هذا الفيديو يبين تقنيات لوضع العلامات على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية والخلايا الجذعية الوسيطة مع الأصباغ الفلورية. ويمكن استخدام هذه التقنية لتتبع في الجسم الحي من الخلايا الجذعية التي تم زرعها مع التصوير الضوئي والارتباطات مع الأنسجة المجهري مضان.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
وسم الخلايا الجذعية مع الأصباغ نيون للمنظمات غير الغازية مع الكشف عن التصوير الضوئي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التصوير الضوئي (OI) هو أداة سهلة وسريعة وغير مكلفة لرصد المجراة في علاجات جديدة لبناء الخلايا الجذعية. وتستند هذه التقنية على وضع العلامات فيفو السابقين الخلايا الجذعية مع صبغة الفلورسنت ، والحقن في الوريد لاحقة من الخلايا وصفت والتصور من تراكمها في الأعضاء المستهدفة محددة أو الأمراض. أسلوب عرض يوضح كيف يمكننا تسمية الإنسان الخلايا الجذعية الوسيطة (hMSC) من حضانة بسيطة مع صبغ فلوري هل محبة للدهون (C67H103CIN2O3S) وكيف يمكننا تسمية الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) مع ادارة الاغذية والعقاقير المعتمدة صبغة الفلورسنت خضرة الإندوسيانين (ICG). آلية امتصاص هو عبر التمسك ونشر الصبغة lypophilic عبر غشاء الخلية طبقة ثنائية فسفوليبيد. وعادة ما يتم تحسين كفاءة الوسم إذا المحتضنة الخلايا مع صبغة خالية في المصل وسائل الاعلام بدلا من الحضانة في مصل الدم التي تحتوي على وسائل الإعلام. علاوة على ذلك ، إضافة سلفات بروتامين ترنسفكأيشن كيل تحسن كبير في امتصاص النقيض عامل.
البروتوكول
توسيم الخلايا الجذعية الوسيطة مع صبغة الفلورسنت هل
- لبدء إجراءات لوضع العلامات الخلايا الجذعية الوسيطة ، ويعرض للتريبسين عدد الخلايا للحصول على تعليق مع عدد محدد من الخلايا.
- تأخذ الخلايا من الحاضنة ونضح من وسائل الإعلام القديمة من القوارير التي تحتوي على خلايا يمكن وصفها
- غسل الخلايا مع 10 مل من مغ / كا خالية من برنامج تلفزيوني. نضح بها في برنامج تلفزيوني. فإن المغنيسيوم والكالسيوم وتمنع التربسين ، وبالتالي فإننا نستخدم برنامج تلفزيوني من دون ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
OI هي تقنية تصوير جديدة نسبيا ، استنادا إلى الكشف عن مضان. OI حساسة مثل تقنيات التصوير قائف مشع مقرها ، ولكن لا يرتبط مع أي التعرض لأشعة. OI يوفر وسيلة فعالة لتعقب الخلايا غير جراحية ومتكررة ، وبالتالي توفير نظرة ثاقبة الهجرة الخلية إلى موقع الهدف. أحد أوجه القصور الرئيسية لهذا الأسلوب هو اختراق محدود من الانسجة في الجسم الحي تحقيقات الفلورسنت. وهكذا ، فإن تراكم التتبع في الأنسجة العميقة ، أكثر من حوالي 50-10 سم من سطح الجلد ، قد لا يتم الكشف عن. وتقتصر التطبيقات السريرية الحالية إلى تقنيات مثل التصوي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وقد أيد هذا المشروع من خلال منحة ليون J. SEED تال من معهد كاليفورنيا للطب التجديدي. ومولت من قبل توبياس هينينغ بحوث راتب من جمعية البحوث الألمانية (DFG ، وسعادة 4578/1-2). نحن نريد أن نعترف بامتنان مينيسيس خوانيتو لنصائحه حول ثقافة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| إندوسيانين الأخضر (IR-125) | كاشف | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | كاشف | Sigma-Aldrich | D-2650 | |
| وسط DMEM عالي الجلوكوز | كاشف | Sigma-Aldrich | D5648 | |
| جيلاتين | كاشف | Sigma-Aldrich | G1890 | يُخفف حتى يصل إلى التركيز النهائي 0.1% في المحلول الملحي المُنظم للفوسفات (PBS) |
| محلول ملحي منظم بالفوسفات (PBS)، خالٍ من المغنيسيوم والكالسيوم | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 14190-144 | |
| تريبسين-إيديتات الكالسيوم (Trypsin-EDTA) بتركيز 0.05% | كاشف | Invitrogen | 25300-120 | |
| تريبسين-إيديتات الكالسيوم ثنائي الصوديوم (Trypsin-EDTA) بتركيز 0.25% | كاشف | Invitrogen | 25200-114 | |
| مصل جنين العجل، مُوصَف | كاشف | Hyclone | SH30071.03 | |
| مصفاة الخلايا (40 ميكرون) μنايلون (Nylon) | كاشف | BD Biosciences | 352340 | |
| الفرق في الفروقات | كاشف | Molecular Probes, Life Technologies | V-22887 | |
| وسط DMEM خاوٍ من الغلوتامات (Knockout DMEM) | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 10829018 | |
| بديل المصل Knockout | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 10828028 | |
| بيتا-مركابتوهيدروكسي إيثيل (β-Mercaptoethyl)–إيثانول | كاشف | Sigma-Aldrich | 7522 | |
| الأحماض الأمينية غير الأساسية | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 11140050 | |
| عامل نمو الأرومة الليفية-2 (FGF-2) | كاشف | R&أنظمة amp;D | 233-FB-025 | |
| غلوتامين 200 ملي مولار | كاشف | GIBCO، من شركة Life Technologies | 25030081 | |
| بنسلين/ستريبتومايسين | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 15140-122 | |
| كبريتات البروتامين | كاشف | الشركاء الصيدلانيون الأمريكيون |
المراجع
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Stem cell tracking with Gadophrin-2 -- a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 31, 1312-1321 (2004).
- Simon, G. H., Daldrup-Link, H. ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
