يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

قطع الرباط الصليبي الأمامي وغسل السائل الزليلي في نموذج القوارض لدراسة التهاب المفاصل وهشاشة العظام اللاحقة للصدمة

3.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68713

⸱

سبتمبر 2, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Surgery, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 2Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نصف طريقة جراحية لعبور الرباط الصليبي الأمامي (ACL) كنموذج موثوق به للحث على هشاشة العظام في الركبة في القوارض ومنهجيات حصاد السائل الزليلي في الركبة ، وقياس وذمة الركبة ، وتقييم شدة هشاشة العظام.

الملخص

هشاشة العظام (OA) هو مرض مشترك يتميز بألم مزمن وليس له علاج حاليا. يمكن أن تحدث مجموعة فرعية من التهاب المفاصل ، هشاشة العظام اللاحقة للصدمة (PTOA) ، بعد إصابة المفصل. الركبة هي واحدة من أكثر المفاصل تضررا ، ومن بين إصابات الركبة ، تعد إصابات الرباط الصليبي الأمامي من بين أكثر الإصابات شيوعا. يمكن أن يتطور التهاب المفاصل العرضي ، المصحوب بتغييرات في المفصل مثل تدهور الغضروف وتكوين النبات العظمي ، بعد سنوات من الإصابة الأولية ، ولكن يمكن اكتشاف التغيرات المبكرة في المفاصل بعد فترة وجيزة. يعتبر الالتهاب أحد العوامل المساهمة في تطور PTOA ، ويمكن للوسطاء المؤيدين للالتهابات الذين يتم إنتاجهم استجابة للإصابة أن يحفزوا تطور PTOA. في النماذج الحيوانية ، تعد الهياكل التي تصيب جراحيا في الركبة طريقة مستخدمة على نطاق واسع لتحريض التهاب المفاصل ، والتقنية الجراحية الشائعة هي قطع الرباط الصليبي الأمامي (ACLT). الغرض من هذه الدراسة هو وصف تقنية ACLT الخاصة بنا لتحريض الزراعة العضوية ، بالإضافة إلى طرق مراقبة التهاب المفاصل وتحديد شدة التهاب المفاصل لتقييم الالتهاب بعد الجراحة ، نصف تقنية لقياس وذمة الركبة بالإضافة إلى تقنية لحصاد وتحليل السائل الزليلي في الركبة. لتقييم التغييرات المشتركة طويلة المدى المرتبطة بالزراعة العضوية ، نقدم نظام تسجيل شبه كمي طورناه لتقييم شدة التهاب المفاصل العماني عبر التصوير المصغر بالتصوير المقطعي المحوسب.

المقدمة

الرباط الصليبي الأمامي (ACL) هو هيكل حرج في مفصل الركبة ، يوفر الاستقرار ويمنع الحركة المفرطة للأمام في الظنبوب بالنسبة لعظم الفخذ1. تعد إصابات الرباط الصليبي الأمامي من بين أكثر إصابات الركبة شيوعا ، خاصة في الرياضات التي تنطوي على توقف مفاجئ أو قفزات أو تغييرات في الاتجاه2. يمكن أن تتراوح هذه الإصابات من التمزقات الجزئية إلى التمزقات الكاملة وغالبا ما تتطلب تدخلا جراحيا للشفاء الأمثل3. ومع ذلك ، حتى بعد العلاج الجراحي ، غالبا ما تؤدي إصابات الرباط الصليبي الأمامي إلى تغيرات طويلة الأمد في المفاصل ، بما في ذلك تآكل الغضروف ، وتكوين القطع العظمية ، والتغيرات الهيكلية للعظم تحت الغضروف. تساهم هذه التغييرات مجتمعة في تنكس المفاصل ، والذي يشار إليه عادة باسم هشاشة العظام بعد الصدمة (PTOA) 4،5.

