مقالة منهجية

تسليط الضوء على انتقال السيتوكروم C للميتوكوندريا عن طريق المجهر الإلكتروني للنقل المناعي

DOI:

10.3791/68633

⸱

أغسطس 15, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Medical Department, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Critical Care Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 3Sichuan Scientist Biotechnology Co., Ltd, 4Department of Critical Care Medicine, Deyang Hospital Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 6Department of Critical Care Medicine, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف البروتوكول طرقا لدراسة التغيرات المجهرية في الخلايا العصبية وانتقال السيتوكروم ج للميتوكوندريا عن طريق المجهر الإلكتروني للنقل المناعي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

غالبا ما تقدم تغييرات موقع البروتين في البنية المجهرية آلية تنظيم دقيقة على مستوى العضيات المرضية. إن كيفية التقاط موقع نقل البروتين العضوي هذا بدقة له أهمية وقيمة إيجابية لتشخيص الأمراض وعلاجها. تلعب الميتوكوندريا دورا مركزيا في النخر والمسار الجوهري لموت الخلايا المبرمج. في ظل الظروف العادية ، يوجد السيتوكروم ج (Cyt c) فقط بين الأغشية الداخلية والخارجية للميتوكوندريا وفي النواة. عندما تخضع الخلايا لموت الخلايا المبرمج ، تتغير نفاذية الغشاء الداخلي للميتوكوندريا ، ويتم إطلاق Cyt c من الميتوكوندريا إلى السيتوبلازم. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج الفئران لإصابة نقص التروية الدماغية وإعادة التروية ، وأظهرت التغيرات المجهرية للخلايا العصبية التي تخضع لموت الخلايا المبرمج عن طريق المجهر الإلكتروني للنقل المناعي. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يظهر رؤية نقل Cyt c لوضع العلامات على الذهب المناعي من مصفوفة الميتوكوندريا إلى السيتوبلازم بعد إصابة نقص التروية الدماغية وإعادة التروية بشكل أكثر دقة. تقنية المجهر الإلكتروني للنقل المناعي المعروضة في هذا البروتوكول مناسبة لعرض أي انتقالات في موضع البروتين على المستوى المجهري.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وفقا لدراسة العبء العالمي للمرض لعام 2021 ، كانت السكتة الدماغية هي السبب الرئيسي الثالث للوفاة والسبب الرئيسي الرابع لسنوات العمر المعدلة بالإعاقة. كان هناك 11.9 مليون حدث سكتة دماغية جديد ، شكلت فيها السكتة الدماغية الإقفارية 65.3٪ (7.8 مليون) 1. يحدث الموت العصبي بعد نقص التروية الدماغي ، بما في ذلك النخر وموت الخلايا المبرمج. تخضع أنسجة المخ الأكثر تضررا لاحقا لموت الخلايا النخرية. قد تخضع الخلايا العصبية في منطقة ظلال الظل الإقفارية أو منطقة ما حول الاحتشاء لموت الخلايا المبرمج بعد عدة ساعات أو أيام2. بالإضافة إلى وظائف الطاقة الحيوية والتمثيل الغذائي ، تلعب الميتوكوندريا أيضا دورا مركزيا في المسار الجوهري لموت الخلايا المبرمج3،4،5،6.

Cyt C هو بروتين مشفر بواسطة الجينات النووية. في ظل الظروف العادية ، يوجد Cyt C فقط بين الأغشية الداخلية والخارجية للميتوكوندريا وفي النواة. يرتبط المسار موت الخلايا المبرمج بوساطة إطلاقه بالتحكم التنظيمي لأفراد عائلة Bcl-2. بعد تحفيزها عن طريق موت الخلايا المبرمج ، يتم تشكيل أوليغومرات Bax / Bak وإدخالها في مسام الغشاء الخارجي للميتوكوندريا ، مما يؤدي إلى تغيرات في الضغط التناضحي للميتوكوندريا وفقدان إمكانات الغشاء. يتم إطلاق Cyt C من الميتوكوندريا إلى السيتوبلازم ، حيث يرتبط بمنشط موت الخلايا المبرمج 1 لتشكيل مركب موت الخلايا المبرمج وتنشيط pro-caspase-9. في المقابل ، يتم تنشيط caspase-3 و caspase-7 ، مما يؤدي إلى سلسلة Caspase ويؤدي إلى موت الخلايا المبرمج7.

يمكن للفحص المجهري الإلكتروني الناقل (TEM) أن يلاحظ بوضوح التغيرات في بنية الخلية في مراحل مختلفة من موت الخلايا المبرمج. تعد الملاحظة المورفولوجية للفحص المجهري الإلكتروني طريقة موثوقة لتحديد موت الخلايا المبرمج8. ومع ذلك ، لا يمكنه ملاحظة التغييرات في Cyt C في البنية الفوقية. هناك العديد من التقنيات للكشف عن بروتينات معينة في البنية الفوقية: قياس التدفق الخلوي ، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ، والقياس الطيفي الضوئي ، والنشاف الغربي. ومع ذلك ، لا يمكنهم التقاط تغييرات موقع البروتين بدقة في البنية المجهرية. يحتوي الذهب الغروي على جزيئات بأحجام مختلفة ، وكثافة الإلكترون للذهب الغروي عالية. تقنية Immunogold مناسبة بشكل خاص لدراسات التوطين أحادية أو متعددة الملصقات للفحص المجهري الإلكتروني المناعي. نظرا لونه المتأصل باللون الأحمر الفاتح إلى الداكن ، فإن الذهب الغروي قابل أيضا للمراقبة تحت الفحص المجهري الضوئي. عندما يتم تمييز بروتينات معينة ب Immunogold ، يمكن تصور تغييرات الموقع عن طريق TEM بدقة تحت الخلوية9.

يصف هذا البروتوكول تسليط الضوء على انتقال Cyt C للميتوكوندريا عن طريق المجهر الإلكتروني للنقل المناعي (IEM). الهدف العام من هذه الطريقة هو تصور الانتقال الخلوي ل Cyt C أثناء موت الخلايا المبرمج الناجم عن نقص التروية باستخدام IEM. الأساس المنطقي ل IEM هو تسمية Cyt C بالذهب الغروي وتصور تغييرات التوطين بدقة تحت الخلوية باستخدام TEM9. يمكن ل IEM مراقبة التغيرات الديناميكية للبروتينات على المستوى المكاني ، مما يوفر وسيلة قوية لشرح الأنشطة الفسيولوجية والمرضية10.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على برنامج من قبل اللجنة الأخلاقية في SLAS (رقم إصدار IACUC: SYST-2024-018). هنا ، تم تربية 6 فئران SD من الذكور الخالية من مسببات الأمراض (200-220 جم) في أقفاص تهوية مستقلة ، مما يحافظ على بيئة المختبر عند 22-25 درجة مئوية و 45٪ -65٪ رطوبة نسبية. خضعت جميع الفئران للتغذية التكيفية لمدة أسبوع واحد بالماء المجاني والنظام الغذائي خلال هذه الفترة.

1. إنشاء نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO)

  1. قسم الفئران بشكل عشوائي إلى مجموعة MCAO ومجموعة العمليات الوهمية ، مع وجود ثلاثة فئران في كل مجموعة. انظر الشكل 1 للحصول على المخطط الانسيابي التجريبي.
  2. تحقق من المعدات المتضمنة في هذا البروتوكول وفقا للقائمة الواردة في الشكل 2.
  3. لإنشاء نموذج MCAO لإصابة نقص تروية الفئران ، استخدم إجراء الخياطة داخل اللمعة.
  4. قم بصوم الفئران لمدة 12 ساعة قبل الجراحة مع الوصول إلى المياه.
  5. تخدير الفئران SD بنسبة 2٪ من الأيزوفلوران (انظر جدول المواد) في خليط من الهواء والأكسجين بمعدل 0.6 لتر / دقيقة. تأكيد التخدير المناسب عن طريق قص جلد الأطراف بالملقط ؛ يجب ألا يكون لدى الفئران أي تراجع أو رد فعل في الساق. اربط الفئران الفاقدة للوعي تماما على طاولة العمليات وحافظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية باستخدام حافظ على درجة حرارة. أغلق أعينهم أثناء الجراحة لمنع الجفاف.
  6. قم بإزالة الفراء حول الرقبة باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية وقم بتطهير الجلد بالبيتادين. قم بعمل شق رقبة خط الوسط بطول 1.5 سم باستخدام مقص جراحي (انظر جدول المواد) ، وقم بإجراء تشريح حاد للعضلات واللفافة المحيطة بالأوعية الدموية ، وكشف القصبة الهوائية لتحديد موقع الشريان السباتي المشترك الأيمن (CCA) ، والشريان السباتي الخارجي (ECA) ، والشريان السباتي الداخلي (ICA). يجب تعقيم الأدوات الجراحية لمنع العدوى.
  7. اربط الطرف البعيد من ECA بخياطة جراحية 6-0 وضع خياطة جراحية أخرى بشكل فضفاض حول الطرف القريب من ECA إلى نقطة التشعب. احرص على عدم الإضرار بالعصب المبهم.
  8. قم بقص CCA و ICA بمشابك الأوعية الدموية وقم بعمل شق صغير في ECA بين خيوط جراحية.
  9. أدخل خياطة الشعيرات الأحادية في تجويف ECA لأسفل باتجاه CCA ، وشد الخيط الجراحي حول جذع ECA لتأمين الخيط داخل اللمعة ومنع النزيف. تأكد من أن خياطة الشعيرات الأحادية تتطابق مع وزن لتقليل الضرر وتحقيق حجم احتشاء مستهدف بنسبة 40٪ في نصف الكرة الأرضية المماثل.
  10. قم بقص الجزء المتبقي من ECA لتحرير الجذع ووضع جذع ECA أسفل نقطة التشعب بحيث يتماشى تقريبا مع ICA.
  11. إزالة مقطع الأوعية الدموية الدقيقة من ICA, الاستمرار في تقدم الخيط حتى يتم الشعور بمقاومة خفيفة, مما يشير إلى انسداد الشريان الدماغي الأوسط; هذا الطول عادة حوالي 2 سم. اربط الخيط حول الشعيرات الأحادية بإحكام. قم بإزالة مشبك الأوعية الدموية الدقيقة الآخر من CCA.
  12. أغلق الشق بخياطة جراحية وضع الجرذ في قفص التعافي ، واعتني بالحيوان لمدة تصل إلى ساعتين بعد نقص التروية.

2. استعادة تدفق الدم في الشريان الدماغي الأوسط

  1. قبل إعادة التخدير ، تحقق من النتيجة العصبية باستخدام مقياس Longa Score لتقييم نجاح الجراحة كما هو موضح في الخطوة 3.
  2. تخدير الجرذ على النحو الوارد أعلاه وأعد فتح الشق. ضع مشبك الأوعية الدموية الدقيقة على CCA ، واسحب خياطة الانسداد جزئيا من ICA حتى تظهر نهاية الخيط من خلال ICA.
  3. ضع مشبك صغير آخر على ICA فوق موقع الخيط داخل اللمعة ، وقم بإزالة خياطة الانسداد تماما ، واربط جذع ECA. إعادة التروية لمدة 24 ساعة.
  4. قم بإزالة المقاطع من CCA و ICA. أغلق الشق بخياطة جراحية. يتم تطبيق البوبرينورفين (0.05 ملغم/كغ؛ انظر جدول المواد) تحت الجلد.
  5. أعد الجرذ إلى القفص ، ووفر الماء والطعام المهروس ، واعتني به حتى يستعيد وعيه. حافظ على درجة حرارة جسم الفئران عند 37± 0.5 درجة مئوية أثناء الإجراء التجريبي بأكمله.

3. تقييم النقاط العصبية

  1. تسجيل العجز العصبي بعد العملية و 24 ساعة بعد إعادة التروية باستخدام مقياس لونجا11: (0) لا يوجد عجز ؛ (1) الفشل في تمديد اليسار (الجانب المشلول) الأمامي بالكامل ؛ (2) الدوران إلى اليسار (الجانب المشلول) ؛ (3) السقوط إلى اليسار (الجانب المشلول) ؛ (4) عدم المشي التلقائي وانخفاض الوعي. (5) مات.
    ملاحظة: تم تقييم ثلاثة مشغلين وفقا للمعايير المذكورة أعلاه.

4. جمع أنسجة المخ

  1. جمع أنسجة المخ بعد 24 ساعة من إعادة التروية بعد تسجيل العجز العصبي وتقييمه.
  2. تخدير الجرذ كما هو موضح أعلاه. قطع الجلد لكشف الرأس والرقبة وقطع الحبل العنقي من العمود الفقري العنقي بمقص جراحي (انظر جدول المواد).
  3. افصل وقم بإزالة عضلات الرقبة الخلفية. قم بإزالة الجمجمة بعناية باستخدام ملقط منحني (انظر جدول المواد). انتبه إلى الجافية عند فصل الجمجمة لتجنب خدش أنسجة المخ. قم بإزالة أنسجة المخ تماما.
  4. ضع أنسجة المخ في مثبت TEM و IEM المبرد مسبقا عند 4 درجات مئوية ، واحفظه في الثلاجة على حرارة 4 درجات مئوية.

5. عملية الوهم

  1. بالنسبة للعمليات الوهمية ، قم بإجراء جميع الإجراءات على النحو الوارد أعلاه باستثناء عدم إجراء الانسداد.

6. إعداد وتصوير قسم رقيقة للغاية

  1. تحضير قسم TEM فائق النحافة
    1. التثبيت: تحديد موقع أخذ العينات من الأنسجة الطازجة لتقليل الضرر الميكانيكي مثل الجر والكدمة والبثق ، والتأكد من أن سمك الأنسجة لا يتجاوز 2 مم. تأكد من أن حجم الأنسجة لا يتجاوز 1 مم × 1 مم × 1 مم.
    2. قم بالإصلاح باستخدام مثبت TEM عند 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة. اغسل 3 مرات لمدة 15 دقيقة لكل منها في 0.1 M من الفوسفات PB (درجة الحموضة 7.4 ؛ انظر جدول المواد).
    3. بعد التثبيت: أضف 1٪ حمض أوسميك · 0.1 M PB (انظر جدول المواد) لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية).
    4. الجفاف: جفف الأنسجة على التوالي في 30٪ إيثانول لمدة 10 دقائق ، و 50٪ إيثانول لمدة 10 دقائق ، و 70٪ إيثانول لمدة 15 دقيقة ، و 90٪ إيثانول لمدة 15 دقيقة ، والإيثانول المطلق لمدة 15 دقيقة ، و 100٪ أسيتون لمدة 15 دقيقة.
    5. غمس اللثة: اغمر الأنسجة على التوالي في محلول راتنجات الايبوكسي SPI-Pon 812: الأسيتون = 1: 3 لمدة 30 دقيقة ، محلول SPI-Pon 812: الأسيتون = 1: 1 لمدة 30 دقيقة ، والمحلول SPI-Pon 812: الأسيتون = 3: 1 لمدة ساعة واحدة (انظر جدول المواد).
    6. البلمرة والتضمين: اغمر العينة في SPI-Pon 812 النقي طوال الليل عند 37 درجة مئوية ، وقم بالتغيير إلى SPI-Pon 812 الطازج لمدة 8 ساعات ، وبلمرة عند 60 درجة مئوية لمدة 48 ساعة (انظر جدول المواد).
    7. التقسيم: قم بتقطيع الكتلة المدمجة إلى شرائح شبه رقيقة بسمك 0.8 ميكرومتر بسكين ماسي ، وصمة عار باللون الأزرق أمينوتولوين عند 25 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. حدد موقع وحدد المناطق ذات الخلايا العصبية المكتظة بكثافة باستخدام مجهر ضوئي لمراقبة التكبير العالي. اصنع أقساما رفيعة للغاية بسمك 90 نانومتر. ضع العينات على شبكات نحاسية مطلية بفورمفار 200 شبكة (انظر جدول المواد).
    8. بعد التلوين: قم بتلطيخ الشبكات في أسيتات اليورانيل عند 25 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، ثم تلطيخ الشبكات في سترات الرصاص عند 25 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
  2. إعداد قسم IEM فائق النحافة
    1. قم بتنفيذ الخطوة 6.1.1-6.1.4.
    2. غمس اللثة: اغمر الأنسجة على التوالي في محلول LR الراتنج الأبيض: الإيثانول = 1: 3 لمدة ساعتين ، محلول LR الراتنج الأبيض: الإيثانول = 1: 1 لمدة ساعتين ، والمحلول LR الراتنج الأبيض: الإيثانول = 3: 1 لمدة ساعتين.
    3. البلمرة والتضمين: اغمر العينة في راتنج LR الأبيض النقي طوال الليل عند 4 درجات مئوية ، وقم بالتغيير إلى راتنج LR الأبيض الطازج لمدة 4 ساعات عند 25 درجة مئوية والبلمرة عند 55 درجة مئوية لمدة 78 ساعة.
    4. التقسيم (كما هو الحال في الخطوة 6.1.7): قم بتقطيع الكتل المضمنة إلى شرائح شبه رقيقة بسماكة 0.8 ميكرومتر ، وصمة عار باللون الأزرق أمينوتولوين عند 25 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. حدد موقع وحدد المناطق ذات الخلايا العصبية المكتظة بكثافة باستخدام المجهر الضوئي. اصنع أقساما رفيعة للغاية بسمك 90 نانومتر. ضع العينات على شبكات نحاسية.

7. وضع العلامات على Immunogold

  1. اشطف 2x باستخدام PBS و 1x بمحلول جلايسين عند 25 درجة مئوية لمدة 5 دقائق لكل منهما ، ثم أضف 2٪ من محلول الفوسفات من ألبومين مصل الأبقار (PBS-BSA) واحتضنه لمدة 30 دقيقة.
  2. احتضان في محلول الجسم المضاد الأساسي (الجسم المضاد متعدد النسيلة للأرانب للسيتوكروم C) عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. يتم تخفيف الجسم المضاد الأساسي باستخدام PBS-BSA بنسبة 1:50.
  3. اشطفها باستخدام PBS عند 25 درجة مئوية لمدة 5 مرات لمدة 5 دقائق لكل منهما. احتضان في محلول الجسم المضاد الثانوي الغروي المسمى بالذهب (الماعز المترافق بالذهب المضاد للأرانب IgG) عند 25 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. يتم تخفيف الجسم المضاد الثانوي باستخدام PBS-BSA بنسبة 1:20 (انظر جدول المواد).
  4. اشطفها باستخدام PBS عند 25 درجة مئوية لمدة 5 مرات لمدة 5 دقائق لكل منهما. اشطفها بالماء المقطر عند 25 درجة مئوية لمدة 5 مرات لمدة 5 دقائق لكل منها (انظر جدول المواد).
  5. بعد التلوين: قم بتلطيخ الشبكات في أسيتات اليورانيل عند 25 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، ثم قم بتلطيخ الشبكات في سترات الرصاص عند 25 درجة مئوية لمدة دقيقتين (انظر جدول المواد).
  6. قم بتصوير القسم الرقيق للغاية والتقط صورا على مجهر إلكتروني ناقل الحركة عند 80 كيلو فولت.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤكد تقييم النقاط العصبية نجاح MCAO ، وفقا لمقياس Longa Score ، قدمت الفئران في مجموعة MCAO على الأقل تدور إلى اليسار (Neuroscore 2). لم تظهر الفئران من مجموعة العمليات الوهمية أي خلل عصبي واضح (الدرجة العصبية 0). لم يلاحظ أي وفيات خلال يوم الجراحة. يتم سرد النتيجة العصبية للحيوانات في الجدول 1.

كشف تحليل IEM لمجموعة MCAO عن خلايا عصبية ذات نوى منكمش وكثافة إلكترون سيتوبلازمية مرتفعة ، مصحوبة باضطراب هيكلي جزئي في الميتوكوندريا. بشكل حاسم ، أظهر Cyt c المسمى بالذهب المناعي إعا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف الأساسي من علاج إعادة التروية في السكتة الدماغية الإقفارية الحادة هو إعادة نضح الدم إلى المنطقة الإقفارية. الآن يمكننا تحقيق هذا الهدف من خلال انحلال التخثر في الوريد والعلاج داخل الأوعية الدموية والعلاج المضاد للتخثر. ومع ذلك ، فإن استعادة نضح الدم يؤدي إلى إصابة نقص التروية وإعادة التروية ، ويؤدي إلى تفاقم النخر العصبي وموت الخلايا المبرمج ، مما يؤدي إلى ضعف عصبي. أثناء نقص التروية ، يؤدي التسرب غير الطبيعي للإلكترونات من سلسلة نقل الإلكترون في الميتوكوندريا إلى إنتاج كمية كبيرة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل مشروع البحث العلمي الخاص حول الطب الصيني التقليدي التابع لإدارة مقاطعة سيتشوان للطب الصيني التقليدي (2021MS414).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.9٪ محلول ملحي عاديسيتشوان كيلون الصيدلانية المحدودةH20083400
200 شبكة شبكات نحاسية مطليةب Zhongjingkeyi Technology Co.، Ltd.BZ10262a
220-230g MCAO MonofilamentsBeijing Cinontech Co.، Ltd.A4-243250
الإيثانولالمطلق تشنغدو   ؛ كيلونغ  الكيميائية   ؛ المحدودة2023101201
أسيتونتشنغدو  كيلونغ  الكيميائية   ؛ المحدودة2023120501
نظام التخدير الحيوانيRayward Life Technology Co.، Ltd.R500
الحافظ على درجة حرارةRayward Life Technology Co.، Ltd.69020
طاولة الخبزشنتشن Bangqi Chuangyuan التكنولوجيا المحدودةCT-946
أدوات العلوم الدقيقة لقص العظام16102-11
قوالب تضمين المحفظةZhongjingkeyi Technology Co.، Ltd.GP130-B
جهاز طرد مركزيSCILOGEXD3024R
الفحص المجهري البصري التقليدي ذو المجال الساطعZeiss (ألمانيا)Primo Star
(10 سم)Shanghai Medical Equipment Co.، Ltd.211001
سكين الماسدياتوم (سويسرا)DU4530
ملقطRayward Life Technology Co.، Ltd.F12018-10
الملقطRayward Life Technology Co.، Ltd.F12010-10
فرن تجفيف الانفجار الكهربائيشنغهاي YiHENG Scientific Instrument Co.، Ltd.DHG-9030A
ماكينة حلاقة كهربائيةYiwu Kemei للأجهزة الكهربائية المحدودةKM-PG5002
سائل التثبيتسيتشوان عالم التكنولوجيا الحيوية المحدودةSC0001
الشريحة الزجاجيةنانتونغ ميفيد علوم الحياة المحدودة220518001
الماعز المترافق بالذهب المضادة للأرانب lgGSangon Biotech (شنغهاي) المحدودة.D111094
ملقط مرقئ (12.5 سم)Anqisheng Biotechnology Co.، Ltd.PL068
ملقط مرقئ (14 سم)Anqisheng Biotechnology Co.، Ltd.PL002
IsofluraneRayward Life Technology Co.، Ltd.2024071201
L. R. الراتنج الأبيضتيانجين تاينو العلوم والتكنولوجيا المحدودةAGR1281A
سترات الرصاصSPI (الولايات المتحدة)GA10701
حامل الإبرة   ؛جياشي التكنولوجيا الطبية المحدودة10044036898028
رباعي أكسيد الأوزميومتيد بيلا (الولايات المتحدة)4008-220501
PBSServicebioG4202
أجسام مضادة متعددة النسيلة للأرانب للسيتوكروم c & nbsp ؛  Affinity Biosciences، Ltd.AF0146
الفئرانبكين Huafukang التكنولوجيا الحيوية المحدودة110322241102187881
SPI-Pon 812 طقم الراتنج المدمجSPI (الولايات المتحدة)GS02660
المجهر المجسمشركة Sunny Optical Technology Co.، Ltd.Soptop SZMN
مقص مستقيم الرأس (10 سم)Anqisheng Biotechnology Co.، Ltd.PL063
ملقط عيون مستقيم (10 سم)شنغهاي للمعدات الطبية المحدودة211001
مقص جراحيRayward Life Technology Co.، Ltd.S14001-10
الفحص المجهري الإلكتروني لنقلهيتاشي (اليابان) المحدودة.HT7800
ultramicrotomeLeica (ألمانيا)UC7
أسيتات اليورانيومSPI (الولايات المتحدة)GS02624
ملقط العين المنحني تشريح تشريح

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. GBD 2021 Nervous System Disorders Collaborators. Global, regional, and national burden of disorders affecting the nervous system, 1990-2021: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet Neurol. 23 (4), 344-381 (2024).
  2. Taylor, R. C., Cullen, S. P., Martin, S. J. Apoptosis: controlled demolition at the cellular level. Nat Rev Mol Cell Biol. 9 (3), 231-341 (2008).
  3. Li, G. R., et al. Albiflorin: a promising natural monoterpene glycoside with potential therapeutic benefits for multiple physiological systems. Food Med Homol. , (2025).
  4. Ye, X. S., et al. The food and medicine homologous Chinese Medicine from Leguminosae species: A comprehensive review on bioactive constituents with neuroprotective effects on nervous system. Food Med Homol. 2 (2), 9420033(2025).
  5. Mubeen, M., Sakarwala, A. S., Bijarani, A. I., Kamal, M. T. Enhancing heart health: expanding the use of SGLT2 inhibitors in cardiovascular disease. Med Adv. 3 (2), 122-126 (2025).
  6. Zhang, Y. C., et al. Comprehensive analyses of nuclear mitochondria-related genes in the molecular features, immune infiltration, and drug sensitivity of clear cell renal cell carcinoma. Med Adv. 2 (3), 238-253 (2024).
  7. Broughton, B. R., Reutens, D. C., Sobey, C. G. Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia. Stroke. 40 (5), e331-e339 (2009).
  8. Guo, M. J., Lu, B., Gan, J. L., Wang, S. C., Jiang, X. J., Li, H. H. Apoptosis detection: a purpose-dependent approach selection. Cell cycle. 20 (11), 1033-1040 (2021).
  9. Squarzoni, S. Immunoelectron Microscopy Methods. Methods Mol Biol. 2655, 201-210 (2023).
  10. Liu, Y., Ohgaki, R., Okanishi, H., Xu, M., Kanai, Y. Amino acid transporter LAT1 is expressed on cancer cell-derived exosomes with potential as a diagnostic and prognostic biomarker. Sci Rep. 14 (1), 28458(2024).
  11. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  12. Sanderson, T. H., Reynolds, C. A., Kumar, R., Przyklenk, K., Hüttemann, M. Molecular mechanisms of ischemia-reperfusion injury in brain: pivotal role of the mitochondrial membrane potential in reactive oxygen species generation. Mol Neurobiol. 47 (1), 9-23 (2013).
  13. Lesnefsky, E. J., Chen, Q., Tandler, B., Hoppel, C. L. Mitochondrial Dysfunction and Myocardial Ischemia-Reperfusion: Implications for Novel Therapies. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 57, 535-565 (2017).
  14. Hetz, C., et al. channel inhibitors prevent mitochondrion-mediated apoptosis and protect neurons in a model of global brain ischemia. J Biol Chem. 280 (52), 42960-42970 (2005).
  15. Sanderson, T. H., Kumar, R., Sullivan, J. M., Krause, G. S. Insulin blocks cytochrome c release in the reperfused brain through PI3-K signaling and by promoting Bax/Bcl-XL binding. J Neurochem. 106 (3), 1248-1258 (2008).
  16. Goldberg, M. W., Fiserova, J. Immunogold labelling for scanning electron microscopy. Methods Mol Biol. 657, 297-313 (2010).
  17. Sachse, M., de Castro, I. F., Fournier, G., Naffakh, N., Risco, C. Metal-Tagging Transmission Electron Microscopy and Immunogold Labeling on Tokuyasu Cryosections to Image Influenza A Virus Ribonucleoprotein Transport and Packaging. Methods Mol Biol. 1836, 281-301 (2018).
  18. Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P. Immunogold cytochemistry in neuroscience. Nat Neurosci. 16 (7), 798-804 (2013).
  19. Veeramachaneni, R., Gu, X., Herrera, G. A. Atypical amyloidosis: diagnostic challenges and the role of immunoelectron microscopy in diagnosis. Ultrastruct Pathol. 28 (2), 75-82 (2004).
  20. Fossmark, R., et al. Ultrastructure and chromogranin A immunogold labelling of ECL cell carcinoids. APMIS. 113 (7-8), 506-512 (2005).
  21. Page, L. J., et al. Secretion of amyloidogenic gelsolin progressively compromises protein homeostasis leading to the intracellular aggregation of proteins. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (27), 11125-11130 (2009).
  22. Vainer, B., Sørensen, S., Nielsen, O. H., Horn, T. Subcellular localization of intercellular adhesion molecule-1 in colonic mucosa in ulcerative colitis. Ultrastruct Pathol. 26 (2), 113-121 (2002).
  23. Cheng, X. T., et al. Revisiting LAMP1 as a marker for degradative autophagy-lysosomal organelles in the nervous system. Autophagy. 14 (8), 1472-1474 (2018).
  24. Karreman, M. A., van Donselaar, E. G., Gerritsen, H. C., Verrips, C. T., Verkleij, A. J. VIS2FIX: a high-speed fixation method for immuno-electron microscopy. Traffic. 12 (7), 806-814 (2011).
  25. Wang, X. B., et al. Mechanistic Insights into salidroside's mitochondrial protection via AMPK/Sirt1/HIF-1α pathway in hypoxic HT22 Cells. J Vis Exp. (218), e66923(2025).
  26. Hou, Y., et al. Rhodiola crenulata alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury by maintaining BBB integrity and balancing energy metabolism dysfunction. Phytomedicine. 128, 155529(2024).
  27. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

C
الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة