مقالة منهجية

تخليق 13C 2-Retinyl Acetate وتحضير الجرعة لاختبارات تخفيف نظائر الريتينول

595 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68535

⸱

أغسطس 22, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nutritional Sciences, University of Wisconsin-Madison, 2Department of Otolaryngology - Head and Neck Surgery, University of Wisconsin-Madison

في هذه المقالة

ملخص

عادة ما يتم تصنيف أسيتات الريتينيل بدرجتين 13درجة مئوية عند استخدام قياس الطيف الكتلي لتحليل مصل الدم وحليب الثدي. تصف هذه الورقة تخليق 13C 2-retinyl acetate وإعداد جرعات لاختبارات تخفيف نظائر الريتينول التي سيتم تسليمها بواسطة ماصة إزاحة موجبة أو حقنة در.

الملخص

يعد اختبار تخفيف نظائر الريتينول (RID) الطريقة الأكثر حساسية لتقييم حالة فيتامين أ عن طريق تقدير إجمالي احتياطيات الكبد ، والتي تعتبر المعيار المرجعي. للكشف عن قياس الطيف الكتلي لنسبة كروماتوغرافيا الغاز والاحتراق والنظائر ، تتم إضافة 13درجة مئوية إلى جزء الريتينول. يبدأ الإجراء الاصطناعي ل 13C-retinyl acetate ب β-ionone الذي يحدث بشكل طبيعي. باختصار ، يتم تصنيع كيتون C18-tetraene من β-ionone وتنقيته. إذا كانت هناك حاجة إلى أسيتات 13C 4-retinyl ، فيمكن استخدام كاربانيون ثلاثي إيثيل فوسفونو أسيتات 13C 2 لإضافة اثنين من 13درجة مئوية إلى جزء β-ionone قبل إضافة الكربون الثلاثة للأسيتون لتصنيع كيتون C18-tetraene. إذا كانت هناك حاجة إلى أسيتات 13درجة مئوية 3-ريتينيل ، فيمكن تصنيف الكربون الثلاثة للأسيتون ب 13درجة مئوية.

بالنسبة لأكثر أسيتات 13C 2-retinyl استخداما للتحليل المستقبلي عن طريق قياس الطيف الكتلي لنسبة نظائر الاحتراق بالغاز والكروماتوغرافيا ، يتم استخدام إجراء Wittig-Horner المعدل ، ويتفاعل كيتون C18 tetraene غير المسمى مع كاربانيون ثلاثي إيثيل فوسفونو أسيتات 13C 2 لإضافة اثنين من 13درجة مئوية إلى مواضع 14 و 15 لجزيء الريتينول. يتم تقليل إستر الإيثيل الناتج إلى الكحول ويتم استيريته إلى 13درجة مئوية 2-أسيتات الريتينيل مع أنهيدريد الخليك. يتم تنقية الأيزومر المتحول بالكامل على الألومينا المعطلة بالماء بنسبة 8٪ باستخدام مذيبات غير ضارة نسبيا وشديدة التقلب - الهكسان وثنائي إيثيل الأثير - والتي تتم إزالتها عن طريق التبخر الدوار وصوتنة جرعات الزيت. يتميز المنتج بالتحليل الطيفي للأشعة فوق البنفسجية المرئية (UV-Vis) ، وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) ، والكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط (HPLC) مقابل المعايير التحليلية. يتم تخزين الجرعة المركزة مذابة في زيت فول الصويا عند -80 درجة مئوية. يتم تخفيف الجرعات النهائية في زيت فول الصويا (~ 200 ميكرولتر / جرعة) ويتم قياسها كميا عن طريق التحليل الطيفي للأشعة فوق البنفسجية مقابل زيت فول الصويا في السيارة. تقاس الجرعات لتسليمها إلى البشر بماصة إزاحة إيجابية أو محاقن السل لاختبار RID. باستخدام الافتراضات المناسبة ، يتم حساب إجمالي مخازن الجسم ، ويتم تقدير إجمالي احتياطيات الكبد.

المقدمة

تخفيف نظائر الريتينول (RID) هو المؤشر الحيوي الوحيد لحالة فيتامين أ الذي يقيس إجمالي مخازن فيتامين أ في الجسم (TBS) كميا وبافتراضات مناسبة ، يمكنه تقدير إجمالي احتياطيات الكبد (TLR). إنها الطريقة الأكثر حساسية لقياس حالة فيتامين A وتأثير التدخلات التي تحتوي إما على الريتينول المشكل مسبقا أو الكاروتينات بروفيتامين A. على الرغم من أن RID يمثل تحديا تقنيا ، إلا أنه دقيق وبسيط التوغل لأنه لا يتطلب سوى عينات دم بدلا من خزعات الكبد1. يتضمن اختبار RID إعطاء أسيتات الريتينيل المنزوعة أو 13أسيتات C ، اعتمادا على منصة مطياف الكتلة. قبل إعطاء الجرعة، يتم جمع عينة دم أساسية، وهو أمر ضروري عند استخدام 13علامة C، ولكن يمكن إجراؤها على مجموعة فرعية مختارة عشوائيا. يتم جمع عينة ثانية بعد خلط 13خلات ريتينيل المسمى C مع TBS1.

تشمل تدخلات فيتامين ألف للوقاية من نقص الغذاء إغناء الأغذية والتقوية الأحيائية وتنويع الغذاء والتكملة. ومع ذلك، في بعض البلدان، كانت هناك تدخلات متداخلة تستهدف نفس الأشخاص، مما أدى إلى فرط الفيتامينات A2، مما يتطلب إطارا للرصد لتقييم نتائج البرنامج. على هذا النحو ، هناك حاجة إلى طرق تقيس حالة فيتامين أ كميا. من خلال العمل مع الدول الأعضاء ، تعمل الوكالة الدولية للطاقة الذرية (IAEA) على تعزيز الاستخدام السلمي للنظائر في البحوث والتقييمات ، مما يدعم تطبيق اختبار RID. يكتسب اختبار RID زخما ويمكن استخدامه قريبا في المسوحات السكانية الكبيرة لتقييم حالة الفيتامين A من النقص إلى الزيادة في البلدان التي تنفذ تدخلات فيتامينA 3.

في السابق ، تم تصنيع 10،11،14،15-13 C 4-retinyl acetate باستخدام تعديلات من Bergen et al. لأسيتات الريتينيلالمنزوع 4،5. تم استخدام هذا المركب فيالفئران 6 والتجارب البشرية مع قياس الطيف الكتلي لنسبة الاحتراق والنظائر الغازية (GCCIRMS) التي تم تكييفها للتحليل7. من هذه التجارب القيمة ، قررنا أن GCCIRMS كانت حساسة للغاية لدرجة أن أربعة 13درجة مئوية لم تكن مطلوبة لاختبار RID باستخدام GCCIRMS. لذلك ، يتم تقليل تكلفة التتبع باستخدام اثنين فقط من 13درجة مئوية في موضعي 14 و 15 لجزيء الريتينول (الشكل 1). يقلل هذا التعديل من التكاليف المرتبطة بالتوليف ويؤدي إلى زيادة الغلة بسبب المسار الاصطناعي. هنا ، يتم وصف بروتوكول موسع لتوليفه.

يعتبر GCCIRMS أكثر حساسية من الأنواع الأخرى من قياس الطيف الكتلي لقياس النظائر المستقرة8 ويمكن أن يستجيب للتغيرات في النظام الغذائي وتغيرات التخصيب الطبيعية 13في الريتينول في المصل. تم وصف هذا في الجربوع9 والبشر10يستهلكون الذرة ، وفي البشر المسجلين في تدخل نباتي11. في الواقع ، تختلف الوفرة الطبيعية ل 13درجة مئوية بين المجموعات السكانية المختلفة ويجب تحديدها في الأشخاص المسجلين في تقييمات RID12. ومع ذلك، فقد استخدمت مجموعات فرعية صغيرة لقياس التخصيب الطبيعي مع RID في الأطفال الغانيين والتايلانديين13،14 والنساء التايلانديات15. يجب تحديد التخصيب الفردي لخط الأساس 13C للتحديد الأكثر دقة ل TBS على المستوىالفردي 12.

البروتوكول

ملاحظة: عند تسجيل البشر للبحث أو التدخلات أو الدراسات التقييمية ، يجب متابعة موافقة مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) مع إجراءات الموافقة المستنيرة المناسبة.

1. تخليق 13C2 -retinyl acetate (الشكل 2)

ملاحظة: يتم تنفيذ جميع الإجراءات التركيبية والقياس الكمي تحت إضاءة الفلورسنت الذهبية لمنع تدهور المركب والأيزومير.

  1. قم بتصنيع أسيتات β-ionyl في دفعة كبيرة من β-ionone المتوفرة تجاريا. على سبيل المثال ، قم بتغطية هيدريد الصوديوم (NaH) (4 جم ، 0.16 مول) ب 100 مل من الأثير. أضف ثلاثي إيثيل فوسفونوأسيتات غير المسمى (36 جم ، 0.16 مول) في 100 مل من الأثير بالتنقيط وحرك لمدة ساعتين. يتم تحرير H2 ويصبح التعليق الأولي واضحا وكهرمانيا.
    تنبيه: هيدريد الصوديوم (NaH) هو عامل اختزال قوي مفيد في مجموعة واسعة من التفاعلات الكيميائية. ومع ذلك ، يمكن أن تحدث حرائق المختبرات بسبب تفاعلها الطارد للحرارة مع الماء في الغلافالجوي 16،17. يوصى بالوصول إلى ورقة بيانات السلامة. تم نشر إرشادات إضافية للتعامل مع المواد الصلبة النارية معتدلة مثل NaH18. احتفظ به معلقا في الزيت أو المذيب غير التفاعلي أثناء المناولة ، وتنظيف أوعية التفاعل ، وحاويات التخزين بالغاز الخامل (مثل النيتروجين أو الأرجون) ، وتبريد وعاء التفاعل ، وتخزينه في حاويات محكمة الغلق محفوظة في بيئة جافة. في مختبرنا ، يتم نقل هيدروكسيد الهيدروكسيد بكميات صغيرة (~ 1 جم) تحت بيئة النيتروجين إلى قوارير ثم تخزينها في مجفف محكم الغلق حتى الاستخدام.
  2. أضف β-ionone (21 جم ، 0.12 مول) في 40 مل من الأثير وتفاعل بين عشية وضحاها (~ 15 ساعة عند 20 درجة مئوية). في اليوم 2 ، قم بإخماد التفاعل بالماء واستخرج أسيتات الإيثيل β-أيونيلدين إلى هكسان واغسلها بشكل متكرر بالماء في سلسلة من القمع المنفصل لتحقيق أقصى قدر من الاسترداد. جفف الطبقة العضوية (MgSO4 اللامائية) ، وقم بالترشيح ، والتركيز
    ملاحظة: عادة ما يكتشف كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) الشوائب الطفيفة فقط في هذه المرحلة من التوليف. يمكن تخزينها لفترة طويلة عند -80 درجة مئوية قبل الانتقال إلى الخطوات التالية.
  3. يتفاعل أسيتات إيثيل β-أيونيلدين (28 جم ، 0.11 مول) مع 120 مل من 1 مولي هيدريد ألومنيوم الليثيوم (LiAlH4) في ثنائي إيثيل الأثير. اغمر وعاء التفاعل في حمام الأسيتون الجاف وحرك المحلول باستمرار لإنتاج β إيثانول أيونيلدين.
    تنبيه: هيدريد الألومنيوم الليثيوم (LiAlH4) هو عامل اختزال قوي. قم بالوصول إلى ورقة بيانات السلامة ، وارجع إلى إرشادات إضافية للتعامل مع المواد الصلبة النارية المعتدلة مثل LiAlH418،19. الهدف الأساسي لمعظم احتياطات السلامة هو تقليل مخاطر تعرض LiAlH4 للغلاف الجوي ومنع ردود الفعل الجامحة. يتضمن ذلك بشكل عام إبقاء هذه المركبات معلقة في الزيت أو المذيبات غير التفاعلية أثناء المناولة ، وتنظيف أوعية التفاعل ، وحاويات التخزين بالغاز الخامل (مثل النيتروجين أو الأرجون) ، وتبريد وعاء التفاعل ، وتخزين LiAlH4 في حاويات محكمة الغلق محفوظة في بيئة جافة. في مختبرنا ، يتم شراء هيدريد الألومنيوم الليثيوم في زجاجات محكمة الغلق 1 مولار بدلا من شكل المسحوق ، مع إزالة الكميات المطلوبة بحقنة واستبدال غلاف الزجاجة بالنيتروجين.
  4. قم بإذابة 28 جم (0.12 مول) من إيثانول β-ionylidene في 300 مل من الهكسانات. أضف ما يقرب من 50 جم يوميا من 90٪ MnO2 على مدار 3 أيام (51 جم و 52 جم و 54 جم) وحرك خليط التفاعل لمزيد من الوقت (غالبا يومين عند 20 درجة مئوية). أخيرا, إضافة 35 غرام من MnO2 واتركها بين عشية وضحاها لمدة 15 ساعة تقريبا; اكتمل التفاعل بنسبة 90٪ تقريبا. قم بتصفية وغسل أسيتالديهايد β-ionylidene من MnO2 باستخدام ثنائي كلورو ميثان.
  5. قم بإذابة β-ionylidene acetaldehyde الخام (22 جم ، 0.10 مول) في 150 مل من الأسيتون مع التحريك المستمر ، وأضف 10 مل من 1 N هيدروكسيد الصوديوم بالتنقيط. اترك التفاعل لمدة 6 ساعات.
  6. استخرج كيتون C18 tetraene بالهكسان واغسله بشكل متكرر بالماء باستخدام سلسلة من القمع المنفصل لتحقيق أقصى قدر من الاسترداد. جفف المحلول الناتج باستخدام مبخر دوار لإنتاج كيتون تيتراين C18 الخام من رابطة الدول المستقلة . نظرا لأن الأيزومر المتحول هو المرغوب فيه للغاية للدراسات البشرية ، قم بتنقية الخليط على 4٪ هلام السيليكا غير النشط بالماء (300 جم) باستخدام تدرج بطيء من 0-10٪ أسيتات الإيثيل في الهكسان.
  7. يقلب NaH (1.2 جم ، 0.05 مول) مع 50 مل من الأثير. أضف 13درجة مئوية2-ثلاثي إيثيل فوسفونو أسيتات (11 جم ، 0.049 مول) مذابة في 50 مل من الأثير بالتنقيط وقلبها لمدة ساعتين. قم بإذابة C18 tetraene ketone (12 جم ، 0.044 مول) في 50 مل من الأثير وتفاعل بين عشية وضحاها لمدة 15 ساعة تقريبا عند 20 درجة مئوية.
  8. قم بإخماد التفاعل بالماء واستخرج إستر إيثيل حمض الريتينويك 14،15-13 C2 مع الهكسان واغسله بالماء في قمع فاصل. تجفيف الطبقة العضوية باستخدام MgSO4 اللامائي والتركيز ؛ تنقية الألومينا المحايدة المعطلة بالماء بنسبة 8٪ (400 جم) مع إيثر ثنائي إيثيل بطيء من 0 إلى 3٪ في تدرج الهكسان لإنتاج أيزومرات رابطة الدول المستقلة / العابرة.
    ملاحظة: في كثير من الأحيان ، يحتوي التنقية الأولى على ملوثات وفقا للحكم من قبل TLC. يتم تصور الملوثات من خلال تفاعل لوحة TLC ببخار اليود. عند وجود الملوثات ، من الضروري إعادة تنقية 400 غرام من الألومينا المحايدة المعطلة بنسبة 8٪ من الماء مع 100٪ من الهكسان للحصول على إستر إيثيل حمض الريتينويك النقي 14،15-13 درجة مئوية.
  9. قلل 14،15-13درجة مئوية2-حمض الريتينويك إيثيل إستر (3.7 جم) مع 15 مل من 1 هيدريد ألومنيوم ليثيوم مولار في حمام أسيتون بالثلج الجاف أثناء التقليب لإنتاج 14،15-13 درجة مئوية 2-ريتينول (الشكل 1).
  10. قم بإذابة 14،15-13درجة مئوية 2-ريتينول (3.5 جم) في 20 مل من ثلاثي إيثيل أمين. أثناء تقليب المحلول ، اخلطي 3.5 مل من أنهيدريد الخليك مع 7 مل من ثلاثي إيثيل أمين وأضيفيه بالتنقيط إلى القارورة. اترك القارورة طوال الليل في الثلاجة لتكوين أسيتات الريتينيل 14،15-13 درجة مئوية2 (حوالي 15 ساعة).
  11. استخرج 3.9 جم من أسيتات الريتينيل الخام 14،15-13درجة مئوية 2-ريتينيل إلى هكسان ، وجففها وتركيزها وتنقيتها على 500 جم من الألومينا المحايدة المعطلة بالماء بنسبة 8٪ مع إيثر ثنائي إيثيل بطيء 0-3٪ في تدرج الهكسان. مراقبة الكسور باستخدام مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية (UV-Vis) عند 325 نانومتر. قم بإزالة جميع المذيبات المتبقية باستخدام مبخر روتو. قم بتقييم المنتج النهائي باستخدام HPLC واكتشاف الثنائي الضوئي لتحديد نسبة رابطة الدول المستقلة / العابرة. يتوفر مثال على نظام التدرج المتقدم لفصل ملف تعريف رابطة الدول المستقلة / العابر باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الضغط في الشكل التكميلي S1.
    ملاحظة: عادة ما تكون نسبة رابطة الدول المستقلة / العابرة >95٪ في هذه المرحلة.
  12. للتخزين ، قم بإذابة أسيتات 14،15-13 درجة مئوية 2-ريتينيل في زيت فول الصويا الغذائي بدون إضافات أخرى وتخزينها في زجاج كهرماني مغسول بالنيتروجين عند -80 درجة مئوية وقم بتسميته على أنه مخزون مركز.

2. تحضير جرعة المحاليل الزيتية من أسيتات الريتينيل المستقرة المسماة بالنظائر

ملاحظة: تم إعطاء أسيتات الريتينيل المصنفة نظائريا في كبسولات20 أو في محاليل زيتية يتم تسليمها بماصة 21 ذات إزاحة موجبة سعة 250ميكرولتر أو حقنةطبية 22 (الشكل 3). لقد اختبرنا ثبات الكبسولات (الشكل 4) ، الموضح أدناه.

  1. مباشرة بعد التوليف ، قم بإذابة أسيتات الريتينيل المسمى إلى ~ 15 مل من الزيت النباتي غير المدعم (على سبيل المثال ، زيت فول الصويا الغذائي) قبل أن يبدأ في التبلور وتخزينه في قارورة كهرمانية سعة 24 مل عند -30 إلى -80 درجة مئوية حتى تصبح جاهزة لتحضير الجرعات النهائية.
    1. إذا تم شراء أسيتات الريتينيل المسمى ، فقم بقطع الجزء العلوي من الأمبولة محكمة الغلق بالفراغ بعناية عن طريق التسجيل باستخدام ملف أو كسر الختم الموجود على زجاجة لولبية. اعتمادا على الكتلة المطلوبة ، ضع كمية موزونة في زجاجة كهرماني بنية سعة 24 مل وأضف كمية صغيرة من الزيت النباتي (من المحتمل أن تكون 10 مل كافية). قم بتقطيع الخليط حتى يصبح حلا واضحا.
  2. قم بتقدير كمية الزيت النهائي المطلوبة بضرب عدد الأشخاص في 200 ميكرولتر. على سبيل المثال ، إذا كان سيتم تسجيل 60 شخصا ، فقم بتكوين ما يقرب من 70 جرعة للحصول على ما يكفي للهدر (حوالي 10-20٪). وبالتالي ، فإن 70 × 200 ميكرولتر يساوي 14 مل.
    ملاحظة: لا تعتمد على كتلة الزيت الاصطناعي أو البلورات. يجب عليك استخدام مقياس الطيف الضوئي لتحديد الجرعات. تحتوي جميع أنواع فيتامين أ الاصطناعية على مذيبات متبقية. يمكن تبديدها عن طريق الصوتنة أو تحت تيار لطيف من النيتروجين ولكنها السبب الرئيسي لعدم إمكانية استخدام الكتلة وحدها لتحديد جرعات النظائر.
    إذا تم الاحتفاظ بمحاليل أسيتات الريتينيل الموسومة لفترة طويلة جدا في الفريزر دون استخدامها ، فيجب إعادة تحليلها لتحديد ما إذا كان قد حدث تدهور كبير.
  3. لتحديد كمية أسيتات الريتينيل:
    1. قم بتشغيل مقياس الطيف الضوئي UV-Vis (يفضل مسح الطيف الضوئي مزدوج الشعاع) والكمبيوتر المرفق، إن أمكن. ابدأ تشغيل مقياس الطيف الضوئي UV-Vis باتباع تعليمات الشركة المصنعة. اترك مقياس الطيف الضوئي يسخن لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل القراءة.
    2. قم بإعداد قارورتين وأغطية حجمية سعة 25 مل واملأ كل منهما ب 25 مل من الهكسان حتى الخط تقريبا. قم بتسمية قارورة واحدة "زيت" أو "فارغة" والأخرى "فيتامين أ" أو "جرعة" ؛ ثم اترك قارورة فيتامين أ جانبا حتى بعد تشغيل الفراغات.
    3. صب بعض زيت فول الصويا النقي في كوب بلاستيكي يمكن التخلص منه وأضف 20-40 ميكرولتر إلى قارورة الزيت لتفريغ النظام.
      ملاحظة: غالبا ما نستخدم 20 ميكرولتر ، ولكن طالما أن حجم الجرعة الفارغة والنظير متماثلان ، يمكن للمرء استخدام المزيد.
    4. اقلب 4-5x لخلط الزيت والهكسان ، ثم اشطف كل من كوفيت الكوارتز الطيفي الضوئي بهذا المحلول ، واملأ كلاهما ~ 75٪ ممتلئ.
    5. ضع كلتا الكوفيت في مقياس الطيف الضوئي ، مع الحرص على عدم لمس الجزء الأمامي والخلفي الشفاف (مقبض من الجوانب المصقولة فقط). للحصول على أفضل دقة ، واجه الجزء الأمامي المرقم لكل كوفيت متطابق باتجاه المستخدم.
    6. أغلق باب حجب الضوء فوق العينات.
    7. انقر فوق وظيفة فارغ أو خط الأساس واسمح للنظام بقياس امتصاص خط الأساس للزيت والهكسانات. هذا يصحح امتصاص محلول الهكسان الفارغ الزيتي. المسح الضوئي من 260 إلى 400 نانومتر ؛ تأكد من أن القراءة هي "صفر" عند 400 نانومتر بعد انتهاء هذه العملية. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فاضغط على زر الصفر وأعد تشغيل الفحص. بمجرد الانتهاء ، يكون النظام جاهزا لقياس امتصاص جرعة أسيتات الريتينيل.
    8. تخلص من محتويات عينة كوفيت واملأها بمحلول الهكسان الجرعة. ضع العينة في المكان المناسب وامسح الأطياف. حدد الذروة واقرأ الامتصاص. يحتوي أسيتات الريتينيل النقي على لامدا واحد فقط كحد أقصى عند 325 نانومتر.
      ملاحظة: إذا كان لديك أكثر من ذروة واحدة أو لديك واحدة عند 280 نانومتر ، فإن أسيتات الريتينيل قد تحلل ويجب عدم استخدامه للجرعات.
  4. حسابات الخطوة 2.3
    ملاحظة: E 1٪ ، 1 سم للريتينول هو 1،810 عند 325 نانومتر في الهكسانات. ستقوم بقياس أسيتات الريتينيل في مكافئ الريتينول.
    1. اقسم الامتصاص على 0.181 للحصول على ميكروغرام / مل من المحلول.
    2. اضرب في 25 مل للحصول على ميكروغرام في 20 ميكرولتر من محلول الزيت.
      ملاحظة: مثال: امتصاص 20 ميكرولتر من الزيت في 25 مل من الهكسان هو 0.295.
      0.295 / 0.181 = 1.630 ميكروغرام / مل × 25 مل = 40.75 ميكروغرام في 20 ميكرولتر من الزيت
      إذا كنت بحاجة إلى 286 ميكروغرام للجرعة ، فهذا يعني 140.4 ميكرولتر. هذا هو 1 ميكرومول ، ولكن سيتم صنع 288 ميكروغرام من 13درجة مئوية 2-ريتينول في الأمعاء بسبب الملصق. قد ترغب في إجراء تخفيف للاقتراب من كمية الجرعة 200 ميكرولتر وإعادة القياس الكمي أعلاه.
  5. تحضير كبسولات لاختبار الاستقرار
    1. افصل الكبسولات إلى قاع أبيض أكبر وأغطية زرقاء أصغر.
    2. ضع قيعان الكبسولة البيضاء في صناديق أطراف الماصة (96 كبسولة لكل صندوق) وقريبة لمنع دخول الغبار إلى الكبسولات ووضع أغطية زرقاء في كيس بلاستيكي بسحاب طوال الليل. تخلص من الكبسولات المتشققة.
    3. دع محلول زيت أسيتات الريتينيل يصل إلى درجة حرارة الغرفة. صب كمية صغيرة (~ 5 مل) في كوب بلاستيكي صغير غير مستخدم.
    4. قم بإعداد ماصة مكرر عن طريق تحميل المحقنة سعة 5 مل (حيث 1 = 100 ميكرولتر) وضبطها على "2" لتوزيع 200 ميكرولتر لكل مكبس زناد.
    5. قم بتحميل زيت أسيتات الريتينيل في ماصة المكرر عن طريق سحب ذراع التحميل. قم بتوزيع ما لا يقل عن 4 × 200 ميكرولتر مرة أخرى في الكوب لإزالة فقاعات الهواء من الحافة.
    6. قم بتوزيع 1 × 200 ميكرولتر لكل قاع كبسولة بيضاء عن طريق لمس طرف الماصة برفق على الجدار الداخلي للكبسولة والضغط على الزناد.
    7. بمجرد أن تقترب ماصة المكرر من الفراغ، اسحب المزيد من الزيت.
    8. بعد الانتهاء من مجموعة كاملة من 96 كبسولة ، قم بتوزيع الزيت مرة أخرى في الكوب ثم ابدأ في تحريك الأغطية الزرقاء برفق على كل قاع أبيض ، مع الحرص على عدم كسر الأغطية.
    9. بعد وضع جميع الأغطية على الكبسولات ، ارفع كل كبسولة للخارج ، وتأكد برفق من أن الغطاء قيد التشغيل بإحكام ، ثم استبدله في صندوق الطرف.
    10. قم بتخزين الكبسولات في درجات الحرارة والظروف المختارة. يمكن تحقيق الظلام عن طريق تخزين الكبسولات في رفوف تحت ورق الألمنيوم. فيما يلي أمثلة:
      a.  في الفريزر: -20 درجة مئوية في الظلام
      b.  في الثلاجة: 4 درجات مئوية في الظلام
      ج. على المقعد: 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) في الظلام
      د. على المقعد ولكن تم تركه: 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) معرضة لإضاءة الفلورسنت القياسية
      e.  في الفرن ، تكرار درجات الحرارة المحيطة المرتفعة في مواقع أخرى: 37 درجة مئوية في الظلام

3. إعطاء الجرعة

ملاحظة: تمت مقارنة ماصة الإزاحة الموجبة مباشرة مع محاقن السل لتحديد الدقة والدقة بين الفنيين (الشكل 5).

تعطى الجرعات باستخدام ماصات الإزاحة الموجبة 250 ميكرولتر من Rainin أو محاقن توبركولين سعة 1 مل.

  1. قم بإذابة الجرعات المجمدة أو وضعها في مبرد مع أكياس ثلج إذا ذهبت إلى موقع الحقل. أثناء النقل ، عادة ما تذوب الجرعات.
  2. قم بإزالة القارورة الزجاجية الكهرمانية من المبرد وافتحها. احتفظ بالقارورة في "كوب" أو دورق لمنعها من الانقلاب.
  3. أدخل طرف الماصة أو حقنة السل في الزيت واسحب كمية صغيرة. اضغط على المكبس بسرعة لإزاحة أي فقاعات قد تكون قد تكونت. اسحب ببطء مقدار الحجم المطلوب في الماصة أو المحقنة. تأكد من عدم وجود فقاعات.
  4. امسح الجزء الخارجي من الحافة بمنديل ورقي. لا تلمس طرف الماصة أو المحقنة لأن ذلك سيسحب السائل.
  5. ضع الطرف في فم المشارك ، وأطلق الزيت في فمه ، واطلب من الشخص إغلاق فمه والبلع.
    ملاحظة: من المفيد أن يتمكن المشاركون من إمالة رؤوسهم للخلف قليلا للحصول على الجرعات.
  6. بعد الجرعة ، قم بإعطاء "مطارد" أو وجبة خفيفة دهنية توفر ما لا يقل عن 10 غرامات من الدهون. بالنسبة للأطفال الصغار ، قم بإعطاء 1 مل من الزيت غير المدعم الذي يتم توصيله على ملعقة بلاستيكية كمطارد. بالنسبة للأطفال الأكبر سنا والبالغين ، فإن نصف شطيرة زبدة الفول السوداني أو البطاطا البيضاء المقلية أو الرغيف الفرنسي مع دهن الشوكولاتة هي وجبات خفيفة جيدة للمتابعة.
    ملاحظة: يجب إجراء بحث إعلامي لتحديد الوجبة الخفيفة المقبولة محليا.

النتائج

بدءا من β-ionone المتاح تجاريا ، تم تصنيع 28 جم من أسيتات الإيثيل β-ionylidene. بعد التخفيض ، تفاعل 22 جم β-ionylidene acetaldehyde مع الأسيتون في ظل الظروف الأساسية لإنتاج كيتون C18-tetraene. تم الحصول على 12 جم من كيتون C18-tetraene المنقى ، والذي كان ~ 90٪ متحول. تم تفاعل هذا لاحقا مع كاربانيون 13C 2-triethylphosphonoacetate باستخدام إجراء Wittig-Horner المعدل لإضافة اثنين من 13درجة مئوية في المواضع 14 ، 15 من جزيء الريتينول. تم تقليل إستر الإيثيل الناتج (3.7 جم محصول) إلى الكحول وأستريه إلى 13درجة مئوية 2-أسيتات الريتينيل مع أنهيدريد الخليك المذاب في ثلاثي إيثيل أمين. تم تنقية الفيتامين الاصطناعي على الألومينا المعطلة بالماء بنسبة 8٪ باستخدام مذيبات عضوية عالية التطاير - الهكسان وثنائي إيثيل الأثير. تم تمييز المستحضر الناتج باستخدام التحليل الطيفي للأشعة فوق البنفسجية والبصرية و TLC و HPLC. للتخزين طويل الأجل ، يتم تخزين أسيتات الريتينيل المسمى مذاب في زيت فول الصويا عند -80 درجة مئوية.

تم تصوير المخطط الاصطناعي الناجح ل 14،15-13C 2-retinyl acetate الموصوف أعلاه في الشكل 2. يتكون المسار الكلي الذي يبدأ ب β-ionone من سبع خطوات. كان العائد الأول 0.9 جم من أسيتات 14،15-13 C 2-retinyl celletate. تم دمج كسور أيزومر رابطة الدول المستقلة / العابرة (1.2 جم) وإعادة تنقيتها على 300 غرام من الألومينا المحايدة المعطلة بالماء بنسبة 8٪ لينتج عنها 0.3 غرام إضافية من أسيتات الريتينيل 14،15-13C 2-retinyl.

لتحديد استقرار أسيتات الريتينيل في الكبسولات ، تم إذابة أسيتات الريتينيل (1 جم) في الهكسان وتنقيتها بواسطة كروماتوغرافيا العمود المفتوح باستخدام 300 جم من الألومينا المعطلة بالماء بنسبة 8٪ مع الهكسان كمذيب. تمت مراقبة أسيتات الريتينيل بواسطة التحليل الطيفي TLC و UV-Vis ، وتم استخدام الكسور النقية فقط. هذه العملية مطابقة لتلك المستخدمة في تخليق وتنقية 13C 2-retinyl acetate في مختبر Tanumihardjo لاختبار RID كما هو موضح أعلاه. تم إذابة أسيتات الريتينيل المنقى في زيت فول الصويا ، وإزالة المذيب العضوي بواسطة المبخر الدوار ، وإضافة المزيد من الزيت إلى التركيز النهائي البالغ 7.5 ميكرومتر (لإنتاج 1.5 ميكرومول لكل 200 ميكرولتر ، وهي نقطة المنتصف بين الجرعة للبالغين والأطفال لاختبار RID عند استخدام GCCIRMS للتحليل). تم تحديد التركيز عن طريق التحليل الطيفي للأشعة فوق البنفسجية والبصرية كما هو موضح أعلاه.

تم توزيع كمية من 200 ميكرولتر من الزيت إلى كبسولات السليلوز بحجم 3 (الحد الأقصى للحجم 300 ميكرولتر) لدراسة الاستقرار. تم تخزين كبسولات كل جرعة في خمسة شروط. تم تحقيق الظلام عن طريق تخزين الكبسولات في رفوف تحت ورق الألمنيوم. تم تحضير كبسولة (150) لكل حالة بإجمالي 750 كبسولات: أنا) في الفريزر: -20 درجة مئوية في الظلام. ب) في الثلاجة: 4 درجات مئوية في الظلام ؛ ج) على المقعد: 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) في الظلام ؛ رابعا) على المقعد ولكن تم تركه: 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) معرضة لإضاءة الفلورسنت القياسية ؛ v) في الفرن ، وتكرار درجات الحرارة المحيطة المرتفعة في مواقع أخرى: 37 درجة مئوية في الظلام.

في دراسة ثبات الكبسولة ، تم قياس ثلاث كبسولات من كل حالة في كل نقطة زمنية (-20 درجة مئوية ، 4 درجات مئوية ، درجة حرارة الغرفة مظلمة ، ضوء درجة حرارة الغرفة ، 37 درجة مئوية). سمح لجميع الكبسولات بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة (تم تحليل كبسولات درجة حرارة الغرفة أولا) ؛ يؤدي اختلاف درجة الحرارة إلى تباين الامتصاص. تم قياس الكبسولات حتى 480 يوما. ظلت الكبسولات مستقرة خلال تسعة أشهر عند -20 درجة مئوية و 4 درجات مئوية (الشكل 4).

أجريت مقارنة طريقة لمقارنة محاقن السل ذات الاستخدام الواحد بماصات الإزاحة الموجبة Rainin كمعيار مرجعي. تمت معايرة ماصة الإزاحة الموجبة Rainin بالماء، مع مراعاة درجة الحرارة والضغط المحليين، ثم تم اختبارها بثلاث أطراف في ثلاث نسخ لتحديد حجم الزيت المستهدف الذي تم توزيعه عند إعداد 200 ميكرولتر على قارب وزن قطران. تم إجراء بروتوكول الاستغناء من قبل 10 فنيين تتراوح من حيث مستوى الخبرة. لكل فني، تم اختبار ثماني محاقن في ثلاث نسخ ومقارنتها بمرجع الماصة. تم مسح جوانب الماصة بالمناديل الورقية ، وتم توزيع الزيت في قارب الوزن بزاوية ، مما يضمن إطلاق أقصى قدر من الزيت. تم تعمية الفنيين عن نتائج الكتلة التي تم توزيعها في جميع أنحاء البروتوكول. تم تسجيل كتلة الزيت من قبل فني منفصل. تكررت العملية ب 200 ميكرولتر من زيت فول الصويا باستخدام ثماني محاقن توبركولين (على سبيل المثال ، Norm-Ject).

تم استخدام برنامج R الإحصائي لملاءمة نموذج مكون التباين (FitVCA) 22 (الشكل 5). تضمنت عوامل التباين المقاسة فني ، وحقنة داخل فني ، وخطأ تكرار. كان متوسط (95٪ CI) قيمة تسليم المحقنة الطبيعية عند مقارنتها بحجم توصيل الماصة 0.996 (0.912، 1.08). ويمثل التباين من خطأ التكرار ٪64,8 من التباين الكلي، مما يشير إلى أن أكبر مصدر للتباين كان من تكرار القياسات داخل المحقنة نفسها. كان التباين في النسبة المئوية للفني والحقنة داخل الفني أقل بكثير ، حيث ساهم بنسبة 22.9٪ و 12.3٪ على التوالي.

تم إجراء تحليل المجموعات الفرعية عن طريق تقسيم الفنيين إلى مجموعتين (ن = 5 / مجموعة) بناء على الخبرة. كان متوسط توصيل المحاقن الطبيعية متشابها بين كلا المجموعتين ، لكن CI بنسبة 95٪ كان أضيق بالنسبة للفنيين ذوي الخبرة الأكبر. 1.001 (0.939 ، 1.063) و 0.998 (0.900 ، 1.100) ، على التوالي. ضمن الفنيين الأكثر خبرة ، جاء معظم التباين من المحقنة داخل الفني (57.0٪) والخطأ المتماثل (42.9٪) ، بينما بالنسبة للفنيين الأقل خبرة ، جاء معظم التباين من الفنيين (32.7٪) والخطأ المتماثل (67.2٪).

figure-results-1
الشكل 1: هيكل الريتينول مع ترقيم الكربون. عادة ما تتم إضافة 13درجة مئوية في الوضعين 14 و 15 لاستخدامها مع قياس الطيف الكتلي لاحتراق الكروماتوغرافيا والغاز. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: المخطط الاصطناعي ل 14،15-13C 2-retinyl acetate المستخدم في اختبارات تخفيف نظائر الريتينول عند استخدام قياس الطيف الكتلي لنسبة الكروماتوغرافيا الغازية والاحتراق والنظائر لتحليل المصل أو حليب الثدي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-3
الشكل 3: حقنة توبركولين سعة 1 مل بدون حجم ميت عند طرفها وماصة الإزاحة الموجبة سعة 250 ميكرولتر المستخدمة في الجرعات في دراسات التتبع. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-4
الشكل 4: منحنيات تحلل أسيتات الريتينيل المخزنة في كبسولات في خمسة ظروف مختلفة. الظروف هي -20 درجة مئوية ، 4 درجات مئوية ، 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) في الظلام ، 20 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) تحت ضوء الفلورسنت القياسي ، و 37 درجة مئوية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-5
الشكل 5: تحليل مكون التباين لكمية توصيل الجرعة مقارنة محاقن السل سعة 1 مل بماصة إزاحة موجبة سعة 250 ميكرولتر بين 10 فنيين أعمى النتائج أثناء التقييم. يتم توزيع القيم على كتلة الزيت (200 ميكرولتر) من المحاقن التي تم تطبيعها إلى ماصة الإزاحة الموجبة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل التكميلي S1: مثال على فحص النقاء النهائي لأسيتات الريتينيل 14،15-13C بواسطة كروماتوغرافيا السائل فائقة الضغط. الأطياف المقابلة هي سمة من سمات أشكال رابطة الدول المستقلة / العابرة للفيتامين. كانت شروط UPLC هي المذيب A 70:25:5 (الأسيتونيتريل: الماء: الأيزوبروبانول) مع 10 ملي مولار أسيتات الأمونيوم والمذيب B كان 75٪ أسيتونيتريل ، 25٪ إيزوبروبانول. كان العمود المستخدم عبارة عن عمود Acquity UPLC ، BEH C18 1.7 ميكرومتر ، 2.1 × 100 مم. تم ضبط العمود على 29 درجة مئوية ، وكان معدل التدفق 0.4 مل / دقيقة. بدأ التدرج بمذيب 100٪ A واحتفظ به لمدة 5.0 دقيقة ، متبوعا بالانتقال إلى 98٪ مذيب B بمقدار 7 دقائق واحتفظ به لمدة 8 دقائق قبل الانتقال مرة أخرى إلى 100٪ مذيب A على مدى 1 دقيقة والاحتفاظ به لمدة 4 دقائق. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الملف.

المناقشة

في حين أن هناك مصادر تجارية لأسيتات الريتينيل المنزعة و 13علامة C ، إلا أن هناك العديد من المسارات الاصطناعية للريتينول في أدبيات الكيميائيين العضويين المهرة. اخترنا مسارا اصطناعيا لأسيتات الريتينيل المنزوع للمتابعة وأجرينا التعديلات المناسبة لإضافة 13درجة مئوية إلى العمود الفقري لجزء الريتينول ، الموضحة أعلاه. تم إنجاز تخليق 14،15-13C 2-retinyl acetate باستخدام إجراء من سبع خطوات يبدأ ب β-ionone المتاح تجاريا. β-Ionone هو مكون نباتي طبيعي ويساهم في العطور ، مثل الورود. الخطوة الأكثر أهمية في المسار الاصطناعي هي تكوين كيتون C18 tetraene. يجب أن يكون هذا المركب الوسيط نقيا بنسبة 90٪ على الأقل للخطوات اللاحقة لإنتاج عوائد جيدة.

تم إجراء وضع العلامات باستخدام إجراء Wittig-Homer المعدل مع 13C 2-triethylphosphonoacetate المتاح تجاريا. تستخدم المركبات المصنفة في اختبار RID لتحديد TBS وتقدير TLR. تستخدم الطريقة GCCIRMS لتحليل الريتينول المنقى من المصل أو حليب الثدي للأفراد الذين تم تناولهم جرعات بمستويات فسيولوجية من المركبات المصنفة. الجرعات الأكثر شيوعا هي 1 ميكرومول للأطفال و 2 ميكرومول للبالغين. في حين أن تحليل GCCIRMS حساس لتخصيب النظائر ، فإن تحليل المصل يتطلب ما لا يقل عن 400 ميكرولتر من المصل للحصول على كتلة ريتينول كافية لإدخالها في GC.

تم استخدام اختبار C-RID 13في الدراسات السريرية23،24 وفي مجموعات من الأطفال الأفارقة25 مع خطط مستقبلية لجعله متاحا للعمل القائم على السكان. أجرينا التجارب على الكبسولات والمحاقن للتحقق مما إذا كانت هذه التعديلات مناسبة للعمل السكاني. يجب أن تكون الكبسولات في وضع مستقيم أو تسربت ؛ سرعان ما تخلصنا من فكرة أنه يمكن تخزينها في زجاجات حبوب منع الحمل الكهرمانية العادية للاستخدام الميداني. كانت الكبسولات مستقرة فقط لمدة ~ 9 أشهر في درجات حرارة الثلاجة والفريزر. قد يؤدي إنتاج الكبسولات المختومة إلى تحسين الاستقرار عن طريق تقليل التعرض الطفيف للغلاف الجوي أثناء التخزين. وينبغي اختبار استخدام الكبسولات والتحقق من صحته من قبل مجموعات المستعملين قبل التنفيذ.

تكون محاليل الزيت النهائية مستقرة في درجة حرارة الغرفة لمدة ~ 2 أشهر ، ولكن بمجرد أن تبدأ في التحلل ، يستمر التدهور بسرعة. لا يوجد نشاط جزئي مقبول لاختبارات RID حيث يتم استخدام الكمية المعدة في حساب TBS. من الأفضل الاحتفاظ بالمحاليل على أكياس الثلج في الحقل أثناء الاستخدام وإعادة تجميدها في أسرع وقت ممكن بعد اكتمال الجرعات. من الأفضل إحضار بضع جرعات فقط أكثر من اللازم لهذا اليوم والحفاظ على الباقي مجمدا. لا يؤثر التجميد والذوبان على هذه المحاليل لأن الزيت نفسه يحتوي على مضادات الأكسدة. تعتبر محاليل الزيت أقوى من عينات الدم ولكنها لا تزال بحاجة إلى حفظها في الظلام في جميع الأوقات وتجميدها عندما لا تكون قيد الاستخدام.

تعطى الجرعات باستخدام ماصات الإزاحة الموجبة 250 ميكرولتر من Rainin أو محاقن توبركولين سعة 1 مل. ماصات إزاحة الهواء ليست مناسبة للجرعات الذائبة في الزيت. قارن مختبرنا تجريبيا بين هاتين الطريقتين (انظر النتائج التمثيلية). يتشابه الإعطاء مع الماصة أو المحقنة مع بعض الانحرافات. يوصى باستخدام ماصات الإزاحة الإيجابية من Rainin للأبحاث أو الدراسات السريرية، ولكن يمكن استخدام المحاقن في العمل السكاني. يوصى باستخدام المحاقن ذات الحجم الميت الصغير في الطرف لزيادة دقة الجرعة (على سبيل المثال ، Norm-Ject).

تتضمن حسابات اختبار RID كمية الجرعة المعطاة ، ويتناسب الخطأ في كمية الجرعة المعطاة مع الخطأ في التقدير الناتج ل TBS. وبالنسبة لاستخدام محاقن السل مقابل الماصات ذات الإزاحة الإيجابية، كان متوسط توصيل المحاقن الطبيعية قريبا من 1، مما يشير إلى أن المحاقن يمكن أن توفر جرعة دقيقة للدراسات السكانية. كانت حدود الثقة 95٪ حوالي ± 8٪ من تسليم الجرعة المستهدفة. كان لدى الفنيين ذوي الخبرة السابقة الأكثر خبرة في المحاقن CI أضيق بنسبة 95٪ (± 6٪) ومساهمة تباين أقل من الفنيين مقارنة بالفنيين ذوي الخبرة الأقل (± 10٪). يشير هذا إلى أنه يجب إجراء بروتوكول تدريب والتحقق من الصحة باستخدام زيت السيارة قبل تنفيذه في الميدان. تستحق هذه النتائج مزيدا من التحقق في كل مختبر يريد استخدام محاقن السل ذات الاستخدام الواحد كطريقة إيصال فعالة من حيث التكلفة وموفرة للوقت لإدارة الجرعات في اختبارات الاستجابة للجرعة واختبارات RID في الدراسات السكانية.

لقد اخترنا ماصة الإزاحة الإيجابية للأبحاث والدراسات السريرية باستخدام اختبار RID لزيادة الدقة على المستوى الفردي إلى أقصى حد، حيث تبلغ دقتها ودقتها المبلغ عنها ≤1٪. بالمقارنة ، فإن اختبار استجابة الجرعة النسبية المعدل نوعي ، ولا تستند أي حسابات إلى مقدار الجرعة المعطاة1. لذلك ، أوصينا باستخدام المحاقن للاختبار في المسوحات السكانية وأن يتم إذابة الجرعة في حوالي 0.7 مل من السيارة.

اختبار RID هو طريقة حساسة لتحديد TBS وتقدير TLR ، وهو المعيار المرجعي لتقييم حالة فيتامين A. وقد تم استخدامه في العديد من التطبيقات البحثية باستخدام إما الديوتيريوم أو 13درجة مئوية. ستستخدم التطبيقات الحالية والمستقبلية اختبار RID في البيئات السريرية والمجموعات الفرعية للسكان في المسوح. سيكون تبسيط الجرعات مهما لهذه التطبيقات.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح مع محتوى هذه المخطوطة.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا العمل من قبل DC019357 المعهد الوطني للصحة - R01 ومشروع البحوث المنسق للوكالة الدولية للطاقة الذرية E43035. نشكر نيكولاس كيولر من مجموعة الاستشارات الإحصائية في جامعة ويسكونسن ماديسون للمساعدة في تحليل مقارنة طريقة الحقنة ذات الاستخدام الواحد.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنهيدريد الخليكسيجما ألدريتش242845
أسيتونسيجما ألدريتش179124
أكسيد الألومنيومسيجما ألدريتش199974
الاكوابأيأي شركة توريد زجاج   ؛
بيتا أيونونسيجما ألدريتشW259500
الاثيرسيجما ألدريتش673811
ماصات باستر زجاجيةأيأي شركة توريد زجاج   ؛
الهكسانسيغما178918
المسمى ثلاثي إيثيل فوسفونوأسيتاتسيجما ألدريتش293202
محلول هيدريد الألومنيوم الليثيومأكروس عضوية199511000
أكسيد المنغنيزسيدما ألدريتش310700
ماصات الإزاحة الموجبةمطرين17008579
أسيتات الريتينيلسيجما ألدريتشR4632
مسارات التحويل المنفصلةأيأي شركة توريد زجاج   ؛
هلام السيليكاسيجما ألدريتش1.07734
هيدريد الصوديومالدريتش223441
هيدروكسيد الصوديومفيشر العلميةس318-100
مقياس الطيف الضوئيأي مسح ضوئييفضل شعاع مزدوج
ثلاثي إيثيل أمينسيجما ألدريتش471283
ثلاثي إيثيل فوسفونو أسيتاتالدريتشتي 61301
حقنة السلالمعيار جيكت19G334
الزيوت النباتيةفول الصوياالبقاله
قوارير حجمية (25 مل)أيأي شركة توريد زجاج   ؛

المراجع

  1. Tanumihardjo, S. A., et al. Biomarkers of nutrition for development (BOND) - Vitamin A review. J Nutr. 146 (9), 1816S-1848S (2016).
  2. Tanumihardjo, S. A., Kaliwile, C., Boy, E., Dhansay, M. A., van Stuijvenberg, M. E. Overlapping vitamin A interventions in the United States, Guatemala, Zambia, and South Africa: case studies. Annals NY Acad Sci. 1446 (1), 102-116 (2019).
  3. Sheftel, J., Loechl, C., Mokhtar, N., Tanumihardjo, S. A. Use of stable isotopes to evaluate bioefficacy of provitamin A carotenoids, vitamin A status, and bioavailability of iron and zinc. Adv Nutr. 9 (5), 625-636 (2018).
  4. Bergen, H. R., Furr, H. C., Olson, J. A. Synthesis of tri-, tetra-, and penta-deuterated forms of vitamin A. J Labelled Cpd Radiopharm. 25 (1), 11-21 (1988).
  5. Tanumihardjo, S. A. Synthesis of 10, 11, 14, 15-13C4- and 14, 15-13C2-retinyl acetate. J Labelled Cpd Radiopharm. 44 (5), 365-372 (2001).
  6. Tanumihardjo, S. A. Vitamin A status assessment in rats using 13C4-retinyl acetate and gas chromatography-combustion isotope ratio mass spectrometry (GCCIRMS). J Nutr. 130 (1), 2844-2849 (2000).
  7. Gannon, B. M., Valentine, A. R., Davis, C. R., Howe, J. A., Tanumihardjo, S. A. Duration of retinol isotope dilution studies with compartmental modeling affects model complexity, kinetic parameters, and calculated vitamin A stores in US women. J Nutr. 148 (8), 1387-1396 (2018).
  8. Preston, T. Existing and emerging technologies for measuring stable isotope labelled retinol in biological samples: isotope dilution analysis of body retinol stores. Int J Vitam Nutr Res. 84 (Suppl 1), 30-39 (2014).
  9. Gannon, B. M., et al. 13C natural abundance of serum retinol is a novel biomarker for evaluating provitamin A carotenoid-biofortified maize consumption in male Mongolian gerbils. J Nutr. 146 (7), 1290-1297 (2016).
  10. Sheftel, J., Gannon, B. M., Davis, C. R., Tanumihardjo, S. A. Provitamin A-biofortified maize consumption increases serum xanthophylls and 13C-natural abundance of retinol in Zambian children. Exp Biol Med. 242 (15), 1508-1514 (2017).
  11. Howe, J. A., Valentine, A. R., Hull, A. K., Tanumihardjo, S. A. 13C natural abundance in serum retinol acts as a biomarker for increases in dietary provitamin A. Exp Biol Med. 234 (2), 140-147 (2009).
  12. Gannon, B. M., et al. Comparison of total body vitamin A stores using individual versus population 13C-natural abundance of serum retinol in preschool children and women residing in 6 diverse African countries. J Nutr. 153 (4), 949-957 (2023).
  13. Newton, S., et al. Vitamin A status and body pool size of infants before and after consuming fortified home-based complementary foods. Arch Public Health. 74, 10(2016).
  14. Pinkaew, S., et al. Triple-fortified rice containing vitamin A reduced marginal vitamin A deficiency and increased vitamin A liver stores in school-aged Thai children. J Nutr. 144 (4), 519-524 (2014).
  15. Nimmannun, K., et al. Breast milk retinol concentrations reflect total liver vitamin A reserves and dietary exposure in Thai lactating women from urban and rural areas. J Nutr. 152 (12), 2689-2698 (2023).
  16. A campus laboratory fire involving lithium aluminum hydride. , https://ehs.stanford.edu/reference/campus-laboratory-fire-involvinglithium- aluminum-hydride (2025).
  17. Merlic, C. A., Ferber, C. J., Schroder, I. Lessons learned− lithium aluminum hydride fires. ACS Chem. Health Saf. 29 (4), 362-365 (2002).
  18. Chandra, T., Zebrowski, J. P. A safety guidance document for lithium aluminum hydride (LAH) reduction: A resource for developing specific SOPs on LAH manipulations. ACS Chemical Health & Safety. 31 (2), 162-171 (2024).
  19. Procedures for safe use of pyrophoric solids accessed. , https://ehs.ucsc.edu/programs/research-safety/documents/ucla-pyrophoric-solid.pdf (2025).
  20. Tang, G., et al. Green and yellow vegetables can maintain body stores of vitamin A in Chinese children. Am J Clin Nutr. 70 (6), 1069-1076 (1999).
  21. Gannon, B., et al. Biofortified orange maize is as efficacious as a vitamin A supplement in Zambian children even in the presence of high liver reserves of vitamin A: a community-based, randomized placebo-controlled trial. Am J Clin Nutr. 100 (6), 1541-1550 (2014).
  22. R Core Team. R: A Language and Environment for Statistical Computing. R Foundation for Statistical Computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. (2024).
  23. Valentine, A. R., Davis, C. R., Tanumihardjo, S. A. Vitamin A isotope dilution predicts liver stores in line with long-term vitamin A intake above the current Recommended Dietary Allowance for young adult women. Am J Clin Nutr. 98 (5), 1192-1199 (2013).
  24. Sheftel, J., et al. Findings in 3 clinical trials challenge the accuracy of the Institute of Medicine's estimated average requirements for vitamin A in children and women. Am J Clin Nutr. 113 (5), 1322-1331 (2021).
  25. Suri, D., et al. Association between biomarkers of inflammation and total liver vitamin A reserves estimated by 13C-retinol isotope dilution among preschool children in five African countries. J Nutr. 153 (3), 622-635 (2023).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

حالة فيتامين أريتينيل أسيتات 13Cفيتامين أ في الكبدكروماتوغرافيا الغازمطيافية كتلة نسبة النظائرتخليق ويتيج-هورنركروماتوغرافيا الطبقة الرقيقةمطيافية الأشعة فوق البنفسجية والمرئيةكروماتوغرافيا السائل عالية الأداء

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.