مقالة منهجية

تطبيق علم البصريات الوراثي جنبا إلى جنب مع تسجيل القياس الضوئي للألياف في تنظيم الدوائر العصبية - الوظائف الحشوية عن طريق الوخز بالإبر الكهربائية

DOI:

10.3791/68667

⸱

سبتمبر 19, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغرض من هذه التجربة هو إنشاء نهج جديد للتكامل المتزامن لعلم البصريات الوراثي ، وتسجيل إشارة الكالسيوم داخل المخ ، ومراقبة حركة المعدة ، مما يوفر نموذجا جديدا للمراقبة في الوقت الفعلي للعلاقة بين التحفيز الجسدي وتفاعلات الدائرة العصبية والوظيفة الحشوية ، والتي يتم تطبيقها على أبحاث الوخز بالإبر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول تقنية للتلاعب البصري الجيني لأنواع معينة من الخلايا العصبية والتسجيل في الوقت الفعلي لتأثيرات الوخز بالإبر الكهربائية في Zusanli (ST36) على إشارات الكالسيوم النووية وحركة المعدة في الفئران تحت التخدير في الجسم الحي. كان استكشاف الآليات المركزية الكامنة وراء فعالية الوخز بالإبر محدودا بسبب القيود التكنولوجية. ومع ذلك ، فإن تقدم تكنولوجيا التصوير البصري والبصري قد دفع تطوير علم الأعصاب. يبرز تسجيل القياس الضوئي للألياف ، الذي يستفيد في البداية من مؤشرات الكالسيوم المشفرة وراثيا لتصور التغيرات في ديناميكيات الكالسيوم التي تدل على نشاط الخلايا العصبية ، كتقنية رئيسية لتوصيف ارتباطات سلوك الدماغ في الجسم الحي. يتيح تطبيق علم البصريات الوراثي الترميز الجيني للخلايا العصبية ، مما يتيح تنشيطها أو تثبيطها استجابة لتحفيز الضوء. تسهل هذه القدرة إنشاء روابط سببية بين وظيفة الدوائر العصبية والنتائج السلوكية. يوفر القياس الضوئي للألياف المتزامن وتسجيل الكالسيوم والتحفيز البصري الوراثي طريقة للتسجيل في الوقت الفعلي ومعالجة النشاط العصبي ، وهو بمثابة نهج فعال للتحقيق في الآليات المركزية للوخز بالإبر. ومع ذلك ، لا تزال هناك ندرة في الدراسات التي توثق الاستخدام المتزامن لقياس الألياف الضوئي ، وتسجيل الكالسيوم ، وعلم البصريات الوراثي ، ومراقبة الوظيفة الحشوية في أبحاث الوخز بالإبر. تظهر نتائج هذه التجربة أن EA-ST36 قد ينظم حركة المعدة المتعلقة بدائرة PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT . ينتج عن التحفيز البصري لهذه الدائرة نفس التأثير. بعد تراكب الاثنين ، تصل التغييرات في إشارة الكالسيوم وحركية المعدة إلى الحد الأقصى. أنشأت هذه الدراسة نهجا جديدا للتكامل المتزامن لتسجيل إشارات الكالسيوم البصرية والتطورية داخل المخ ومراقبة حركة المعدة ، مما يوفر نموذجا جديدا للمراقبة في الوقت الفعلي للعلاقة بين التحفيز الجسدي وتفاعلات الدائرة العصبية والوظيفة الحشوية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في السنوات الأخيرة ، أدى انتشار مستشعرات الفلورسنت الجزيئية الحيوية إلى دفع استخدام القياس الضوئي للألياف في البيولوجيا الجزيئية ، مما يسهل التسجيل في الجسم الحي 1. يتيح هذا التقدم المراقبة في الوقت الفعلي لتغيرات النشاط العصبي في الدماغ. يسمح تكامل علم البصريات الوراثي بمعالجة الخلايا العصبية ، مما يوفر ميزة إجراء علم الوراثة البصرية وتسجيل الألياف الضوئية على الفور عن طريق إدخال الألياف الضوئية. إلى جانب تسجيل الوظيفة الحشوية ، توفر هذه الطريقة دقة زمنية جيدة واستهداف على مستوى النواة لمراقبة كيفية تعديل الوخز بالإبر للوظائف الحشوية عبر تعديلات النشاط العصبي.

أوضحت العديد من الدراسات التأثير التنظيمي المميز للوخز بالإبر على وظيفة الجهاز الهضمي2،3،4 ، على الرغم من أن الآليات المركزية الدقيقة لا تزال بعيدة المنال. سجلت العديد من الكتب الطبية الصينية القديمة ، مثل HuangDiNeiJing ، أيضا أن ST36 (على الجانب الجانبي الخلفي لمفصل الركبة ، حوالي 2 مم أدنى من الشظيةcaput 5) غالبا ما يستخدم لعلاج أمراض الجهاز الهضمي. أظهرت الدراسات الحديثة أن النوى المشاركة في العمليات الفسيولوجية للمعدة (على سبيل المثال ، سلوك التغذية6 ، والتوقف عن تناول الطعام7 ، وقمع الشهية8) والعمليات المرضية (على سبيل المثال ، آلام المعدة9 ، وضعف المعدة10) تشمل النواة المجاورة للمهاد (PSTn) ، ونواة راف الظهرية (DRN) ، والنواة شبه العضدية الجانبية (LPB) ، ونواة السبيل الانفرادي (NTS) ، والنواة الحركية الظهرية للمبهم (DMV). أظهرت الدراسات أن الوخز بالإبر الكهربائية في ST36 يمكن أن يزيد من عدد خلايا c-Fos + في DMV ، وبالتالي زيادة تعبير c-Fos + في النواة الفرعية الذيلية ل NTS11. بالإضافة إلى ذلك ، تم توثيق أن النواة غير المركزية (PBN) متورطة في تكوين المركب النووي غير المركزي ، ويمكن أن تبرز وصولا إلى النخاع المستطيل NTS ، والذي يلعب دورا مهما في تكامل المعلومات الحسية الحشوية ، مثل إشارات الجهاز الهضمي12،13. تشير المعلومات المذكورة أعلاه إلى أن الوخز بالإبر يمكن أن يعدل حركة المعدة قد يكون مرتبطا بالدائرة العصبية PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT. تشارك الخلايا العصبية الجلوتاماتيرية بشكل أساسي في LPB و NTS14 ، بينما تشارك الخلايا العصبية الكولينية بشكل أساسي في DMV أثناء العمليات الفسيولوجية والمرضية في المعدة15. يمكن أن يوفر التحقيق في الآثار التنظيمية للوخز بالإبر على الدوائر العصبية والوظائف الحشوية فهما أوضح لآليات الوخز بالإبر ويوفر دعما نظريا لتدخلات الوخز بالإبر السريرية في الأمراض الحشوية.

ومع ذلك ، نظرا للقيود الفنية ، فقد تعمقت الأبحاث المحدودة في آليات الدوائر العصبية للوخز بالإبر الكهربائية في تعديل الوظائف الحشوية. لذلك ، تقدم الدراسة الحالية إرشادات مبسطة لإدخال العملية التفصيلية لحقن الفيروس. والجدير بالذكر أنه يمكن استخدام المنهجية الموضحة في هذه الورقة لتوضيح آليات الدوائر المتورطة في تنظيم الوخز بالإبر للوظائف الحشوية المتنوعة.

