Method Article

نموذج فأر لتقييم النتائج الهيكلية والوظيفية طويلة المدى بعد عكس انسداد الحالب أحادي الجانب لفترات طويلة

DOI:

10.3791/68492

⸱

July 18th, 2025

 , 
1Division of Nephrology, Department of Medicine, Vanderbilt University Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه الورقة تعليمات مفصلة لتمكين الباحثين من إجراء انسداد الحالب أحادي الجانب القابل للانعكاس في الفئران باستخدام نموذج موحد يسمح بتحليل النتائج الهيكلية والوظيفية طويلة المدى بعد عكس انسداد الحالب لفترات طويلة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتطلب الإدارة السريرية للمرضى الذين يعانون من انسداد المسالك البولية (UTO) تدخلا مبكرا لعكس سبب الانسداد ، ولكن على الرغم من ذلك ، فإن المرضى الذين يعانون من انسداد المسالك البولية لفترات طويلة معرضون بشكل متزايد لخطر الإصابة بأمراض الكلى المزمنة (CKD) وإصابات الكلى الحادة المتكررة (AKI). ومع ذلك ، بخلاف الانعكاس المبكر للانسداد والعلاج العام لتأخير تطور مرض الكلى المزمن ، لم تتحسن أي علاجات بشكل كبير من النتائج الكلوية طويلة المدى بعد انعكاس UTO. لمعالجة هذا الأمر ، طور عدد من المختبرات نماذج من UUO القابلة للانعكاس (R-UUO) ، لكنها تمثل تحديا تقنيا ولم يتم اعتمادها على نطاق واسع. بالإضافة إلى ذلك ، في حين أن نماذج الفئران من R-UUO جذابة حيث يمكن استخدامها لتسخير قوة علم الوراثة للفأر لدراسة الفيزيولوجيا المرضية للمرض ، إلا أنها كانت صعبة بشكل خاص لأن الأساليب المستخدمة غالبا ما تؤدي إلى UUO لا رجعة فيه إذا استمر الانسداد >3 أيام. بالإضافة إلى ذلك ، نظرا لطبيعة هذه النماذج ، قام عدد قليل من الدراسات بتقييم النتائج الوظيفية طويلة المدى لعكس انسداد الحالب. لمعالجة هذا الأمر ، قمنا مؤخرا بتطوير نموذج فأر ل R-UUO مع استئصال الكلية المقابل المتأخر الذي يسمح بتحليل الآثار طويلة المدى لعكس UTO لفترات طويلة على النتائج الهيكلية والوظيفية الكلوية على المدى الطويل. تظهر هذه الدراسات أنه على الرغم من الشفاء النسيجي شبه الكامل بعد 3 أشهر من الانعكاس ، كان هناك انخفاض دائم في وظائف الكلى وعيب ملحوظ ومستمر في قدرة تركيز البول ، مما يدل على وجود خلل في وظيفة النخاع الكلوي. يتطلب النموذج ثلاث جراحات رئيسية للبقاء على قيد الحياة ولكنه ينتج عنه انخفاض قوي وقابل للتكرار على المدى الطويل في وظيفة الكلى يمكن استنساخه في سلالات الفئران المختلفة عن طريق تعديل فترة الانسداد. في هذه المقالة ، نقدم إرشادات مفصلة لإجراء هذه العمليات الجراحية ، وتحسين ظروف الاستخدام في سلالات الفئران المختلفة ، وتقييم النتائج الوظيفية للكلى ، وحصاد الأنسجة الكلوية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قد يكون انسداد المسالك البولية (UTO) أحادي الجانب ، والذي غالبا ما يكون بدون أعراض ، ويظهر في وقت متأخر مع اعتلال المسالك البولية الانسدادي المزمن1 ، أو قد يظهر بشكل حاد مع المغص الكلوي و / أو البيلة الدموية. التهاب الحويضة والكلية الحاد أو إصابة الكلى الحادة بعد الكلى (AKI)2. مفتاح إدارة UTO هو الانعكاس المبكر للعرقلة2. ومع ذلك ، على الرغم من الانعكاس الفعال واستخدام العلاجات الجنيسة لتأخير تطور مرض الكلى المزمن (CKD) ، لا يزال المرضى المصابون معرضين لخطر متزايد للإصابة بمرض الكلى المزمن التدريجي وارتفاع ضغطالدم 3،4. بالإضافة إلى ذلك ، غالبا ما تضعف قدرة تركيز البول على المدى الطويل (UCC)5 ، مما قد يعرض المرضى المعرضين للجفاف وAKI المتكرر ، مما يسرع من التدهور التدريجي في وظائف الكلى بعد UTO.

جزئيا ، نتج هذا الفشل في تحديد الأساليب العلاجية لتحسين النتائج طويلة المدى في المرضى الذين يعانون من UTO عن اعتمادنا على استخدام نماذج انسداد الحالب أحادي الجانب التي لا رجعة فيها (UUO) لاستكشاف البيولوجيا المرضية ل UTO. ومع ذلك ، فإن هذه النماذج لا تكرر الوضع السريري الذي يخضع فيه المرضى للانعكاس بعد فترة وجيزة من التشخيص ولا يمكن استخدامها لاستكشاف الآليات والأساليب العلاجية التي يمكن استخدامها لتحسين الإصلاح طويل الأمد بعد عكس الانسداد. تم تطوير نماذج UUO القابلة للانعكاس (R-UUO) لمعالجة هذا الأمر ، ولكن هذه أكثر تحديا من الناحية الفنية من نماذج UUO التي لا رجعة فيها ، ويصعب إعادة إنتاجها بواسطة مختبرات مختلفة ، ونتيجة لذلك ، لم يتم تبنيها على نطاق واسع من قبل المجتمع العلمي. تعتبر نماذج الفئران جذابة حيث يمكن استخدامها لتسخير قوة علم الوراثة للفأر لدراسة الفيزيولوجيا المرضية للمرض ، ولكن كان من الصعب تحسينها بشكل خاص لأن الطرق غالبا ما تؤدي إلى UUO لا رجعة فيه إذا استمر الانسداد لأكثر من 3 أيام6. وقد تم نشر مجموعة متنوعة من الأساليب لمعالجة هذا, بما في ذلك الجراحة المتعددة, وضع المشابك المتسلسلة على طول الحالب كل 2 أيام 6,7; UUO تليها إعادة زرع المثانة8،9،10،11 ؛ واستخدام المشابك والأنابيب غير الضارة لعرقلة الحالب12،13،14. أظهرت دراسات النتائج طويلة المدى على الفئران والفئران تحسنا في وظائف الكلى ، وانخفاض التليف ، و / أو إصابة الكبيبات بعد عكس الانسداد ، ولكن الانتعاش الجزئي فقط إذا استمر UUO لفترة أطول من يومين6،7،8،9،12،14،15،16،17،18،19. بالإضافة إلى ذلك ، في حين أن النخاع الكلوي (RM) عرضة بشكل خاص للتلف الناجم عن UTO20،21 حتى وقت قريب ، لم تكن هناك دراسات طويلة الأمد للقوارض تمت فيها دراسة تأثيرات R-UUO لفترات طويلة على بنية ووظيفة RM. هذا مهم لأن UCC والقدرة على إفراز أحمال الملح دون زيادة ضغط الدم (ما يسمى باستجابة التهاب البول بالضغط) تعتمد على الحفاظ على السلامة التشريحية ل RM22،23،24 ، بحيث قد يفسر الإصلاح غير الكامل ل RM بعد عكس UTO سبب زيادة تعرض المرضى لالتهاب النواب العميق المتكرر وارتفاع ضغط الدم بعد انعكاس UTO. ومع ذلك ، فإن العديد من التقنيات المطلوبة لتقييم ذلك تتطلب جولات متعددة من الجراحة (خمس عمليات جراحية كبرى لمدة 6 أيام من الانسداد6،7) ، تتطلب خبرة جراحية يصعب تعليمها (على سبيل المثال ، إعادة زرع الحالب الجراحي في المثانة8،9،10،11)، ولأن الانسداد أحادي الجانب، يجعل من الصعب على المحققين تقييم التغيرات في وظائف الكلى بعد عكس الانسداد.

لمعالجة هذا الأمر ، قمنا بتطوير نموذج فأر من R-UUO سهل الأداء والتدريس نسبيا ، ويتطلب عددا محدودا من العمليات الجراحية أكثر من التقنيات الأخرى (عمليتان جراحيتان لمدة 5 إلى 7 أيام من الانسداد) ، ويسمح بتحليل الانتعاش الوظيفي الكلوي دون الحاجة إلى دراسات وظائف الكلى المتداخلة الغازية و / أو المكلفة25. لهذا الغرض ، تخضع الفئران لثلاث عمليات جراحية كبرى: 1) وضع مشبك وعائي غير مؤلم على الحالب الأيسر القريب. 2) إزالة المشبك الوعائي بعد 5 إلى 7 أيام ، اعتمادا على سلالة الفأر ؛ و 3) إزالة الكلى المقابلة بعد 10 أيام لتقييم وظائف الكلى. يموت ما يقرب من 20 إلى 40٪ من الفئران في غضون 2-3 أيام من استئصال الكلية ، مما يشير إلى أن UUO لا ينعكس في جميع الفئران. تظهر المتابعة طويلة الأمد للفئران الباقية أنه على الرغم من الشفاء النسيجي شبه الكامل للنخاع الكلوي (RM) بعد 3 أشهر من R-UUO. هناك انخفاض في وظائف الكلى ، يقاس بمعدل الترشيح الكبيبي عبر الجلد (tGFR) 26. بالإضافة إلى ذلك ، هناك انخفاض ملحوظ في UCC ، يتم تحديده عن طريق قياس الأسمولية البولية بعد تقييد الماء ، مما يشير إلى وجود عيب دائم في وظيفة RM. تظهر دراسات الدورة الزمنية أنه في حين أن هناك تحسنا في tGFR بين اليومين 28 و 56 بعد RUUO ، فإن هذا يستقر بين اليومين 56 و 84. في المقابل ، لا يوجد تحسن في UCC بين اليومين 28 و 84 بعد R-UUO25. باستخدام scRNA-Seq ل RMs المعزولة ، التي تم التحقق من صحتها من خلال دراسات سلالة الخلية والكيمياء المناعية ، حددنا استجابات تجديدية قوية استعادت أبعاد RM بعد R-UUO ولكن جميع المقصورات الخلوية الرئيسية في RM أظهرت تغيرات دائمة في أعداد الخلايا والتوقيعات الجينية التي من المحتمل أن تؤثر على التعافي الوظيفي بعد R-UUO. وشمل ذلك الاستجابات المسببة للالتهابات المستمرة في قناة وحلقة تجميع RM لمجموعات خلايا Henle بعد 84 يوما من R-UUO ، على غرار التوقيعات الالتهابية والشيخوخة للخلايا الظهارية الأنبوبية القريبة الفاشلة بعد AKI و UUO27،28،29،30. شوهدت تغييرات مماثلة أيضا في RM التي تجمع القنوات من المرضى الذين يعانون من مرض حصوات الكلىالمتكرر 31 ، مما يشير إلى وجود استجابة إصابة شائعة لتلف RM في كل من البشر والفئران. في هذه المقالة ، نقدم إرشادات مفصلة حول كيفية إجراء هذه العمليات الجراحية ، وكيف نحسن الظروف لاستخدامها في سلالات الفئران المختلفة ، وكيف نحدد ما إذا كان الحالب لا يزال مسدودا بعد الانعكاس ، وكيف نقيم النتائج الوظيفية الرئيسية ، وكيف نحصد الأنسجة الكلوية لتقييم الهياكل النخاعية الكلوية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، يتم وصف البروتوكول المكون من أربع خطوات المستخدم للدراسات طويلة المدى (الشكل 1). كما تمت مناقشته في نهاية هذه المخطوطة ، قد يختار الباحثون إجراء ثلاثة فقط من هذه (الأقسام 1 و 2 و 4) أو الأربعة إذا كانوا مهتمين بدراسة النتائج طويلة المدى. تمت الموافقة على جميع تجارب الفئران في هذه المخطوطة من قبل لجنة رعاية واستخدام المؤسسية في فاندربيلت وتلتزم بإرشادات استخدام.

1. وضع مشبك الحالب (10-15 دقيقة / فأر)

ملاحظة: اعتمد على معرفة تشريح الكلى بالفأر لتحديد موقع الحالب لأنه لا يمكن رؤيته مباشرة بدون النسيج الضام المحيط. يمتد الحالب على طول الجانب الخلفي السفلي من الأنسجة النزفية عند تعرض الكلى (الشكل 2). اختيار المشبك الوعائي مهم. يمكن أن تكون باهظة الثمن ولكن يمكن تنظيفها وتعقيمها وإعادة استخدامها عدة مرات. يمكن إعادة استخدام هذه المشابك 100 مرة على الأقل دون مشاكل.

  1. الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية قبل الجراحة عند 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. في حالة إجراء عمليات جراحية على عدة فئران ، قم بإزالة الدم والحطام من الأدوات بين الاستخدام وتعقيمها لمدة 10-15 ثانية باستخدام معقم الخرز الساخن. اترك الأدوات تبرد قبل استخدامها مرة أخرى.
  2. وزن الماوس.
  3. تخدير الفأر باستخدام 5-10 ملغم/كغ زيلازين مع 90-120 ملغم/كغ كيتامين عن طريق الحقن داخل الصفاق (انظر جدول المواد). يستغرق هذا عادة من 3 إلى 5 دقائق حتى يصبح ساري المفعول.
  4. يجب تطبيق تسكين الألم قبل الجراحة في حالة استخدام عامل مخدر مختلف، مثل الأيزوفلوران، لأنه على عكس الزيلازين، لا يكون له آثار مسكنة.
  5. احلق موقع الجراحة من الوركين إلى القفص الصدري وحول الجانب ، مع وجود حدود كافية لمنع الشعر من تلويث موقع الشق. قم بإجراء منطقة تحضيرية ، وليس في مكان إجراء الجراحة.
  6. قم بتغطية المجال الجراحي الساخن بستارة جراحية معقمة. سيساعد على منع الشعر الضال من دخول المجال الجراحي ويوفر منطقة لوضع أدوات معقمة.
  7. ضع مرهم ترطيب العين على العينين.
  8. ضع التحضير المعقم باستخدام شاش مبلل بالبيتادين: افرك من وسط الموقع باتجاه المحيط من 3 إلى 4 مرات ، في كل مرة متبوعا بالمسح مرة واحدة بمسحة كحولية. قم بإزالة كل البيتادين من المجال الجراحي قبل الشق.
  9. قم بعمل شق ظهري طولي بطول 1.5 سم على خط الوسط عبر الجلد والطبقات تحت الجلد باستخدام المقص والملقط.
  10. قم بعمل شق صغير من خلال عضلة الجناح الأيسر واللفافة فوق الكلى وقم بإخراج الكلية اليسرى.
  11. قم بتشريح دهون القطب السفلي بعناية وبعض الأنسجة الضامة حول المكان الذي يجب أن يكون فيه الحالب. لا يمكن رؤية الحالب مباشرة بدون النسيج الضام المحيط. بعد ذلك ، افصل الحالب بالنسيج الضام المحيط به عن العنيق الكلوي ، الذي يحتوي على الوريد الكلوي والشريان ، لذلك لا يتم تضمين عنيق الكلى مع مشبك الحالب (الشكل 2).
  12. استخدم أدوات تثبيت المشبك لفتحه ووضعه على الحالب أسفل الحوض مباشرة. استخدم العلامات الموجودة على المشبك الوعائي للتأكد من وضعها بنفس الضغط على الحالب لكل فأر (الشكل 3). لا تقم بتطبيقه ، ثم قم بإزالة المشبك لتغيير وضعه ، لأن ذلك قد يؤدي إلى تلف الحالب.
  13. بمجرد وضع المشبك ، ادفع الكلية برفق باستخدام المشبك مرة أخرى إلى الفضاء خلف الصفاق باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة بالمحلول الملحي.
  14. أغلق طبقة العضلات باستخدام خياطة قابلة للامتصاص.
  15. أغلق طبقة الجلد باستخدام مشابك الجلد.
  16. يجب تطبيق البوبرينورفين 3.25 ملغم/كغ تسكين الألم، كما هو موضح في قسم الأدوية، وإعطاء 0.5 مل من محلول ملحي عادي معقم تحت الجلد لترطيب الفئران.
  17. اترك الماوس في الحقل الجراحي للوسادة الصلبة المسخنة أو انقله إلى قفص منزله باستخدام وسادة متساوية الحرارة دافئة تحت نصف القفص حتى يستيقظ الفأر.
  18. أعد الماوس إلى غرفة.
  19. راقب الماوس عن كثب وأعط جرعات إضافية من البوبرينورفين للألم أو الانزعاج لمدة 48 إلى 72 ساعة. تشمل العلامات السريرية للألم والضيق التي تشير إلى أن الفئران بحاجة إلى تسكين إضافي الاكتئاب أو التغيرات السلوكية الأخرى ، أو المظهر غير الطبيعي ، أو المواقف مثل الانتصاب ، أو الوضعية المنحنية ، أو قلة الاستمالة والأكل ، أو عدم الحركة.

2. إزالة مشبك الحالب (10-15 دقيقة / فأر)

  1. اتبع خطوات إجراء وضع المشبك 1.1-1.10 باستخدام شقوق الجلد والعضلات الأصلية لبدء إزالة المشبك. قم بإزالة مشابك الجرح قبل تنظيف منطقة الجراحة. عادة ما تكون الحلاقة مرة أخرى غير ضرورية لأن الشعر لم ينمو مرة أخرى.
  2. بسبب التصاقات الأنسجة المتقدمة ، استخدم الملقط لتحديد موقع المشبك بعناية في الفضاء خلف الصفاق دون إخراج الكلية أولا. استخدم أدوات تثبيت المشبك لفتح المشبك برفق أثناء استخدام الملقط لسحب الأنسجة لأسفل من حول رأس المشبك لإزالة المشبك.
  3. الآن ، قم بإخراج الكلية بحيث يمكن تصور الحوض الكلوي لتحديد الانسداد. يجب أن يكون الحوض الكلوي منتفخا ، مما يشير إلى استسقاء الكلى.
  4. بمجرد فحص الكلى ، ادفع الكلية برفق إلى الفراغ خلف الصفاق باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة بالمحلول الملحي.
  5. اتبع الخطوات 1.13-1.18، كما هو موضح أعلاه.

3. استئصال الكلية المقابل (10-15 دقيقة / فأر)

  1. احلق المنطقة إذا كان هناك نمو للشعر.
  2. استخدم 1-5٪ من مزيج الأيزوفلوران / الهواء للتخدير للسماح بالشفاء بسهولة بسبب وجود أحداث تخدير سابقة. قم بإزالة مشابك الجرح قبل تنظيف منطقة الجراحة.
  3. يجب تطبيق تسكين البوبرينورفين قبل الجراحة (انظر جدول المواد).
  4. اتبع خطوات الإجراء 1.1-1.9 باستخدام شق الجلد الأصلي للبدء.
  5. قم بعمل شق صغير من خلال عضلة الخاصرة اليمنى واللفافة فوق الكلى وقم بإخراج الكلية اليمنى.
  6. امسك الكلية برفق باستخدام ملقط ناعم ومنحني وقم بتشريح القطبين العلوي والسفلي للكلية بعناية خاليا من الأنسجة المحيطة.
    ملاحظة: تحتوي الأنسجة الموجودة حول القطب العلوي على الغدة الكظرية ، والتي تحمل إمدادات الدم الخاصة بها ، والتي يمكن سحبها من الكلى ولكن من الواضح أنه لا ينبغي إزالتها من الفأر (انظر الشكل 2).
  7. بعد تحرير الكلى من الأنسجة المحيطة ، اربط خياطة الحرير 4-0 بالكامل حول الأوعية الكلوية والحالب باستخدام عقدة جراحية مزدوجة. إذا تركت لمدة ~ 30 ثانية ، تصبح الكلية مظلمة. امسك الكلية بملقط ناعم ومنحني ، وقم بإزالة الكلية عن طريق القطع بعيدا إلى العقدة بمقص منحني.
  8. ادفع العنق الكلوي المتبقي برفق إلى الفراغ خلف الصفاق باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة بالمحلول الملحي.
  9. اتبع الخطوات 1.13-1.18، كما هو موضح أعلاه.

4. جمع الأنسجة

  1. قم بالتخدير بمزيج 5٪ من الأيزوفلوران / الهواء لتحقيق مستوى مستقر من التخدير الجراحي قبل الإجراء النهائي.
  2. افتح تجويف البطن لكشف الكلية اليسرى
  3. افحص الكلية لرؤية أي تورم في الحوض الكلوي (انظر الخطوة 2.3).
  4. إذا بدا أن الحوض الكلوي لا يزال منتفخا ، فأدخل إبرة فراشة صغيرة متصلة بحقنة تحتوي على 0.5 مل من 1 في 5000 تخفيف من الميثيلين الأزرق في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS). إذا كان الحالب حاصلا على براءة اختراع ، فسيكون المحلول الأزرق مرئيا أثناء انتقاله من الحوض الكلوي إلى المثانة. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فسوف ينتفخ الحوض الكلوي بمحلول أزرق ، ولن يظهر في المثانة.
  5. لإصلاح الكلى ، افتح التجويف الصدري وفضح القلب.
    1. بينما لا يزال القلب ينبض ، أدخل إبرة فراشة 23-25 جم في البطين الأيسر ، وابدأ في ضخ المحلول الملحي الطبيعي ، وقم بقطع الأذين الأيمن أو البطين لاستبدال حجم الدم بالمحلول الملحي.
    2. بعد حوالي دقيقة ، تأكد من أن الكلى بيضاء. استمر في التسريب الملحي لمدة دقيقة أخرى أو استبدله بتسريب محلول فورمالين بنسبة 10٪ لمدة 1-2 دقيقة أخرى لإصلاح الأنسجة.
    3. في هذه المرحلة ، سيموت الفأر. حصاد الأنسجة. إذا تم جمع الأنسجة لدراسات الحمض النووي الريبي أو البروتين ، فلا تقم بإصلاحها.
  6. عند إزالة الكلى من (سواء تم إصلاح التروية أم لا) ، استخدم شفرة حلاقة لقطع ما يصل إلى ثلاث شرائح سهمية بسمك 2-3 مم من خلال مركز الكلى (الشكل 4). يعطي هذا أقساما تمثيلية تشمل النخاع الكلوي والقشرة ويوفر أنسجة كافية لفحوصات الأنسجة أو البروتين أو الحمض النووي الريبي.
  7. استمر في إصلاح / تجميد العينات وفقا لمتطلبات الدراسة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بالنسبة للدراسات طويلة المدى ، نقوم عموما بتقييم وظائف الكلى عن طريق قياس نيتروجين اليوريا في الدم المتسلسل (BUN) ومعدلات الترشيح الكبيبي عبر الجلد (tGFR) في الفئران الواعية (راجع مقالة منشورة سابقا تصف هذا26) ، بالإضافة إلى قياس قدرة تركيز البول (UCC) عن طريق تقييم الأسمولية البولية من عينات البول الموضعية التي تم جمعها بعد 18 ساعة من الحرمان من الماء. بينما نجري دائما دراسات BUN ، إلا أنها مفيدة للغاية لتقييم شدة الإصابة في نقاط زمنية مبكرة بعد استئصال الكلية (انظر المناقشة). ومع ذلك ، بالنسبة ل...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مقارنة ببعض الأساليب التي تم استخدامها لدراسة انعكاس UUO المطول في الفئران6,7,8,9,10,11,12,13,14، البروتوكول الموصوف هنا بسيط نسبيا ولا يتطلب مستوى عال من الخبرة الجراحية السابقة. يتضمن عد...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا البحث من قبل المعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى (NIDDK) تحت أرقام الجوائز RO1DK128823 و UC2DK126122.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.9٪ كلوريد الصوديومصيدلية VUMCضعف
خياطة قابلة للامتصاص Vicryl 6-0ميد فيت إنترناشيونال- إيثيكونجي 492 جي
مسحات الكحولمسحات الكحول الأيزوبروبيل ماركة BD326895 دينار بحريني
محلول البيتادينشركة حنا للتوريدات الدوائية67618015017
المشبك تطبيق الملقط: S & amp تي CAF-4أدوات العلوم الجميلة00071-14
وسادة متساوية الحرارة الطوربرينتري العلميةDPIP
ماكينة تشذيب كهربائيةاوسترضعف
قفازات جراحية محكم ENCORE Latexانسل5785003
إيثيكا إكس آر بوبروفينور (CIII) السادس 1.3 مجم / ملباترسون البيطري - إيثيقة86084010030
مشبك EZ 9 ممبرينتري العلميةEZC-CSأو 7 مم
EZ كليب applier 9 مم   ؛برينتري العلميةEZC-APLأو 7 مم
مزيل مشبك EZ 9 مم   ؛برينتري العلميةEZC-RMVأو 7 مم
إسفنج الشاش 2 ´ 2فيشر العلمية22-362178
طرف مسنن بزاوية أو منحنيأدوات العلوم الجميلة11049-10
Graefe طرف مسنن مستقيمأدوات العلوم الجميلة11050-10
وسادة صلبة ساخنة 15 ´ 24برينتري العلميةبرنامج HHP 2
موصلات مضخة الوسادة الصلبة المسخنةبرينتري العلميةموصل HHP Gaymar
معقم حبة ساخنةأدوات العلوم الجميلة18000-45
حقنة الأنسولين 0.5 مل 29 جمإكسيل انترناشيونال26028
Isoflurane باترسون البيطرية - بيفيتال78949580
كيتامين 100 مجم / ملصيدلية VUMC
خياطة غير قابلة للامتصاص حرير 4-0ميد فيت إنترناشيونال- إيثيكون683 جرام
حامل إبرة أولسن هيغار: مع قاطع خياطةأدوات العلوم الجميلة12002-12
أوبتيكسكير - زيوت العين 20 جمميد فيت انترناشيونالفوبتيكسكير
مقص بلانت ليكسر بيبيأدوات العلوم الجميلة14078-10
مقص حاد منحنيأدوات العلوم الجميلة14005-12
أدوات تطبيق معقمة برأس قطنيالبروتستانتي25806 2 دبليو سي
إسفنج شاش معقم 4 ´ 4فيشر العلمية22-415-469
ستارة جراحية معقمة يمكن التخلص منها 18 á ؛ 26ميد فيت انترناشيونال20001
الحقيبة أداة التعقيم 5 ´ 10فيشر العلمية01-812-54
مضخة تبريد التدفئة T / مضخةبرينتري العلميةتي بي -700
ملقط تايلور منحني ، ناعمأدوات العلوم الجميلة11017-17
المشبك الوعائي: S & amp مكبس من 5 إلى 15 جمأدوات العلوم الجميلة00396-01
زيلازين 100 مجم / ملباترسون البيطري - كرونوسCR04305

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, A. K., Tran, T. C., Sorensen, M. D., Durack, J. C., Stoller, M. L. Relative renal function does not improve after relieving chronic renal obstruction. BJU Int. 109 (10), 1540-1544 (2012).
  2. Tseng, T. Y., Stoller, M. L. Obstructive uropathy. Clin Geriatr Med. 25 (3), 437-443 (2009).
  3. Caddeo, G., Williams, S. T., McIntyre, C. W., Selby, N. M. Acute kidney injury in urology patients: incidence, causes and outcomes. Nephrourol Mon. 5 (5), 955-961 (2013).
  4. Sasaki, S., et al. Anemia and long-term renal prognosis in patients with post-renal acute kidney injury of nonmalignant cause. Nephron. 135 (2), 129-136 (2017).
  5. Berlyne, G. M. Distal tubular function in chronic hydronephrosis. Q J Med. 30, 339-355 (1961).
  6. Puri, T. S., et al. Chronic kidney disease induced in mice by reversible unilateral ureteral obstruction is dependent on genetic background. Am J Physiol Renal Physiol. 298 (4), F1024-F1032 (2010).
  7. Buchtler, S., et al. Cellular origin and functional relevance of collagen I production in the kidney. J Am Soc Nephrol. 29 (7), 1859-1873 (2018).
  8. Tapmeier, T. T., et al. Reimplantation of the ureter after unilateral ureteral obstruction provides a model that allows functional evaluation. Kidney Int. 73 (7), 885-889 (2008).
  9. Conway, B. R., et al. Kidney single-cell atlas reveals myeloid heterogeneity in progression and regression of kidney disease. J Am Soc Nephrol. 31 (12), 2833-2854 (2020).
  10. Connor, K. L., et al. Identifying cell-enriched miRNAs in kidney injury and repair. JCI Insight. 5 (24), e140399(2020).
  11. Hesketh, E. E., et al. A murine model of irreversible and reversible unilateral ureteric obstruction. J Vis Exp. (94), e51234(2014).
  12. Yao, Y., et al. Interferon-gamma improves renal interstitial fibrosis and decreases intrarenal vascular resistance of hydronephrosis in an animal model. Urology. 77 (3), 761-768 (2011).
  13. Chaabane, W., et al. Renal functional decline and glomerulotubular injury are arrested but not restored by release of unilateral ureteral obstruction (UUO). Am J Physiol Renal Physiol. 304 (4), F432-F439 (2013).
  14. Cochrane, A. L., et al. Renal structural and functional repair in a mouse model of reversal of ureteral obstruction. J Am Soc Nephrol. 16 (12), 3623-3630 (2005).
  15. Souma, T., et al. Plasticity of renal erythropoietin-producing cells governs fibrosis. J Am Soc Nephrol. 24 (10), 1599-1616 (2013).
  16. Flam, T., Venot, A., Bariety, J. Reversible hydronephrosis in the rat: a new surgical technique assessed by radioisotopic measurements. J Urol. 131 (4), 796-798 (1984).
  17. Hammad, F. T., et al. Despite initial recovery of GFR, long-term renal functions deteriorate following short periods of unilateral ureteral obstruction. Am J Physiol Renal Physiol. 319 (3), F523-F533 (2020).
  18. Hammad, F. T., Lubbad, L. The effect of diclofenac sodium on renal function in reversible unilateral ureteric obstruction. Urol Res. 39 (5), 351-356 (2011).
  19. Ito, K., et al. Renal damage progresses despite improvement of renal function after relief of unilateral ureteral obstruction in adult rats. Am J Physiol Renal Physiol. 287 (6), F1283-F1293 (2004).
  20. Griffin, M. D., Bergstralhn, E. J., Larson, T. S. Renal papillary necrosis-a sixteen-year clinical experience. J Am Soc Nephrol. 6 (2), 248-256 (1995).
  21. Onen, A. Grading of hydronephrosis: an ongoing challenge. Front Pediatr. 8, 458(2020).
  22. Sands, J. M., Layton, H. E. Advances in understanding the urine-concentrating mechanism. Annu Rev Physiol. 76, 387-409 (2014).
  23. Nawata, C. M., Pannabecker, T. L. Mammalian urine concentration: a review of renal medullary architecture and membrane transporters. J Comp Physiol B. 188 (6), 899-918 (2018).
  24. O'Connor, P. M., Cowley, A. W. Jr Modulation of pressure-natriuresis by renal medullary reactive oxygen species and nitric oxide. Curr Hypertens Rep. 12 (2), 86-92 (2010).
  25. Vanichapol, T., et al. Permanent defects in renal medullary structure and function after reversal of urinary obstruction. JCI Insight. 10 (5), e142017(2025).
  26. Scarfe, L., et al. Transdermal measurement of glomerular filtration rate in mice. J Vis Exp. (140), e57921(2018).
  27. Li, H., Dixon, E. E., Wu, H., Humphreys, B. D. Comprehensive single-cell transcriptional profiling defines shared and unique epithelial injury responses during kidney fibrosis. Cell Metab. 34 (12), 1977-1998.e9 (2022).
  28. Gerhardt, L. M. S., Liu, J., Koppitch, K., Cippa, P. E., McMahon, A. P. Single-nuclear transcriptomics reveals diversity of proximal tubule cell states in a dynamic response to acute kidney injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (27), e2101234(2021).
  29. Gerhardt, L. M. S., et al. Lineage tracing and single-nucleus multiomics reveal novel features of adaptive and maladaptive repair after acute kidney injury. J Am Soc Nephrol. 34 (4), 554-571 (2023).
  30. Kirita, Y., Wu, H., Uchimura, K., Wilson, P. C., Humphreys, B. D. Cell profiling of mouse acute kidney injury reveals conserved cellular responses to injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (27), 15874-15883 (2020).
  31. Canela, V. H., et al. A spatially anchored transcriptomic atlas of the human kidney papilla identifies significant immune injury in patients with stone disease. Nat Commun. 14 (1), 4140(2023).
  32. Lee, H. T., Ota-Setlik, A., Fu, Y., Nasr, S. H., Emala, C. W. Differential protective effects of volatile anesthetics against renal ischemia-reperfusion injury in vivo. Anesthesiology. 101 (6), 1313-1324 (2004).
  33. Mohammadi, A., et al. Effects of the surgical ligation of the ureter in different locations on the kidney over time in the rat model. Adv Urol. 2024, 6611081(2024).
  34. Imig, J. D., et al. Salt-sensitive hypertension after reversal of unilateral ureteral obstruction. Biochem Pharmacol. 210, 115438(2023).
  35. Provoost, A. P., Molenaar, J. C. Changes in the glomerular filtration rate after unilateral nephrectomy in rats. Pflugers Arch. 385 (2), 161-165 (1980).
  36. Young, L. S., et al. Changes in regional renal blood flow after unilateral nephrectomy using the techniques of autoradiography and microautoradiography. J Urol. 160 (3 Pt 1), 926-931 (1998).
  37. Hostetter, T. H. Progression of renal disease and renal hypertrophy. Annu Rev Physiol. 57, 263-278 (1995).
  38. Soranno, D. E., et al. Matching human unilateral AKI, a reverse translational approach to investigate kidney recovery after ischemia. J Am Soc Nephrol. 30 (6), 990-1005 (2019).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mouse ModelUreteric ObstructionRenal FunctionReversible UUOContralateral NephrectomyKidney InjuryUrinary Concentrating CapacityHydronephrosisBlood Urea NitrogenGlomerular Filtration Rate

Related Articles