يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
يصف هذا البروتوكول إجراءات التخزين البارد الممتد للكبد وزرع تقويم العظام في السنجاب الأرضي الدوريان (DGS; Spermophilus dauricus) ، سبات موسمي نموذجي. ويشمل طرقا لحصاد ترقيع الكبد وعينات الدم لإجراء تقييمات تنبؤية ومعالجتها للدراسات القائمة على الخلية الواحدة.
يمثل التعافي الوظيفي للطعم والتوافق المناعي للمضيف مخاوف تنبؤية رئيسية بعد زراعة الكبد. بشكل حاسم ، تقدم نماذج القوارض التقليدية التي تستخدم الفئران أو الفئران نظرة ثاقبة محدودة لآليات إصابات الكسب غير المشروع الناجمة عن انخفاض حرارة الجسم أثناء الحفظ. وتؤكد هذه الفجوة الحاجة إلى نماذج بديلة. منذ ترقيع الكبد من السنجاب الأرضي Daurian المتكيف على البارد (DGS; Spermophilus dauricus) يمكن أن يحافظ على الحفاظ على البرد لفترات طويلة وبالتالي يدعم القدرة العالية على البقاء على قيد الحياة في DGSs بعد الزرع ، وبالتالي ، فإن هذا البروتوكول يوضح بالتفصيل رعاية الأساسية بعد الجراحة والمراقبة الفسيولوجية المطلوبة لموضوعات DGS المزروعة. علاوة على ذلك ، فإنه يوفر إجراءات موحدة لإعداد عينات ترقيع الكبد عالية الجودة للتقنيات التحليلية النهائية ، بما في ذلك تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية (scRNA-seq) للتنميط النسخي والفحص النسيجي المرضي. يعد توليد عينات ترقيع DGS المعدة جيدا بنجاح الخطوة الأولى الحاسمة في تطبيق كل من المنهجيات التقليدية والمتطورة لدراسة هذا النموذج غير التقليدي ولكنه وثيق الصلة. يعالج هذا البروتوكول المعلومات متعددة الأوميك ل DGS ، وبالتالي تسهيل البحث المستقبلي حول التدخلات الجراحية ونمذجة الأمراض ليس فقط في القوارض السبات ولكن أيضا في الكائنات الحية المتخصصة الأخرى.
في العقدين الماضيين ، أدرك المزيد والمزيد من الباحثين أن القدرات التكيفية الفائقة للأنواع في حالة السبات توفر فرصا لا تقدر بثمن للكشف عن آليات جديدة في التكيف البيولوجي ، ويمكن أن تلهم اختراقات في مختلف المجالات الطبية مثل الحفاظ على الأعضاء وإعادة التأهيل الأيضي1،2،3،4،5،6،7،8. أول بروتوكول جراحي شامل للحفاظ على البرد لفترات طويلة للكبد وزرع تقويم العظام في السبات ، الس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على جميع التجارب على من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه بجامعة بكين (LSC-WangSQ-2). تم إنتاج DGS المستخدمة في هذه الدراسة في المختبر بواسطة الإناث الحوامل DGS التي تم التقاطها في الأراضي العشبية في مدينة Zhangjiakou. كان عمر حوالي 1-2 سنة وقت التجربة. تم استخدام DGS ، من الذكور والإناث ، والتي يتراوح وزنها بين 180 و 400 جم ، كمتبرعين ومتلقين. كان وزن المتلقي أكبر قليلا من وزن المتبرع ، بفارق أقل من 50 جم. يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.
1. رعاية ما بعد الزرع
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
كشف الفحص النسيجي للطعوم المخزنة عند 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة وزرعها في DGS عن بنية فصيصات الكبد الطبيعية مع الحد الأدنى من علامات الالتهاب أو النخر أو ركود صفراوي في يومي ما بعد الجراحة 3 و 6 ، مقارنة بالمجموعة التي يتم تشغيلها بواسطة الوهم (الشكل 4A-C).
يستغرق عزل خلايا الكبد الأولية من DGS بعد الجراحة حوالي ساعة واحدة. باستخدام البروتوكول الموصوف ، يمكن الحصول على أكثر من 5 × 107 خلايا كبدية ، مع بقاء الخلية بحوالي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
باتباع البروتوكول الذي يصف حفظ الكبد البارد من المتبرع وزرعها في DGSs ، فإن الإجراءات الموضحة هنا توضح بالتفصيل المراقبة بعد الجراحة والإدارة الدوائية المصممة خصيصا ل DGSs المزروعة بكبد مخزنة على البارد لمدة 24 ساعة على الأقل. يتيح هذا البروتوكول بقاء المتلقي على قيد الحياة بعد 7 أيام بعد الزرع ، مما يدل على مزايا واضحة للسبات كنماذج بحثية للحفاظ على الأعضاء13،14 والزرع على نماذج القوارض القياسية.
هنا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى أصحاب البلاغ تضارب في المصالح للإعلان.
تم دعم هذه الدراسة من قبل المشروع الرئيسي للأمراض المزمنة غير المعدية - العلوم والتكنولوجيا الوطنية (2023ZD0507600) ، ومنح المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82170671 ، 92254301 ، 32230048 ، 82371794 ، 32301306) ، البرنامج الوطني للبحث والتطوير (2024YFA0916804) ، والأكاديمي لمؤسسة التعليم بجامعة تشجيانغ مؤسسة Shusen Lanjuan Talent Foundation.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1&مرات ؛ برنامج تلفزيوني | سيرفيسبيو | جي 4202 | |
| 10× برنامج تلفزيوني | سيرفيسبيو | جي 4207 | |
| 4٪ بارافورمالديهايد | بيوشارب | BL539 أ | |
| بوبرينورفين | شافعي | H12020276 | |
| قنية (22 جم) | براون | 4254090 ب | |
| سيفوروكسيم | سيليك | E4838 | |
| طبق زراعة الخلايا (60 مم) | عش | 705001 | |
| الكولاجيناز الرابع | سيجما ألدريتش | ج 5138 | |
| أنبوب مخروطي (15 مل) | عش | 601052 | |
| أنبوب مخروطي (50 مل) | عش | 602052 | |
| مسحة قطنية | متجر مستلزمات المنزل | ||
| Countstar عدد الخلايا الآلي | رويو | الكونت ستار ريجل S2 | |
| دي إم إيم / إف 12 | جيبيكو | C11330500BT | |
| إيجا تي إي تي إي | سيجما ألدريتش | E4378 | |
| FBS | جيبكو | 10099-141 | |
| مرشح (0.22 μ m) | ميرك ميليبور | SLGP033RB | |
| فلتر (70 μ m) | بيولوجيكس | 15-1070 | |
| جنتل ماكس | ميلتيني | 130-093-235 | |
| HBSS (مع Ca2+ و Mg2+) | سيرفيسبيو | جي 4204 | |
| HBSS (بدون Ca2+ و Mg2+) | سيرفيسبيو | جي 4203 | |
| طقم تفكيك الشخصيات غير القابلة للعب | ميلتيني | 130-096-730 | |
| بيركول | سيتيفا | 17-0891-09 | |
| مضخة تمعجية | يويان | بي تي 100 | |
| RPMI-1640 | جيبيكو | C11875500BT | |
| ملح | SRB | ريال سعودي009 | |
| المنظم | Illumina | نوفاسيك اكس بلس | |
| أنابيب سيلاستيك | تيجون | E-3603 | |
| خياطة الحرير | إيثيكون | SA845G | |
| حقنة (1 مل) | ليج ساينس | إل جي 05-124 | ستكون هناك حاجة فقط إلى إبرة من المحقنة |
| حقنة (2 مل) | ليج ساينس | إل جي 05-124 | ستكون هناك حاجة فقط إلى برميل من الحقنة |
| تاكروليموس | سيليك | S5003 | |
| نقل الماصة | بيولوجيكس | 30-0138 أ1 | |
| كحول ثلاثي البرومويثيل | سيجما ألدريتش | تي 48402 | |
| حمام مائي | وهب | ساب 2 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم نشر هذه المقالة
الفيديو قريباً