لذلك ، تهدف هذه الدراسة إلى التحقيق في الآثار التنظيمية للوخز بالإبر على حركة المعدة ، والتي قد تكون مرتبطة بالدائرة العصبية PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT من خلال الجمع بين علم البصريات الوراثي والقياس الضوئي للألياف لتسجيل تصوير الكالسيوم. الهدف هو إنشاء بروتوكول لتصوير الكالسيوم والمزامنة البصرية الوراثية ، وتقديم إطار بحثي جديد للتحقيق في الوظيفة الحشوية والدوائر العصبية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اتبعت جميع الإجراءات المبادئ التوجيهية لرعاية المختبر واستخدامها التي وضعتها المعاهد الوطنية للصحة وحصلت على موافقة من لجنة أخلاقيات رعاية واستخدامه التابعة لمعهد الوخز بالإبر والتموكسي ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية. تم استخدام الفئران الذكور البالغة C57 التي تزن 25 جراما للحقن الفيروسي وزرع الألياف الضوئية. التزم بروتوكول التجارب على بشكل صارم بمتطلبات المعيار الوطني "المبادئ التوجيهية للمراجعة الأخلاقية لرفاهية المختبر" (GB / T 35892-2018) وتمت الموافقة عليه من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة للمؤسسة.

ملاحظة: حافظ على نظافة البيئة أثناء عملية حقن الفيروسات وزرع الألياف الضوئية. ارتد أقنعة طوال العملية بأكملها. بعد فترة التعبير الفيروسي العالي (21-28 يوما) ، تم إجراء الوخز بالإبر الكهربائية في ST36 والتلاعب بالبصريات الوراثية لتسجيل حركة المعدة. تم إيواء في منشأة التابعة لمعهد الوخز بالإبر والكي ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية ، في ظل ظروف خاضعة للرقابة (درجة الحرارة: 22-24 درجة مئوية ، الرطوبة: 50٪ -60٪ ، دورة الضوء والظلام 12 ساعة) ، مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. يمكن العثور على معلومات محددة بخصوص الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.

1. التحضير قبل الجراحة

  1. تطهير الأداة الجراحية التي خضعت للتعقيم بدرجة حرارة عالية ، وتنظيف المنطقة الجراحية ب 70٪ إيثانول.
  2. التخدير: يتم تطبيق حقن داخل الصفاق بنسبة 1.25٪ ثلاثي البرومويثانول (0.2 مل/10 غ من الوزن) للفأر. تقييم عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم لقياس عمق التخدير.
  3. احلق شعر الرأس وضع الفئران في إطار تجسيمي مجهز بقضبان للأذن والأسنان. ضع مرهم الإريثروميسين على عيون الفئران لمنع التلف الناتج عن الضوء الجراحي.
  4. انقع حلقة الألياف الضوئية (حجم الطويق: 1.25 مم الطويق الأبيض ، نوع الألياف: 200 / 0.37 ، طول الألياف: 5.5 مم ، طراز إبرة الطويق: V8475) في 75٪ إيثانول لمدة 30 دقيقة ثم اغسل 70٪ الإيثانول بالمحلول الملحي.
  5. قم بتحميل الحاقن الدقيق (1 ميكرولتر) بالبارافين (800-900 نانوم). قم بإذابة الأنبوب الزجاجي واسحبه إلى قسمين. شحذ قسم واحد عند الحافة باستخدام آلة طحن الإبرة لتكون بمثابة إبرة حقن. من أجل ضمان إحكام الغاز للحاقن الدقيق ، املأ الأنبوب بالبارافين وقم بتوصيله بالحاقن الدقيق الموجود على الحافة باستخدام مسدس الغراء.

2. جراحة الحقن الفيروسي

  1. شق فروة الرأس على طول خط الوسط من العينين إلى مؤخرة الرقبة للكشف عن الجمجمة. بعد ذلك ، قم باستئصال عضلات الرقبة لفضح العظم القذالي. امسح سطح العظم ب H2O2 لمدة 30 ثانية ثم نظف بقطعة قطن جافة لإزالة اللفافة تحت الجلد والأنسجة الضامة (الشكل 1 أ).
    ملاحظة: هذه الخطوة هي تسهيل تغطية الأسمنت السني على العظم القذالي ، مما يجعل الألياف الضوئية أكثر ثباتا.
  2. قم بتسوية الجمجمة.
    1. تسوية المحور X: ضع علامة على نقطتين تبعدان 3.5 مم عن نقطة بريجيما في الخيط الإكليلي، وقم بتوصيل النقطتين لتشكيل خط. نقطة منتصف هذا الخط هي الصفر. يجب أن تكون القيمة المطلقة لفرق المحور Z على سطح العظم على بعد 3.5 مم من الأصل ≤ 0.03 مم.
    2. تسوية المحور Y: ضع علامة على نقطتين تبعدان 3.5 مم عن نقطة Lambda في خياطة lambdoid ، واضبط نقطة المنتصف للنقطتين ، وقم بتوصيل نقطة المنتصف هذه بنقطة Lambda لتشكيل خط. نقطة منتصف هذا الخط هي صفر آخر. يجب أن تكون القيمة المطلقة لفرق المحور Z بين هذا الصفر والصفر الذي تم عنده ضبط سطح العظم أثناء المحور X ≤ 0.03 مم.
  3. ضع علامة على الإحداثيات التجسيمية لحقن الفيروس بقلم علامة. ل PBN: -1.1 مم أمامي خلفي (AP ، المحور Y) ، -5.45 مم وسطي جانبي (ML ، المحور X) ، -3.3 مم ظهري بطني (DV ، المحور Z) (مع بريجما كنقطة الصفر) ؛ بالنسبة إلى NTS: -0.35 مم AP ، 0.2 مم ML ، -3.3 مم DV (مع أعلى نقطة في العظم القذالي كنقطة الصفر) ؛ بالنسبة ل DMV: -0.35 مم AP ، 0.0 مم (أعلى نقطة في العظم القذالي) ، -3.5 مم DV (مع أعلى نقطة في العظم القذالي كنقطة الصفر) (الشكل 1 ب). استخدم مثقاب دقيق عالي السرعة (قطر حفر 0.8 مم) لاختراق الجمجمة في المواقع المحددة لفضح سطح الدماغ. بعد ذلك ، استخدم ملقطا ناعما لثقب الأم الجافية برفق وإزالتها ، ضع المحلول الملحي على الفتحة المحفورة للحفاظ على الرطوبة على سطح الدماغ.
  4. ضع مادة لاصقة Single Bond Universal على سطح الجمجمة (باستثناء المنطقة المحفورة) وقم بتعريضها للضوء لمدة 30 ثانية للمعالجة. من المهم الحفاظ على سطح جمجمة جاف قبل تطبيق المادة اللاصقة العالمية ذات الرابطة المفردة لضمان التصاق قوي. بالإضافة إلى ذلك ، يجب تجنب المادة اللاصقة على العضلات أثناء التطبيق.
  5. قم بتثبيت الحاقن الدقيق على الذراع الميكانيكية لجهاز تجسيم. املأ ب 250 نانومتر من الفيروس (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA). عند ملامسة طرف الإبرة لسطح الدماغ ، اضبط العمق (Z) على 0. اخفض الإبرة إلى الموقع المستهدف داخل النواة المجاورة العضدية (PBN) ، وحقن الفيروس في منطقة PBN بمعدل 35 نانولتر / دقيقة. بعد الحقن ، احتفظ بالإبرة في مكانها لمدة 10 دقائق ، ثم اسحبها بسرعة 6 مم / دقيقة. بعد ذلك ، اغمر الإبرة في أنبوب Eppendorf يحتوي على محلول ملحي للتنظيف (الشكل 1C ، D).
    ملاحظة: جرعات الحقن لجميع الفيروسات التالية هي 250 نانولتر; DMV هو 100 nL16,17.
  6. استخدم البروتوكول المتطابق لحقن rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs في النواة المجرى الانفرادي (NTS) و rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA في النواة الحركية الظهرية للمبهم (DMV) (الشكل 1 د). جميع عيارات الفيروسات ≥ 1 × 1012 VG / مل.

3. جراحة زرع الألياف البصرية

  1. قم بتأمين حلقة الألياف الضوئية بواسطة حامل optrode وإرفاقها بالذراع الميكانيكي للجهاز التجسيمي. اضبط إحداثيات الزرع المقابلة لموضع حوالي 100 ميكرومتر فوق موقع الحقن الفيروسي DMV (الشكل 1E ، F).
  2. امزج 1-3 جم من أسمنت الأسنان مع 1 مل من الراتنج المقوى بدرجة حرارة الغرفة حتى يتجانس. قم بإدارة الخليط على الفور حول حلقة الألياف الضوئية وعلى سطح الجمجمة ، مع ترك 5 مم من الجزء العلوي من طويق الألياف الضوئية مكشوفا. بمجرد أن يتجمد الأسمنت ، حرر برغي الحامل ، وارفعه وقم بإزالته (الشكل 1 ز).
  3. استخدم خيوطا جراحية قابلة للامتصاص (6-0) لخياطة فروة الرأس القذالية الخلفية للفئران. قم بإزالة الفئران من الإطار التجسيمي وضعها في بيئة دافئة للتعافي من التخدير. بمجرد أن أظهرت حركة غير مقيدة ، تم نقلها إلى قفص نظيف وفسيح للإقامة ، مع وجود 4-5 فئران معا وسمح لها بالوصول المجاني إلى الطعام والماء.
    ملاحظة: خلال التجربة ، لوحظ أن القفص الأكبر مفيد للحركة الطبيعية للفئران وهو ضروري للحفاظ على وزنها. تقلل المساحة المتزايدة أيضا من احتمالية التلامس العرضي مع الألياف المزروعة ، وبالتالي تقليل الضرر المحتمل. أظهرت الفئران التي تزن 25 جراما أو أكثر تغيرات كبيرة في ضغط المعدة عند الوخز بالإبر.

4. جراحة إدخال البالون

  1. في ذروة التعبير الفيروسي (21-28 يوما) ، صيام الفئران لمدة 4-5 ساعات. بعد ذلك، تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من 1.25٪ ثلاثي البروموانثانول (0.1 مل/10 غرام من الوزن). بعد 15 دقيقة، يتم تطبيق محلول إيثيل كاربامات 10٪ داخل الصفاق (0.15 مل/10 غ من الوزن). قم بتقييم عمق التخدير من خلال تأكيد عدم وجود رد فعل قرصة إصبع القدم.
  2. احلق شعر مناطق البطن و ST36. قم بتشغيل وسادة التدفئة واضبطها على الحفاظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية ، مع إبقاء على وسادة التدفئة طوال الجراحة لضمان درجة حرارة ثابتة للجسم.
  3. قم بتوصيل بالون اللاتكس بالمحقنة وحقن الهواء فيه للتحقق من عدم وجود تسرب للهواء في بالون اللاتكس (BS4 73-2787).
  4. كشف المعدة وجزء من الاثني عشر أسفل عملية الخنجر. قم بعمل شق صغير في الاثني عشر بطول 0.3 سم تقريبا ، 0.5-1 سم بعيدا عن البواب.
  5. أدخل البالون في المعدة على طول اتجاه الأمعاء من خلال شق الاثني عشر ، مع وضع العقدة عند الجيب البواب.
  6. قم بإزالة إبرة المحقنة ، واملأ 5 مل من الماء النقي ، وقم بتفريغ الهواء ، وقم بتوصيل الطرف الآخر من البالون بالمحقنة. اسحب قفل اللورية الخاص بالمحقنة لأعلى لتفريغ الغاز من البالون ، ثم اخفض قفل اللور لحقن الماء النقي في البالون. قم بتوصيل المجموعة بمحبس ثلاثي الاتجاهات ومحول ضغط.

5. التسجيل المتزامن للضغط داخل المعدة وتصوير الكالسيوم

  1. قم بتشغيل نموذج Neurolog Digitimer و CED Micro1401-4 و Inper Studio ونظام تسجيل الألياف الضوئية متعدد القنوات وبرنامج Inper Signal وبرنامج Spike 2. اضبط برنامج Inper ، وتسجيل إشارة الكالسيوم ليتم تشغيله بواسطة برنامج Spike2 والمحفز البصري ، مما يضمن توافق تحفيز الليزر واكتساب إشارة الكالسيوم بواسطة برنامج Inper مع تسجيل الضغط داخل المعدة بواسطة برنامج Spike2.
  2. افتح جميع محبس الاتجاهات ثلاثية الاتجاهات التي تتصل بالبالون ، وقم بتدوير مقبض ZERO في نموذج رقمي Neurolog ، ولاحظ على برنامج Spike 2 ما إذا كان خط الأساس قد تم ضبطه على النقطة 0. بعد معادلة الضغط داخل البالون بالضغط الجوي ، قم بحقن الماء النقي في البالون حتى يتم عرض الضغط داخل المعدة 15-35 سم H2O. بمجرد وصول كل من الضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم إلى حالة مستقرة ، سجل خط أساس 60 ثانية للضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم في DMV (الشكل 2 أ).

6. الوخز بالإبر الكهربائية في ST36 وتحفيز الليزر

  1. أدخل إبرة الوخز بالإبر (0.25 مم × 25 مم) في نقطة الوخز بالإبر ST36 اليسرى وقم بتوصيلها بجهاز الوخز بالإبر الكهربائي (10 هرتز ، 1 مللي أمبير). يتم تطبيق الوخز بالإبر الكهربائي لمدة 60 ثانية مع تسجيل التغيرات في الضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم.
  2. بعد تثبيت الضغط الأساسي داخل المعدة وإشارات الكالسيوم ، قم بتوصيل التحفيز البصري (635 نانومتر ، 5 مللي ثانية ، 5 هرتز ، 30 ميجاوات) من خلال الألياف لمدة 60 ثانية ، ومراقبة التغيرات في الضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم.
  3. بمجرد أن يستقر خط الأساس للضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم مرة أخرى ، اجمع بين الوخز بالإبر الكهربائية عند ST36 (10 هرتز ، 1 مللي أمبير) مع التحفيز البصري الوراثي (635 نانومتر ، 5 مللي ثانية ، 5 هرتز) لمدة 60 ثانية ، وسجل التغيرات في الضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم.

7. الفحص النسيجي للحقن الفيروسي ووضع الألياف

  1. بعد الانتهاء من البروتوكولات المذكورة أعلاه ، قم بتركيب الفئران بمحلول ملحي وقم بتثبيتها بنسبة 4٪ بارافورمالديهايد عن طريق القلب على الفور. حصاد أدمغة الفئران. قم بإجراء الجفاف المتدرج باستخدام محاليل السكروز بنسبة 20٪ و 30٪ ، ثم قم بالتقسيم بعد التضمين باستخدام عامل تضمين سريع التجميد. قارن شرائح الدماغ بخرائط دماغ الفئران لملاحظة ما إذا كانت مواضع حقن الفيروسات وزرع الألياف الضوئية دقيقة. أيد الوضع الدقيق للحقن الفيروسية وغرسات الألياف صحة الضغط داخل المعدة وبيانات إشارة الكالسيوم (الشكل 1H ، I).

8. تحليل البيانات

  1. تحليل بيانات إشارة الكالسيوم باستخدام برنامج Inper Data Analysis وبيانات حركة المعدة بواسطة برنامج Spike2. قارن الاختلافات بين إشارات الكالسيوم أو اتساع حركة المعدة في وقت التحفيز (60 ثانية) وتلك التي تسبق التحفيز (60 ثانية) لمراقبة التأثيرات التنظيمية للمنبهات المختلفة على حركة المعدة وإشارات الكالسيوم. جميع البيانات الموضحة في الشكل 2 هي الرسوم البيانية للبيانات الأصلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم حقن الفيروسات في النواة شبه العضدية (PBN) ، والنواة المفصلية المنعزلة (NTS) ، والنواة الحركية الظهرية للمبهم (DMV) للفئران ، مع ألياف مزروعة في DMV (الشكل 1A-G). خلال فترة ذروة التعبير الفيروسي ، تم تسجيل الاختلافات في الضغط داخل المعدة وإشارات الكالسيوم داخل DMV بعد الوخز بالإبر الكهربائية في ST36 والتحفيز البصري الوراثي. الهدف من هذه الدراسة هو مراقبة التأثيرات التنظيمية للوخز بالإبر الكهربائية في ST36 والتحفيز البصري على حركة المعدة ، والتي قد تكون مرتبطة بالدائرة العص...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتعلق البحث العلمي المركزي للوخز بالإبر بتنظيم الأعضاء المستهدفة من خلال تحفيز نقاط الوخز بالإبر للأعصاب اللاإرادية. اقترحت النتائج التي اقترحها Q. Ma أن تأثير الوخز بالإبر على تعديل وظيفة الأعضاء البعيدة ينشأ من ردود الفعل اللاإرادية الجسدية التي تنشط المسارات الودية و / أو السمبتاوي ، خاصة تلك المتعلقة بأمراض الجهاز الهضمي والالتهابات الجهازية18. ومع ذلك ، فقد تركزت الأبحاث الموجودة في الغالب على تحقيقات الأعصاب المحيطية أو مناطق الدماغ المعزولة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82174518 ، 82474661) ، وصناديق البحوث الأساسية لمعاهد أبحاث الرفاهية العامة المركزية (ZZ-2023008) ، ومشروع الابتكار العلمي والتكنولوجي التابع للأكاديمية الصينية للعلوم الطبية الصينية (CI2021A03402).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>فيروس
rAAV-CaMKII &alpha ؛ -CRE-WPRE-hGH polyA (AAV2 / 9)برين VTAالقط # PT-0020
rAAV-CaMKII &alpha ؛ -DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2 / 9)برين VTAالقط # PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)برين VTAالقط # PT-10973
<قوي>أخرى
1 μ ل microinjectorهاملتون80135
3M EPSP واحد بوند لاصق عالميمسؤول عالم طب الأسنان41269
إبرة الوخز بالإبرتشونغيانتايهي0.25 / 13 ثانية
سيد مايكرو 1401-4CED (إنجلترا)1401-4
أسمنت الأسنان / راتنج مقوى بدرجة حرارة الغرفةياماهاتشي لطب الأسنانغير متاح
ملقط ناعمRWDF11028-13
أنبوب زجاجيالأدوات الدقيقة العالمية504949
HANS-200Aمعهد هانزHANS-200
إشارة Inper (برنامج)إنبرغير متاح
استوديو إنبر (فينوس)إنبرب 1502
بالون اللاتكسجهاز هارواردBS4 73-2787
نظام تسجيل الألياف الضوئية متعدد القنوات (Vista Pro)إنبر5268 راند
نموذج الرقمية العصبية   ؛ديجيتيمرNL900D
حلقة الألياف الضوئية   ؛إنبرالمحرك V8475
سبايك 2 (برنامج)CED (إنجلترا)غير متاح
أدوات التجسيم (مع حاسبة الإحداثيات)ديفيد كوبف إنسترومنتسكوبف 942
ثلاثي البروموإيثانولسيغماتي 48402
ثلاثي بروموإيثانولسيجما تي 48402

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, S., et al. Perspective of calcium imaging technology applied to acupuncture research. Chin J Integr Med. 30 (1), 3-9 (2024).
  2. Xu, X., et al. Mechanism of electro-acupuncture in alleviating intestinal injury in septic mice via polyamine-related M2-macrophage polarization. Front Immunol. 15, e1373876(2024).
  3. Yaklai, K., Pattanakuhar, S., Chattipakorn, N., Chattipakorn, S. C. The role of acupuncture on the gut-brain-microbiota axis in irritable bowel syndrome. Am J Chin Med. 49 (2), 285-314 (2021).
  4. Wang, X. Y., Wang, H., Guan, Y. Y., Cai, R. L., Shen, G. M. Acupuncture for functional gastrointestinal disorders: a systematic review and meta-analysis. J Gastroenterol Hepatol. 36 (11), 3015-3026 (2021).
  5. China Association of Acupuncture and Moxibustion. Nomenclature and location of acupuncture points for laboratory animals Part 3: Mouse. World J Acupunct Moxibustion. 35 (2), 160-166 (2025).
  6. Chen, J., et al. A vagal-NTS neural pathway that stimulates feeding. Curr Biol. 30 (20), 3986-3998 (2020).
  7. Campos, C. A., Bowen, A. J., Schwartz, M. W., Palmiter, R. D. Parabrachial CGRP neurons control meal termination. Cell Metab. 23 (5), 811-820 (2016).
  8. Zhang, T., Perkins, M. H., Chang, H., Han, W., de Araujo, I. E. An inter-organ neural circuit for appetite suppression. Cell. 185 (14), 2478-2494 (2022).
  9. Zhang, F. C., et al. A vagus nerve dominant tetra-synaptic ascending pathway for gastric pain processing. Nat Commun. 15 (1), 9824(2024).
  10. Dong, W. Y., et al. Brain regulation of gastric dysfunction induced by stress. Nat Metab. 5 (9), 1494-1505 (2023).
  11. Iwa, M., Tateiwa, M., Sakita, M., Fujimiya, M., Takahashi, T. Anatomical evidence of regional specific effects of acupuncture on gastric motor function in rats. Auton Neurosci. 137 (1-2), 67-76 (2007).
  12. Browning, K. N., Travagli, R. A. Central nervous system control of gastrointestinal motility and secretion and modulation of gastrointestinal functions. Compr Physiol. 4 (4), 1339-1368 (2011).
  13. Sun, L., et al. Parabrachial nucleus circuit governs neuropathic pain-like behavior. Nat Commun. 11 (1), 21(2020).
  14. Simpson, E., et al. Lights, fiber, action! A primer on in vivo fiber photometry. Neuron. 112 (5), 718-739 (2024).
  15. Tao, J., et al. Highly selective brain-to-gut communication via genetically defined vagus neurons. Neuron. 109 (13), 2106-2115 (2021).
  16. Yao, L., Ye, Q., Liu, Y., et al. Electroacupuncture improves swallowing function in a post-stroke dysphagia mouse model by activating the motor cortex inputs to the nucleus tractus solitarii through the parabrachial nuclei. Nat Commun. 14 (1), 810(2023).
  17. Lyu, Q., Xue, W., Liu, R., et al. A brain-to-gut signal controls intestinal fat absorption. Nature. 634 (8035), 936-943 (2024).
  18. Ma, Q. Somatotopic organization of autonomic reflexes by acupuncture. Curr Opin Neurobiol. 76, e102602(2022).
  19. Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
  20. Liu, S., et al. Somatotopic organization and intensity dependence in driving distinct NPY-expressing sympathetic pathways by electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
  21. Luo, L. Architectures of neuronal circuits. Science. 373 (6559), eabg7285(2021).
  22. Yuan, Z., et al. A corticoamygdalar pathway controls reward devaluation and depression using dynamic inhibition code. Neuron. 111 (23), 3837-3853 (2023).
  23. Feng, J., et al. Monitoring norepinephrine release in vivo using next-generation GRABNE sensors. Neuron. 112 (12), 1930-1942 (2024).
  24. Smith, J., et al. Regulation of stress-induced sleep fragmentation by preoptic glutamatergic neurons. Curr Biol. 34 (1), 12-23 (2024).
  25. Li, Y., Liu, Z., Guo, Q., Luo, M. Long-term fiber photometry for neuroscience studies. Neurosci Bull. 35 (3), 425-433 (2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة