مقالة منهجية

القياس الكمي للفيولاسين في Chromobacterium violaceum وتثبيطه بالمركبات النشطة بيولوجيا

DOI:

10.3791/68507

⸱

أغسطس 8, 2025

 ,  ,  , 
1Food Research Center, Department of Food and Experimental Nutrition, Faculty of Pharmaceutical Sciences, University of São Paulo (USP)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من هذا البروتوكول هو تحديد إنتاج الفيولاسين بواسطة Chromobacterium violaceum ATCC 12472 كوكيل لتقييم تثبيط استشعار النصاب بواسطة المركبات النشطة بيولوجيا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتواصل البكتيريا من خلال نظام يعرف باسم استشعار النصاب (QS) ، والذي يسمح لها بتنسيق سلوكها استجابة للتغيرات في كثافة الخلايا. تتضمن هذه العملية إنتاج وإفراز واكتشاف جزيئات الإشارات الصغيرة خارج الخلية ، والتي تسمى عادة المحرضات الذاتية (الذكاء الاصطناعي). ينظم QS مجموعة واسعة من الجينات والوظائف ، بما في ذلك تكوين الأغشية الحيوية وتشتتها ، وحركة الاحتشاد ، وإنتاج عوامل الفوعة ، ومقاومة المضادات الحيوية ، والتلألؤ البيولوجي ، من بين أمور أخرى. أصبح تثبيط QS استراتيجية واعدة لمضادات الفوعة ضد البكتيريا المقاومة للمضادات الحيوية لأنه يمارس ضغطا انتقائيا أقل مقارنة بالمضادات الحيوية التقليدية. في بكتيريا Chromobacterium violaceum ATCC 12472 ، تتحكم بروتينات QS CviI / CviR ، المتماثلة مع بروتينات QS من نوع LuxI / LuxR من Aliivibrio fisheri ، في العديد من الجينات ، بما في ذلك تلك المسؤولة عن إنتاج صبغة فيولاسين الأرجواني. C . violaceum تم استخدامه على نطاق واسع كسلالة مستشعر حيوي في دراسات تثبيط QS ، وخاصة تثبيط إنتاج الكمان. العديد من المركبات لديها القدرة على تثبيط QS عن طريق الارتباط ببروتينات QS ، إما متماثلات LuxI أو LuxR ، مما يؤدي إلى تعطيل دوائر QS. يصف هذا البروتوكول طريقة قياس كمية الفيلاسين الذي تنتجه C. violaceum ATCC 12472 وتثبيطه بواسطة المركبات النشطة بيولوجيا بتركيزات لا تؤثر على نمو البكتيريا. يوضح الاختبار الموصوف هنا انخفاضا كبيرا في إنتاج الفيوسين بواسطة المركبات المختبرة. تسلط هذه الدراسة الضوء على إمكانية استخدام هذا البروتوكول لفحص المرشحين الواعدين في أبحاث تثبيط QS.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن للبكتيريا التواصل من خلال نظام يعرف باسم QS ، والذي يتيح التعديل المنسق لسلوكها استجابة للتغيرات في كثافة الخلايا. تتضمن هذه العملية إنتاج وإفراز واكتشاف جزيئات الإشارات الصغيرة خارج الخلية ، والتي تسمى أيضا المحفزات الذاتية ، والتي تسمح بالاتصال بين الأنواع المختلفة وداخل نفس النوع1،2.

هذا الاتصال قادر على تنظيم الجينات والوظائف مثل تكوين الأغشية الحيوية وتشتتها ، والحركة والالتصاق ، وتكاثر الخلايا ، وتوليف الإنزيمات الخارجية والسديروفور ، والتبواغ ، ومقاومة الأحماض ، ونقل الجينات الأفقي ، ومقاومة المضادات الحيوية ، والتلألؤ البيولوجي ، وإنتاج عديدات السكاريد الخارجية ، من بين أمور أخرى3،4،5. نظرا لأهمية الأنماط الظاهرية الخاضعة لتنظيم QS ، هناك اهتمام كبير بتطوير أنظمة قادرة على التدخل في هذا الاتصال الخلوي. يطلق على تثبيط إشارات QS أيضا تبريد النصاب (QQ) 6. يمكن أن يحدث QQ بعدة طرق ، بما في ذلك مثبطات تخليق المحرضات الذاتية ، والتعطيل الأنزيمي لهذه الإشارات ، والجزيئات ذات التأثير العدائي على هذه الجزيئات4،7.

أدى التهديد المتزايد لمقاومة المضادات الحيوية إلى دفع البحث في العلاجات البديلة ، بما في ذلك مثبطات استشعار النصاب (QSIs) ، التي تعطل الاتصال البكتيري دون قتل مسببات الأمراض مباشرة. قد تظهر هذه المركبات تأثيرات تآزرية عند دمجها مع المضادات الحيوية ، مما يعزز قابلية البكتيريا ويسمح بتقليل جرعات المضادات الحيوية ، وهي استراتيجية رئيسية لإبطاء تطور المقاومة. على سبيل المثال ، يؤخر ريسفيراترول وكاناميسين معا نمو Aeromonas hydrophila 8 ، بينما يتآزر N-acetylcysteine مع tobramycin لتعطيل الأغشية الحيوية Pseudomonas aeruginosa 5.

مع الإفراط في استخدام المضادات الحيوية وركود تطوير الأدوية ، تقدم مناهج مضادات الفوعة مثل تثبيط QS نقلة نوعية9. بدلا من استهداف قابلية البقاء ، فإنها تستهدف عوامل الفوعة ، مما يجعل البكتيريا أقل ضررا وأكثر عرضة لمناعة المضيف أو المضادات الحيوية5. تفرض هذه الاستراتيجية ضغطا انتقائيا أضعف مقارنة بالمضادات الحيوية التقليدية ، مما يقلل من المقاومة ويحافظ على الجراثيم المفيدة10،11. على الرغم من النتائج المعملية الواعدة ، لا يزال التحقق من الصحة في العالم الحقيقي من خلال التجارب السريرية غير مستكشف12. يمثل تثبيط QS مكملا واعدا للمضادات الحيوية ، لكن ترجمته إلى الممارسة تتطلب مزيدا من الأدلة على الفعالية والسلامة في البيئات البيولوجية المعقدة.

C. violaceum هو بروتين بيتا يشكل مستعمرات بنفسجية ذات سطح أملس ولامع. إنها عصيات لاهوائية اختيارية ولا تشكل جراثيم13. تتضمن آلية QS في C. violaceum حلقة تغذية مرتدة إيجابية تعتمد على نظام الجينات المماثل لنموذج lux ل Aliivibrio fisheri ، والذي يحتوي على بروتينات CviI (متماثلة ل LuxI) و CviR (متماثلة ل LuxR. الشكل 1). يظهر Violacein نشاطا بيولوجيا ضد الكائنات الحية المختلفة ، بما في ذلك الفطريات والبكتيريا والديدان الخيطية والفيروسات ، خاصة خلال مرحلة النمو الميكروبي الثابت ، عندما تكون الكثافة السكانية عالية للغاية ، وتنضب العناصر الغذائية تقريبا. وبالتالي ، يمكن اعتبار إنتاج الكمان استراتيجية تنافسية لإطالة بقاء المستعمرة الميكروبية14.

تنتج النباتات مركبات ناتجة عن التمثيل الغذائي الثانوي ، والتي تلعب دورا مهما في زيادة قدرتها على التكيف مع البيئات غير المواتية. هذه المستقلبات ، مثل القلويات والفينولات والفلافونويد والكينونات والعفص والتربين والليكتين ، معترف بها على نطاق واسع كآليات دفاعية ضد العاشبة والكائنات الحيةالدقيقة 15. جذبت إمكانات المركبات المشتقة من النباتات مثل QSI اهتماما خاصا بسبب التفاعلات الديناميكية بين النباتات والكائنات الحية الدقيقة. أظهرت الدراسات التي أجريت على تفاعلات مسببات الأمراض النباتية في الجذور أن النباتات يمكن أن تستجيب للمحفزات الذاتية البكتيرية عن طريق إفراز مركبات نشطة بيولوجيا قادرة على العمل كمثبطات ضد مسبباتالأمراض 16.

في هذه الدراسة ، نصف طريقة عملية تهدف إلى تحديد إنتاج الفيولاسين بواسطة C. violaceum ، مع التركيز على تثبيطه بواسطة المركبات النشطة بيولوجيا. تعمل هذه الطريقة كأداة فحص أولية لاختيار المركبات ذات أنشطة QSI المحتملة. يوفر نهجا سريعا وعمليا للتطوير العلاجي المستقبلي ضد البكتيريا المسببة للأمراض سالبة الجرام. سيكون هذا البروتوكول الموحد مفيدا لأنه يوفر وصفا مفصلا لم يتم إجراؤه في الدراسات السابقة وسيسهل المقارنة بين الدراسات المختلفة في المستقبل17 ، 18 ، 19.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد الثقافة (الشكل 2)

  1. تنمو في أنبوب اختبار 5 مل من C. violaceum ATCC 12472 في مرق لوريا بيرتاني (رطل: التربتون 10 جم / لتر ، مستخلص الخميرة 5 جم / لتر ، 5 جم / لتر كلوريد الصوديوم) عند 30 درجة مئوية في حاضنة اهتزاز (220 دورة في الدقيقة) لمدة 24 ساعة.
  2. اضبط المزرعة على OD595 من 0.1 في مرق LB ، المقابل حوالي 1 × 108 CFU / mL.

2. تحضير المركب

  1. في طبق مسطح القاع مكون من 96 بئرا ، أضف مرق LB والمركب النشط بيولوجيا وفقا لحساب التخفيف التسلسلي ، باتباع الوصف أدناه. اعتمادا على قابليتها للذوبان ، عادة ما يتم تخفيف المركبات النشطة بيولوجيا في DMSO نقي أو DMSO: محلول الماء (1: 1).
    ملاحظة: في المنهجيات التي تقيم QSI ، من الأهمية بمكان التأكد من أن التركيزات المستخدمة أقل من الحد الأدنى للتركيز المثبط (sub-MIC) ، مما يعني أنها لا تؤثر على نمو البكتيريا. لذلك ، يوصى بإجراء فحوصات منحنى النمو بتركيزات مختلفة للتأكد من أن المركب يثبط على وجه التحديد الاتصال من خلية إلى خلية بدلا من الجدوى الميكروبية. يرجى الاطلاع على الشكل التكميلي 1 للحصول على فحوصات منحنى النمو للمركبات النشطة بيولوجيا المختبرة المستخدمة في هذا البروتوكول.
  2. لحساب تركيز المركب النشط بيولوجيا في البئر ، مع الأخذ في الاعتبار محلول مخزون من فارنيسول واللينالول عند 20 مجم / مل وتركيز مستهدف يبلغ 200 ميكروغرام / مل في البئر ، وكذلك الريسفيراترول عند 2.5 مجم / مل في محلول المخزون و 25 ميكروغرام / مل في البئر ، قم بإجراء الحساب على النحو التالي:
    ج1فولت1 = ج2فولت2
    20,000 ميكروغرام / مل × V1 = 200 ميكروغرام / مل × 200 ميكرولتر
    V1 = 40,000 / 20,000 ميكرولتر
    V1 = 2 ميكرولتر
    حيث C1 = تركيز محلول المخزون (20 ملغم/مل، أي ما يعادل 20,000 ميكروغرام/مل)؛ V1 = حجم محلول المخزون المراد إضافته ؛ C2 = التركيز النهائي المطلوب (200 ميكروغرام / مل) ؛ V2 = الحجم النهائي في البئر (200 ميكرولتر).

3. التخفيف التسلسلي20 وإعداد اللوحة (الشكل 3)

ملاحظة: يستخدم التخفيف التسلسلي لتقييم مجموعة من تركيزات المركب المختبر بسرعة. في هذه العملية ، يتم تخفيف المركب على التوالي بنسبة ثابتة ، في هذه الحالة 1: 2. كل تخفيف يقلل من تركيز المركب بمقدار النصف مقارنة بالتركيز السابق ، مما يؤدي إلى مجموعة من التركيزات المتناقصة20.

  1. في العمود الأول من التخفيف التسلسلي ، أضف 196 ميكرولتر من مرق LB (في مثالنا ، الأعمدة 3 و 5 و 7). في الآبار التالية للتخفيف التسلسلي ، أضف 100 ميكرولتر من مرق LB (في حالتنا ، الأعمدة 4 و 6 و 8).
  2. ثم أضف 2 أضعاف كمية المركب النشط بيولوجيا المحسوبة في الخطوة السابقة (2.2) لإجراء التخفيف التسلسلي. نتج عن الحساب 2 ميكرولتر من كل مركب تم اختباره لتحقيق التركيز النهائي في البئر الأول ، لذا أضف 4 ميكرولتر من المركب (الأعمدة 3 و 5 و 7).
  3. انقل نصف الحجم الكلي للبئر (100 ميكرولتر) إلى العمود التالي (في حالتنا ، الأعمدة 4 و 6 و 8) ، وهكذا حتى آخر تركيز مطلوب ، إذا قمت بالتخفيف التسلسلي. تذكر أن تخلط المحتويات جيدا قبل النقل.
    ملاحظة: في هذا الإعداد التجريبي ، استخدمنا تركيزين فقط للبساطة وجميع المركبات تتناسب مع لوحة واحدة فقط.
  4. قم بإجراء التجربة ثلاث نسخ على الأقل لكل تركيز لكل مركب. يوصى أيضا بثلاثة مكررات بيولوجية. قم بتغيير الطرف وكرر الإجراء حتى آخر تركيز مطلوب. في العمود الأخير (في حالتنا ، 4 و 6 و 8) ، خذ 100 ميكرولتر منه وتخلص منه.
  5. أضف 80 ميكرولتر من مرق LB إلى جميع الآبار ، بإجمالي 180 ميكرولتر (الصفوف من B إلى D). ثم أضف 20 ميكرولتر من C. violaceum مزرعة موحدة في الخطوة 1.2 ، مما يضمن حجما نهائيا يبلغ 200 ميكرولتر لكل بئر (الصفوف من B إلى D). تأكد من تغيير أطراف الماصة في كل مرة عند تغيير الآبار لتجنب ترحيل تركيزات أعلى بين الآبار أو التلوث.
  6. إذا تم إذابة المركب في أي نوع من المذيبات ، فتأكد من إعداد التحكم باستخدام هذا المذيب. استخدمنا DMSO. في هذه الحالة ، قم بإعداد عنصر تحكم في المذيبات ، والذي سيكون عنصر التحكم غير المعالج - UC (بدون مركب نشط بيولوجيا ؛ العمود 9). أضف 2 ميكرولتر من DMSO لكل بئر تحكم. هذا يعطي تركيزا قصوى يبلغ 1٪ DMSO في الاختبار.
    ملاحظة: DMSO بنسبة 1٪ لا يؤثر على نمو البكتيريا21،22.
  7. قم بإعداد الفراغ ، أو التحكم في اللون إذا كنت تستخدم مركبات مصطبغة ، بدون بكتيريا. بعد إضافة 80 ميكرولتر من مرق LB إلى جميع الآبار ، بإجمالي 180 ميكرولتر (الصفوف B إلى D ، كما هو موضح سابقا) ، أضف 20 ميكرولتر من مرق LB إلى الآبار الفارغة المقابلة ، بإجمالي 200 ميكرولتر (الصفوف E إلى G). يتم ذلك بسبب وجود بعض تلطيخ الخلفية من البنفسجي البلوري الذي يحتاج إلى طرحه من قراءات OD ، كما سيتم وصفه في الخطوة 5 من هذا البروتوكول.
  8. إذا ظل أي عمود فارغا ، فاملأه ب 200 ميكرولتر من مرق LB أو الماء المقطر المعقم (الأعمدة 1 و 2 و 10 و 11 و 12). هذه الخطوة مهمة لمنع الجفاف المفرط للوسط في الحاضنة.

4. حضانة واستخراج الكمانش

  1. قم بتغطية اللوحة بغطاء أو فيلم مانع للتسرب (كما هو محدد في جدول المواد) لمنع التبخر ، اعتمادا على مقياس الطيف الضوئي المستخدم.
  2. احتضان اللوحة عند 30 درجة مئوية مع التحريك عند 130 دورة في الدقيقة لمدة 24 ساعة ، ثم قم بإزالة اللوحة من الحاضنة ، وضعها في حاضنة تجفيف عند 60 درجة مئوية ، وقم بإزالة الغطاء ، واترك اللوحة تجف تماما (حوالي 8 ساعات).
  3. بعد أن يجف الطبق ، أخرجه من الحاضنة وأضف 200 ميكرولتر من DMSO النقي إلى كل بئر ، ثم قم بتغطيته. ضع الطبق في حاضنة عند 25 درجة مئوية مع رجه عند 130 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة لإذابة صبغة الكمان.
  4. بعد هذا الوقت ، قم بإزالة اللوحة من الحاضنة وانقل 100 ميكرولتر إلى صفيحة دقيقة أخرى ، وتجنب ملامسة الطرف وجدران البئر.

5. القياس الكمي لإنتاج الكمان

  1. قم بقياس كمية إنتاج الكمان عن طريق قياس الامتصاص عند 595 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي المناسب (جدول المواد). يتناسب تثبيط صبغة الكمان مع قراءات الامتصاص المنخفضة.
  2. تحديد إنتاج الكفيلاسين باستخدام عنصر تحكم سلبي (تحكم غير معالج) كمرجع لإنتاج الكمان بنسبة 100٪ (الجدول 1). أولا ، اطرح قيمة امتصاص الفراغ من كل تكرار معالجة للحصول على الامتصاص المقابل فقط لصبغة الكمانش (باستثناء التداخل من المرق أو اللون المركب). ثم احسب النسبة المئوية لإنتاج الفيولاسين لكل معالجة باستخدام المعادلة التالية.
    ٪ إنتاج الكمان = (OD للمركب النشط بيولوجيا / OD للتحكم غير المعالج) × 100
  3. احسب التحليلات الإحصائية في ثلاث نسخ مكررة. يمكن إرسال النتائج إلى ANOVA ، متبوعا باختبار Tukey باستخدام برنامج GraphPad Prism 8.0. اعتبرت قيمة p <0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بالنسبة للنتائج الموضحة هنا ، تم استخدام ثلاثة مركبات نشطة بيولوجيا تمت دراستها سابقا من قبل مجموعتناالبحثية 8 ، وهي ريسفيراترول ، وفارنيسول ، ولينالول. تم اختبار كل مركب لقدرته على تثبيط إنتاج الكمانش في C. violaceum ATCC 12472 ، وهو نمط ظاهري ينظمه نظام QS على vioABCDE operon23.

تثبت النتائج فعالية بروتوكولنا في تحديد إنتاج الكمان وتثبيطه بواسطة المركبات النشطة بيولوجيا في C. violaceum ATCC 12472. يؤكد الانخفاض الكبير...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ظهرت الطريقة الأولى لاستخراج وتوصيف الكمانات من C. violaceum في التسعينيات ، مع التركيز على تحديد مصادر الكربون المناسبة لتخليق الصباغ. في هذه العملية ، تم تجفيف الفيوسين - جنبا إلى جنب مع الخلايا ووسط الثقافة - ، وإعادة تعليقه في الإيثانول ، ثم فصله عن طريق استخراج طاف. تم تجفيف الكمان ، المذاب الآن في الإيثانول ، مرة أخرى ، مما أدى إلى ظهور شكل نقي وجاف من الصبغة27. في عام 1998 ، تم تعديل البروتوكول28. بينما كان الإيثانول لا يزال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر المجلس الوطني للتنمية العلمية (CNPQ) من خلال المنح # 403661 / 2023-4 و # 444794 / 2024-7 والمنح الدراسية # 306685 / 2022-1 ، ومؤسسة ساو باولو للأبحاث (FAPESP) على المنح # 2024 / 05158-6 و 2023 / 17090-4 والدعم المالي لمركز أبحاث الأغذية (FoRC) # 2013 / 07914-8.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
DMSO موالفه
فارنيسولسيجما ألدريتشإف 20395%
لينالولسيجما ألدريتشL260297%
لوريا بيرتاني وسطديفكو244620
فيلم لاصق بصريثيرمو فيشر4311971مايكرو أمبير
ريسفيراترولسيجما ألدريتش5010 راند&GE; 99٪ (HPLC)
قارئ Synergy HTX متعدد الأوضاعبيوتيك
ألواح زراعة الأنسجة 96 جيداكاسفيك 12-096

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mukherjee, S., Bassler, B. L. Bacterial quorum sensing in complex and dynamically changing environments. Nat Rev Microbiol. 17 (6), 371(2019).
  2. Lima, E. M. F., Winans, S. C., Pinto, U. M. Quorum sensing interference by phenolic compounds - A matter of bacterial misunderstanding. Heliyon. 9 (7), (2023).
  3. Papenfort, K., Bassler, B. L. Quorum sensing signal-response systems in Gram-negative bacteria. Nat Rev Microbiol. 14 (9), 576-588 (2016).
  4. Grandclément, C., Tannières, M., Moréra, S., Dessaux, Y., Faure, D. Quorum quenching: role in nature and applied developments. FEMS Microbiol Rev. 40 (1), 86-116 (2016).
  5. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Sircili, M. P., Bueris, V., Pinto, U. M. N-acetylcysteine (NAC) attenuates quorum sensing regulated phenotypes in Pseudomonas aeruginosa PAO1. Heliyon. 9 (3), (2023).
  6. Allen, R. C., Popat, R., Diggle, S. P., Brown, S. P. Targeting virulence: can we make evolution-proof drugs. Nat Rev Microbiol. 12 (4), 300-308 (2014).
  7. Kalia, V. C., Patel, S. K. S., Kang, Y. C., Lee, J. K. Quorum sensing inhibitors as antipathogens: biotechnological applications. Biotechnol Adv. 37 (1), 68-90 (2019).
  8. Santos, C. A., Lima, E. M. F., Franco, B. D. G. deM., Pinto, U. M. Exploring phenolic compounds as quorum sensing inhibitors in foodborne bacteria. Front Microbiol. 12, 735931(2021).
  9. Ahmed, S. A. K. S., et al. Natural quorum sensing inhibitors effectively downregulate gene expression of Pseudomonas aeruginosa virulence factors. Appl Microbiol Biotechnol. 103 (8), 3521-3535 (2019).
  10. Yang, Q., Defoirdt, T. Weak selection for resistance to quorum sensing inhibition during multiple host infection cycles. ISME J. 18 (1), 251(2024).
  11. Defoirdt, T. Specific antivirulence activity, A new concept for reliable screening of virulence inhibitors. Trends Biotechnol. 34 (7), (2016).
  12. Defoirdt, T. Quorum-sensing systems as targets for antivirulence therapy. Trends Microbiol. 26 (4), 313-328 (2018).
  13. Mahendrarajan, V., Easwaran, N. Quorum quenching effects of linoleic and stearic acids on outer membrane vesicle-mediated virulence in Chromobacterium violaceum. Biofouling. , 1-11 (2024).
  14. Durán, N., et al. Advances in Chromobacterium violaceum and properties of violacein-Its main secondary metabolite: A review. Biotechnol Adv. 34 (5), 1030-1045 (2016).
  15. Nazir, N., et al. Characterization of phenolic compounds in two novel lines of Pisum sativum L. along with their in vitro antioxidant potential. Env Sci Pollut Res Int. 27 (7), 7639(2020).
  16. Majdura, J., Jankiewicz, U., Gałązka, A., Orzechowski, S. The role of quorum sensing molecules in bacterial-plant interactions. Metabolites. 13 (1), (2023).
  17. Çevikbaş, H., Ulusoy, S., Kaya Kinaytürk,, N, Exploring rose absolute and phenylethyl alcohol as novel quorum sensing inhibitors in Pseudomonas aeruginosa and Chromobacterium violaceum. Sci Rep. 14 (1), 15666(2024).
  18. Choi, S. Y., Lim, S., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. Biotechnological activities and applications of bacterial pigments violacein and prodigiosin. J Biol Eng. 15 (1), (2021).
  19. Moradi, F., Hadi, N., Bazargani, A. Evaluation of quorum-sensing inhibitory effects of extracts of three traditional medicine plants with known antibacterial properties. New Microb New Infect. 38 (100769), 100769(2020).
  20. Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances. Nat Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).
  21. Scardino, A., et al. Cinnamaldehyde effectively disrupts Desulfovibrio vulgaris biofilms: potential implication to mitigate microbiologically influenced corrosion. Appl Env Microbiol. 91 (5), (2025).
  22. Summer, K., Browne, J., Hollanders, M., Benkendorff, K. Out of control: The need for standardised solvent approaches and data reporting in antibiofilm assays incorporating dimethyl-sulfoxide (DMSO). Biofilm. 4, 100081(2022).
  23. Ravichandran, V., et al. Virtual screening and biomolecular interactions of CviR-based quorum sensing inhibitors against Chromobacterium violaceum. Front Cell Infect Microbiol. 8, (2018).
  24. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Pinto, U. M. Exploring the antivirulence potential of phenolic compounds to inhibit quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa. World J Microbiol Biotechnol. 41 (2), (2025).
  25. Blosser, R. S., Gray, K. M. Extraction of violacein from Chromobacterium violaceum provides a new quantitative bioassay for N-acyl homoserine lactone autoinducers. J Microbiol Methods. 40 (1), 47-55 (2000).
  26. Zhu, H., He, C. C., Chu, Q. H. Inhibition of quorum sensing in Chromobacterium violaceum by pigments extracted from Auricularia auricular. Lett Appl Microbiol. 52 (3), 269-274 (2011).
  27. Durán, N., Antonio, R. V., Haun, M., Pilli, R. A. Biosynthesis of a trypanocide by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 10 (6), 686(1994).
  28. Rettori, D., Production Durán, N. extraction and purification of violacein: an antibiotic pigment produced by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 14 (5), 685(1998).
  29. Cheng, K. -C., Hsiao, H. -C., Hou, Y. -C., Hsieh, C. -W., Hsu, H. -Y., Chen, H. -Y., Lin, S. -P. Improvement in violacein production by utilizing formic acid to induce quorum sensing in Chromobacterium violaceum. Antiox. 11 (5), 849(2022).
  30. Defoirdt, T., Brackman, G., Coenye, T. Quorum sensing inhibitors: how strong is the evidence. Trends Microbiol. 21 (12), 619-624 (2013).
  31. Alyousef, A. A., et al. Myrtus communis and its bioactive phytoconstituent, linalool, interferes with Quorum sensing regulated virulence functions and biofilm of uropathogenic bacteria: In vitro and in silico insights. J King Saud Univ Sci. 33 (7), 101588(2021).
  32. Kanekar, S., Devasya, R. P. Growth-phase specific regulation of cviI/R based quorum sensing associated virulence factors in Chromobacterium violaceum by linalool, a monoterpenoid. World J Microbiol Biotechnol. 38 (2), (2022).
  33. Dias, J. P., Domingues, F. C., Ferreira, S. Linalool reduces virulence and tolerance to adverse conditions of listeria monocytogenes. Antibiotics. 13 (6), 474(2024).
  34. Rodrigues, C. F., Černáková, L. Farnesol and tyrosol: Secondary metabolites with a crucial quorum-sensing role in Candida biofilm development. Genes. 11 (4), (2020).
  35. Hacioglu, M., Yilmaz, F. N., Yetke, H. I., Haciosmanoglu-Aldogan, E. Synergistic effects of quorum-sensing molecules and antimicrobials against Candida albicans and Pseudomonas aeruginosa biofilms: in vitro and in vivo studies. J Antimicrob Chemother. 79 (11), 2828(2024).
  36. Bhattacharyya, S., Agrawal, A., Knabe, C. Sol-gel silica controlled release thin films for the inhibition of methicillin resistant Staphylococcus aureus. Biomater. 35, 509-517 (2014).
  37. Qu, Y., Zou, Y., Wang, G., Zhang, Y., Yu, Q. Disruption of communication: Recent advances in antibiofilm materials with anti-quorum sensing properties. ACS Appl Mater Interfaces. 16 (11), 13353-13383 (2024).
  38. Li, B., et al. Effects of Rhapontigenin as a Novel Quorum-Sensing Inhibitor on Exoenzymes and Biofilm Formation of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum and Its Application in Vegetables. Molecules. 27 (24), (2022).
  39. Mattio, L. M., Catinella, G., Pinto, A., Dallavalle, S. Natural and nature-inspired stilbenoids as antiviral agents. Eur J Med Chem. 202 (112541), 112541(2020).
  40. Duarte, A., Alves, A. C., Ferreira, S., Silva, F., Domingues, F. C. Resveratrol inclusion complexes: Antibacterial and anti-biofilm activity against Campylobacter spp. and Arcobacter butzleri. Food Res Int. 77, 244-250 (2015).
  41. Martinelli, D., Grossmann, G., Séquin, U., Brandl, H., Bachofen, R. Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violaceum. BMC Microbiol. 4 (1), (2004).
  42. Tan, L. Y., Yin, W. F., Piper Chan, K. G. nigrum, Piper betle and Gnetum gnemon-natural food sources with anti-quorum sensing properties. Sensors. 13 (3), 3975-3985 (2013).
  43. Tan, L. Y., Yin, W. F., Chan, K. G. Silencing quorum sensing through extracts of Melicope lunu-ankenda. Sensors. 12 (4), 4339-4351 (2012).
  44. Oliveira, B. D., et al. Antioxidant, antimicrobial and anti-quorum sensing activities of Rubus rosaefolius phenolic extract. Ind Crops Prod. 84, 59-66 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة