يقدم اختبار 2,3,5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم كلوريد (TTC) الحالي بروتوكول تلوين TTC محسن يمكن من تحليل إصابات عضلة القلب بدقة مجهرية، مما ينتج صورا عالية الجودة تتيح تقييما دقيقا وموثوقا لحجم الاحتشاء وصلاحية خلايا القلب على المستوى الخلوي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
اختبار مجهري 2,3,5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم كلوريد لتحليل دقيق وموثوق لإصابة عضلة القلب
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في هذا البروتوكول، نقدم طريقة مكررة تعتمد على 2,3,5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم كلوريد (TTC) لتحليل دقيق وموثوق لاحتشاء عضلة القلب (MI) بدقة خلوية. يتضمن هذا البروتوكول إجراء صبغ من خطوتين على قلوب محتمة بمعدل 24 ساعة من الانقسام: التروية، حيث يتم تغذية محلول 1٪ من الحمل عبر الأوعية التاجية عبر قنية الأبهر، والغمر حيث يحتضن القلب بعد ذلك في محلول TTC عند 4 درجات مئوية طوال الليل. بعد التلوين، يتم إدخال القلب في مركب OCT ويتم تقطيعه بالتجميد بشكل عرضي إلى شرائح بسماكة 50 ميكرومتر بفواصل 100 ميكرومتر. بعد عملية تثبيت استمرت 24 ساعة باستخدام مثبت زامبوني، يصبح هناك حد واضح ومميز بين عضلة القلب الحية (الأحمر العميق) والنسيج النخر (الأصفر) يمكن تمييزه تحت الفحص المجهري. ومن الجدير بالذكر أن هذا الاختبار المجهري TTC يتيح الكشف عن الالتهاب العضلي ليس فقط في المرحلة الحادة (24 ساعة بعد الالتهاب العضلي) بل أيضا خلال فترة زمنية ممتدة تتجاوز 7 أيام. نظرا لأن اختبار TTC المجهري يولد صورا متعددة الطبقات (80 شريحة لكل قلب)، طورنا خوارزمية شبه آلية قوية تعتمد على الألوان تتيح تحليلا سريعا وفعالا لمجموعات بيانات الصور الكبيرة وتكميم حجم الفتحة العالمية خلال دقائق. مع هذه التحسينات، يحسن النهج الحالي عملية التلوين أثناء الحمل ويوفر أداة ذات قيمة وقابلة للتطبيق على نطاق واسع للمختبرات التي تحقق في إصابات الإقفاري القلبي.
المقدمة
على مدى العقدين الماضيين، استمر اتباع حماية القلب كاستراتيجية رئيسية للحفاظ على خلايا عضلة القلب بعد الإصابات الإقفاري الشديدة في القلب1. في كل من البيئات التجريبية والسريرية، يعد الحد النهائي لإصابة عضلة القلب مقياسا حاسما لتقييم كفاءة التدخلات الواقية للقلب2. لذا، فإن التقييم الدقيق والموثوق لحجم الانسداد هو أمر مرغوب فيه للغاية ومهم في جوهره.
في نماذج القوارض، اعتمد البروتوكول القياسي لتقييم حجم الاحتشاء بعد الوفاة بشكل أساسي على نشاط إنزيم ديهيدروجيناز الميتوكوندريا، الذي يحول إنزيميا المركب عديم اللون 2,3,5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم كلوريد (TTC) إلى ترسيب أحمر في الخلايا الصالحة، بينما يبقى رماديا فاتحا في الأنسجة النخرية3. على الرغم من أن التلوين القائم على TTC بسيط وفعال من حيث التكلفة، إلا أنه يطرح عدة تحديات منهجية وقيود جوهرية. تشمل هذه الشرائح القلبية التي تخضع للانقباض في محلول TTC، مما يؤدي إلى تشوه النسيج بشكل كبير ويمنع الشرائح من الاستلقاء بشكل مسطح أثناء قياس الرياح؛ سمك شرائح غير متساوي أثناء معالجة العينة؛ وجودة صورة ضعيفة تعيق تحديد حدود الفتحة بدقة. في السنوات الأخيرة، تم إدخال عدة تعديلات تقنية على عملية تحضير العينة، مثل استخدام مصفوفات القلب الأكريليك4 أو تجميد القلب جزئيا لتسهيل تقطيع3. على الرغم من أن هذه التعديلات عززت بشكل كبير من عملية تقطيع الأنسجة، إلا أن النهج التقليدي لا يزال يعتمد على التصوير الإجمالي لأقسام القلب السميكة، وغالبا ما ينتج جودة صورة متغيرة وغير مثالية5، مع تباين ألوان غير كاف يمكن أن يضيف ذاتية كبيرة لقياس الفتحة6. علاوة على ذلك، تتطلب الطريقة التقليدية استخدام نسيج القلب الكامل، مما يمنع إجراء تحليلات متعددة الأغراض على نفس عينات الأنسجة، مثل التلوين المناعي المشترك للبروتينات التنظيمية لتحديد سلاسل الإشارات الرئيسية المشاركة في بقاء القلب. ونتيجة لذلك، غالبا ما يطلب من عدد كبير من للإجابة بشكل كاف على مختلف الأسئلة البحثية.
لتجاوز هذه القيود5، طورنا بروتوكولا مناسبا للتصوير المجهري لتلوين TTC. تجمع هذه الطريقة بين خطوات التلوين "التروية + الغمر" مع التقسيمات البريدية لنسيج القلب إلى شرائح رقيقة مصممة للتصوير بواسطة المجهر الضوئي. على الرغم من أن هذه الطريقة تم الإبلاغ عنهامؤخرا في 7، نعتقد أن تقديم إجراءات تجريبية مفصلة يعزز من عمليتها وسهولة الوصول إليها. علاوة على ذلك، وبما أن طريقة TTC المجهرية تولد صورا عالية الدقة تتكون من طبقات متعددة في مقطع القلب، طورنا خوارزمية شبه آلية قوية قائمة على الألوان لمعالجة الطبيعة المكثفة للوقت لتحليل مجموعات بيانات الصور الكبيرة. تمكن الطريقة الحالية من الكشف السريع عن مناطق الاشتاء وقياس حجم الاحتشاء العالمي خلال دقائق.
بشكل عام، يعد البروتوكول المعروض هنا أداة قيمة، تمكن الباحثين من تنفيذ هذه الطريقة بسهولة ودقة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل LANUV في نوردراين-وستفالن، ألمانيا، وأجريت وفقا لإرشادات ARRIVE ودليل NIH لرعاية واستخدام المختبرية. جميع المعدات والمواد الكيميائية اللازمة مدرجة في جدول المواد.
1. إعداد نظام لانغندورف الرجعي للتروية
ملاحظة: يتكون النظام من صمام توقف ثلاثي الاتجاه ذو شريطين متصل بقناة أبهرية مصنوعة من إبرة خفيفة عيار 20 ومنفذين للنقب، أحدهما لمحلول الغسيل (منفذ محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)) والآخر لتسريب TTC (منفذ TTC). عن طريق التناوب في اتجاه صمام الإيقاف ثلاثي الاتجاهات، يمكن توصيل البرفوسات إلى القلب بالتبادل.
- ثبت الجهاز أفقيا على طبق بتري بقطر 150 مم باستخدام قطعة لاصقة لمنع الحركة غير المرغوب فيها في الخطوات اللاحقة.
- اضبط طرف القنية ليكون على ارتفاع 1 مم فوق القاع، مع محاذاته مع مستوى جذر الأبهر عند وضع القلب بشكل مسطح.
- املأ النظام مسبقا ب PBS بارد جدا باستخدام حقنة بسعة 10 مل عبر منفذ PBS.
- حضر محلول تلوين جديد (1٪ TTC مذاب في PBS); يتطلب حجم أدنى 6 مل لكل قلب.
تحذير: يعتبر محاولة الحمل بشكل عام خطيرا وتتطلب التعامل بحذر لأنه قد يسبب تهيجا خفيفا للجلد، وتهيجا خطيرا للعين، ويكون ضارا إذا تم استنشاقه. التخلص من النفايات والمخلفات وفقا لمتطلبات السلطات المحلية. - استخدم حقنة بسعة 3 مل لملء منفذ TTC بمحلول التلوين.
- تأكد من عدم وجود فقاعات هواء غير مقصودة في النظام، لأنها قد تسبب جلوة هوائية قد تتداخل مع التلوين اللاحق. في معظم الحالات، تكون فقاعات الهواء مرئية داخل النظام؛ عند وجودها، قم بإزالتها عن طريق سحب وإعادة تعبئة PBS مع النقر بلطف على صمام الإيقاف ثلاثي الاتجاه في وضع القنية العمودية.
- شكل عقدة نصف مربعة فضفاضة باستخدام خياطة حرير 6-0 وضعها في الطرف البعيد من القنية لتثبيت جذر الأبهر لاحقا.
2. تحضير عينات القلب
ملاحظة: تم استخدام فئران C57BL/6J (20-25 جم) في هذه الدراسة. تم تحفيز احتشاء عضلة القلب التجريبي (MI) عن طريق ربط الشريان الأمامي الأيسر النازل (LAD) جراحيا لمدة 30-60 دقيقة، كما هو موضح أدناه. تم الإبلاغ سابقا عن منهجية استقراء MI8 ولم يتم تفصيلها في هذه المخطوطة. ما لم يذكر خلاف ذلك، تم جمع عينات القلب بعد 24 ساعة من الالتهاب العضلي.
- أخرج فأر الممرض ب MI من القفص وقم بإعداده عن طريق خلع عنق الرحم تحت تخدير عميق بالأيزفلوران (3٪، v/v).
ملاحظة: يجب توثيق جميع إجراءات القتل الرحيم بشكل صحيح والإبلاغ عنها، بما في ذلك سبب القتل الرحيم والطريقة المستخدمة، وفقا للوائح المحلية. - انقل الذي تم إعداده إلى طاولة العمليات وثبت الأطراف الأربعة بشريط لاصق.
- قم بإزالة الجلد من منتصف البطن إلى منتصف الكف الأمامي باستخدام ملقط ومقص دقيق التشريح.
- قم بعمل شق عرضي بقطر 2 سم في جدار عضلة البطن، أسفل الحجاب الحاجز مباشرة، للسماح بفتح الصدر لاحقا.
- افرد الحجاب الحاجز بمقص دقيق لكشف القلب، ثم قم بعمل شقوق ثنائية الجانب عبر الجلد والعضلات والأضلاع لفتح التجويف الصدري.
- اقطع الحجاب الحاجز من الجانبين واكشف القلب بالكامل عن طريق رفع عظمة القص.
- اسكب فورا 20 مل من PBS البارد جدا على سطح القلب لإيقاف نبض القلب.
- قم باستئصال القلب مع الأنسجة المحيطة (الرئتين والمرييء) وانقل كتلة النسيج إلى كأس بحجم 50 مل يحتوي على متلازمة PBS الباردة جدا لمدة دقيقة تقريبا للسماح لهدوء نبضات القلب.
- انقل القلب إلى طبق بتري بقطر 150 مم وقص جذر الأبهر من الأنسجة الضامة تحت المجهر الثنائي باستخدام ملقط دقيق ومقص.
- قم بإزالة الغدة الزعترية بلطف وكشف الشريان الأبهر الصاعد.
- قم بقص جذر الأبهر عن طريق تشريح النسيج الضام.
- ارفع جذع الشريان الأبهر باستخدام ملقط دقيق وركبه فوق القنية المتصلة بالفعل بجهاز تروية مملوء مسبقا بمحلول تلوين PBS وTTC. استخدم ملقطا دقيقا لتثبيت جدار جذر الشريان الأبهر أثناء الإدخال.
- ثبت الشريان الأبهر باستخدام العقدة المفكوكة مسبقا على القنية. افحص القنية والقلب بعناية أثناء تدميرها بنظام PBS. يمكن تأكيد امتلاء القلب بصريا من خلال انتفاخ البطين مع زيادة حجم PBS الداخلي إلى القلب.
- اترك الأنسجة خارج القلب (الرئتين والمريئي) في مكانها لدعم القلب في وضعية طبيعية ومناسبة.
3. التلوين المطلوب للحمل
- غط القلب بورق مناديل رطب بعد تثبيت القناة الكهربائية.
- ابدأ بغسل القلب بحقنة مسبقة بسعة 10 مل مملوءة ب PBS البارد بمعدل 2-3 مل/دقيقة لمدة 3 دقائق، حتى تصريف القلب. وهذا يضمن بقاء كمية قليلة فقط من الدم في القلب والقلب. خلال هذه الخطوة، تجنب الضغط الزائد أثناء التروية لأنه قد يؤدي إلى تمزق البطين الحاف.
- فحص القلب تحت المجهر الثنائي للتأكد من عدم وجود تسرب في جذر الشريان الأبهر وأنه ينتفخ بشكل صحيح تحت ضغط التروية.
- قم بتوجيه صمام الإيقاف ثلاثي الاتجاه نحو محلول TTC وقم بحقن 1 مل من محلول التلوين ببطء عبر منفذ TTC على مدى 30 ثانية.
- أعد نقع 1 مل من محلول TTC بعد 5 دقائق وكرر هذه الخطوة مرة أخرى بعد 5 دقائق أخرى (10 دقائق بعد أول عملية تسريب TTC). يتطلب الحقن 3 مرات خلال 15 دقيقة ما مجموعه 3 مل من محلول TTC.
- افحص سطح القلب تحت المجهر الثنائي. في هذه المرحلة، يجب أن يكون هناك تمييز واضح بين عضلة القلب الحية (الأحمر العميق) والنسيج النخر (الرمادي الفاتح) بالفعل.
- قم بإزالة جميع الأنسجة غير القلبية باستخدام مقص دقيق وانقل القلب المصبوغ إلى أنبوب مخروطي بحجم 15 مل يحتوي على 3 مل من محلول TTC.
- ضع الأنبوب المخروطي عند 4 درجات مئوية طوال الليل لجولة ثانية من التلوين بالغمر.
4. تحضير كتلة الأنسجة
- أخرج القلب من الأنبوب المخروطي وجففه بعناية بورق مناديل. في هذه المرحلة، يصبح التلوين في عضلة القلب الصالحة للحياة أكثر وضوحا، كما تظهر عضلة القلب غير المثقبة (المناطق فوق القلبية وربما الشغافة) صبغات حمراء خفيفة.
- املأ قنية 20 مقياس مثحونة وغير حادة بمركب درجة حرارة قطع مثالية (OCT) باستخدام حقنة بسعة 1 مل.
- قم بإزالة الصمام ثلاثي الشكل بمقص دقيق وأدخل القنية في البطين الأيمن.
- املأ التجويف بمركب OCT (حوالي 50-80 ميكرولتر) وأوقف التسريب عند ملاحظة التدفق العكسي.
- اعرض الصمام الميترالي وأدخل القنية عبر الأذين الأيسر والصمام الميترالي إلى البطين الأيسر.
- قم بحقن التجويف بلطف بمركب OCT (حوالي 80 ميكرولتر) وأوقف التسريب عند ملاحظة تدفق خارج الشريان الأبهر.
- جهز كبسولة أسطوانية صغيرة (قطرها 1 سم) مصنوعة من ورق الألمنيوم واملأها ب 300 ميكرولتر من مركب OCT.
- ضع القلب بحذر داخل الكبسولة في وضع أعلى للأسفل وضبطه على اتجاه عمودي. من منظور علوي إلى الأسفل، يجب ألا تبرز القمة بشكل مفرط نحو أي من الجانبين.
- اغمر الكبسولة في محلول ميثيلبوتان 2 مبردة مسبقا إلى -30 درجة مئوية إلى -40 درجة مئوية.
- اترك العينة تبقى في المحلول لمدة 5-10 دقائق لتتصلب قبل تكوين كتلة نسيجية.
- ضع علامة على كتلة الأنسجة وخزنها عند -80 درجة مئوية لمزيد من التحليل النسيجي.
5. التجميد والتثبيت
- قم بتركيب كتلة الأنسجة على جهاز تجميد باستخدام مركب OCT.
- ضع الشاك في الكريوستات واضبط درجة الحرارة عند حوالي -24 درجة مئوية.
- قم بتقطيع كتلة الأنسجة حتى يصبح الرأس مرئيا.
- اضبط سمك المقطع إلى 50 ميكرومتر واجمع كل شريحة ثانية، مما ينتج عنه فواصل 100 ميكرومتر بين الشرائح.
ملاحظة: تجنب طي الأنسجة أثناء التجميد بالتجميد. يتم تقليل ذلك إلى حد كبير عن طريق ملء تجاويف البطين الفارغة بمركب OCT (انظر الخطوات 4.4-4.6). - قم بمحاذاة الشرائح بشكل متسلسل على شرائح المجهر الزجاجي، مع وضع ثماني قطع في كل شريحة. بالمجمل، من المتوقع أن يكون هناك 80 قسما، أي 10 شرائح، لكل قلب.
- جفف السلايدات باستخدام مجفف الشعر على أدنى إعداد باستخدام تدفق هواء بدرجة حرارة الغرفة (لا حاجة للتدفئة) لمدة تقارب 10 دقائق.
- اغمر الشرائح في غرفة تلوين مملوءة بمحلول زامبوني (مثبت يحتوي على 2٪ بارافورمالديهايد و0.4٪ حمض بيكريك، مع الضرب).
تحذير: قد يسبب مثبت زامبوني رد فعل تحسسي في الجلد ويشتبه في أنه يسبب عيوبا وراثية وسرطان الجسم. التخلص من النفايات والمخلفات وفقا للوائح السلطات المحلية. - ثبت نسيج القلب عند 4 درجات مئوية طوال الليل. يضمن هذا التثبيت طويل الأمد أن يبقى سطح نسيج القلب خاليا من فقاعات الهواء التي تتكون أثناء عملية التثبيت.
- بعد التثبيت، أخرج الشرائح من المثبت واشطفها ثلاث مرات ب PBS.
- قم بتركيب الشرائح مع وسط التثبيت وغط الأقسام بأغطية منزلق. بعد هذه الخطوة، تكون شرائح القلب جاهزة لالتقاط الصورة.
- خزن العينات في صندوق شرائح بدرجة حرارة الغرفة.
ملاحظة: بما أن ترسبات الفورمازان غير قابلة للذوبان في الماء، يمكن الحفاظ على التلوين لسنوات دون فقدان شدة.
6. التصوير والمعالجة
- قم بتركيب مجهر خفيف باستخدام هدف 1.25x وتشغيل برنامج CellSens للتصوير.
- ضع قسم القلب في وسط مجال الرؤية.
- قم بضبط وقت التعريض والتركيز وتوازن اللون الأبيض في الكاميرا حسب الحاجة.
- التقط صورا لكل قسم وحفظ جميع الصور من نفس القلب في مجلد مخصص.
- انسخ سكريبت R (الملف التكميلي 1) إلى منصة RStudio وشغل خوارزمية آلية قائمة على R لتقييم ال MI. تحسب الخوارزمية أحجام الفتحات المخططة لكل شريحة وتحسب حجم الاحتشام الكلي للقلب بأكمله.
- تصدير مجموعة البيانات إلى ملف إكسل وتحليل البيانات حسب الحاجة.
- استيراد جميع صور كل قلب إلى منصة ImageJ لإعادة البناء ثلاثية الأبعاد لاحقا.
- قم بترتيب جميع الصور بشكل متماسك ومتسلسل باستخدام القائمة المنبثقة في منصة ImageJ.
- أنشئ بناء ثلاثي الأبعاد باستخدام دالة رسم السطح.
- افتح نافذة عارض الصوت وضبط جميع المعايير للعرض ثلاثي الأبعاد.
ملاحظة: تم الإبلاغ سابقا عن منهجية الكيمياء المناعية9 والفيديوهات الخاصة بالتلوين التقليديلحمل الحمل 4,5 ولم تدرج في هذه المخطوطة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الخطوات الرئيسية المتضمنة في إجراء التلوين المجهري باستخدام TTC موضحة في الشكل 1. بعد جولتين من التلوين من محاولة الحمل، ظهر نمط مثقوب واضح على سطح القلب. أسفر القطع التسلسلي للقلب بالكامل بفواصل 100 ميكرومتر عن حوالي 80 قسم نسيج، مع موقع الربطحول الشريحة الستين. في كل قسم، كان التلوين الأحمر الداكن لخلايا عضلة القلب الحية (viaCM) مميزا بوضوح عن النسيج النخر الأصفر (necCM)، الموسوم بحمض البيكريك، مما ينتج حدا محددا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لا يزال احتشاء عضلة القلب، الناتج عن نقص التروية العضلية القلبية المطول، مصدر قلق صحي عالمي كبير، حيث أن الإصابة الإقفاري غالبا ما تعيق وظيفة الانقباض اللازمة لدورة الدم الفعالة. على مدى العقود الماضية، تم بذل جهود كبيرة لتحديد التدخلات أو المركبات التي تعزز مقاومة القلب للإجهاد الإقفاري1. على الرغم من استكشاف نقاط نهاية بديلة مثل إطلاق الإنزيم11، أو التعافي الوظيفي بعد الإقفاري، أو مؤشرات البقاء الخلوية في الخلايا المزروعة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه لا توجد لديهم مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
تم تمويل هذه الدراسة من قبل FoKo 23/2013 ومن قبل معهد أبحاث القلب والأوعية الدموية في دوسلدورف (CARID).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| هدف 1.25x | أوليمبوس | PlanApo 1.25X/0.04 | التصوير |
| حقن 10 مل | ب. براوم | 4617100V | التروية العكسية |
| كلوريد 2,3,5-تريفينيل تيترازوليوم | ميليبور | 1.08380.0100 | المواد الكيميائية |
| قنية 20 جيلوموانا | BD | 305895 | التروية العكسية |
| 3 حقن mL | ب. براوم | 4617022V | التروية العكسية |
| صمام إيقاف ثلاثي الاتجاهات | ب. براوم | 16494C | التروية العكسية |
| أكواماونت | BDH | 362262H | القطع السيروسي |
| التوازن | أوهاوس | لا يوجد | وزن المواد الكيميائية |
| المنظار الميني | لايكا | MZ6 | الكانوليشن |
| C57BL/6J | جانفييه | لا يوجد | الحيوانات |
| الكاميرا | أوليمبوس | UC30 | التصوير |
| انزلاق الغطاء | إبريديا | BB02400500A113MN20 | القطع السيروسي |
| كريوستات | لايكا | M850 | القطع السيروسي |
| الماء المقطر المزدوج | ميلبور | لا يوجد | المواد الكيميائية المذابة |
| مقص التشريح الدقيق | AESCULAP | BC702R | الأدوات الجراحية |
| ملقط دقيق التحليل الدقيق | AESCULAP | FM001R | الأدوات الجراحية |
| شرائح المجهر الزجاجي | إنجلبريخت | 11102 | القطع السيروسي |
| ImageJ | المعاهد الوطنية للصحة | 1.54 جرام | معالجة التصوير |
| إيزوفلوران | بيرامال | 14150097146754 | المواد الكيميائية |
| إيزوبوبانول | روث | 0733.1 | المواد الكيميائية |
| المجهر الضوئي | أوليمبوس | BX61 | التصوير |
| ملقط التشريح الدقيق | F.S.T | 11152-10 | الأدوات الجراحية |
| مركب OCT | ساكورا | 4583 | المواد الكيميائية |
| طبق بتري | ثيرنو ساينتيفك | 172931 | التروية العكسية |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات | روث | 9143.1 | المواد الكيميائية |
| Rstudio | برنامج الوضع | 2024.09.0 | معالجة التصوير |
| خياطة حريرية | F.S.T | 18020-60 | التروية العكسية |
| البرمجيات | أوليمبوس | سيل سينز V3.2 | التصوير |
| مقص القطع المقاوم للصدأ | AESCULAP | BC257R | الأدوات الجراحية |
| حل زامبوني | مورفيستو | 12773.0050 | المواد الكيميائية |
المراجع
- Bolli, R., Becker, L., Gross, G., Mentzer, R., Balshaw, D., et al. Myocardial protection at a crossroads: the need for translation into clinical therapy. Circ Res. 95 (2), 125-134 (2004).
- Murphy, E., Steenbergen, C. Mechanisms underlying acute protection from cardiac ischemia-reperfusion injury. Physiol Rev. 88 (2), 581-609 (2008).
- Bohl, S., Medway, D. J., Schulz-Menger, J., Schneider, J. E., Neubauer, S., et al. Refined approach for quantification of in vivo ischemia-reperfusion injury in the mouse heart. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (6), H2054-H2058 (2009).
- Liepinsh, E., Kuka, J., Zvejniece, L., Vilskersts, R., Dambrova, M. Rodent heart and brain tissue preparation for digital macro photography after ischemia-reperfusion. J Vis Exp. (180), e62942(2022).
- Kim, S. -C., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Knüfermann, P., et al. A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion. J Vis Exp. (65), e3896(2012).
- Lindsey, M. L., et al. Guidelines for experimental models of myocardial ischemia and infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 314 (4), H812-H838 (2018).
- Ding, Z., et al. A refined TTC assay precisely detects cardiac injury and cellular viability in the infarcted mouse heart. Sci Rep. 14 (1), 25214(2024).
- Zhu, H., et al. IL-6 coaxes cellular dedifferentiation as a pro-regenerative intermediate that contributes to pericardial ADSC-induced cardiac repair. Stem Cell Res Ther. 13 (1), 44(2022).
- Zhu, H., et al. Sfrp1 as a pivotal paracrine factor in the trained pericardial stem cells that foster reparative activity. Stem Cells Transl Med. 13 (2), 137-150 (2023).
- Yellon, D. M., Hausenloy, D. J. Myocardial reperfusion injury. N Engl J Med. 357, 1121-1135 (2007).
- Li, C., Chen, M., Zhang, D., Xu, T., Wang, Z. Cardiac injury induced by obstructive jaundice: a comprehensive review. Perioper Precis Med. 28 (1), 28-38 (2025).
- Chang, X., et al. ß-tubulin contributes to Tongyang Huoxue decoction-induced protection against hypoxia/reoxygenation-induced injury of sinoatrial node cells through SIRT1-mediated regulation of mitochondrial quality surveillance. Phytomedicine. 108, 154502(2023).
- Li, Z., Hu, B., Zou, X. Research advances in understanding the role and mechanism of pyroptosis in myocardial ischemia-reperfusion injury. Perioper Precis Med. 2 (2), 52-63 (2024).
- Ouyang, W., et al. An immunostaining-based approach for assessing myocardial viability in the infarcted mouse hearts. Front Cardiovasc Med. 12, 1598314(2025).
- Benedek, A., et al. Use of TTC staining for the evaluation of tissue injury in the early phases of reperfusion after focal cerebral ischemia in rats. Brain Res. 1116 (1), 159-165 (2006).
- Lindsey, M. L., et al. Guidelines for in vivo mouse models of myocardial infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 321 (6), H1056-H1073 (2021).
- Lujan, H. L., Janbaih, H., Feng, H. -Z., Jin, J. -P., DiCarlo, S. E. Myocardial ischemia, reperfusion, and infarction in chronically instrumented, intact, conscious, and unrestrained mice. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 302 (12), R1384-R1400 (2012).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17 (4), 268-272 (2012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
