يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

جمع سائل غسل الأنف الفئران دون تلوث الدم

3.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68451

⸱

يوليو 11, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology, Kindai University Faculty of Medicine, 2Department of Arts and Sciences, Kindai University Faculty of Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف البروتوكول الحالي طريقة جديدة لتجنب تلوث الدم في سائل غسل أنف الفئران (NLF). نظرا لأن هذه الطريقة تضمن جمع NLF دون تلوث الدم ، فإنها تسمح باكتشاف أكثر دقة للمكونات المناعية ومسببات الأمراض التنفسية المختلفة.

الملخص

عينات مجرى الهواء العلوي ، بما في ذلك سائل غسل الأنف (NLF) ومسحات الأنف ، مفيدة في الكشف عن مسببات الأمراض ، بما في ذلك الفيروسات والبكتيريا ، التي يمكن أن تسبب أمراض الجهاز التنفسي. تم استخدام NLF لفحص المكونات الخلوية والخلطية في الجهاز التنفسي ، على سبيل المثال ، في تقييم تحريض الغلوبولين المناعي (Ig) A بعد التطعيمات المخاطية. في القوارض التجريبية ، يمكن جمع عينات NLF إما عن طريق البلعوم أو عبر القصبة الهوائية. على الرغم من أن الطريق عبر البلعوم قد تم الإبلاغ عنه ليكون أكثر كفاءة في جمع عينات NLF من الطريق عبر القصبة الهوائية ، إلا أن عينات NLF التي تم جمعها بواسطة الطريق عبر البلعوم غالبا ما كانت ملوثة بالدم ، مما يؤثر على مستويات المحتويات الخلوية والخلطية في عينات NLF الأصلية. وبالتالي ، تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء طريقة جديدة لجمع NLF في الفئران التجريبية لتقليل تلوث الدم. باختصار ، قبل فصل الفك السفلي للفأر ، تم وضع كرات قطنية في الفم لامتصاص الدم. عندما توقف النزيف ، تم جمع عينات NLF عن طريق إدخال ماصة دقيقة في choana والتنظيف ب 200 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات مرتين (الحجم النهائي: 400 ميكرولتر / فأر). للكشف عن تلوث الدم ، تم استخدام اختبار لومينول شرعي بسيط وحساس يكشف عن الهيموجلوبين. أظهر اختبار اللومينول أن تلوث الدم كان قابلا للاكتشاف في عينات NLF التي تم حصادها بالطريقة التقليدية (بدون كرات قطنية) ، ولكن ليس تلك التي تم حصادها بالطريقة الجديدة (باستخدام كرات القطن). وبسبب تلوث الدم، كانت التركيزات الإجمالية للIgA وIgG في عينات الهيئة-للتملزمات أعلى في الطريقة التقليدية منها في الطريقة الجديدة. من المعروف أن الدم يحتوي على مستويات أعلى بكثير من IgA و IgG من NLF. لذلك ، يمكن استخدام هذه الطريقة الفريدة كطريقة بسيطة وحساسة لجمع عينات NLF من الفئران التجريبية لمنع تلوث الدم.

المقدمة

في كل من البحث السريري والأساسي ، تعد طرق جمع العينات المناسبة هي الأكثر أهمية لتقييم النتائج. غسل الأنف هو تقنية ري تستخدم لتحليل المكونات الخلوية والخلطية في الجهاز التنفسي1،2،3. سريريا ، تم استخدام سائل غسل الأنف (NLF) كعينة فعالة غير جراحية لاكتشاف المؤشرات الحيوية ، مع العديد من الدراسات التي تدعم استخدامه عبر أمراض الجهاز التنفسي المختلفة ، بما في ذلك التهاب الجيوب الأنفية والتليف الكيسي واضطرابات الجهاز التنفسي العامة4،5،6،7. في التجارب ، تم استخدام NLF أيضا لدراسة نماذج أمراض الجهاز التنفسي ، بما في ذلك الأنفلونزا ومرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19) ومرض الحساسية3،8،9. تستخدم هذه الطريقة على نطاق واسع لتحديد المؤشرات الحيوية الالتهابية الرئيسية ، مثل الخلايا متعددة الأشكال والسيتوكينات ، والتي غالبا ما يتم فحصها كمؤشرات للاستجابات لمسببات الحساسية والربو والتهابات الجهاز التنفسي10،11،12. في الآونة الأخيرة ، للتحقيق في فعالية ومأمونية اللقاح المرشح المحتمل داخل الأنف ، غالبا ما تم جمع عينات NLF من التجارب ، وتم تحديد مستويات العامل الممرض والغلوبولين المناعي (Ig) في عينات NLF كمؤشرات13.

في الفئران التجريبية ، يمكن جمع NLF باستخدام طريقة البلعوم أو عبر القصبة الهوائية. في الطريقة عبر البلعوم ، تم فصل رأس الفئران ، بما في ذلك منطقة البلعوم الحنكية ، عن الحنجرة ، ثم تم إدخال قسطرة من خلال فتحة البلعوم في choana لحقن محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) وجمع NLF من فتحة الأنف14. تمكنت طريقة القصبة الهوائية من الوصول إلى الجهاز التنفسي من خلال القصبة الهوائية دون قطع الرأس ، وتم جمع NLF من فتحة الأنف ، مما يقلل من خطر تلوث الدم. على الرغم من استخدام هاتين الطريقتين الأساسيتين لجمع NLF في الفئران التجريبية ، إلا أن كلتا الطريقتين التقليديتين لهما حدودهما الخاصة. ثبت أن الطريقة عبر القصبة الهوائية تنتج كميات أقل من NLF من طريقة البلعوم بسبب تسرب سائل الغسيل عبر القصبة الهوائية إلى تجويف الفم. أظهرت الدراسة السابقة أنه بعد حقن PBS ، كانت أحجام السوائل المستردة في NLF 70٪ -80٪ و 90٪ -100٪ في الطرق عبر القصبة الهوائية وعبر البلعوم ، على التوالي14. على الرغم من أن الطريقة عبر البلعوم يمكن اعتبارها أفضل مع كميات أكبر من NLF من الطريقة عبر القصبة الهوائية ، إلا أن تلوث الدم أثناء الإجراء كان لا مفر منه إلى حدما 14،15. وبالمثل ، أفادت العديد من الدراسات أن عينات NLF غالبا ما كانت ملوثة بمستويات عالية من بروتينات مصل الدم16،17،18. يمكن أن يتداخل هذا مع اكتشاف وقياس المؤشرات الحيوية الخاصة بالنيفور الوطني لأمراض الجهازالتنفسي 19. قد يؤثر هذا أيضا على تركيزات Ig ، وخاصة IgA و IgG ، في عينات NLF لأن الدم يحتوي على كميات أكبر من IgA و IgG من NLF.

لمواجهة هذه التحديات ، هدفت هذه الدراسة إلى إنشاء طريقة فريدة وبسيطة وموثوقة عبر البلعوم لجمع عينات NLF من الفئران التجريبية ، وتعظيم إنتاجية العينة وتقليل تلوث الدم. أثناء العمليات التجريبية ، تم وضع كرات قطنية في فم الفأر لمنع تلوث الدم ، ثم تم حقن PBS لجمع عينات NLF من فتحة الأنف. تم تحديد مستويات تلوث الدم في NLF باستخدام تقنية الطب الشرعي ، التلألؤ الكيميائي القائم على اللومينول ، والذي يتيح القياس شبه الكمي لمستويات الهيموجلوبين (Hb) في عينات NLF. كان تفاعل اللويمينول في NLF الذي تم جمعه بالطريقة الجديدة سلبيا. وبالتالي ، يمكن للطريقة الجديدة الحالية تحسين جودة عينة NLF لمختلف التجارب البيولوجية ، مثل فحوصات الممتز المناعي المرتبطة بإنزيم الأجسام المضادة (ELISAs) ، وملامح السيتوكين ، وتحديدات المؤشرات الحيوية المناعية والطبية ، ونماذج أمراض الجهاز التنفسي في الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه (IACUC) التابعة لكلية الطب بجامعة كينداي وتم إجراؤها وفقا للمعايير التي حددتها المعاهد الوطنية للصحة (NIH) 20. تم استخدام ذكور C57BL / 6 الفئران البالغة من العمر 4 أشهر في هذه الدراسة. وترد المعلومات المتعلقة بالكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.

1. مجموعة NLF

  1. القتل الرحيم للفأر بنسبة 5٪ من الأيزوفلوران21 باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا.
  2. ضع الفأر على ظهره على صفيحة جراحية وقم بإصلاحه عن طريق تثبيت الأطراف الأربعة.
  3. خذ الدم من القلب باستخدام حقنة سعة 1 مل.
  4. افتح تجويف البطن باستخدام المقص لكشف الأعضاء الحشوية والحجاب الحاجز.
  5. شق الحجاب الحاجز والأضلاع باستخدام المقص لجعل الأذين الأيمن مرئيا.
  6. ثقب الأذين الأيمن باستخدام المقص لإزالة الدم بشكل أكبر.
  7. ضع ثلاث كرات قطنية في فم أثناء سحب اللسان.
  8. افصل الفك السفلي باستخدام المقص أثناء رفع الرأس (وضع الأنف لأعلى) لمنع تلوث الدم في NLF.
  9. استبدل كرات القطن بأخرى جديدة لتجنب تلوث الدم.
  10. بعد توقف النزيف ، قم بحقن 200 ميكرولتر من PBS المعقم في choana واجمع NLF المقذوف من فتحتي الأنف في أنبوب 1.5 مل.
  11. كرر الخطوة 1.10 مرة أخرى.

2. الكشف عن تلوث الدم عن طريق التلألؤ الكيميائي لللومينول

  1. قم بإذابة 1 مجم من اللومينول و 5 مجم من بيروكسيد الصوديوم (Na2O2) مع 1 مل من الماء المعقم باستخدام أنبوب 1.5 مل لعمل محلول المخزون.
    ملاحظة: التركيز النهائي هو 1 مجم / مل من اللومينول و 5 مجم / مل Na2O2.
  2. قم بتغطية الأنبوب بورق الألمنيوم وتخزينه على حرارة 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
  3. خفف محلول المرق 10 أضعاف بالماء منزوع الأيونات لعمل محلول عملي.
    ملاحظة: التركيز النهائي هو 0.1 مجم / مل من الألومينول و 0.5 مجم / مل Na2O2.
  4. الماصة 2 ميكرولتر من عينات NLF في آبار صفيحة 96 بئرا.
  5. أضف 100 ميكرولتر من محلول اللومينول المخفف إلى كل بئر.
  6. رج اللوحة المكونة من 96 بئرا لفترة وجيزة لخلط العينات مع محلول اللومينول.
  7. لاحظ مباشرة تلألؤ كيميائي من اللومينول في الظلام.
  8. قم بتحديد تركيز Hb بشكل شبه كمي باستخدام مقياس الإضاءة ، إذا لزم الأمر.

3. القياس الكمي ل IgA و IgG بواسطة ELISAs

  1. قم بتغطية الآبار المكونة من 96 بئرا ب 100 ميكرولتر / بئر من الجسم المضاد الكلي IgA المضاد للفأر (20 نانوغرام / بئر ؛ 200 نانوغرام / مل) أو IgG (10 نانوغرام / بئر ؛ 100 نانوغرام / مل) (انظر جدول المواد).
  2. أغلق الألواح واحتضانها عند 4 درجات مئوية طوال الليل.
  3. اغسل الأطباق ثلاث مرات باستخدام 300 ميكرولتر / بئر من مخزن الغسيل الذي يحتوي على 0.05٪ Tween 20 في PBS في كل مرة ، ثم امسح الأطباق على مناشف ورقية.
  4. أضف 200 ميكرولتر من مخفف الفحص الذي يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) و 0.2٪ توين 20 في PBS لكل بئر.
  5. احتضان الأطباق في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 60 دقيقة.
  6. استنشق مخفف الفحص ثم امسح الألواح على مناشف ورقية.
  7. قم بإعداد 100 نانوغرام / مل من معيار IgA أو IgG للماوس باستخدام مخفف الفحص وقم بعمل تخفيفات تسلسلية مزدوجة: 50 نانوغرام / مل ، 25 نانوغرام / مل ، 12.5 نانوغرام / مل ، 6.25 نانوغرام / مل ، 3.13 نانوغرام / مل ، 1.56 نانوغرام / مل ، و 0.78 نانوغرام / مل.
    ملاحظة: الحجم المطلوب لكل معيار هو 100 ميكرولتر لكل بئر.
  8. قم بتخفيف العينات باستخدام مخفف الفحص عند التخفيفات المناسبة: المصل (104 إلى 106) ، NLF (10 ، 50 ، 200 ، و 500) ، و BALF (101 إلى 104).
    ملاحظة: الحجم المطلوب لكل عينة هو 100 ميكرولتر لكل بئر.
  9. أضف 100 ميكرولتر من معايير IgA أو IgG والعينات إلى الآبار المناسبة.
  10. احتضن الألواح في RT لمدة 75 دقيقة.
  11. اغسل الأطباق ثلاث مرات ب 300 ميكرولتر / بئر من مخزن الغسيل في كل مرة ، ثم امسح الأطباق على مناشف ورقية.
  12. تمييع الجسم المضاد F (ab')2 المترافق مع البيروكسيداز (انظر جدول المواد) مع مخفف الفحص عند التخفيف المناسب: 10 تخفيف4 أضعاف.
    ملاحظة: الحجم المطلوب هو 100 ميكرولتر لكل بئر.
  13. أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد F (ab') 2 المخفف المضاد للفأر المقترن بالبيروكسيداز إلى كل بئر.
  14. احتضن الألواح في RT لمدة 75 دقيقة.
  15. اغسل الأطباق خمس مرات ب 300 ميكرولتر / بئر من مخزن الغسيل في كل مرة ، ثم امسح الأطباق على أبراج الورق.
  16. أضف 100 ميكرولتر من محلول الركيزة الذي يحتوي على رباعي ميثيل بنزيدين (TMB) وبيروكسيد الهيدروجين لكل بئر.
  17. احتضن الألواح في RT لمدة 5 دقائق.
  18. أضف 50 ميكرولتر من محلول التوقف ، 2 N حمض الكبريتيك (2N H2SO4) ، إلى كل بئر.
  19. قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة.
  20. تحديد تركيزات IgA و IgG في كل عينة من خلال استخدام المنحنيات القياسية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

باستخدام الطريقة التقليدية أو الجديدة ، تم جمع عينات NLF من فئران C57BL / 6 عبر الطريق عبر البلعوم. كما هو موضح في الشكل 1 ، كانت عينات NLF التي تم جمعها بالطريقة التقليدية مشوبة باللون الوردي قليلا (الشكل 1 أ) ؛ كانت عينات NLF التي تم جمعها بالطريقة الجديدة واضحة (الشكل 1 ب). نظرا لأن الاختلاف يبدو ناتجا عن تلوث الدم في عينات NLF بالطريقة التقليدية ، فقد تم فحص تلوث الدم في عينات NLF باستخدام تفاعل لومينول. كما هو موضح في

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

غسل الأنف هو تقنية قيمة للحصول على معلومات كيميائية حيوية وخلوية وبيولوجية في أمراض الجهاز التنفسي ، مثل الأنفلونزا و COVID-1923. إلى جانب تحديد الخلايا المتسللة المختلفة ، يمكن فحص التركيب غير الخلوي للجهاز التنفسي من عينات NLF باستخدام طرق مختلفة ، مثل ELISAs ، واللطخة المناعية ، وتفاعل البوليميراز المتسلسلالكمي 1،19،24. هنا ، أجريت دراسة مقارنة باستخدام طريقتين مختلفتي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نشكر Seiichi Omura ، دكتوراه ، Cong Thanh Nguyen ، دكتوراه في الطب ، دكتوراه ، كوتا موريغوتشي ، دكتوراه في الطب ، دكتوراه في الطب ، ريونا شيرو ، دكتوراه في الطب ، وسانديش ريمال ، ماجستير ، قسم علم الأحياء الدقيقة ، كلية الطب بجامعة كينداي ، وهيروتاكا إيبينا ، دكتوراه ، شينيا أوكامورا ، دكتوراه ، وياسو يوشيوكا ، دكتوراه ، مجموعة لقاح الفيروسات ، مختبرات تحالف أبحاث اللقاحات المبتكر BIKEN ، معهد أبحاث الأمراض الميكروبية ، جامعة أوساكا ، للمناقشات المفيدة. كما نعرب عن امتناننا لأعضاء معهد أبحاث علوم الحياة بجامعة كينداي على مساعدتهم الفنية الممتازة. تم دعم هذا العمل من قبل وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان ، من خلال منحة Monbukagakusho (MEXT ، 2021-2025) (I.A.) ، ومنحة المساعدة للبحث العلمي KAKENHI من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS) JP23K06493 (FS) ، و JP21K07287 / JP24K10500 (A.-M. P.) ، و JP22K18378 / JP24K10163 (IT) ، ومنحة تعزيز البحوث بجامعة كينداي 2406 دينار كويتي (FS) و 2506 دينار كويتي (I.T.).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
إبرة تثبيتNatsume Seisakusho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابانKN-358-Aأصلحنا فأرا بإبر تثبيت. ستانلس ستيل؛ الطول الإجمالي ، 23 مم ؛ وطرف الإبرة ، 15 ملم.
BD OptEIATM  مجموعة كاشف الركيزة TMBBD Biosciences ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية555214أضفنا 100 مو ؛ L من محلول الركيزة TMB لكل بئر.
جرة الجرسNANA استخدمنا جرة جرس للتخدير.
واضح مسطحة القاع مناعية غير معقمة 96 بئر لوحات  ThermoFisher Scientific ، روتشستر ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية442404استخدمنا ألواح مناعية غير معقمة ذات 96 بئرا ذات قاع مسطح مع المعالجة السطحية MaxiSorp لمقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم.
الكرة القطنيةSansho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان94-1951استخدمنا كرات القطن لتجنب تلوث الدم. كان قطر كرات القطن 7 مم.
مصل الأبقار الجنينيSigma-Aldrich Co.، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية172012-500 ملأضفنا 10٪ من مصل الأبقار الجنينية إلى مخفف الفحص.
ملقط (ملاقط صغيرة للتجارب البحثية ، طرف منحني)شركة Sansho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان91-1506استخدمنا ملقط للتشريح. نموذج ، HSC 551-10 ؛ وتجاوز كل الطول ، 105 ملم.
ملقط (ملاقط دقيقة)Sansho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان91-2772استخدمنا ملقط للتشريح. نموذج ، HSC 607-12 ؛ تجاوز كل الطول ، 120 مم ؛ وقطر الطرف 0.3 مم.
الماعز المضادة للفأر IgA-UNLBSouthernBiotech ، برمنغهام ، AL ، الولايات المتحدة الأمريكية1040-01قمنا بطلاء ألواح مناعية غير معقمة ذات 96 بئر ذات قاع مسطح شفاف مع 100 & mu ؛ لتر / بئر (20 نانوغرام / بئر) من إجمالي الغلوبولين المناعي أ.
إيزوفلوران شركة Viatris Inc. ، Canonsburg ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكيةNAاستخدمنا الأيزوفلوران للتخدير.
مجموعة كاشف Luminol RectionFUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation ، أوساكا ، اليابان124-06511استخدمنا مجموعة كاشف تفاعل اللومينية للكشف عن الهيموجلوبين في عينات NLF.
MicrotubeWatson Co., Ltd., طوكيو, اليابان131-7155Cاستخدمنا الأنابيب الدقيقة لجمع NLF و BALF (أنبوب دقيق سعة 1.5 مل مع غطاء قفل ، قاع دائري ، غطاء ناعم اللمس).
مياه Milli-QMerck KGaA ، دارمشتات ، ألمانياMilli-Q Direct 8استخدمنا ماء MilliQ لصنع محلول مستقيم اللومينول.
ميني شاكر PSU-2TBiosan Ltd. ، ريغا ، لاتفياPSU-2Tهزنا 96 لوحة بئر باستخدام Mini-Shaler PSU-2T.
سلالة الفأرCLEA Japan، Inc. ، طوكيو ، اليابانNAاستخدمنا فئران ذكور C57BL / 6 البالغة من العمر 4 أشهر.
Nunc MicroWell 96-Well ، Nunclon Delta المعالجة ، صفيحة مسطحةالحرارية فيشر Scientific Nunc A / S. Kamstrupvej ، Roskilde ، الدنمارك136101استخدمنا Nunc TM < / sup> MicroWell < sup >TM < / sup> 96-Well ، Nunclon Delta-Treatment ، Microplate Flat-Bottom لاختبار اللومينول.
AffiniPure F (ab') المترافق بالبيروكسيداز 2< / sub> جزء الماعز المضاد للفأر IgG ، F (ab') 2< / sub> جزء محدد (الحد الأدنى من التفاعل المتبادل لبروتينات مصل الإنسان والأبقار والحصان)مختبرات Jackson ImmunoResearch ، Inc. ، West Grove ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكية115-036-072أضفنا 100 مو ؛ L من جزء الماعز المترافق مع البيروكسيديز AffiniPure F (ab') 2 IgG ، F (ab') 2< / sub> جزء خاص ، كجسم مضاد للكشف (تخفيف 10,000 ضعف) لكل بئر.
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتSigma-Aldrich Co. ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةD8537-500MLاستخدمنا محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (معدل بدون كلوريد الكالسيوم وكلوريد المغنيسيوم ، سائل ، مفلتر معقم ، مناسب لإعدام الخلايا) لمجموعة NLF و BALF.
الماصة شركة Watson Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابانNAاستخدمنا 200-& mu ؛ ماصة L لغسل الأنف.
طرف الماصةWatson Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابانNAاستخدمنا 200-& mu ؛ طرف ماصة L متعدد الملاءمة لغسل الأنف.
بولي أوكسي إيثيلين (20) سوربيتان مونولورات (توين 20)FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation ، أوساكا ، اليابان167-11515أضفنا 0.05٪ من Tween 20 إلى مخزن الغسيل و 0.2٪ من Tween 20 إلى مخفف الفحص.
الماعز المنقى المضاد للفأر IgG (الحد الأدنى من تفاعل x) الأجسام المضادةBioLegend ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية405301قمنا بتغطية ألواح 96 بئر مناعية مسطحة ذات قاع مسطح شفاف مع 100 مو ؛ لتر / بئر (10 نانوغرام / بئر) من إجمالي الغلوبولين المناعي G.
مقص صغير ، مزدوج الرأسSansho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان91-7005استخدمنا مقصا للتشريح. نموذج ، S-4A ؛ وتجاوز كل الطول ، 115 ملم.
حامض الكبريتيكواكو للصناعات الكيميائية النقية ، المحدودة ، طوكيو ، اليابان192-04755أضفنا 50 مو ؛ L من 2 N حامض الكبريتيك لكل بئر لإيقاف التفاعل.
قسطرة Surflo في الوريد شركة Terumo ، طوكيو ، اليابان  SR-FS2032استخدمنا قسطرة في الوريد وحقنا PBS في القصبة الهوائية لغسل القصبات الهوائية. قسطرة ، 20 جرام ؛ طول القسطرة ، 32 مم ؛ القطر الداخلي للقسطرة ، 0.80 مم ؛ القطر الخارجي للقسطرة ، 1.1 مم ؛ والإبرة الداخلية ، 22 جرام.
مقص جراحي مستقيمSansho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان91-7004استخدمنا مقص للتشريح. نموذج ، S-3B ؛ وتجاوز كل الطول ، 120 ملم.
لوحة جراحيةNatsume Seisakusho Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابانKN-321-Bاستخدمنا لوح الفلين للتشريح. العمق ، 20 سم ؛ العرض ، 15 سم ؛ والارتفاع 3 سم.
الصفيحة الدقيقة الهجين متعدد الأوضاع Synergy H1  شركة Agilent Technologies، Inc. ، سانتا كلارا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكيةNAقمنا بقياس امتصاص العينات عند 450 نانومتر ، باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة الهجين متعدد الأوضاع Synergy H1.
حقنةتيرومو ، طوكيو ، اليابان   ؛SS-01Tاستخدمنا حقنة سعة 1 مل لجمع الدم من القلب.
الموضوع  Niccho Kogyo Co., Ltd. طوكيو اليابانNAقمنا بربط قسطرة بخيط لضمان الوضع المناسب أثناء العملية.
القاع قارئ شركة

المراجع

  1. Cortegano, I., et al. Age-dependent nasal immune responses in non-hospitalized bronchiolitis children. Front Immunol. 13, 1011607(2022).
  2. Yao, S., et al. Control of pathogenic effector T-cell activities in situ by PD-L1 expression on respiratory inflammatory dendritic cells during respiratory syncytial virus infection. Mucosal Immunol. 8 (4), 746-759 (2015).
  3. Gould, V. M. W., et al. Nasal IgA provides protection against human influenza challenge in volunteers with low serum influenza antibody titre. Front Microbiol. 8, 900(2017).
  4. Casado, B., Pannell, L. K., Viglio, S., Iadarola, P., Baraniuk, J. N. Analysis of the sinusitis nasal lavage fluid proteome using capillary liquid chromatography interfaced to electrospray ionization-quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry. Electrophoresis. 25 (8), 1386-1393 (2004).
  5. Hull, J., Skinner, W., Robertson, C., Phelan, P. Elemental content of airway surface liquid from infants with cystic fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 157 (1), 10-14 (1998).
  6. Roponen, M., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage, induced sputum and serum of employees with rheumatic and respiratory disorders. Eur Respir J. 18 (3), 542-548 (2001).
  7. Santos Galvão, C. E., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil. São Paulo Med J. 122 (5), 204(2004).
  8. Winkler, E. S., et al. SARS-CoV-2 causes lung infection without severe disease in human ACE2 knock-in mice. J Virol. 96 (1), e01511-e01521 (2022).
  9. Kieran, T. J., et al. Exploring associations between viral titer measurements and disease outcomes in ferrets inoculated with 125 contemporary influenza A viruses. J Virol. 98 (2), e01661-e01723 (2024).
  10. Peden, D. B. The use of nasal lavage for objective measurement of irritant-induced nasal inflammation. Regul Toxicol Pharmacol. 24 (1 II), 68-75 (1996).
  11. Rusznak, C., et al. Mechanisms of pollution-induced allergy and asthma. Rev Fr Allergol Immunol Clin. 38 (7 Suppl. 1), 397-402 (1998).
  12. Laumbach, R. J., et al. Nasal effects of a mixture of volatile organic compounds and their ozone oxidation products. J Occup Environ Med. 47 (11), 1182-1189 (2005).
  13. Kawai, A., et al. The potential of neuraminidase as an antigen for nasal vaccines to increase cross-protection against influenza viruses. J Virol. 95 (20), 1180-1201 (2021).
  14. Cho, S. H., et al. Spontaneous eosinophilic nasal inflammation in a genetically-mutant mouse: Comparative study with an allergic inflammation model. PLoS One. 7 (4), e35114(2012).
  15. Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of inflammatory responses during intranasal colonization with Streptococcus pneumoniae. J Vis Exp. (83), e50490(2014).
  16. Ghafouri, B., et al. Comparative proteomics of nasal fluid in seasonal allergic rhinitis. J Proteome Res. 5 (2), 330-338 (2006).
  17. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Svartz, J., Tagesson, C. Protein patterns of human nasal and bronchoalveolar lavage fluids analyzed with two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis. 19 (18), 3222-3229 (1998).
  18. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight. Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).
  19. Schoenebeck, B., et al. Improved preparation of nasal lavage fluid (NLF) as a noninvasive sample for proteomic biomarker discovery. Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1854 (7), 741-745 (2015).
  20. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).
  21. Roustan, A., et al. Evaluating methods of mouse euthanasia on the oocyte quality: Cervical dislocation versus isoflurane inhalation. Lab Anim. 46 (2), 167-169 (2012).
  22. Park, A. M., Tsunoda, I. Forensic luminol reaction for detecting fecal occult blood in experimental mice. Biotechniques. 65 (4), 227-230 (2018).
  23. Gao, K. M., et al. Human nasal wash RNA-Seq reveals distinct cell-specific innate immune responses in influenza versus SARS-CoV-2. JCI Insight. 6 (22), e152288(2021).
  24. Kirkeby, L., et al. Immunoglobulins in nasal secretions of healthy humans: Structural integrity of secretory immunoglobulin A1 (IgA1) and occurrence of neutralizing antibodies to IgA1 proteases of nasal bacteria. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (1), 31-39 (2000).
  25. Webb, J. L., Creamer, J. I., Quickenden, T. I. A comparison of the presumptive luminol test for blood with four non-chemiluminescent forensic techniques. Luminescence. 21 (4), 214-220 (2006).
  26. Ahmad, I., et al. Exploring the role of platelets in virus-induced inflammatory demyelinating disease and myocarditis. Int J Mol Sci. 25 (6), 3460(2024).
  27. Olsson, T., Bergström, K., Thore, A. A sensitive method for determination of serum hemoglobin based on iso-luminol chemiluminescence. Clin Chim Acta. 122 (2), 125-133 (1982).
  28. Van der Meer, W., Dinnissen, J. M. B., de Keijzer, M. H. Evaluation of the Sysmex XT-2000i, a new automated haematology analyser. Sysmex. (2002), Available at: https://www.sysmex.co.jp/en/products_solutions/library/journal/vol12_no2/summary03.html (2002).
  29. Oshiro, I., Takenaka, T., Maeda, J. New method for hemoglobin determination by using sodium lauryl sulfate (SLS). Clin Biochem. 15 (2), 83-88 (1982).
  30. Hamaguchi, Y., Oshiro, I., Maeda, J. A study on reaction mechanism of sodium lauryl sulfate-hemoglobin (SLS-Hb), Part 1. Rinsho Byori. 40 (6), 649-654 (1992).
  31. McGee, D. W., McMurray, D. N. The effect of protein malnutrition on the IgA immune response in mice. Immunology. 63 (1), 25(1988).
  32. Castigli, E., et al. Impaired IgA class switching in APRIL-deficient mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (11), 3903-3908 (2004).
  33. Matsuo, K., et al. CCL28-deficient mice have reduced IgA antibody-secreting cells and an altered microbiota in the colon. J Immunol. 200 (2), 800-809 (2018).
  34. McDonald, K. G., et al. Aging impacts isolated lymphoid follicle development and function. Immun Ageing. 8 (1), 1-12 (2011).
  35. Abolins, S., et al. The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus. Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

جمع العينات من الفئرانالطريق البلعوميالطريق الرغاميالغلوبولين المناعي Aالغلوبولين المناعي Gتفاعل اللومينولالكشف بالتلألؤ الكيميائيتحليل الميكروبيوم
جمع سائل غسل الأنف الفئران دون تلوث الدم
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.