في حين أن التقدم من إصابة الرباط الصليبي الأمامي الأولية إلى PTOA المصحوبة بأعراض يمكن أن يمتد في أي مكان من أقرب وقت ممكن إلى 20 عاما بعد الإصابة ، يمكن اكتشاف التغيرات المبكرة في المفاصل في غضون أسابيع قليلةفقط 6،7،8،9. تتمثل إحدى السمات الرئيسية لهذه التغييرات المبكرة في الوجود المرتفع للسيتوكينات الالتهابية (على سبيل المثال ، إنترلوكين (IL) -1 ، IL-6 ، عامل نخر الورم (TNF)) وعلامات انهيار المصفوفة خارج الخلية (على سبيل المثال ، البروتينات المعدنية (MMPs) و CTX-II). توفر تقييمات السائل الزليلي لعلامات الالتهاب والتدهور هذه رؤى مهمة حول المراحل الحادة والمزمنة لأمراض المفاصل. على سبيل المثال ، تصل مستويات IL-1 و IL-6 إلى ذروتها في السائل الزليلي للمفصل المصاب خلال الشهر الأول بعد الإصابة. على الرغم من أن هذه المستويات تنخفض بمرور الوقت ، إلا أنها نادرا ما تعود إلى المستوى الطبيعي الأساسي ، حتى بعد سنوات من العلاج10،11،12. تؤدي هذه الاستجابة الأولية المؤيدة للالتهابات إلى سلسلة من تلف المفاصل ، بما في ذلك الالتهاب الزليلي ، وتدهور الغضاريف ، والتعديلات الميكانيكية الحيوية ، مما يؤدي إلى إدامة انهيار الأنسجة وتسريع تنكس المفاصل13. بالإضافة إلى ذلك ، غالبا ما يؤدي الالتهاب الحاد بعد إصابة الرباط الصليبي الأمامي إلى انصباب المفاصل ووذمة الركبة ، ويتمثل ذلك في التورم وتراكم السوائل داخل المفصل14.

لتكرار إصابة الرباط الصليبي الأمامي والتحقيق في تطور PTOA ، يستخدم نموذج قطع الرباط الصليبي الأمامي المستحث جراحيا (ACLT) في الفئران على نطاق واسع15،16. يتضمن هذا النموذج قطع الرباط الصليبي الأمامي لمحاكاة الإصابة وتقييم العواقب البيولوجية والميكانيكية الناتجة. يعد نموذج ACLT أداة قيمة لدراسة الاستجابة الالتهابية وتدهور الغضاريف والتغيرات الميكانيكية الحيوية بعد الإصابة ، مما يسمح برؤى حول الآليات الجزيئية والخلوية التي تقود PTOA. علاوة على ذلك ، فإنه يتيح تقييم الاستراتيجيات العلاجية التي تهدف إلى التخفيف من تنكس المفاصل والحفاظ على الوظيفة. في البشر ، يستخدم تحليل السائل الزليلي على نطاق واسع لمراقبة الالتهاب وتدهور الغضاريف بمرور الوقت ، حيث أن الحصول على السائل الزليلي بسيط نسبيا17،18. ومع ذلك ، في الفئران ، يعد جمع السائل الزليلي بعد نماذج الإصابة أمرا صعبا. في هذه المخطوطة ، نصف تقنيتنا الجراحية ل ACLT وطريقة غسل الركبة لجمع السائل الزليلي لتقييم العلامات الالتهابية والمتدهورة. نقدم أيضا طريقة لقياس حجم الركبة لتحديد الوذمة بعد إصابة المفصل. بالإضافة إلى ذلك ، نصف طريقة تقييم التصوير المقطعي المحوسب المصغر لتصنيف شدة PTOA بعد ACLT. توفر هذه الأساليب أدوات تكميلية لتقييم الآثار الحادة والمزمنة لإصابة الرباط الصليبي الأمامي في بيئة ما قبل السريرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت جميع الدراسات التي أجريت على وفقا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام المختبر وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها في مستشفى بريغهام والنساء.

1. تحضير

ملاحظة: يجب أن يتماشى اختيار جنس الفأر مع أهداف الدراسة ، لأنه على الرغم من أن ACLT يحفز PTOA بشكل موثوق في كلا الجنسين ، فقد تختلف الشدة والتقدم.

  1. تحضير التخدير: قم بإعداد محلول مخدر الكيتامين والزيلازين (KX) مسبقا.
    ملاحظة: يمكن أيضا استخدام التخدير المستنشق (2٪ إيزوفلوران).
  2. الضوابط الجراحية: استخدم مجموعة منفصلة مطابقة للعمر وتعمل بالزيمة كعنصر تحكم جراحي.
    ملاحظة: لا ينبغي أن تكون الركبة المقابلة بمثابة عنصر تحكم زائف ، لأن هذا قد يثير مخاوف تتعلق برعاية. ومع ذلك ، يمكن استخدامه كعنصر تحكم صحي غير مصاب لإنشاء ظروف المفاصل الأساسية في التحليلات المزدوجة.
  3. اختيار عمر: استخدم الفئران البالغة من العمر 8 أسابيع لتعكس العمر النموذجي الذي يحدث فيه تمزق الرباط الصليبي الأمامي بشكل شائع. ومع ذلك ، يمكن لأي فأر ناضج هيكليا الخضوع لهذا الإجراء.

2. رعاية ما قبل الجراحة

ملاحظة: إذا تم نقل الفئران من منشأة مختلفة ، فاترك أسبوعا واحدا على الأقل حتى تتأقلم مع بيئتها الجديدة قبل إجراء الجراحة.

  1. تأكد من إجراء الجراحة بطريقة معقمة ، مع تعقيم جميع الأسطح (على سبيل المثال ، استخدام ستائر معقمة لتغطية المناطق الجراحية) ، والتأكد من استخدام الأدوات المعقمة ومعدات الحماية الشخصية الجراحية المناسبة (PPE).
  2. تحفيز التخدير عن طريق إعطاء حقن داخل الصفاق من الكيتامين (100 مجم / كغ) والزيلازين (10 مجم / كغ).
  3. بمجرد التخدير ، ضعي مادة تشحيم العين واحلقي الفراء فوق الركبة المراد إجراء العملية عليها ، وغطي الجانبين الأمامي والجانبي من منتصف الساق إلى منتصف الفخذ باستخدام مقصات الشعر الصغيرة.
    ملاحظة: اختيار الركبة الخلفية يخضع لتقدير الباحث ، بناء على سهولة الجراحة
  4. تأكد من تخدير الماوس بالكامل ولا يستجيب لمنعكس قرصة إصبع القدم.
  5. تطهير الجلد المكشوف عن طريق وضع منظف للبشرة مضاد للبكتيريا (مثل البيتادين و 70٪ كحول).
  6. تطبيق مسكن أفيوني (على سبيل المثال، 0.05 ملغ/كغ من البوبرينورفين) تحت الجلد لعلاج التسكين الوقائي.
    ملاحظة: يجب أن يكون المسكن إما تركيبة ممتدة المفعول لتوفير تأثير مسكن لمدة 72 ساعة بعد الجراحة أو يجب إعطاؤه بانتظام خلال هذا الإطار الزمني لتخفيف الألم أثناء الشفاء.
  7. إعطاء مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية (على سبيل المثال ، 5 مجم / كجم ميلوكسيكام) على النحو الموصى به ما لم تتداخل إدارة مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية مع نتيجة الاهتمام.
  8. ضع الفأر على جانبه الظهري أسفل مجهر التشريح. تأكد من أن الركبة المراد تشغيلها متجهة لأعلى وداخل مجال عرض المجهر.
  9. قم بتغطية الماوس بستارة معقمة ، مع ترك فتحة ثقب مفتاح صغيرة.
  10. ضع الساق المراد إجراء العملية عليها مع ثني الركبة عند حوالي 90 درجة مع توجيه الرضفة لأعلى. استخدم شريطا جراحيا للحفاظ على الركبة في وضع مرن.

3. قطع الرباط الصليبي الأمامي

  1. اضبط المجهر للتركيز على الرضفة.
  2. باستخدام الملقط ، اضغط على الجلد فوق الرضفة وقم بعمل شق طولي صغير في خط الوسط فوق الركبة باستخدام مقص جراحي. مد الشق إلى حوالي 1 سم وسحب الجلد لكشف الوتر الرضفي (الشكل 1 أ).
  3. ثني الركبة إلى حوالي 120 درجة. استخدم اليد غير المهيمنة للحفاظ على ثني الركبة والحفاظ على حواف الجلد متراجعة ، مما يسهل تصور الوتر الرضفي (الشكل 1 ب).
  4. حدد الحدود الإنسية للوتر الرضفي وقم بعمل شق بشفرة رقم 11 على طول هذا الهامش ، يمتد من نقطة المنتصف إلى القطب العلوي للرضفة لفتح كبسولة المفصل (الأشكال 1C-E).
    ملاحظة: في حالة حدوث نزيف ، استخدم ضغطا برفق باستخدام قطعة قطن معقمة لمدة 5-10 ثوان للسيطرة على الإرقاء.
  5. باستخدام ملقط غير حاد ، أمسك الوتر الرضفي برفق ، وارفعه قليلا لأعلى وتحرك بشكل جانبي لخلع الرضفة وفضح مفصل الركبة بالكامل (الشكل 1F).
  6. في هذه المرحلة ، ستكون وسادة الدهون تحت الرضفة (IFP) مرئية (الشكل 2 أ). باستخدام ملقط غير حاد ، قم بتحريك الجزء الإنسي من IFP برفق لكشف الرباط الصليبي الأمامي مع الحفاظ على سلامة IFP (الشكل 2 ب).
    ملاحظة: يتم تجنب الإزالة الكاملة ل IFP ، لأنه يلعب دورا في إنتاج علامات التهابية. نظرا لأن هذا النموذج يركز على دراسة الاستجابة الالتهابية بعد الإصابة التي تؤدي إلى PTOA ، يفضل الاحتفاظ ب IFP. في حالة حدوث نزيف ، استخدم ضغطا برفق باستخدام قطعة قطن معقمة لمدة 5-10 ثوان للسيطرة على الإرقاء.
  7. مع الحفاظ على الركبة عند انثناء 120 درجة ، حدد الرباط الصليبي الأمامي ، الذي يمتد من السطح الداخلي لللقمة الفخذية الجانبية إلى مركز هضبة الظنبوب (الشكل 2 ج ، د).
  8. باستخدام مقص الجراحة المجهرية ، قم بتمرير الرباط الصليبي الأمامي بعناية تحت التصور المجهري ، مما يضمن بقاء الغضروف المحيط والغضروف المفصلي والأربطة الأخرى سليمة (الشكل 2 ه). اكتمل نموذج ACLT في هذه المرحلة. في بعض الحالات ، يمكن تصور بقايا الرباط الصليبي الأمامي المتقاطع (الشكل 2F).
  9. تأكد من قطع الرباط الصليبي الأمامي عن طريق إجراء اختبار درج أمامي خلفي. ثني الركبة إلى حوالي 90 درجة ، وقم بتثبيت الظنبوب القريب بالأصابع ، واستخدم ملقطا غير حاد لتطبيق قوة خلفية برفق على عظم الفخذ البعيد. تؤكد الترجمة الخلفية لعظم الفخذ البعيد نجاح ACLT (الشكل 3).
  10. أعد وضع الرضفة والوتر الرضفي إلى موضعهما التشريحي عن طريق الرفع قليلا والتحول وسطيا (الشكل 4 أ ، ب). أغلق كبسولة المفصل بغرزة واحدة باستخدام خيوط 6-0 قابلة للامتصاص ، وتأمين العضلات المحيطة بالرضفة بأنسجة العضلات الإنسية المجاورة. ثم أغلق الجلد ب 2-3 غرز باستخدام خيوط 6-0 قابلة للامتصاص (الشكل 4C).
  11. بالنسبة للجراحة الصورية، قم بإجراء نفس الإجراء، ولكن دون تجاوز الرباط الصليبي الأمامي. افتح كبسولة المفصل وخلع الرضفة و IFP كما هو موضح. تصور الرباط الصليبي الأمامي دون نقله، ثم استبدل الرضفة و IFP، وأغلق كبسولة المفصل والجلد.

4. رعاية ما بعد الجراحة

  1. بعد الجراحة ، ضع الفأر على وسادة حرارية واتركه يتعافى من التخدير حتى يصبح وعيا تماما.
  2. بمجرد أن يصبح الماوس متنقلا بالكامل ، انقله إلى قفص نظيف به فراش جديد للتعافي.
  3. في أول 72 ساعة بعد الجراحة ، راقب الفأر عن كثب بحثا عن علامات الألم أو الضيق ، بما في ذلك: التغيرات في وزن الجسم (عادة لا تزيد عن 5٪ انخفاض) ، وانخفاض الاستمالة أو الاستمالة المفرطة حول موقع الشق ، وعلامات تدهور الصحة العامة (مثل الوضعية المنحنية ، أو تجهم الوجه ، أو التنفس غير الطبيعي) ، وعدوى الجرح (بما في ذلك التورم ، إفرازات أو تفرز الجرح). إذا تم استخدام ميلوكسيكام، فقم بتطبيقه كل 24 ساعة لمدة 48 ساعة.
  4. بعد 72 ساعة الأولى بعد الجراحة ، حافظ على الفأر كالمعتاد حتى نقطة النهاية ذات الاهتمام بناء على تصميم الدراسة.

5. تقييم حجم الركبة (الوذمة)

  1. قم بتقييم وذمة الركبة عن طريق قياس العرض المتوسط الجانبي للركبة باستخدام الفرجار الورني (يوصى باستخدام الفرجار الرقمي مع عجلة الإبهام ذات الضبط الدقيق لإجراء قياسات دقيقة ومضبوطة). قياس حي أو بعد الوفاة. أغلق الفرجار تدريجيا حتى يلامس بلطف الحدود الإنسية والجانبية للركبة.
    ملاحظة: بينما يجب أن يكون الفرجار دافئا ، يجب توخي الحذر لتجنب الضغط المفرط ، لأن هذا قد يضغط على الركبة ويقلل بشكل مصطنع من العرض المقاس ، مما يؤدي إلى نتائج غير دقيقة. الهدف هو الحفاظ على الفرجار مناسبا دون ضغط الركبة بشكل واضح. يجب أن يتوقف الشد بمجرد أن تبدأ التعديلات الإضافية في تقليل قياس حجم الركبة (الشكل 5).
  2. ضع المخدر أو القتل الرحيم ظهريا على سطح مستو ، مع التأكد من أن الركبة متجهة لأعلى. ثني الركبة إلى حوالي 90 درجة وحافظ على هذا الوضع. للحفاظ على الركبة في حالة ثني، قم بتأمين الساق باستخدام شريط جراحي أو دبوس تشريح في حالة إجراء القتل الرحيم بعد القتل الرحيم. قم بقياس عرض الركبة باستخدام الفرجار كما هو موضح.
  3. بدلا من ذلك ، إذا لم يكن التخدير مفضلا ، فقم بإجراء قياسات مع عدة أشخاص حتى يتمكن فرد واحد من كبح جماح برفق بينما يحصل الآخر على قياسات عرض الركبة.
  4. لضمان الموثوقية ، قم بقياس كل ركبة مرتين على الأقل. تطبيق نفس الأسلوب على كل من الركبتين المصابة والمقابلة (غير المصابة). أبلغ عن البيانات على أنها الفرق بين الركبتين (حجم الركبة دلتا) ، وليس كقيم مطلقة ، مما يقلل من التباين بسبب تقنية القياس والاختلافات في حجم الماوس الفردي.

6. حصاد السوائل الزليلية (غسل مفصل الركبة)

  1. قتل بالقتل الرحيم باستخدام طريقة معتمدة ، باتباع لوائح الترخيص الوطنية والمبادئ التوجيهية المحلية والبروتوكولات التجريبية. في هذه الدراسة ، تم إجراء القتل الرحيم باستخدام اختناق ثاني أكسيد الكربون2 متبوعا بخلع عنق الرحم.
  2. كشف مفصل الركبة عن طريق عمل شق طولي أمامي فوق الركبة ، وتشريح الجلد والأنسجة الأساسية لكشف الوتر الرضفي والرضفة بالكامل.
  3. باستخدام شفرة رقم 11 ، افتح كبسولة المفصل على طول الجانب الإنسي للرباط الرضفي الممتد من نقطة المنتصف إلى الحافة العلوية للرضفة (الشكل 6 أ ، ب).
  4. قم بإزاحة الرضفة عن طريق تحريكها برفق بشكل جانبي للوصول إلى مساحة المفصل ، مع توخي الحذر لضمان عدم حدوث أي ضرر للهياكل المحيطة.
  5. ثني الركبة إلى حوالي 120 درجة للتأكد من أن تجويف المفصل في وضع جيد للغسيل لتسهيل جمع السوائل الزليلية (الشكل 6C).
  6. املأ أنبوبا مسبقا ب 100 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات في درجة حرارة الغرفة (PBS).
  7. باستخدام ماصة P10، قم بإجراء عمليات غسل تسلسلية للركبة باستخدام 2.5 ميكرولتر من PBS في درجة حرارة الغرفة (الشكل 6D-F) وأضفها إلى الأنبوب المملوء مسبقا، ليصبح المجموع 8 تكرارات. يجب أن يصل الحجم التراكمي لسائل غسل الركبة إلى 120 ميكرولتر.
  8. قم بالطرد المركزي لسائل غسل الركبة عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق عند 240 جم لفصل المكونات الخلوية عن المادة الطافية.
    ملاحظة: يمكن استخدام المكونات الخلوية لعد الخلايا أو تحليل CytoSpin أو قياس التدفق الخلوي. لتحليل قياس التدفق الخلوي ، قد يكون من الضروري تجميع عينات من متعددة للحصول على خلايا كافية للتحليل الدقيق.
  9. قم بتخزين المادة الطافية عند -80 درجة مئوية لتحليلها في المستقبل.
    ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام المادة الطافية لتحليل متعدد الإرسال للسيتوكينات المؤيدة للالتهابات والمصفوفة المعدنية (MMPs).

7. تحليل التصوير المقطعي المحوسب (شدة PTOA في عظم الفخذ البعيد)

  1. تحضير العينة: بعد جمع السائل الزليلي ، قم بحصاد مفاصل الفخذ الظنبوبية عن طريق تشريح عظم الفخذ البعيد والساق القريبة بعناية ، مما يضمن الحفاظ على سلامة المفصل.
    ملاحظة: قم بإزالة الأنسجة العضلية الزائدة المحيطة بالركبة ولكن توخي الحذر للحفاظ على سلامة بنية العظام. الحفاظ على الأنسجة الزليلية إذا تم تحليل التهاب الغشاء المفصلي بواسطة الأنسجة. حصاد بشكل مستقل إذا تم تقييم العلامات المؤيدة للالتهابات عبر qPCR.
  2. قم بإصلاح العينات في 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) عند 4 درجات مئوية لمدة 5 أيام. انقلها إلى 70٪ إيثانول وخزنها في 4 درجات مئوية.
  3. قم بإجراء عمليات مسح التصوير المقطعي المحوسب الدقيقة عالية الدقة باستخدام المعلمات التالية: حجم فوكسل متناحي 7 ميكرومتر ، جهد أنبوب الأشعة السينية 55 كيلو فولت في الثانية ، تيار 0.145 مللي أمبير ، وقت تكامل 600 مللي ثانية لكل إسقاط.
  4. بعد المسح ، قم بتصدير بيانات microCT كملفات DICOM لمزيد من التحليل.
  5. قم بتحميل ملفات DICOM في برنامج معالجة الصور للتصور وإعادة البناء ثلاثي الأبعاد والتحليل.
  6. استخدم أداة إعادة البناء ثلاثية الأبعاد لتقييم جميع مناطق الركبة ، وفي العرض السهمي لعظم الفخذ البعيد ، حدد أربع مناطق ذات أهمية (ROIs) من الخلف إلى الأمامي للتسجيل (الشكل 9) 19 الحوض الخلفي للوحة النمو ، الجانب الخلفي لذروة لوحة النمو ، الجانب الأمامي من ذروة لوحة النمو ، والحوض الأمامي للوحة النمو.
  7. بمجرد تحديد عائد الاستثمار ، حدد صورة مقابلة في العرض الإكليلي. كرر لكل عائد استثمار ليصبح المجموع أربع صور لكل مفصل ظنبوبي الفخذي.
  8. احفظ الصور كملفات عمياء لتحليل غير متحيز.
  9. درجة شدة PTOA على صور التصوير المصغر الإكليلي كما تم الإبلاغ عنهسابقا 19. باختصار ، يقوم نظام التسجيل شبه الكمي هذا بتقييم عدم تناسق الفخذ ، ووجود وحجم النباتات العظمية ، وتسطيح اللقمة الفخذية في أربعة مواقع تشريحية. بعد ذلك ، قم بتسجيل كل موقع على مقياس من 0 إلى 6 ، مع كون 6 هو الأكثر حدة ، للحصول على إجمالي درجة ممكنة تبلغ 24. اطلب من اثنين على الأقل من الممتحنين المستقلين المكفوفين تسجيل الموقع وحساب متوسط درجات النتيجة النهائية.
    ملاحظة: يجب على اثنين من الفاحصين المستقلين تقييم صور التصوير المقطعي المحوسب المصغر ، ويجب أن يكون الفاحصون أعمى عن الظروف التجريبية لتقليل التحيز. يتم تحديد درجة PTOA النهائية من خلال حساب متوسط الدرجات من كلا الممتحنين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إجراء ACLT هو طريقة جراحية فعالة وقابلة للتكرار للحث على هشاشة العظام في ركبة القوارض. بعد إجراء ACLT في ظروف معقمة ، لم تظهر الفئران أي علامات على الضيق أو العدوى في موقع الشق وتحركت بحرية دون علامات العرج في الطرف الذي تم تشغيله.

تم قياس حجم الركبة لمراقبة وذمة الركبة بعد ACLT (الشكل 7 أ). للتحكم في التباين في حجم الفأر ، تم تطبيع عرض الركبة المصابة إلى عرض الركبة المقابلة. بعد ACLT ، زاد حجم الركبة بشكل ملحوظ قبل أن يتناقص تدريجيا نحو خط الأساس. تم حصاد السائل ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوفر هذا الوصف التقني طريقة جراحية مفصلة لإحداث إصابات الرباط الصليبي الأمامي في الفئران عن طريق عبور الرباط الصليبي الأمامي ، مما يوفر نموذجا خاضعا للرقابة لدراسة PTOA. النموذج الجراحي ACLT هو نهج ما قبل السريري المستخدم على نطاق واسع لتحفيز PTOA ويكرر بشكل فعال السمات المرضية الرئيسية التي لوحظت في إصابات الرباط الصليبي الأمامي البشري ، بما في ذلك الميكانيكا الحيوية المتغيرة للمفاصل ، والالتهاب الزليلي ، وتدهور الغضروف (الشكل 7 والشكل<...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1x محلول ملحي مخزن من الفوسفات (PBS)سيتيفاSH30256.02
4٪ بارافورمالديهايدفيشر العلميةAAJ19943K2
70٪ إيثانولفيشر العلميةBP82031GAL
خيوط قابلة للامتصاص 6-0باترسون للإمداد البيطري07-893-1916
ملقط حاد   ؛أدوات العلوم الجميلة11051-10
مسحات القطنفيشر العلمية22-029-685
مجهر التشريحأنظمة لايكا الدقيقةإم 165 إف سي
ماكينة حلاقة كهربائيةبرينتري العلمية CLP-9961
مناديل الإيثانولفيشر العلمية22-246073
إيثيكا XR (بوبرينورفين SR)كوفيرتوس721171.3 مجم / مل
زيوت تشحيم العينباترسون للإمداد البيطريNC1701236 
مقص ناعمأدوات العلوم الجميلة14061-10
وسادة الحرارةفيشر العلميةNC1061604
حورسحورسhorosproject.org
Isoflurane باترسون للإمداد البيطري07-890-8115
الكيتامينباترسون للإمداد البيطري07-890-8598
ميلوكسيكامباترسون للإمداد البيطري07-893-75655 مجم / مل
مقايسة متعددة الإرسالميزوسكيل ديسكفريK15069M-1
حامل الإبرةكودمان36-2000
رقم 11 مشرط أدوات العلوم الجميلة10011-00
ماصة P10جيلسونF144055M
أطراف الماصة P10فيشر العلمية02-707-439
مسحة بوفيدون اليودميدلاينMDS093901ZZ
سكانكو الطبية والميكروية. نظام CT-35سكانكوhttps://www.scanco.ch/systems-overview.html7   µ م حجم فوكسل ، 55 كيلو فولت ، 0.145 &thinsp ؛ مللي أمبير ، 600 > MS
ستائر معقمةماكيسون الطبية العامةNC2032042
قناع الوجه الجراحيفيشر العلمية18-048-010
قفازات جراحيةوسيم7823PF
الشريط الجراحيباترسون للإمداد البيطري07-888-0614
محاقندينار بحريني3096231 مل
فاناس مقص زنبركيالأدوات الدقيقة العالمية501778شفرات 3 مم
الورنية كابيلرNeiko   ؛01407 أ
زيلازين باترسون للإمداد البيطري07-893-8424

المراجع

  1. Furman, W., Marshall, J. L., Girgis, F. G. The anterior cruciate ligament: a functional analysis based on postmortem studies. J Bone Joint Surg Am. 58 (2), 179-185 (1976).
  2. Shimokochi, Y., Shultz, S. J. Mechanisms of noncontact anterior cruciate ligament injury. J Athl Train. 43 (4), 396-408 (2008).
  3. Engler, I. D., et al. Trends in anterior cruciate ligament reconstruction techniques and postoperative care among leaders in the field: a survey of the Herodicus Society. Orthop J Sports Med. 12 (10), 23259671241274770(2024).
  4. Amano, K., et al. Synovial fluid profile at the time of anterior cruciate ligament reconstruction and its association with cartilage matrix composition 3 years after surgery. Am J Sports Med. 46 (4), 890-899 (2018).
  5. Anderson, D. D., et al. Posttraumatic osteoarthritis: improved understanding and opportunities for early intervention. J Orthop Res. 29 (6), 802-809 (2011).
  6. MOON Group. The clinical radiographic incidence of posttraumatic osteoarthritis 10 years after anterior cruciate ligament reconstruction: data from the MOON nested cohort. Am J Sports Med. 49 (5), 1251-1261 (2021).
  7. Cinque, M. E., Dornan, G. J., Chahla, J., Moatshe, G., LaPrade, R. F. High rates of osteoarthritis develop after anterior cruciate ligament surgery: an analysis of 4108 patients. Am J Sports Med. 46 (8), 2011-2019 (2018).
  8. Nelson, F., et al. Early posttraumatic osteoarthritis-like changes in human articular cartilage following rupture of the anterior cruciate ligament. Osteoarthr Cartil. 14 (2), 114-119 (2006).
  9. Davidson, E. J., et al. Chondral injury associated with ACL injury: assessing progressive chondral degeneration with morphologic and quantitative MRI techniques. Sports Health. 16 (5), 722-734 (2024).
  10. Marks, P. H., Donaldson, M. L. C. Inflammatory cytokine profiles associated with chondral damage in the anterior cruciate ligament-deficient knee. Arthroscopy. 21 (11), 1342-1347 (2005).
  11. Lohmander, L. S., Atley, L. M., Pietka, T. A., Eyre, D. R. The release of crosslinked peptides from type II collagen into human synovial fluid is increased soon after joint injury and in osteoarthritis. Arthritis Rheum. 48 (11), 3130-3139 (2003).
  12. Palmieri-Smith, R. M., Wojtys, E. M., Potter, H. G. Early cartilage changes after anterior cruciate ligament injury: evaluation with imaging and serum biomarkers-a pilot study. Arthroscopy. 32 (7), 1309-1318 (2016).
  13. Leite, C. B. G., Merkely, G., Charles, J. F., Lattermann, C. From inflammation to resolution: specialized pro-resolving mediators in posttraumatic osteoarthritis. Curr Osteoporos Rep. , (2023).
  14. Kikuchi, N., et al. Joint effusion at 3 months after anterior cruciate ligament reconstruction is associated with reinjury. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 31 (5), 1798-1804 (2023).
  15. Lorenz, J., Grässel, S. Experimental osteoarthritis models in mice. Methods Mol Biol. 1194, 401-419 (2014).
  16. Hayami, T., et al. Characterization of articular cartilage and subchondral bone changes in the rat anterior cruciate ligament transection and meniscectomized models of osteoarthritis. Bone. 38 (2), 234-243 (2006).
  17. Lattermann, C., et al. Logistical challenges and design considerations for studies using acute anterior cruciate ligament injury as a potential model for early posttraumatic osteoarthritis. J Orthop Res. 35 (3), 641-650 (2017).
  18. Lattermann, C., et al. Biomarkers on the day of ACL reconstruction and sex predictive of knee-related quality of life at 2-year follow-up. Orthop J Sports Med. 5 (3 Suppl 3), 2325967117(2017).
  19. Leite, C. B. G., et al. Maresin 1-LGR6 axis mitigates inflammation and posttraumatic osteoarthritis after transection of the anterior cruciate ligament in mice. Osteoarthr Cartil. , (2025).
  20. Glasson, S. S., Chambers, M. G., Van Den Berg, W. B., Little, C. B. The OARSI histopathology initiative: recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse. Osteoarthr Cartil. 18 (Suppl 3), S17-S23 (2010).
  21. Armstrong, A. R., Carlson, C. S., Rendahl, A. K., Loeser, R. F. Optimization of histologic grading schemes in spontaneous and surgically-induced murine models of osteoarthritis. Osteoarthr Cartil. 29 (4), 536-546 (2021).
  22. Gilbert, S. J., et al. Inflammatory and degenerative phases resulting from anterior cruciate rupture in a non-invasive murine model of posttraumatic osteoarthritis. J Orthop Res. , (2018).
  23. Braza-Boïls, A., Alcaraz, M. J., Ferrándiz, M. L. Regulation of the inflammatory response by tin protoporphyrin IX in the rat anterior cruciate ligament transection model of osteoarthritis. J Orthop Res. 29 (9), 1375-1382 (2011).
  24. Shen, P. -C., et al. Lentiviral small hairpin RNA knockdown of macrophage inflammatory protein-1γ ameliorates experimentally induced osteoarthritis in mice. Hum Gene Ther. 24 (10), 871-882 (2013).
  25. Irie, K., Uchiyama, E., Iwaso, H. Intraarticular inflammatory cytokines in acute anterior cruciate ligament injured knee. Knee. 10 (1), 93-96 (2003).
  26. Swärd, P., Frobell, R., Englund, M., Roos, H., Struglics, A. Cartilage and bone markers and inflammatory cytokines are increased in synovial fluid in the acute phase of knee injury (hemarthrosis): a cross-sectional analysis. Osteoarthr Cartil. 20 (11), 1302-1308 (2012).
  27. Christiansen, B. A., et al. Non-invasive mouse models of posttraumatic osteoarthritis. Osteoarthr Cartil. 23 (10), 1627-1638 (2015).
  28. Proffen, B. L., McElfresh, M., Fleming, B. C., Murray, M. M. A comparative anatomical study of the human knee and six animal species. Knee. 19 (4), 493-499 (2012).
  29. Chu, C. R., Szczodry, M., Bruno, S. Animal models for cartilage regeneration and repair. Tissue Eng Part B Rev. 16 (1), 105-115 (2010).
  30. Huang, L., et al. Early changes in osteochondral tissues in a rabbit model of posttraumatic osteoarthritis. J Orthop Res. 39 (12), 2556-2567 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

قطع الرباط الصليبي الأماميالتهاب الركبةتحلل الغضروفالتصوير المقطعي المحوسب الدقيقاستقطاب الكريات البيضاءإنترلوكين 1 بيتا
قطع الرباط الصليبي الأمامي وغسل السائل الزليلي في نموذج القوارض لدراسة التهاب المفاصل وهشاشة العظام اللاحقة للصدمة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.