توهين الحديدي العصبي عن طريق تثبيط RKIP بعد النزيف التلقائي داخل المخ عبر تنشيط مسار NRF2 / HO-1

ملخص

من خلال إجراء كل من الدراسات القائمة على الكائنات العضوية وزراعة الخلايا ، ثبت أن تثبيط بروتين مثبط Raf kinase (RKIP) يمكن أن يخفف من داء الحديد العصبي بعد النزيف التلقائي داخل المخ ، وبالتالي تقليل إصابات الدماغ. تنشأ الحماية الخلوية المرصودة من خلال تعديل محور الإشارات NRF2 / HO-1 .

الملخص

بروتين مثبط Raf kinase (RKIP) ، وهو عضو أساسي في عائلة البروتين المرتبط بالفوسفاتيديل إيثانول أمين ، معروف بمشاركته في العمليات الفسيولوجية المختلفة ، بما في ذلك تمايز الخلايا ، والهجرة ، ودورة الخلية ، وموت الخلايا المبرمج. استكشفت هذه الدراسة وظيفتها في داء الحديدية العصبي بعد النزيف التلقائي داخل المخ (ICH) والآليات المرتبطة به. تم تطوير نموذج خلوي للتراث الثقافي غير المادي التلقائي باستخدام خلايا ورم قواتم الفئران المستنبتة (PC12) المحفزة بالهيمين. تم تقييم صلاحية الخلية ، وتعبير الحمض النووي الريبي ، ومستويات أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ، وهيدروبيروكسيد الدهون (LPO). بالإضافة إلى ذلك ، تم قياس مستويات التعبير عن البروتين. أكدت هذه الدراسة أن تثبيط RKIP هو محصن في المختبر بعد التراث الثقافي غير المادي. ارتبط هذا التأثير بزيادة التعبير عن الجلوتاثيون بيروكسيداز 4 (GPX4) وانخفاض التعبير عن عائلة acyl-CoA synthetase طويلة السلسلة 4 (ACSL4) ، جنبا إلى جنب مع مستويات ROS و LPO في الخلايا العصبية. أظهر تثبيط RKIP دورا وقائيا ضد داء الحديد العصبي في المختبر بعد التراث الثقافي غير المادي ، ربما عن طريق تنشيط العامل النووي E2 المرتبط بالعامل النووي 2 / هيم أكسجيناز-1 (NRF2 / HO-1). قد تقدم هذه الآلية رؤى حول الاستراتيجيات العلاجية التي تستهدف داء الحديد العصبي في التراث الثقافي غير المادي.

المقدمة

النزيف التلقائي داخل المخ (ICH) هو حالة دماغية ووعائية تتميز بالنزيف بسبب تلف الأوعية الدموية داخل الجمجمة والنخر وتمزق الأوعية الدموية ، وعادة ما تؤثر على العقد القاعدية وتمثل نوعا فرعيا رئيسيا من السكتة الدماغية النزفية¹. ويبلغ معدل الوفيات بين المرضى الذين تم تشخيص إصابتهم بالتراث الثقافي غير المادي حوالي 50٪، وتعاني نسبة كبيرة من الناجين من فقدان شديد للاستقلالية². وخيارات العلاج الحالية للتراث الثقافي غير المادي التلقائي محدودة، حيث لا تظهر أي علاجات حالية أنها تقلل بشكل كبير من الوفيات أو تعزز بشكل ملحوظ النتائج العصبية بعد التراث الثقافي غير المادي.

يتم....

البروتوكول

ثقافة خلايا PC12
تم نشر خط خلايا PC12 في وسط النمو الذي يحتوي على 10٪ مصل أبقار الجنين (FBS) و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين ، مع الصيانة الروتينية في ظل ظروف الاستزراع القياسية (37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂ جو مرطب). بالنسبة للإجراءات التجريبية ، تم طلاء الخلايا الملتصقة على أوعية الاستزراع وسمح لها بالتكاثر حتى تحقيق طبقات أحادية شبه ملتقاء (حوالي 90٪ تغطية سطحية). تم تحقيق التفكك الخلوي من خلال المعالجة الأنزيمية باستخدام محلول التربسين-EDTA بنسبة 0.25٪ ، تليها ثلاث دورات ثقافة فرعية متتالية لضمان الاستقرار السكاني. تم تخصيص الخلايا المعالجة لاحقا للتطبيقات التجريبية النهائية والتقييمات التحليلية....

النتائج

يمكن أن يؤدي Hemin إلى تلف غشاء البلازما ، وبالتالي يتم استخدامه بشكل متكرر لبناء نماذج الخلايا في المختبر ل ICH. بحثت هذه الدراسة في تأثيرات معالجة الهيمين بتركيزات وفترات متفاوتة على بقاء خلية PC12 ، مع تحليل ديناميكيات تعبير بروتين RKIP في نفس الوقت في ظل الظروف التجريبية المقابلة من خلال تحليل اللطخة الغربية (الشكل 1 أ). انخفضت صلاحية الخلية بشكل ملحوظ عند تركيزات الهيمين البالغة 60 ميكرومتر أو أعلى (الشكل 1 ب) ، وحدث هذا الانخفاض بطريقة تعتمد على ا.......

المناقشة

بحثت هذه الدراسة في الآثار والآليات الكامنة وراء ضربة قاضية RKIP على داء الحديد الناجم عن التراث الثقافي غير المادي في بيئة في المختبر . يؤدي تحفيز الخلايا بالهيمين إلى الإجهاد التأكسدي ، مصحوبا بتوليد مفرط من أنواع الأكسجين التفاعلية و LPO ، وبالتالي تعزيز داء الحديد. يؤدي تثبيط تعبير RKIP الداخلي إلى تسريع NRF2 المحرر للانتقال إلى النواة والارتباط بعنصر الاستجابة المضادة للأكسدة (ARE) ، مما يبدأ نسخ الجينات المضادة للأكسدة في اتجاه مجرى النهر. HO.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أليكسا فلور 488 المميز ب Goat Anti-Rabbit IgG	بيوتايم بيوتيك	A0423
الأجسام المضادة المضادة ل ACSL4	الإشارات الخلوية	38493T
الأجسام المضادة المضادة ل-GPX4	الإشارات الخلوية	59735S
الأجسام المضادة المضادة HO-1	ميدكيم إكسبريس	HY-P80499
الأجسام المضادة المضادة ل NRF2	الإشارات الخلوية	12721T
الأجسام المضادة المضادة ل RKIP	أبكام	ab76582
الأجسام المضادة المضادة للأكتين وبيتا	أبكام	ab179467
BeyoECL Plus	بيوتايم بيوتيك	P0018M
جيش صرب البوسنه	NCM Biotech	WB6504-100g
مجموعة عد الخلايا-8	بيوتايم بيوتيك	C0037
حفظ الخلايا	NCM Biotech	C40050
مزيج رئيسي QPCR بلون ChamQ SYBR	فازيم	Q411-02
DMSO	بيوتايم بيوتيك	ST038
مصل الأبقار الجنيني	جيبكو	A5670801
منشور جراف باد
همين	ميدكيم إكسبريس	HY-19424
HiScript Q RT SuperMix لجهاز qPCR (+gDNA wiper)	فازيم	R123-01
IgG المضاد للفئران من قبل HRP	الحراريه	C31430100
جهاز IgG المضاد للأرانب من قبل HRP	الحراريه	C31460100
مجموعة اختبار محتوى بيروكسيد الدهون (LPO)	سولاربيولوجيا	BC5245
لوكوستاتين	ميدكيم إكسبريس	هاي-W013411A
ML385	ميدكيم إكسبريس	HY-100523
تركيب وسيط التخفيف (مع DAPI)	سولاربيولوجيا	S2110
الحليب المسطح الخالي من الدسم	سولاربيولوجيا	D8340
PBS (مسحوق؟pH7.2-7.4)	سولاربيولوجيا	P1010
PC-12Adh	نانجينغ بيوتشينال بيوتكنولوجي	BC-C-RA-005
سائل البنسلين-ستريبتوميسين	سولاربيولوجيا	P1400
PRMI-1640	جيبكو	A1049101
كوكتيل مثبط البروتياز والفوسفاتاز للاستخدام العام، 50 مرة	بيوتايم بيوتيك	P1045
علامة البروتين	الحراريه	26617
PVDF	ميليبور	RIKB43638
مجموعة اختبار أنواع الأكسجين التفاعلي	سولاربيولوجيا	CA1410
مخزن RIPA (عالي)	سولاربيولوجيا	R0010
مجموعة تحضير سريعة جل SDS-PAGE	إبيزيم	PG110
مخزن تحميل عينات SDS-PAGE، 5x	بيوتايم بيوتيك	P0015
ترايتون إكس-100	سولاربيولوجيا	IT9100
تريزول	الحراريه	15596018CN
محلول تريبسين-EDTA؟ 0.25٪ (بدون فينول ريد)	سولاربيولوجيا	T1300