonics GmbH & Co. KG (بريمن ، ألمانيا)تسجيل استيراد الأجهزة الطبية الوطنية رقم 20182222017نظام قائم على قياس الطيف الكتلي MALDI-TOF لتحديد الميكروبات بسرعة من خلال توصيف البروتين ، مما يتيح تحديد أنواع البكتيريا والفطريات في مختبرات علم الأحياء الدقيقة السريرية.
خطوط خلايا مكويمحفوظة في المختبر.محفوظة في المختبر.لثقافة الكلاميديا الحثرية.
حاضنة ميكروبليت ترموستاتي Leopard70-4 (سعة 4 ألواح)Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co.، Ltd.Leopard70-4حاضنة صفيحة دقيقة تستوعب ما يصل إلى 4 ألواح دقيقة قياسية ، مع نطاق درجة حرارة من محيط إلى 70 درجة ؛ ج,  تستخدم لخطوات الحضانة.
مجهر (أوليمبوس CX43)شركة أوليمبوس (طوكيو ، اليابان)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/لمراقبة العينة السريرية (على سبيل المثال ، مورفولوجيا الخلية ، العينات الملطخة).
معدني صغير MiniG-R100Leaptec Scientific Instruments (بكين) المحدودةMiniG-R100لتنظيم درجة الحرارة بسرعة أثناء التجربة ، مثل التسخين أو الحضانة أو إنهاء التفاعلات في عينات صغيرة الحجم.
مقايسة الحمض النووي Neisseria pinorrhoeae (NG) (مقايسة تضخيم الحمض النووي الريبي - مقايسة التدفق الجانبي)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ووهان ، الصين)A.10.309-STD-RG-001للكشف النوعي عن الحمض النووي الريبي للنيسرية البنية في عينات مسحة الأعضاء التناسلية والمسالك البولية.
كاشف استخراج الحمض النوويووهان تشونغتشي للتقنيات الحيوية (ووهان ، الصين)A.10.105-SC-001لاستخراج وتخصيب وتنقية الأحماض النووية.
وسيط نقل العيناتQIAGEN N.V. (فينلو ، هولندا)5128-1220تم تصميم هذه الوسيلة خصيصا لجمع العينات السريرية وحفظها ونقلها ، مما يضمن صلاحية الكلاميديا الحثرية   ؛ و  النيسرية البنية   للاختبارات التشخيصية اللاحقة.
جهاز الطرد المركزي الحراريBeckman Coulter، Inc. (Brea ، الولايات المتحدة الأمريكية)SN: MRZ21L037لتكوير الخلايا أو الميكروبات أو الحمض النووي.
TM المتوسطةشنغهاي Yihua العلوم الطبية & شركة التكنولوجيا المحدودة (شنغهاي ، الصين)الجهاز الطبي Shanghai Pu رقم 20140081TM الوسيط لعزل وزراعة وتحديد النيسرية البنية من العينات السريرية للمساعدة في تشخيص مرض السيلان.
Trypsin-EDTA (0.25٪) شركةThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكية)25200072للتفكك اللطيف للخلايا الملتصقة أثناء الزراعة الفرعية أو الإجراءات التجريبية.
مقايسة الحمض النووي Ureaplasma urealyticum (UU) (مقايسة تضخيم الحمض النووي الريبي - مقايسة التدفق الجانبي)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ووهان ، الصين)A.10.309-STD-RG-003للكشف النوعي عن الحمض النووي الريبي Ureaplasma Urealyticum في عينات مسحة الأعضاء التناسلية والمسالك البولية.
Ureaplasma urealyticum و Mycoplasma hominis ثقافة العزل الانتقائي وتحديد الهوية وحساسية الأدوية مجموعةأدوات Hebei Zhongaisheng Biotechnology Co.، Ltd. (Hebei ، الصين)تسجيل الجهاز الطبي Hebei 20152400168للعزل الانتقائي ، والثقافة ، وتحديد الهوية ، وتحديد حساسية الدواء ل Ureaplasma urealyticum و Mycoplasma hominis.
خلاط دوامةXinkang Medical Instrument Co. Ltd (جيانغسو ، الصين)XK80-Aجهاز مختبر لتجانس العينات السائلة عن طريق التحريض السريع.
السلامة البيولوجية 300504406 رقم شرائح رقم حمام يمكن استخدام ملف رقم

المراجع

  1. Hufstetler, K., Llata, E., Miele, K., Quilter, L. A. S. Clinical updates in sexually transmitted infections, 2024. J Womens Health (Larchmt). 33 (6), 827-837 (2024).
  2. Sunkavalli, A., McClure, R., Genco, C. Molecular regulatory mechanisms drive emergent pathogenetic properties of Neisseria gonorrhoeae. Microorganisms. 10 (5), 922(2022).
  3. Quillin, S. J., Seifert, H. S. Neisseria gonorrhoeae host adaptation and pathogenesis. Nat Rev Microbiol. 16 (4), 226-240 (2018).
  4. Rowley, J., et al. Chlamydia, gonorrhoea, trichomoniasis, and syphilis: global prevalence and incidence estimates, 2016. Bull World Health Organ. 97 (8), 548-562 (2016).
  5. Rittenschober-Boehm, J., et al. Intrauterine detection of Ureaplasma species after vaginal colonization in pregnancy and neonatal outcome. Neonatology. 121 (2), 187-194 (2024).
  6. Liu, T., et al. Analysis of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae infections among obstetrics and gynecological outpatients in southwest China: a retrospective study. BMC Infect Dis. 22 (1), 283(2022).
  7. Song, J., Zhang, L., Zeng, L., Xu, X. Visualized lateral flow assay for dual viral RNA fragment detection. Anal Chem. 95 (30), 11187-11192 (2023).
  8. Dighe, K., Moitra, P., Alafeef, M., Gunaseelan, N., Pan, D. A rapid RNA extraction-free lateral flow assay for molecular point-of-care detection of SARS-CoV-2 augmented by chemical probes. Biosens Bioelectron. 200, 113900(2002).
  9. Liu, C. C., Yeung, C. Y., Chen, P. H., Yeh, M. K., Hou, S. Y. Salmonella detection using 16S ribosomal DNA/RNA probe-gold nanoparticles and lateral flow immunoassay. Food Chem. 141 (3), 2526-2532 (2013).
  10. Pereyre, S., Caméléna, F., Hénin, N., Berçot, B., Bébéar, C. Clinical performance of four multiplex real-time PCR kits detecting urogenital and sexually transmitted pathogens. Clin Microbiol Infect. 28 (5), 733.e7-733.e13 (2022).
  11. Morris, S. R., Bristow, C. C., Wierzbicki, M. R., et al. Performance of a single-use, rapid, point-of-care PCR device for the detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, and Trichomonas vaginalis: a cross-sectional study. Lancet Infect Dis. 21 (5), 668-676 (2021).
  12. Pflüger, L. S., Nörz, D., Grunwald, M., et al. Analytical and clinical validation of a multiplex PCR assay for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis including simultaneous LGV serotyping on an automated high-throughput PCR system. Microbiol Spectr. 12 (3), e0275623(2024).
  13. Huang, Y., et al. Droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 21 (1), 804(2021).
  14. Ma, Y., et al. Comparison of analytical sensitivity of DNA-based and RNA-based nucleic acid amplification tests for reproductive tract infection pathogens: implications for clinical applications. Microbiol Spectr. 11 (5), e0149723(2023).
  15. Van Der Pol, B., et al. Multicenter comparison of nucleic acid amplification tests for the diagnosis of rectal and oropharyngeal Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. J Clin Microbiol. 60 (1), e0136321(2022).
  16. Luo, H., et al. An isothermal CRISPR-based diagnostic assay for Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis detection. Microbiol Spectr. 11 (6), e0046423(2023).
  17. Tu, Q., et al. Point-of-care detection of Neisseria gonorrhoeae based on RPA-CRISPR/Cas12a. AMB Express. 13 (1), 50(2023).
  18. Caruso, G., Giammanco, A., Virruso, R., Fasciana, T. Current and future trends in the laboratory diagnosis of sexually transmitted infections. Int J Environ Res Public Health. 18 (3), 1038(2021).
  19. Yang, J. L., et al. Comparison of an rRNA-based and DNA-based nucleic acid amplification test for the detection of Chlamydia trachomatis in trachoma. Br J Ophthalmol. 91 (3), 293-295 (2007).
  20. Luo, Z. G., Li, R. P., Wang, Y. B., Shang, X. J., Zhu, J. Y. Real-time fluorescence constant-temperature simultaneous amplification and testing of nucleic acid for detection of Mycoplasma genitalium infection in the genitourinary tract. Zhonghua Nan Ke Xue. 25 (6), Chinese 535-538 (2019).
  21. Zhang, T., et al. Light-up RNA aptamer signaling-CRISPR-Cas13a-based mix-and-read assays for profiling viable pathogenic bacteria. Biosens Bioelectron. 176, 112906(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الفيديو قريباً
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.