مقالة منهجية

استئصال اللمفاوية الميساريتيكية للفأر لاضطراب انتقائي في التواصل اللمفاوي مع الأمعاء الخاصة بالمنطقة المحددة

DOI:

10.3791/68696

⸱

ديسمبر 30, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Yale University School of Medicine, 2Department of Immunobiology, Yale University School of Medicine, 3Department of Internal Medicine, Section of Rheumatology, Yale University, 4Howard Hughes Medical Institute, Yale University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول إجراء البقاء لاستئصال الغدة الليمفاوية المسارقي الآمن والجيد في كل من أربع محطات على طول سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية. هذه العملية قابلة للتكيف للسماح باضطراب انتقائي في التواصل اللمفاوي مع القولون البعيد، القولون القريب، و/أو الأمعاء الدقيقة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المراقبة المناعية مقابل تحمل المستضدات هو توازن دقيق داخل البيئة الدقيقة للأمعاء، حيث يعرف الدور الحاسم لتحضير الخلايا التائية المتداولة داخل العقد اللمفاوية المحلية. بعد تمهيد الخلايا التائية، بدأت الأدبيات الحديثة تظهر دورا فريدا وغير مكرر لخلايا T غير المتداولة في العقدة اللمفاوية المتصية للعضو. قد يكون هذا صحيحا بشكل خاص في الأمعاء، حيث يعرف أن تصريف اللمفاوف محدد للغاية. ومع ذلك، لفهم التأثير الفريد لهذه الخلايا المحلية مقابل التكرار الوظيفي الجهازي، يحتاج المجتمع العلمي إلى إجراء موضح جيدا لعزل هذه العقد وتحريبها بشكل انتقائي. موضح هنا إجراء للبقاء على قيد الحياة لاستئصال اللمفاوية المسارقي الآمن والمحتمل جيدا في كل من المحطات الأربع على طول سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية. هذه العملية قابلة للتكيف للسماح باضطراب انتقائي في التواصل اللمفاوي مع القولون البعيد، القولون القريب، و/أو الأمعاء الدقيقة. تتضمن التعليمات التفصيلية، والمساعدات البصرية، ونصائح مفيدة لتحسين النجاح، وحل المشكلات للبقاء على قيد الحياة دون المستوى الأمثل. تكون العقد اللمفاوية المقطوعة جاهزة فورا لمزيد من المعالجة لاحقا إذا رغبت في ذلك. هذه التقنية مناسبة بشكل أفضل للدراسات التي تتطلب اضطرابا انتقائيا لتصريف اللمف من القولون البعيد، القولون القريب، و/أو الأمعاء الدقيقة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا التائية هي واحدة من الأنواع الرئيسية للخلايا المؤثرة في المناعة التكيفية، مع أدوار موصوفة عبر فئات مرضية متنوعة، بما في ذلك العدوى، والمناعة الذاتية، والسرطاناتالخبيثة 1,2,3. خطوة حاسمة لوظيفة الخلايا التائية هي التحضير ثلاثي الأطوار بواسطة الخلايا المقدمة للمستضدات داخل الأعضاء اللمفاوية الثانوية، مثل العقد اللمفاوية المحلية4. في الطب الحديث، تشمل الركيزة الأساسية للاستئصال الأورامي الصحيح عبر عدة أعضاء درجة معينة من أخذ عينات موضعية أو استئصال العقد اللمفاوية الكتلة 5,6,7,8. على سبيل المثال، في سرطان القولون، توصي الإرشادات المتفق بإزالة 12 عقدة لمفاوية وفحصها في عملية استئصال بهدف الشفاء بسبب ارتباط واضح مع تحسين البقاء على المدى الطويل 6,7. ومع ذلك، هل يمكن استئصال العقد اللمفاوية المحلية دون رادع؟ أظهرت الدراسات الحديثة على الفئران أن العقدة اللمفاوية التي تصرف الورم تحتوي على مخزون من المواد السلفية المضادة للورم التائية، والتي يمكن حمايتها من التمايز النهائي وإرهاق الخلايا التائية الذي يحدث داخل البيئة الدقيقة للورم 9,10,11. وهذا يشير إلى أن إزالة مثل هذه المجموعة الحرجة قد تضعف قدرات المراقبة المناعية المستمرة.

من المعروف أن نمط تصريف اللمفاوف في الأمعاء في الفئران متخصص جدا على طول سلسلة العقد اللمفاوية المساريقيقية؛ على سبيل المثال، يتم تصريف القولون القريب تقريبا حصريا من محطة العقدة اللمفاوية الأولى، والأمعاء الدقيقة من المحطة الثانية/الثالثة، والقولون البعيد بشكل رئيسي من محطة العقدة اللمفاوية الرابعةرقم 12 (الشكل 1، الشكل التكميلي 1). وبالتالي، يمكن تعطيل التواصل المباشر بين أجزاء الأمعاء واللمفاويات من خلال الاستئصال المستهدف لهذه العقد. لمنع التنقل بين العقد اللمفاوية والأنسجة، تستخدم عادة منشطات مستقبلات S1P مثل FTY720 وحجب الإنتيرين؛ ومع ذلك، فإن هذه الأدوية تثبط الاتجار بشكل عام، وبالتالي لا يمكن استخدامها لدراسة مساهمة العقد اللمفاوية المحددة13,14. ومع ذلك، فإن قدرة المجتمع العلمي الأوسع على دراسة التأثير المحلي للتفاعلات المناعية داخل العقد اللمفاوية المعوية محدودة بسبب غياب استئصال جراحي موضح جيدا لكل محطة. مع وضع هذه الفجوة في الاعتبار، تم تطوير إجراء بقاء لاستئصال اللمفاوية العضلية في كل محطة عقدة ويتم وصفه هنا. الهدف العام من هذا الإجراء هو تحقيق استئصال آمن وموثوق لمحطة أو محطات العقد اللمفاوية الميسارية في الفئران ذات معدلات بقاء وتحمل مرتفعين بعد العملية.

تم اختبار هذا الإجراء وينفذ بسهولة في فئران صغيرة وبالغة عبر عدة سلالات (مثل Balb/c، C57BL/6J، 129S4)، لكنه محدود بالحاجة إلى عقد لمفاوية سهلة الوصول وسهلة التحديد. لذلك، قد لا يكون مناسبا للدمج مع نماذج الفئران أو الأنماط الجينية التي تحتوي على عقد لمفاوية أصغر من المعتاد أو غير ملحوظة (مثل الفئران التي تفتقر إلى الليمفوتوكسين-ألفا)15. بالإضافة إلى ذلك، تميل الفئران الأكبر سنا (>15 أسبوعا) إلى زيادة السمنة الحشوية، مما يجعل تحديد وعزل العقد اللمفاوية أكثر صعوبة، وعلى الرغم من أن هذا ليس مانع في العلاج، إلا أنه قد يكون محدودا للنجاح أو الإجراءات. بعيدا عن هذه القيود، يوفر استئصال الوظمة اللمفاوية المساريقية اضطرابا دقيقا وانتقائيا للغاية للعقد اللمفاوية. سيكون هذا الإجراء الأنسب لحل الأسئلة حول التأثير المحلي للعقد اللمفاوية وخلايا المناعة المقيمة المرتبطة بها والتفاعلات على أجزاء الأمعاء (مثل القولون القريب، القولون البعيد، الأمعاء الدقيقة).

figure-introduction-1
الشكل 1: المعالم التشريحية للمحطات في سلسلة العقد اللمفاوية الميزاريوية. (أ) تصوير غير مميز و(ب) معنون لأربع محطات رئيسية للعقد اللمفاوية المضاريوية في الموقع. تصريف القولون القريب يكون بشكل رئيسي عبر المحطة 1، والأمعاء الدقيقة تكون في المحطة 2/3، والقولون البعيد هو المحطة 4. (DC= القولون البعيد، ICV= الأوعية اللفائفي القولونية، PC= القولون القريب، CEC= القمص، IV/JV = الأوعية اللفائفية/الأوعية الحضنية، SI= الأمعاء الدقيقة). أشرطة المقياس: 1.5 سم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تجرى جميع الإجراءات وفقا لبروتوكولات لجنة رعاية واستخدام في مؤسسة ييل. لتطوير هذا الإجراء، تم استخدام سلالة C57BL/6 عمرها 8-12 أسبوعا، وفئران من النوع البري، وأدوات تحكم وهمية مطابقة للعمر/جنس/النمط الجيني. تم تضمين كل من الفئران الذكور والإناث. تراوح وزن الجسم بين 18-25 جرام. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير الأدوات وغرفة العمليات

  1. قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية. تأكد من تنظيف سطح التشغيل ومخروط أنف المخدر بنسبة 70٪ إيثانول.
  2. قم بتركيب جهاز تبخير التخدير المستنشق مع مخروط أنف وشفط لإزالة التخدير الزائد. قم بإعداد سطح تشغيل مع وسادة مياه دافئة للحفاظ على درجة حرارة جسم والإمدادات في مكان مناسب ومعقم.
    ملاحظة: هذا الإجراء لا يتطلب مجهر تشغيل؛ ومع ذلك، فكر في تضمين هذه الأداة لتحسين التصور.
  3. تحفز التخدير عن طريق إعطاء إيزوفلوران مستنشق بنسبة 2٪-3٪ مع معدل تدفق للأكسجين 2 لتر/دقيقة عبر مخروط الأنف من جهاز تبخير مخدر مستنشق (وفقا لبروتوكولات معتمدة مؤسسيا).
    1. تأكد من مستوى التخدير المناسب من خلال التأكد من معدل تنفس يقارب 30-40 نفسا/دقيقة وعدم الاستجابة لقرص القدم الخلفية. أعد التحقق بشكل دوري عن المستوى المناسب للتخدير وضبط معدل تدفق الإيزوفلوران وفقا لذلك.
      ملاحظة: بدلا من ذلك، المخدر القابل للحقن مناسب أيضا.
  4. اتبع إرشادات المعهد للحصول على المسكنات المناسبة والتخدير الموضعي. على سبيل المثال، إعطاء مسكن طويل المفعول مثل 3.25 ملغ/كجم بوبرينورفين XR تحت الجلد وإعطاء حتى 0.04 مل/5 جرام من وزن الجسم من محلول ليدوكائين تحت الجلد عند الشق المخطط له.
  5. جهز للإجراء عن طريق وضع الجلوس، ووضع مزلق العين، ونتف أو قص فرو البطن، وتعقيم البطن بمحلول بوفيدون/يود، ثم 70٪ إيثانول (الشكل 2A).
  6. استخدم قفازات معقمة ووضع ستائر معقمة فوق مع نافذة على مجال العملية. حافظ على العقم طوال العملية.

figure-protocol-1
الشكل2: صور تمثيلية للخطوات الإجرائية الرئيسية في استئصال الغدة اللمفاوية المساريقية. (أ) نافذة بطن منقعة ومعقمة. (ب) شق بقطر 0.5 سم عبر الجلد والخط الألبي. (ج) تعرض سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية عن طريق توجيه اللفائفي إلى اليمين، والقولون القريب إلى اليسار، والسقوص السفلي. تقع العقدة اللمفاوية الأولى المساريقيقية على طول الشريان اللفائفي (السهم الأبيض). (د) العقدة اللمفاوية المسرقيقة المستأصلة (سهم باهت). أشرطة الميزان: 0.5 سم (شرقا) العقدة اللمفاوية الميزانريكية خارج الجسم الحي (سهم أبيض؛ 2.5 مم × 3 مم). القراد = 1 مم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

2. التحضير لاستئصال الوظن العضلي اللمفاوي

  1. قم بعمل شق منتصف بقطر 0.5-1 سم عبر الجلد. قم بتشريح الجلد بشكل غير مباشر بعيدا عن جدار البطن وتحديد الخط الألبي. قم بعمل شق بقطر 0.5-1 سم عبر الخط الألبي للوصول إلى التجويف البريتوني (الشكل 4B).
    ملاحظة: لتحسين الوصول إلى عقد المحطة 2/3/4، فكر في تمديد الرأس الشرق، ولكن ليس لتجاوز عملية التزيفوئيد الغضروفية.
  2. قم بغرس 1 مل من محلول ملحي معقم بدرجة حرارة الجسم في تجويف الصفاق عبر إبرة جافاج ذات طرف عريض وترطيب الستائر المعقمة استعدادا لوضع الأمعاء. استخدم مسحات معقمة ومبللة بأطراف قطنية لتحديد وإزالة الأحشاء من خلال الشق.
    1. تجنب استخدام الأدوات الحادة للتعامل مع الأمعاء، لأن ذلك قد يؤدي إلى إصابة. أعد ترطيب الستائر والأمعاء بشكل دوري لمنع التلف الناتج عن الجفاف.
      ملاحظة: عادة ما يقيم النفث الفأري في الربع السفلي الأيسر من البطن، لكنه يمكن أن يحتضن في أي ربع.
  3. حدد محطة أو محطات العقد اللمفاوية المضرقية المستهدفة للاستئصال واتبع التعليمات المحددة أدناه (أي 3.1-3.4). انظر الشكل 1A,B للمعالم التشريحية والتحديد.

3. تشريح واستئصال محطات العقد اللمفاوية المساريقية

  1. محطة العقد اللمفاوية الأولى (تصريف القولون القريب؛ الشكل الإضافي 1A,B').
    1. وجه الأمعاء الخارجية على ستائر مبللة مع وجود الساق السفلي والقولون القريب من الأعلى، واللفائفي النهائي نحو الجانب الأيسر للجراح (الجانب الأيسر للحيوان؛ الشكل 1A، الشكل 2C).
    2. حدد سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية، التي تمتد طوليا على طول القولون. باستخدام ملقط ذو طرف دقيق مائل، قم بتشريح محطة العقد اللمفاوية الأولى بعيدا عن الأوعية اللفائفية عن طريق وضع ملقط مغلق في الفراغ بين هذه الهياكل والسماح للملقط بالفتح بلطف.
      1. قم بإزالة الملقط وكرر هذه الحركة 2-3 مرات أو حتى يتم إنشاء مستوى كاف للاستئصال الآمن. تجنب تلف الأوعية الدموية القولونية الرئيسية (الشكل 3A,B).
        ملاحظة: إذا حدث نزيف كبير، أوقف الإجراء وقم بإعدام بطريقة إنسانية (وفقا للبروتوكولات المعتمدة من المؤسسات).
    3. اختياري: لتقليل الخطر النظري للمواد الجانبية للعقد القريبة، قم بربط خياطة اختياري باستخدام غرز مفردة متقطعة على طول سلسلة العقد اللمفاوية (غرز بعيد 1 مم وغرز 1 مم قريب من محطة العقدة اللمفاوية الأولى) باستخدام غرز نايلون أحادي الخيط الأسود 9-0 وملقط رفيع الأطراف لدفع الإبرة (الشكل 3C,D).
    4. قم بسحب ذيل المحطة اللمفاوية المربوط بلطف وباستخدام مقص دقيق الرأس، قم بإزالة محطة العقد اللمفاوية المستهدفة من الرأس إلى الذيل (الشكل 3E).
      ملاحظة: غالبا ما يكون لدى الفئران وعاء تغذية صغير لكنه مرئي من الشريان اللفائفي إلى الجانب الخلفي للعقدة اللمفاوية. يمكن التحكم في النزيف من هذا الوعاء بضغط لطيف باستخدام مسحة ذات رأس قطني حتى يتم التوفيق الدموي.

figure-protocol-2
الشكل3: صور موضحة وتعليقات من استئصال الغدة الليمفاوية الميسارية (المحطة الأولى). (أ) التوجيه الصحيح للأمعاء يكشف عن أول محطة للعقدة اللمفاوية الميزاريكية (السهم الأبيض). (ب) يتم إنشاء مستوى بين الشريان الليلي (البلوآرو) والعقدة. (ج) يتم ربط الأوعية المغذية التي تدخل قمة العقدة اللمفاوية (السهم الأزرق) بالخياطة مع استبعاد الأوعية الليليوكولية عن طريق الخروج من الفراغ بين هذه الهياكل (السهم الأبيض). (د) يتم ربط قاعدة العقدة اللمفاوية بالخياطة، مع ملاحظة وتجنب الفروع البعيدة للشريان اللحلفي القولوي. (ه) يتم استئصال العقدة على طول مستوى الأنسجة الذي تم إنشاؤه سابقا، مع البقاء مرتفعا نحو العقدة اللمفاوية وترك خلفها روابط خياطة (أسهم سوداء). (و) تم تأكيد الورم الدموي، وملاحظة فروع بعيدة للشريان الليليوكولي لضمان تدفق الدم السليم، ويتم ملاحظة أن الفراغ (السهم الباهت) حيث كانت العقدة تعيش سابقا خال من العقدة المتبقية. أشرطة القياس: 0.5 سم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

  1. محطة العقد اللمفاوية الثانية (تصريف الأمعاء الدقيقة في منتصف البعيد)
    1. قم بتمزيق الأمعاء الدقيقة بلطف أيضا. وجه الأمعاء الخارجية على الستائر المبللة بحيث يكون الساق في الأسفل، والقولون القريب من الأعلى، والأمعاء الدقيقة باتجاه الجانب الأيسر للجراح (الجانب الأيسر للحيوان؛ الشكل 1A).
    2. حدد سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية، التي تمتد طوليا على طول القولون. تبدأ المحطة الثانية عند التقاء الأوعية اللعدفية/الججونية (الشكل 1B).
      1. باستخدام ملقط ذو طرف دقيق مائل، قم بتشريح العقدة اللمفاوية الثانية بعيدا عن الأوعية القولونية بوضع ملقط مغلق في الفراغ بين هذه الهياكل والسماح للملقط بالفتح بلطف.
      2. قم بإزالة الملقط وكرر هذه الحركة 2-3 مرات أو حتى يتم إنشاء مستوى كاف للاستئصال الآمن. تجنب تلف الأوعية الدموية القولونية الرئيسية. أيضا، انتبه بشكل خاص للأوعية اللفائفية والعنكبوتية الصغيرة، والتي قد تكون ضارة إذا تعرضت للإصابة.
        ملاحظة: إذا حدث نزيف كبير، أوقف الإجراء وقم بإعدام بطريقة إنسانية.
    3. اختياري: لتقليل الخطر النظري للغرز الجانبية على العقد القريبة، أجر ربط خياطة اختياري باستخدام غرز مفردة متقطعة على طول سلسلة العقد اللمفاوية (واحدة بعيدة 1 مم وأخرى 1 مم قريبة من محطة العقد اللمفاوية الثانية) باستخدام غرز نايلون أحادية الخيط الأسود 9-0 وملقط رفيع الرأس لدفع الإبرة (الشكل 2A الإضافي).
    4. قم بسحب المحطة اللمفاوية المربوطة بلطف وباستخدام مقص دقيق النقطة، قم بإزالة محطة العقد اللمفاوية المستهدفة من الرأس إلى الذيل (الشكل التكميلي 2B).
      ملاحظة: غالبا ما يكون لدى الفئران وعاء تغذية صغير لكنه مرئي من الشريان اللفائفي إلى الجانب الخلفي للعقدة اللمفاوية. يمكن التحكم في النزيف من هذا الوعاء بضغط لطيف باستخدام مسحة ذات رأس قطني حتى يتم التوفيق الدموي.
  2. محطة العقد اللمفاوية الثانية والثالثة (تصريف الأمعاء الدقيقة بالقرب من منتصف البعيد؛ الشكل الإضافي 1C,D'
    1. قم بإزالة أحشاء الأمعاء الدقيقة بالكامل بلطف حتى تصل إلى نقطة الربط الخلفي (رباط ترايتز). وجه الأمعاء الخارجية على الستائر المبللة بحيث يكون الساق في الأسفل، والقولون القريب من الأعلى، والأمعاء الدقيقة باتجاه الجانب الأيسر للجراح (الجانب الأيسر للحيوان؛ الشكل 1A).
    2. حدد سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية، التي تمتد طوليا على طول القولون. تبدأ المحطة الثانية عند التقاء الأوعية اللعدفية/الججونية (الشكل 1B).
      1. باستخدام ملقط مائل ذو أطراف دقيقة، قم بفصل محطتي العقدتين اللمفاوية الثانية والثالثة بعيدا عن الأوعية القولونية بوضع ملقط مغلق في الفراغ بين هذه الهياكل والسماح للملقط بالفتح بلطف.
      2. قم بإزالة الملقط وكرر هذه الحركة 2-3 مرات أو حتى يتم إنشاء مستوى كاف للاستئصال الآمن. تجنب تلف الأوعية الدموية القولونية الرئيسية. أيضا، انتبه بشكل خاص للأوعية اللفائفية والعنكبوتية الصغيرة، والتي قد تكون ضارة إذا تعرضت للإصابة.
        ملاحظة: إذا حدث نزيف كبير، أوقف الإجراء وقم بإعدام بطريقة إنسانية.
    3. اختياري: لتقليل خطر التأثيرات الجانبية على العقد القريبة، قم بربط خياطة اختياري باستخدام غرز مفردة متقطعة على طول سلسلة العقد اللمفاوية (عادة غرز بعيدة 1 مم، واثنتان جانبية 1 مم، وواحدة 1 مم قريبة من محطات العقدة اللمفاوية الثانية/الثالثة) باستخدام خيط نايلون أسود 9-0 وملقط رفيع لدفع الإبرة (الشكل الإضافي 3B, ج).
      1. لاحظ المسارات اللمفاوية الواردة، التي تقع سطحيا فقط على حزم الأوعية الدموية اللفائفية/الجوهرية (الشكل التكميلي 3B). كن حذرا لضمان ربط الغرز عميقا في المناطق اللمفاوية ومن السطحية إلى البنى الوعائية الرئيسية، لأن تلف الحزم الوعائية اللعدفية/القمعية سيكون ضارا.
    4. قم بسحب المحطات اللمفاوية المربوطة برفق في الرأس، وباستخدام مقص دقيق أو دقيق جدا، قم بإزالة محطات العقد اللمفاوية المستهدفة من الذيل إلى الرأس.
      ملاحظة: قبل المتابعة، تأكد من بقاء الأمعاء الدقيقة وردية اللون وغنية بالنفيوز جيدا. الربط العرضي للأوعية اللباقية/الأوعية الجينية يؤدي إلى حدوث أمعاء دقيقة قفارية.
  3. محطة العقد اللمفاوية الرابعة (تصريف القولون البعيد؛ الشكل الإضافي 1E,F')
    1. قم بإزالة أحشاء الأمعاء الدقيقة بالكامل بلطف حتى تصل إلى نقطة الربط الخلفي (رباط ترايتز). وجه الأمعاء الخارجية على الستائر المبللة بحيث يكون الساق في الأسفل، والقولون القريب من الأعلى، والأمعاء الدقيقة باتجاه الجانب الأيسر للجراح (الجانب الأيسر للحيوان؛ الشكل 1A).
    2. حدد سلسلة العقد اللمفاوية المساريقية، التي تمتد طوليا على طول القولون. تقع المحطة الرابعة مباشرة في وسط القولون البعيد وجانبية للمحطة الثالثة (الشكل 1B، الشكل 4A).
      1. باستخدام ملقط ذو طرف دقيق مائل أو مقص شديد الدقة، قم بتشريح محطة العقد اللمفاوية الرابعة بعيدا عن الأوعية القولونية والدهون المحيطة بوضع ملقط/مقص مغلق في المساحة بين هذه الهياكل والسماح للملقط/المقص بالفتح بلطف.
      2. قم بإزالة الملقط/المقص وكرر هذه الحركة 2-3 مرات أو حتى يتم إنشاء مستوى كاف للاستئصال الآمن. تجنب تلف الأوعية الدموية القولونية الرئيسية.
        ملاحظة: إذا حدث نزيف كبير، أوقف الإجراء وقم بإعدام بطريقة إنسانية.
    3. اختياري: لتقليل الخطر النظري لوجود ضواحي للعقد القريبة، قم بربط خياطة اختياري باستخدام غرز منفصلة واحدة عند كل عقدة لمفاوية معروفة (عادة على بعد 1 مم من العقدة) باستخدام نايلون أحادي الخيط الأسود 9-0 وملقط رفيع الأطراف لدفع الإبرة (الشكل 4B - D).
    4. اسحب المحطات اللمفاوية المربوطة برفق في الرأس، وباستخدام مقص دقيق جدا، قم بإزالة محطة العقد اللمفاوية المستهدفة من الذيل إلى الرأس (الشكل 4D,E).

figure-protocol-3
الشكل 4: صور موضحة وتعليقات من استئصال اللمفاوية المجروية (المحطة الرابعة). (أ) التوجيه الصحيح للأمعاء يكشف عن محطة العقدة اللمفاوية الميساريقية الرابعة (الأسهم البيضاء) في الوسط للقولون البعيد والجانب للمحطة الثالثة. (B,C) بعد التشريح السطحي لمحطة العقدة، يتم إجراء ربط الغرز (سهم أسود) في كل عقدة يمكن التعرف عليها، مع ضمان شمول جميع الأوعية التي تغذي العقد اللمفاوية (الأسهم الزرقاء). (د) يتم استئصال العقدة على طول مستوى الأنسجة المكون سابقا، مع البقاء مرتفعا نحو العقد اللمفاوية وترك خلفها روابط خياطة (سهام سوداء). (ه) بعد استئصال محطة العقدة (الأسهم البيضاء)، يتم تأكيد التومي، وتظهر روابط الغرز (الأسهم السوداء)، ويلاحظ أن الفراغ (الأسهم الباهتة) حيث كانت العقدة تعيش سابقا خال من العقدة المتبقية. أشرطة الميزان: 0.2 سم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

4. إكمال استئصال الغدة اللمفاوية السراريوية

  1. راقب الفروع البعيدة للأوعية الليليوكولية، والأوعية اللفائفية، و/أو الأوعية السنوية للهوى لضمان سلامة تدفق الدم. الأمعاء المثقبة جيدا تكون مشرقة ووردية مع نبضات واضحة.
    1. باستخدام مسحات ذات رؤوس قطنية، أعد محتويات البطن إلى التجويف الصفاقي. احرص على إزالة أي شظايا من القطن أو الوبر أو الغطاء أو الغرز من الأمعاء قبل العودة، لأن ذلك قد يؤدي إلى التهاب جراحي إضافي.
    2. تأكد من أن الأمعاء لا يلتوي على المساريق بتأكيد أن الأمعاء تبقى زاهية/وردية (مثقبة) بدلا من أن تكون باهتة/رمادية/بنفسجية (إقفارية).
  2. قم بحقن 1 مل من محلول ملحي معقم بدرجة حرارة الجسم في البطن قبل الإغلاق مباشرة لتعويض فقدان السوائل غير الحساس/التبخر. أغلق البطن في طبقتين (جدار البطن والجلد) بخيط بولي بروبيلين أحادي الخيط 6-0 بطريقة ممتدة.
  3. ضع غراء جراحي معقم على الجرح.
    ملاحظة: بدلا من ذلك، يمكن استخدام الغرز المتقطعة أو مشابك الجرح لإغلاق الجلد.

5. الرعاية بعد العملية

  1. نقل إلى قفص نظيف، نصفه على منصة مياه دافئة ونصف خارج مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء بشكل مرتج.
  2. دع يتعافى من التخدير وراقب عن كثب بحثا عن علامات الضيق. إذا لم تتعافى بسرعة من التخدير بسلوكيات مناسبة (مثل زيادة معدل التنفس، التصحيح الذاتي، المشي أو العناية بالحيوان)، قم بقتل بطريقة إنسانية.
  3. عندما تتعافى جميع من التخدير، أعد الأقفاص إلى منشأة رعاية مع إمكانية الوصول إلى الماء والطعام والفراش ومواد الإثراء بشكل مطلق.
  4. قيم الفئران بعد العملية كل 12 ساعة لمدة 3 أيام بحثا عن علامات الألم أو الضيق (مثل انحناء الوضعية، انخفاض النشاط، انخفاض التفاعل، سوء العناية). قم بقتل الفئران التي تظهر عليها علامات الضيق بشكل إنساني.
  5. إذا كنت تستخدم خياطة دائمة (مثل 6-0 مونوفلامنت بولي بروبيلين)، افحص الشقوق في اليوم العاشر بعد العملية وقم بإزالة أي مواد خياطة متبقية.

6. التعامل مع العقد اللمفاوية

  1. قم فورا بإجراء اختبار الطفو بوضع النسيج المستخرج في أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل يحتوي على محلول ملحي مخزن بالفوسفات بسعة 500 ميكرولتر (PBS). تأكيد استئصال العقد اللمفاوية من خلال ملاحظة غوص الأنسجة في PBS مقابل الدهون المستأصلة عن غير قصد، والتي ستطفو (الشكل 5A).
    ملاحظة: محطة أو محطات العقد اللمفاوية المستخرجة جاهزة فورا للدخول في معالجة لاحقة.
  2. بالنسبة لتقنيات الخلايا الحية، ضع محطة أو محطات العقد اللمفاوية المستأصلة في وسائط زراعة الخلايا (مثل DMEM، RPMI) أو PBS على الجليد. لعلم الأنسجة المخطط، ضع محطة أو محطات العقد اللمفاوية المستبعدة في حالة تثبيت (مثلا: الفورمالين المحايد 10٪، 4٪ بارافورمالديهايد).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لتأكيد دقة هذا الإجراء، تم إجراء استئصال للشدة اللمفاوية المساريقية على أحد عشر طفلا من سلالات C57BL/6J متطابقة مع النمط الجيني بين 4-6 أسابيع، وعمرهم وجنس ونمط جيني. تراوحت أوقات الإجراءات بين 5-15 دقيقة لكل فأرة. تحملت جميع الفئران العملية بشكل جيد، مع بقاء كامل حول ما قبل العملية. تم وضع العينات المستخرجة في PBS على الثلج. غرقت جميع العينات فورا، مؤكدا انخفاض نسبة الدهون. ثم تم سحق العينات المستخرجة (وأربع عناصر تحكم دهنية حشوية منفصلة) عبر مصفاة خلية بحجم 100 ميكرومتر وغسلها باستخدام...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

موضح هنا إجراء البقاء لاستئصال اللمفاوية الميسرينية الآمن والمحتمل في كل من محطات العقد الأربع. القيد الرئيسي لهذا الإجراء هو العلاقة غير المباشرة بين التعرض وتقدم العقد اللمفاوية على طول سلسلة المساريق. يمكن كشف أول محطة للعقد اللمفاوية بسهولة وبشكل كامل. غالبا ما تكون محطة العقد اللمفاوية الثانية مرئية، ويمكن تحسين التعرضللمحطات الثانية إلى الرابعة عن طريق تمديد الرأس في شق جدار الجلد/البطن. ومع ذلك، بسبب الوصلات الخلفية للقولون البعيد، هناك وصول محدود إضافي (أي ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

R.A.F. هو مستشار لشركات GlaxoSmithKline وPlythera Inc. وVentus Therapeutics. جميع المؤلفين الآخرين يعلنون عدم وجود مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر جي. ألدرمان، ب. كادوجان، إي. هيوز-بيكار، وج. هوروكس على المساعدة الإدارية، ولسي. هيوز لإدارة مستعمرات الفئران. H.N.B. زميل في برنامج تدريب علماء الجراح في جامعة ييل، الذي مول ودعم جزئيا هذا المشروع. وقد تم تمويل هذا العمل أيضا من معهد هوارد هيوز الطبي (لسلاح الجو الملكي) وجائزة الكلية الأمريكية للجراحين لأبحاث المقيمين (لجمعية الجراحين البريطانية).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
دائرة التخديرأيأو مخدر قابل للحقن
مقياس تدفق BD LSRII (أو ما يعادله)بكالوريوس العلوم الحيويةمزود ببرنامج FACS Diva (لقياس التدفق الخلوي) 
بوبرينورفين XRأيلتخفيف الألم
وسائط زراعة الخلايا  أي(لتقنيات الخلايا الحية؛ أي. DMEM أو RPMI)
DAPIالأسطورة الحيوية422801تركيز العمل: 15 ميكروغرام/مل
الإيثانول (70٪ في الماء)أيللتنظيف
CD45.2 (104) مضاد الفأر المقترن ب FITCالأسطورة الحيوية109806تركيز العمل: 5 ميكروغرام/مل
الملقط: ملقط ذو طرف دقيق بزاويةروبوزRS-5058المادة: دوموكسل; النمط #5، زاوية 45 درجة؛ حجم الرأس 0.1 × 0.06 مم
الملقط: ملقط ذو طرف ناعمروبوزRS-4960المادة: دوموستار؛ النمط #1؛ حجم الرأس: 0.20 × 0.12مم
الملقط: ملقط ذو طرف ناعمروبوزRS-4966المادة: دوموستار، نصيحة بيولوجي؛ النمط #3؛ حجم الرأس: 0.08 ×0.04 مم
ليدوكائينأيلتخفيف الألم
إبرة جافاج المعدنيةأيإبرة جافج فموية مستقيمة قابلة لإعادة الاستخدام بقياس 20/22، من الفولاذ المقاوم للصدأ.
محركات الإبرروبوزRS-6410حامل إبر كاستروفييخو؛ ستريت
اختياري:      مصابيح LED مزدوجة أو مزدوجة بمجهر عنق الإوزةأي
<إم>اختياري: صبغة إيفانز بلوسيغماE2129-10Gلتتبع اللمفاوي الاختياري.
<إم>اختياري: مجهر التشغيللايكاMZ9.5مجهر تشغيل رأس ستيريو Leica Mz9.5
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)أي
محلول بوفيدون/اليودأيلتحضير الجلد/التعقيم
المقص: مقص ذو طرف رفيع جداروبوزRS-5605ماكفيرسون-فاناس؛ حافة قطع 3 مم؛ منحنية (لعقد 3/4 المحطة)
المقص: مقص ذو طرف رفيعروبوزRS-5650SCSurecut Castroviejo scissors (لعقد المحطة 1/2/3)
المقص: مقص متوسطروبوزRS-5676نويس؛ حافة قطع 13 مم؛ مستقيم
الغراء الجراحيأيلاصق الأنسجة 3M Vetbond
الخياطة: 6-0 من خيط بولي بروبيلينكس أحادي الأزرقأي
الخياطة: خيط نايلون أحادي الخيط الأسود 9-0أي(اختياري) يمكنك أيضا استخدام 8-0 الأكبر قليلا حجم خياطة.
مثبت الأنسجةأي(للنسجة المخططة؛ أي الفورمالين المحايد المخزن 10٪ أو 4٪ بارافورمالديهايد)
وسادة تسخين دائرية بالماء الدافئأي

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chopp, L., Redmond, C., O'shea, J. J., Schwartz, D. M. From thymus to tissues and tumor: A review of T cell biology. J Allergy Clin Immunol. 151 (1), 81-97 (2023).
  2. Rouiz-Argüelles, A. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  3. Crespo, J., Sun, H., Welling, T. H., Tian, Z., Zou, W. T cell anergy, exhaustion, senescence, and stemness in the tumor microenvironment. Curr Opin Immunol. 25 (2), 214-221 (2013).
  4. Mempel, T. R., Henrickson, S. E., Von Andrian, U. H. T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases. Nature. 427 (6970), 154-159 (2004).
  5. Divi, V., et al. Lymph node count from neck dissection predicts mortality in head and neck cancer. J Clin Oncol. 34 (32), 3892-3897 (2016).
  6. Chang, G. J., Rodriguez-Bigas, M. A., Skibber, J. M., Moyer, V. A. Lymph node evaluation and survival after curative resection of colon cancer: Systematic review. JNCI. 99 (6), 433-441 (2007).
  7. Simoes, P., et al. Lymph node yield in the pathological staging of resected nonmetastatic colon cancer: The more the better. Surg Oncol. 43, 101806(2022).
  8. Resio, B. J., et al. Commission on cancer standards for lymph node sampling and oncologic outcomes after lung resection. Ann Thorac Surg. 119 (2), 308-315 (2025).
  9. Connolly, K. A., et al. A reservoir of stem-like CD8 T cells in the tumor-draining lymph node preserves the ongoing antitumor immune response. Sci Immunol. 6 (64), eabg7836(2021).
  10. Saddawi-Konefka, R., et al. Lymphatic-preserving treatment sequencing with immune checkpoint inhibition unleashes cdc1-dependent antitumor immunity in HNSCC. Nat Commun. 13, 4298(2022).
  11. Saddawi-Konefka, R., Schokrpur, S., Gutkind, J. S. Let it be: Preserving tumor-draining lymph nodes in the era of immuno-oncology. Cancer Cell. 42 (6), 930-933 (2024).
  12. Houston, S. A., et al. The lymph nodes draining the small intestine and colon are anatomically separate and immunologically distinct. Mucosal Immunol. 9 (2), 468-478 (2016).
  13. Brinkmann, V., Pinschewer, D., Chiba, K., Feng, L. Fty720: A novel transplantation drug that modulates lymphocyte traffic rather than activation. Trends Pharmacol Sci. 21 (2), 49-52 (2000).
  14. Mehandru, S., Colombel, J. -F., Juarez, J., Bugni, J., Lindsay, J. O. Understanding the molecular mechanisms of anti-trafficking therapies and their clinical relevance in inflammatory bowel disease. Mucosal Immunol. 16 (6), 859-870 (2023).
  15. Mariathasan, S., et al. Absence of lymph nodes in lymphotoxin-alpha (lt alpha)-deficient mice is due to abnormal organ development, not defective lymphocyte migration. J Inflam. 45 (1), 72-78 (1995).
  16. Kwon, S., Agollah, G. D., Wu, G., Sevick-Muraca, E. M. Spatio-temporal changes of lymphatic contractility and drainage patterns following lymphadenectomy in mice. PLoS One. 9 (8), e106034(2014).
  17. Blum, K. S., Proulx, S. T., Luciani, P., Leroux, J. -C., Detmar, M. Dynamics of lymphatic regeneration and flow patterns after lymph node dissection. Breast Cancer Res Treat. 139 (1), 81-86 (2013).
  18. Shaikh, H., et al. Mesenteric lymph node transplantation in mice to study immune responses of the gastrointestinal tract. Front Immunol. 12, 689896(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CD45

مقالات ذات صلة