يتبع التحليل المختبري للنواب في هذا البروتوكول مرفق قرار المفوض المفوض (EU) 2024/1441 الصادر في 11 مارس 2024 ، المكمل للتوجيه (EU) 2020/2184 الصادر عن البرلمان الأوروبي والمجلس من خلال وضع منهجية لقياس النواب في المياه الموجهة للاستهلاك البشري (مرفق قرار المفوض المفوض (EU) 2024/1441) والتوجيهات بشأن مراقبة القمامة البحرية في البحار الأوروبية31 تم تطويره لتنفيذ التوجيه الإطاري للاستراتيجية البحرية (MSFD). عند الانتهاء من هذا البروتوكول ، يتم توثيق كل جسيم MP أو ألياف بمعرفها الخاص بصورة وأطياف وجميع الخصائص المكتسبة. يتم وصف كل جسيم MP من حيث شكله وحجمه ولونه وشفافيته وتركيبه الكيميائي (نوع البوليمر).
وفقا لملحق قرار المفوض المفوض (EU) 2024/1441 ، ينقسم النواب إلى نوعين من الأشكال: الجسيمات والألياف. يمكن تصنيف الجسيمات إلى شظايا وأغشية ورغوة وكريات وحبيبات. يستخدم هذا التصنيف في مراقبة النواب لمنظمة أطباء بلا حدود (MSFD). تم وصف التمييز بين الأنواع المختلفة من أشكال MPS في إرشادات MSFD31 وبروتوكول الفيديو لأخذ عينات MP على سطح البحر32. يتم قياس حجم كل جسيم على أنه الحد الأقصى لقطر النمس31 أو القطر المكافئ للمساحة (ملحق القرار المفوض للمفوضية (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441) ، بينما يتم تسجيل أبعاد الألياف من حيث طولها وعرضها31. على الرغم من أن اللون والشفافية غير مدرجين في البيانات التي تم الحصول عليها وفقا لمرفق قرار المفوض المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441 ، إلا أنها مدرجة في قائمة ممتلكات النواب التي تم جمعها لمنظمة أطباء بلا فد. وترد التصنيفات في الجدولين 7-3 و7-4 من المبادئ التوجيهيةرقم 31 لمنظمة أطباء بلا حدود على التوالي.
واستنادا إلى نتيجة البحث عن الطيف في مكتبة الطيف، تصنف جسيمات MP في إحدى مجموعات البوليمر ذات الأولوية المدرجة في ملحق قرار اللجنة المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441 القسم 1، النقطتين (14) و(15)، أو تصنف كمواد أخرى بموجب النقطة (15) من القسم 1. يجب تحليل التركيب الكيميائي للألياف فقط إذا كانت أبعادها وقدرات الأداة تسمح بالتحديد الإيجابي لنوع البوليمر ؛ خلاف ذلك ، يجب الإشارة إليها على أنها ألياف مجهولة الهوية.
يقتصر رصد النواب في المياه الجوفية على عدد صغير من الدراسات البحثية بمنهجيات مختلفة قد تؤثر على النتائج النهائية14. تشمل العوامل الرئيسية: 1) التنظيف قبل أخذ العينات ، 2) نوع المضخة ، 3) نظام الترشيح ، 4) مواد الترشيح وحجم المسام ، 5) حجم أخذ العينات ، 6) معالجة العينة ، 7) كشف النواب وتقديرهم الكمي ، و 8) مراقبة الجودة. تتم مناقشة هذه العوامل وخصائصها بمزيد من التفصيل أدناه.
في معظم الدراسات الحالية ، لم يتم ذكر الضخ المسبق (التنظيف) قبل أخذ العينات. ولكن يجب أيضا توفير معلومات حول هذا الموضوع33 ، لأن التطهير له تأثير كبير على تركيز النواب28. يتضمن بروتوكولنا الضخ المسبق ، حيث أن هذه العملية ضرورية لأخذ عينات من المياه الجوفية العذبة من طبقة المياه الجوفية بدلا من المياه الراكدة المتراكمة في البئر. لتنظيف البئر بشكل فعال ، من الضروري ضخ 2-3 أضعاف حجم البئر أو الاستمرار حتى تستقر المعلمات الفيزيائية والكيميائية للمياه14. يجب جمع عينة الماء على ارتفاع 1 متر تقريبا فوق الجزء العلوي من شاشة المرشح لمنع امتصاص الرواسب وضمان العينة المتجانسة.
يتطلب جمع عينات المياه الجوفية من الآبار استخدام مضخة. يتأثر معدل التدفق بشدة بعمق أخذ العينات ونوع المضخة المستخدمة وحالة البئر ، والتي ترتبط ارتباطا وثيقا بخصائص المياه الخاصة بالموقع - مثل محتوى الرواسب - بالإضافة إلى الظروف الجوية السائدة والحديثة في وقت أخذ العينات.
عادة ما تحتوي معظم المضخات على أجزاء بلاستيكية يمكن أن تلوث العينات ، ومع ذلك لا تحدد معظم الدراسات نوع المضخة المستخدمة. يوصى باستخدام مضخات بجميع المكونات مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ. إذا لم يكن ذلك ممكنا ، فيجب تحديد المواد من حيث تركيبها الكيميائي باستخدام تحليل FTIR. يجب تضمين أطياف المواد المستخدمة في المكتبة ، ويجب مقارنة الجسيمات من العينات معها لحساب التلوث المحتمل.
بالنسبة للمضخات المجهزة بالدفاعات ، قد تتلف جزيئات MP الأكبر حجما أو حتى تجزئة أثناء مرورها عبر المضخة. لتجنب المبالغة في تقدير وجود النواب ، من الضروري تقييم ما إذا كانت مضخة أخذ العينات تساهم في تجزئة جزيئات البلاستيك. يمكن اختبار ذلك عن طريق إدخال عدد معروف من جزيئات MP المميزة جيدا في المياه التي تم تنظيفها مسبقا وضخها عبر نظام الترشيح. بعد الضخ ، يجب إعادة توصيف الجسيمات لتحديد ما إذا كانت هناك أي تغييرات فيزيائية - مثل التجزئة أو تغيير السطح. تساعد خطوة التحقق من الصحة هذه على ضمان أن عملية أخذ العينات لا تزيد بشكل مصطنع من عدد الميجابكسل بسبب التدهور الميكانيكي.
لتوفير كمية كبيرة من المياه المأخوذة من العينات ، من الضروري وجود نظام ترشيح مناسب للاستخدام في الحقل. في بروتوكولنا ، لتجنب التلوث ، فإن نظام الترشيح (نظام أخذ العينات حاصل على براءة اختراع بموجب SLO-P-202300155 وهو براءة اختراع معلقة EPO-EP24217168.4) مصنوع من الفولاذ المقاوم للصدأ مع جميع مكوناته ملحومة ولا يشمل التفلون (PTFE) أو أي شريط عازل آخر مصنوع من مواد بلاستيكية. نظرا لأن المرشحات يمكن أن تسد بسرعة كبيرة ، يتم تضمين الترشيح المتتالي كخيار ، والذي يمكن أن يسمح أيضا بالتوزيع المباشر للجسيمات في فئات الحجم المطلوبة. عادة ، يتم استخدام مرشحات بأحجام مسام 100 ميكرومتر و 20 ميكرومتر أو 10 ميكرومتر. يمكن إضافة مرشحات إضافية لمعالجة مشكلات الانسداد المحتملة (على سبيل المثال ، مرشح إضافي بمسام تتراوح بين 100 ميكرومتر و 20 ميكرومتر). يوصي ملحق قرار المفوض المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441 بالترشيح المتتالي بأربع مراحل: يحتوي المرشح الأول على مسام 100 ميكرومتر ، والثاني 20 ميكرومتر ، والثالث 100 ميكرومتر ، والرابع 20 ميكرومتر. يتم استخدام المرشحين الأولين لتحليل MPS ، ويستخدم المرشحان الثالث والرابع لتقييم مستويات تلوث MPS (مراقبة جودة أخذ العينات) وللتأكد من أن جميع الجسيمات قد تم تصفيتها بواسطة الأولين.
يجب تثبيت مقياس التدفق (خاصة إذا كان ميكانيكيا) بعد سلسلة المرشحات لأخذ العينات لقياس حجم المياه التي تم أخذ عينات منها بدقة. أثناء أخذ العينات ، من الضروري مراقبة ضغط النظام. إذا تجاوز الضغط 4 بارات ، فهذا يشير إلى انسداد المرشح ، ويجب إيقاف تشغيل النظام على الفور لمنع تلف الفلتر أو النظام. لتجنب تجزئة إضافية للنواب ، يجب إجراء أخذ العينات بأقل ضغط ممكن.
كما ذكرنا ، يقترح قرار المفوض المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441 استخدام مرشحات 100 ميكرومتر و 20 ميكرومتر. في هذه الدراسة ، تم استخدام مرشحات النايلون. ومع ذلك ، في هذه الحالة ، من الضروري جمع جزيئات MP من المرشحات ونقلها مباشرة إلى ATR-FTIR أو الشرائح العاكسة المناسبة للعمل في وضع الانعكاس باستخدام الفحص المجهري FTIR أو Raman تعتبر مرشحات شبكة النايلون فعالة في التصفية من خلال المرشحات ذات أحجام المسام 100 ميكرومتر ، حيث يمكن التعامل مع جزيئات بهذا الحجم يدويا. ومع ذلك ، عند استخدام مرشحات 20 ميكرومتر ، يوصى باستخدام مرشحات سيليكون أو مغلفة بالألمنيوم لتسهيل القياسات في وضع النقل أو الانعكاس باستخدام FTIR أو الفحص المجهري رامان.
تقترح الأدبيات أخذ عينات من 500 لتر على الأقل من الماء لتجنب التقليل من شأن وجود MPS34. وفقا لمرفق قرار المفوض المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441 ، يجب أخذ عينات من 1 م3 من الماء. يجب مراعاة الحجم الموصى به لتجنب المبالغة في تقدير تركيز MP في العينة. يزيد هذا الحجم الكبير من الماء من خطر انسداد المرشح ، مما يجعل الترشيح المتتالي موصى به للغاية.
يتم تحضير العينات من النظام المقدم على الفور لتحليل النواب باستخدام المجهر الفراغي. هذه طريقة فعالة للغاية من حيث الوقت والتكلفة. توضح العديد من الدراسات بالتفصيل خطوات المعالجة المسبقة لإزالة الرمل والمواد العضوية. ومع ذلك ، فإن هذه الإجراءات تستغرق وقتا طويلا وقد تنطوي على استخدام مواد كيميائية سامة. قد تؤثر خطوات المعالجة المسبقة هذه سلبا أيضا على النتائج لأنها تؤدي إلى تجزئة إضافية أو فقدان الجسيمات ، خاصة الجسيمات الأصغر (< 100 ميكرومتر)35. لذلك ، يفضل تجنب هذه الخطوات إلا إذا لزم الأمر. تم وصف هذه التعليمات أيضا في قرار المفوض المفوض (EU) 2024/1441 ، حيث يقترح إجراء تحليل العينة بواسطة التحليل الطيفي المجهري FTIR مباشرة على مرشحات التجميع الأصلية ، إذا كانت متوافقة مع الطريقة التحليلية المستخدمة ، ويتم استخدام خطوة التعويم إذا لزم الأمر.
أولا ، يتم تحليل عينات المرشح باستخدام المجاهر المجسمة ، حيث يتم توثيق كل جسيم بالصور ، وتصنيف الهوية ، وقياسه حسب الحجم ، وتقييمه للشكل. يعد تحديد الشكل أمرا مهما لأنه يمكن أن يوفر معلومات حول مصدر النواب. عادة ما تأتي الألياف من غسل المنسوجات وتنشأ من محطات معالجة مياه الصرف الصحي ، بينما تأتي الشظايا عادة من تدهور جزيئات البلاستيك الكبيرة في البيئة. في الجزء الثاني من التحليل ، يتم تحديد التركيب الكيميائي لكل جسيم باستخدام الفحص المجهري ATR-FTIR أو FTIR / Raman. بشكل عام ، يتم نقل جميع الجسيمات من المرشح إلى الشرائح العاكسة لإجراء التحليل في الوضع العاكس باستخدام الفحص المجهري FTIR. إذا تم جمع العينة على مرشح سيليكون 20 ميكرومتر ، فيمكن إجراء تحليل مباشر باستخدام مجهر Raman أو FTIR ، بشرط ألا يكون المرشح مغطى بشكل مفرط بجزيئات الرمل. إذا كانت الجسيمات مغروسة في الرمل ، فيمكن تطبيق فصل الكثافة و / أو المعالجات الكيميائية أو الأنزيمية لتقليل وجود المواد غير البلاستيكية مثل المعادن وأكاسيد المعادن والمواد العضوية الطبيعية. يجب تجفيف جزيئات MP قبل القياس ، حيث يمتص الماء بقوة إشعاع الأشعة تحت الحمراء.
لضمان مصداقية النتائج ، يجب مراعاة عناصر مراقبة الجودة التالية: أولا ، منع تلوث الهواء: لمنع تلوث الغلاف الجوي أثناء أخذ العينات ، يعد نظام الترشيح المغلق أمرا ضروريا. لتجنب التلوث المحمول جوا في عملية التحليل ، يلزم وجود طبقة مختبر من القطن الأبيض وترشيح الهواء من خلال مرشح HEPA. ثانيا ، منع التلوث بواسطة نظام التصفية: المكون الوحيد للنظام حيث لا مفر من البوليمرات هو الخراطيم. يوصى باستخدام خراطيم السيليكون ويجب استبدالها في حالة حدوث تلف مرئي. من الضروري معرفة مكونات المضخة واختبار المضخة بحثا عن التلوث المحتمل للعينات إذا تم إثبات وجود البوليمر. ثالثا ، منع التلوث أثناء العمل المخملي: فقط معدات المختبرات المصنوعة من الزجاج والمغسولة بالماء فائق النقاء مناسبة لتحليل النواب. رابعا ، عينات متوازية لضمان قابلية التكرار والدلالة الإحصائية للنتائج: يسمح نظام الترشيح هذا بأخذ عينات متزامنة من أربعة فروع. يجب الحصول على ثلاث عينات متوازية على الأقل لضمان نفس الظروف لجميع العينات ولتوفير الوقت. خامسا: يجب تضمين عينات فارغة في جميع خطوات أخذ العينات والعمليات المختبرية. أثناء أخذ العينات الميدانية ، يتم تركيب مرشحات فارغة 100 ميكرومتر و 20 ميكرومتر بعد مرشحات عينة 100 ميكرومتر و 20 ميكرومتر ، كما هو مقترح في ملحق قرار المفوض المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441. يجب مراعاة العينات الفارغة التي تم الحصول عليها في إجراء أخذ العينات في جميع الخطوات التحليلية باتباع نفس الإجراء.
يلبي البروتوكول الموضح في هذه الورقة جميع المتطلبات المنصوص عليها في قرار المفوض المفوض (الاتحاد الأوروبي) 2024/1441 ، وبالتالي ، يوفر موردا ممتازا لجميع الباحثين الذين يدرسون أو يراقبون النواب في المياه الجوفية. يمكن أيضا استخدام نظام الترشيح الموصوف للمياه العذبة أو المياه البحرية ، لأنه يتيح أخذ عينات من MPs على أعماق مختلفة. طريقة أخذ العينات بسيطة وسهلة الاستخدام وتوفر نتائج سريعة ودقيقة في معظم الحالات دون الحاجة إلى معالجة مسبقة للعينة.