يصف هذا البروتوكول إنتاجا منخفض التكلفة وطريقة تحقق فعالة لبناء TMA القائم على الغراء ، مما يوفر منصة تشخيص مرضية ملائمة لأبحاث الأورام والأمراض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
بناء المصفوفات الدقيقة للأنسجة القائمة على الغراء لأبحاث الأورام والأمراض
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تقنية المصفوفات الدقيقة للأنسجة (TMA) هي منصة عالية الإنتاجية للكشف والتحليل المتزامن لعينات الأنسجة المتعددة ، مما يسهل البحث الفعال عن المؤشرات الحيوية للأورام والأمراض. ومع ذلك ، غالبا ما تواجه طرق بناء TMA التقليدية قيودا مثل التعقيد التشغيلي والإجراءات التي تستغرق وقتا طويلا والدقة المتغيرة. تم تطوير طريقة بناء TMA القائمة على الغراء للتغلب على هذه التحديات ، مما يوفر تثبيتا محسنا للب الأنسجة وثباتا هيكليا محسنا. وشمل التحقق المنهجي التقييم النسيجي (تلطيخ HE) ، والتنميط الكيميائي المناعي للبروتينات المستهدفة ، وتحليل التهجين الموضعي (FISH). أظهرت النتائج أن الطريقة القائمة على الغراء حافظت على سلامة ممتازة للشرائح ، وتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء ، وضمان قابلية التكرار المتسقة من دفعة إلى دفعة. على الرغم من أن هذا النهج يقتصر على التشغيل اليدوي ، إلا أنه يقدم خيارا موثوقا وفعالا من حيث التكلفة لإنتاج TMA متوسط الإنتاجية. هذه الطريقة مناسبة بشكل خاص لبيئات البحث التي تقدر المرونة وتنوع العينات على الأتمتة على نطاق واسع ، مما يوسع من فائدة TMA في الإعدادات الأكاديمية والتشخيصية.
المقدمة
المصفوفة الدقيقة للأنسجة (TMA) هي تقنية عالية الإنتاجية لتحليل عينات الأنسجة1،2،3. يتم الحصول على نوى أنسجة مانحة متعددة ، ويتم نقل كتل البارافين المانحة إلى كتل الأنسجة المتلقية للتحليل الجزيئي التفاضلي والمقارن المتزامن في ظل نفس ظروف الأداءنظريا 2،4. الطريقة الكلاسيكية لبناء مصفوفة دقيقة للأنسجة (TMA) هي استخدام ثقب لاستخراج نوى الأنسجة من عينة أنسجة متبرع وترتيبها بالتتابع في كتلة البارافين المتلقية. هذه الطريقة مناسبة لكتل البارافين المانحة ذات العمق المماثل وتسمح بالتحليل الفعال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم الحصول على جميع كتل المتبرعين من العينات المرضية الأرشيفية التي تم جمعها بين عامي 2016 و 2018 في مستشفى هوايان الشعبي رقم 1 التابع لجامعة نانجينغ الطبية. تم إلغاء تحديد العينات قبل استخدامها ومعالجتها وفقا للبروتوكولات المعتمدة (لجنة الأخلاقيات التابعة لمستشفى Huai'an الشعبي رقم 1 التابع لجامعة نانجينغ الطبية ، KY-2024-250-01).
1. تقييم ووضع علامات على أنسجة المتبرع بها
- حدد كتل الأنسجة بسمك ≥5 مم ومساحة ≥15 مم × 15 مم. تأكد من هامش أمان 2 مم عند الحواف ، واستبعد المناطق التي تظهر عليها نخر أو نزيف أو تكلس للحفاظ على سلامة الأنسجة.
- تحديد المنطقة المستهدفة ووضع علامات....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في هذه الدراسة ، تم إنشاء مصفوفات دقيقة عالية الجودة للأنسجة باستخدام طريقة الغراء. للتحقق من فعالية الطريقة ، تم إجراء سلسلة من التجارب ، بما في ذلك تلطيخ H & E ، والكشف الكيميائي المناعي لبروتينات معينة ، وتحليل التهجين الفلوري في الموقع (FISH). يتمثل أحد المكونات الحاسمة في عملية البناء في وجود نقاط أساسية للأنسجة في المواضع والمسافات المتوقعة بعيدا عن بعضها البعض ، والتي يتم تقييمها عن طريق الفحص البصري. يظهر الفحص البصري لكتل TMA أن النوى موجودة ومتباعدة بانتظام في كل TMA (الشكل 2 أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
كطريقة مبتكرة لبناء المصفوفات الدقيقة للأنسجة (TMA) ، أظهرت طريقة الغراء مزايا كبيرة نظرا لسهولة إجراءات البناء والفعالية من حيث التكلفة. بالمقارنة مع طريقة مصفوفة الإبرة التقليدية ، التي تعتمد على الأدوات المتطورة14،15 ، تتيح طريقة الغراء تثبيت العينة عن طريق اللصق ، والذي يمكن القيام به باستخدام الأدوات الأساسية فقط ، مما يقلل بشكل كبير من العتبة الفنية. على عكس طريقة التضمين التقليدية ، يتم إصلاح طريقة اللصق عن طريق الاستغناء .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
شكرا لأعضاء الفريق على دعمهم ومساهمتهم في هذه التجربة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طقم الكشف عن سرطان الثدي HER2 | Anbiping | 2502001 | طقم الكشف عن سرطان الثدي HER2 |
| الجسم المضاد CDHR4 | Abcam | ab166914 | CDHR4 الجسم المضاد |
| CDK1 الجسم المضاد | Abcam | ab265590 | CDK1 الجسم المضاد |
| CRTAC1 | Abcam | ab254691 | CRTAC1 الأجسام المضادة |
| DNASE1L3 الأجسام المضادة | Abcam | ab203669 | آلة تضمين الأجسام المضادة DNASE1L3 |
| PSJ Medical | BM450A | آلة التضمين | |
| مجفف الأنسجة الأوتوماتيكي بالكامل | Leica Biosystems | ASP3005 | مجفف الأنسجة الأوتوماتيكي بالكامل |
| شرائح المجهر الزجاجي | Citotest | 250124A1 | المجهر الزجاجي |
| الغراء | TIZO | 200 | الغراء |
| GPR146 الجسم المضاد | Abcam | ab117104 | GPR146 الجسم المضاد |
| IGSF10 الجسم المضاد | Abcam | ab197671 | IGSF10 الجسم المضاد |
| ITIH1 الجسم المضاد | Abcam | ab233032 | ITIH1 الجسم المضاد |
| المنخفض الأنظار Microtome شفرات | Thermo Fisher | 3052835 | المظهر المنخفض Microtome شفرات |
| علامة القلم | ديلي | SK109 | قلم تحديد |
| Microtome | Leica Biosystems | HistoCore BIOCUT | Microtome |
| شمع البارافين | Solarbio | YA0012 | شمع البارافين |
| SMAD9 الجسم المضاد | Abcam | ab262940 | SMAD9 الجسم |
| المضاد TARBP1 الجسم المضاد | Abcam | ab115896 | TARBP1 الجسم المضاد |
| ZCCHC24 الجسم المضاد | Abcam | ab88756 | ZCCHC24 الأجسام المضادة |
المراجع
- Bingle, L., Fonseca, F. P., Farthing, P. M. Constructing tissue microarrays: Protocols and methods considering potential advantages and disadvantages for downstream use. Oral Biol Mol Tech Appl. Seymour, G. J., Cullinan, M. P., Heng, N. C. K. , 429-438 (2017).
- Chung, L. K., et al. Tissue microarray analysis for epi....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
