التشخيص السريع لعدوى المتفطرة السلية ومقاومة الأدوية بناء على تفاعل البوليميراز المتسلسل الفلوري في الوقت الفعلي

ملخص

هنا ، يتم تقديم بروتوكول للكشف عن المتفطرة السلية ومقاومتها للأدوية باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qPCR).

الملخص

يعد السل مصدر قلق صحي رئيسي يؤثر بشكل غير متناسب على الفئات السكانية الضعيفة. يشكل ظهور السل المقاوم للأدوية وانتشاره تهديدا خطيرا للصحة العمومية العالمية. طرق التشخيص التقليدية لمتفطرة السل (MTB)، مثل الفحص المجهري للطاخة والثقافة، لها قيود كبيرة وغالبا ما تؤدي إلى تأخر العلاج السريري. لمواجهة هذا التحدي ، تم تطوير مخطط تشخيصي فعال يعتمد على تفاعل البوليميراز المتسلسل الفلوري في الوقت الفعلي. يمكن استخراج الأحماض النووية MTB عالية الجودة من عينات الاختبار ، ويمكن تحديد حالة المقاومة في مواقع المقاومة الرئيسية. بالمقارنة مع الطرق التقليدية ، يقلل هذا النهج بشكل كبير من وقت الكشف إلى بضع ساعات فقط ، مما يتيح تحديد حالة العدوى والمقاومة بعد فترة وجيزة من الزيارة الأولى للمريض. تتجاوز حساسية الكشف 85٪ ، وتصل الخصوصية إلى 95٪. لا تقلل هذه التقنية غير الغازية من انزعاج المريض فحسب ، بل تدعم أيضا التشخيص الدقيق في المؤسسات الطبية الشعبية نظرا لتكلفتها المنخفضة وكفاءتها العالية. وبشكل عام، يمثل هذا النهج تحسنا كبيرا في تشخيص السل.

المقدمة

يعد السل (TB) ، وهو مرض معد مزمن تسببه المتفطرة السلية (MTB) ، من بين الأسباب العشرة الأولى للوفاة في العالم¹. يمثل السل المقاوم للأدوية تحديا كبيرا لجهود مكافحة السل. تؤكد خطة العمل لبناء مجتمعات خالية من السل (2022-2027) ، الصادرة عن المركز الصيني لمكافحة الأمراض والوقاية منها (China CDC) ، على الحاجة إلى إجراء فحص مبكر لمقاومة الأدوية لدى جميع مرضى السل الرئوي المؤكدين^{بكتريولوجيا 2}. وتدعو إلى اعتماد تكنولوجيات جديدة للتشخيص الجزيئي لتعزيز قدرات الكشف عن السل المقاوم للأدوية، وتقصير الجداول الزمنية للتشخيص، وتحديد حالات السل المقاوم للأدوية إلى أقصى حد، وضمان توحيد العلاج والت....

البروتوكول

تمت الموافقة على هذا البحث من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى القسم الخامس في فيلق شينجيانغ للإنتاج والبناء. رقم الأخلاق LLWYH2025001 ، ولا يوجد تعارض أخلاقي. الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. جمع العينات

1. استخدم زجاجات البلغم ذات الغطاء اللولبي الموحدة دوليا الموصى بها من قبل منظمة الصحة العالمية (WHO) ، أو الصناديق البلاستيكية محكمة الغلق وصناديق ورق الشمع ، لجمع عينات البلغم.
2. قم بتسمية حاويات البلغم باسم المريض ورقمه (رقم تسلسل العيادات الخارجية للمرضى الجدد أو رقم التسجيل لمرضى المتابعة) وعناصر الفحص وأرقام تسلسل الحاوية 1 و 2 و 3 (1....

النتائج

استخدمت هذه الدراسة تحليل PCR الفلوري في الوقت الفعلي وتحليل منحنى الذوبان لاختبار عينات البلغم من 17 مريضا بالسل. بالإضافة إلى ذلك ، خضع 30 مريضا لاختبار مقاومة الريفامبيسين ، وتم اختبار 20 لمقاومة الإيزونيازيد والإيثامبوتول. أظهرت طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل الفلوري في الوقت الفعلي معدل اكتشاف إيجابي بنسبة 88.2٪ لمركب المتفطرة السلية .

كانت معدلات المقاومة 13.3٪ للريفامبيسين و 15.0٪ للأ.......

المناقشة

أدى ظهور سلالات متفطرة السل المعقدة المقاومة للأدوية على نطاق عالمي إلى تعقيد علاج مرضى السل بشكل كبير. على وجه الخصوص، يشكل السل المقاوم للأدوية المتعددة والسل المقاوم للأدوية على نطاق واسع تحديات هائلة لمكافحة^{السل 12}. يعد الكشف السريع عن مقاومة الأدوية أمرا بالغ الأهمية لتصميم أنظمة العلاج المناسبة ، ومنع الفشل العلاجي ، والحد من انتشار السلالات المقاومة^{13 ، 14}. اكتسبت طرق الكشف القائمة على تقني.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أجهزة الطرد
تحلل العازلة	شيامن Zhishan التكنولوجيا الحيوية المحدودة	24110701
طقم الكشف عن الطفرات المقاومة للمتفطرة السلية Ethambutol	Xiamen Zhishan Biotechnology Co.، Ltd.	24030801
طقم الكشف عن الطفرات المقاومة للمتفطرة السلية Isoniazid	Xiamen Zhishan Biotechnology Co.، Ltd.	24011101
المتفطرة السلية ريفامبيسين مقاومة الطفرات للكشف عن كي	شيامن Zhishan التكنولوجيا الحيوية المحدودة	24031001
SLAN-96P نظام PCR في الوقت الحقيقي	شنغهاي Hongshi Medical Technology Co.، Ltd.	SLAN-96P
	شيامن Zhishan التكنولوجيا الحيوية المحدودة	24110701
TopPette ماصة

المركزي عالية السرعةحل معالجة البلغم