يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحضير عيون الخنازير للفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر لتصور شبكة ألياف الكولاجين الزجاجي

648 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68823

⸱

أكتوبر 17, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Utah, 2Department of Biomedical Engineering, University of Utah, 3Department of Chemistry, University of Utah, 4Department of Mechanical Engineering, University of Utah

في هذه المقالة

ملخص

تصور هذه الطريقة البنية الأصلية لألياف الكولاجين في الجسم الزجاجي باستخدام الفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر.

الملخص

الجسم الزجاجي عبارة عن جل شفاف يملأ الفراغ بين العدسة وشبكية العين. هيكلها مدعوم بشبكة من ألياف الكولاجين ، والتي من المحتمل أن تؤثر على الخصائص اللزجة المرنة وتساهم في أمراض الشبكية. ومع ذلك ، لا يزال تنظيم شبكة الكولاجين هذه سيئا لأن تصوير الجسم الزجاجي في حالته الأصلية يمثل تحديا. العديد من تقنيات التصوير المطبقة على الجسم الزجاجي تسبب الجفاف والتشويه ، ويمكن للطرق القائمة على الصبغة أن تقدم القطع الأثرية أو وضع العلامات غير المحددة ، مما يجعل من الصعب دراسة شبكة الكولاجين. في هذا البروتوكول ، نحدد ما يلي: 1) طريقة لتشريح عيون الخنازير للتصوير. 2) استراتيجية لتركيب العيون على مجهر مقلوب ؛ 3) إرشادات لتصوير شبكة الكولاجين الزجاجي في حالتها الأصلية باستخدام الفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر ؛ و 4) تعليمات لتحليل الصور الكمي لميزات الشبكة. نسلط الضوء على المزالق الشائعة ونؤكد على النقاط الفنية الرئيسية. نبلغ عن تطبيق الفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر على الجسم الزجاجي. بالمقارنة مع استراتيجيات التصوير الزجاجي السابقة ، يحافظ هذا النهج على البنية الأصلية وتوجيهها وتوزيعه لألياف الكولاجين الزجاجي بدون أصباغ خارجية أو قطع أثرية للجفاف. يمكن للفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر أن يحقق الأساس الهيكلي لتصلب الجل الزجاجي في الصحة والمرض.

المقدمة

الجسم الزجاجي هو المصفوفة خارج الخلية بين العدسة وشبكية العين في العين. يلعب الجر من الجسم الزجاجي على شبكية العين دورا رئيسيا في فقدان البصر في أمراض مثل انفصال الشبكية والثقب البقعي والجر الزجاجيالبقعي 1،2،3،4. يتم تحديد قدرة الجسم الزجاجي على نقل قوى الجر إلى شبكية العين من خلال صلابة الهلام ، والتي بدورها تعتمد على خصائص مكوناته الرئيسية ، الكولاجين وحمض الهيالورونيك5. من المحتمل أن تتأثر صلابة الهلام في الجسم الزجاجي بميزات شبكة ألياف الكولاجين ، نظرا لأن صلابة جل الكولاجين الاصطناعي مدفوعة بخصائص الشبكة مثل الكثافة والمحاذاة وعرض الألياف6.

يصعب تصوير شبكة ألياف الكولاجين الزجاجية بسبب المحتوى المائي العالي وتركيز الكولاجينالمنخفض 7 ، مما يؤدي إلى تشويه اصطناعي أثناء المعالجة للفحص المجهري أو الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال. يتطلب علم الأنسجة التقليدي والفحص المجهري الإلكتروني للإرسال معالجة لتصلب الجسم الزجاجي للتقسيم الرقيق. يتسبب الجفاف المطلوب للتضمين النسيجي في تجمع الألياف الزجاجية في تكوين قرص العسل8 ، ويؤدي تكوين بلورات الجليد أثناء التجميد إلى زيادة حجم المسام في المصفوفة خارج الخلية9. تم تطبيق تضمين البلاستيك8 والتجميد السريع10 على الجسم الزجاجي لتقليل القطع الأثرية ، على الرغم من بقاء بعض القطع الأثرية المتبقية على الأرجح. الفحص المجهري لتباين الطور هو طريقة لا تتطلب تقسيما وقد تم تطبيقها على الجسم الزجاجي ، ولكنها تتطلب إزالة قطعة صغيرة من الجسم الزجاجي من العين ، وبالتالي فقدان الموضع الأصلي واتجاه الشبكة11. في الآونة الأخيرة ، تم استخدام الفحص المجهري للضوء المستقطب الكمي لرسم خريطة لمتوسط اتجاه الألياف عبر عين خنزير مقسمة بشكل كبير ، ولكن لا يمكن حل الألياف الفردية12. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لأساليب وضع العلامات القائمة على الصبغة (على سبيل المثال ، أزرق التربان ، أحمر بيكروسيريوس ، 5- (4،6-ثنائي كلورو تريازينيل) أمينوفلوريسسين) إدخال القطع الأثرية أو وضع العلامات غير المحددة ، وبالتالي تم تجنبها للحفاظ على شبكة الكولاجين الأصلية.

اعتمدنا طريقة تحضير العينات التي استخدمها Filas et al. لدراسة الفحص المجهري للضوء المستقطب ، أي التشريح الإجمالي في كتلة agarose12 ، وقمنا بتصوير العينة باستخدام الفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر ، والذي لم يتم تطبيقه من قبل على الجسم الزجاجي. باستخدام هذه الطريقة ، حصلنا على صور لشبكة ألياف الكولاجين الزجاجية في حالة رطبة شبه فسيولوجية. يوفر هذا العديد من المزايا مقارنة بالطرق السابقة ، بما في ذلك تقليل القطع الأثرية مقارنة بالطرق القائمة على كسر التجميد أو الجفاف10،13. يتطلب هذا البروتوكول مجهرا متحد البؤر مقلوبا بهدف غمر لا يقل عن 30 ضعفا ، وفتحة عدسة عددية أكبر من 0.9 ، ومسافة عمل أكبر من 200 ميكرومتر. نقوم بتضمين إرشادات رئيسية لإعداد العينات والحصول على الصور لتسهيل الدقة الواضحة للألياف. من خلال الحفاظ على حالة شبه أصلية لمصفوفة الكولاجين الزجاجي ، يمكن هذا النهج الباحثين من التحليل الكمي لاتجاه الألياف وكثافتها ومعلمات التوزيع المكاني التي من المحتمل أن تكون حاسمة لفهم صلابة الجسم الزجاجي وتغييراتها المرضية. هذه التقنية مناسبة بشكل خاص للباحثين المهتمين بشبكة الكولاجين الزجاجي وهيكلها والتسبب في أمراض الشبكية والجسم الزجاجي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. تحضير الأنسجة وتشريحها

ملاحظة: تم إجراء هذا البحث وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. في مؤسستنا ، لم تكن هناك حاجة إلى موافقة من لجنة رعاية واستخدامها المؤسسية لإجراء تجارب على عيون الخنازير خارج الجسم الحي .

  1. احصل على عيون الخنازير خارج الجسم الحي من مصنع معالجة اللحوم. استخدم العينين في غضون 48 ساعة من الوفاة.
    ملاحظة: على الرغم من أن المظهر الزجاجي لا يتغير مع وقت ما بعد الوفاة الأطول ، إلا أن شبكية العين والمشيمية تتحلل ، مما يؤدي إلى تشتت الحطام الخلوي والمصطبغ أثناء التشريح. يمكن أن يتداخل هذا الحطام مع تصوير الألياف وتحليلها.
  2. إزالة أي عضلات زائدة والأنسجة الضامة من الكرة الأرضية.
  3. ضع قاعدة التمثال ثلاثية الشوكات على قاعدة قالب مكعب ، مثل قالب مكعبات ثلج سيليكون كبير جدا (الشكل 1 أ والشكل 2).
  4. ضع الكرة الأرضية على قاعدة التمثال ثلاثية الشوك، وضعها بحيث يستقر الطرف على الشوكات.
  5. اصنع جل الاغاروز بنسبة 3٪ عن طريق إضافة 3 جم من الاغاروز للأغراض العامة إلى 100 مل من الماء المقطر ثم تسخين المحلول حتى يذوب. بمجرد أن يبرد المحلول إلى حوالي 37 درجة مئوية ، اسكبه في القالب حتى تغمر العين في الاغاروز.
    ملاحظة: سيؤدي ذلك إلى تضمين العين في جل الاغاروز لتثبيت العين للتشريح.
  6. برد مكعب الاغاروز لمدة 4 ساعات على الأقل.
    ملاحظة: هذا يزيد من التصاق الجل بالعين ويضمن بقاء العين ثابتة أثناء التشريح
  7. بعد التبريد ، قم بإزالة مكعب الاغاروز من القالب. ثم قم بإزالة قاعدة التمثال من المكعب (الشكل 1 ب).
  8. قم ببناء إطار ثلاثي الجوانب بنفس أبعاد مكعب الاغاروز باستخدام مزيج من طوب ليغو 1 × 8 وألواح وبلاط (الشكل 3).
    ملاحظة: سيؤدي ذلك إلى تثبيت المكعب في مكانه وتوفير دليل للشفرة أثناء التشريح. سيحدد ارتفاع إطار Lego الموقع الذي سيتم قطع العين فيه. يمكن تصور ذلك من خلال هلام الاغاروز شبه الشفاف.
  9. ضع مكعب الاغاروز المبرد في إطار Lego. أمسك شفرة ميكروتوم رفيعة المستوى من الحواف الحادة وقم بمحاذاة الشفرة مع الجزء العلوي من إطار Lego. قم بتطبيق ضغط لأسفل برفق على الجزء العلوي من المكعب واسحب شفرة الميكروتوم برفق ذهابا وإيابا عبر المكعب بأكمله والعين المدمجة (الشكل 1 ج).
    ملاحظة: سيؤدي ذلك إلى إنشاء جزء من أنسجة العين مضمنة في الاغاروز ، والذي سيشار إليه باسم "غطاء العين".

2. تصاعد عينة للتصوير

  1. باستخدام شفرة الميكروتوم ، قم بقص ما يقرب من 1 مم من الاغاروز من كامل سطح المكعب المقطوع (الشكل 4 أ).
    ملاحظة: سيترك هذا جزءا صغيرا من غطاء العين يمتد فوق السطح المقطوع لمكعب الاغاروز
  2. استخدم منديل مناديل أو إسفنجة صغيرة مثلثة من السليلوز لتجفيف السطح المقطوع لمكعب الاغاروز ، خاصة بالقرب من حدود غطاء العين.
  3. أضف ما يقرب من ملعقة صغيرة من سد السيليكون متعدد الأغراض إلى كيس شطيرة بلاستيكي صغير وقم بقطع ثقب 3 مم في إحدى الزوايا السفلية للكيس لإنشاء كيس أنابيب للسد.
  4. باستخدام كيس الأنابيب ، ضع حبة رقيقة من السد على السطح المقطوع لمكعب الاغاروز ، على طول حافة غطاء العين مباشرة ، مما يؤدي إلى إنشاء حدود مقاومة للماء حول العينة (الشكل 4 ب). سيمنع ذلك الجل الزجاجي من التسرب من غطاء العين.
  5. ضع زجاجا كبيرا فوق غطاء العين واضغط لأسفل بحيث يكون السطح المقطوع لغطاء العين ملامسا للغطاء دون أي هواء أو سائل محبوس (الشكل 4 ج). تأكد من أن حبة السيليكون تصنع ختما مستمرا مع الغطاء.
    ملاحظة: إذا لم يشكل سد السيليكون ختما مستمرا ، فقد يتسرب السائل الزجاجي للخارج ويسمح بدخول الهواء إلى العينة. سيؤدي التعرض للهواء إلى تقلص الجسم الزجاجي ، مما ينتج عنه ألياف أكثر إشراقا وكثافة ، بالإضافة إلى منطقة سائلة بدون ألياف. إذا لم يكن الجسم الزجاجي ملامسا للغطاء ، فسيكون من الصعب تصويره.
  6. أثناء الإمساك بمكعب الاغاروز ، اقلب العينة وضعها على محول الغطاء الكبير للتصوير على مجهر مقلوب (الشكل 4D والشكل 5).

3. الحصول على الصور

  1. استخدم مجهره متحد البؤر مقلوب ليس من نوع القرص الدوار. استخدم هدفا مائيا (مع الماء أو جل تشحيم العين كمقرنة) ، أو هدف الزيت بفتحة عدسة عددية 0.90 على الأقل ، وتكبير بين 30 × 60 × ، ومسافة عمل لا تقل عن 200 ميكرومتر.
  2. اضبط إعدادات مسار الضوء للمجهر متحد البؤر للحصول على صور انعكاس. بدلا من المرآة ثنائية اللون المستخدمة لإعادة توجيه الضوء المثير ونقل الضوء المنبعث للتصوير الفلوري ، تأكد من وجود مرآة تقسيم شعاع تعيد توجيه نسبة من الليزر المضيء وتنقل نسبة من الضوء المنعكس.
    ملاحظة: إشارة الانعكاس من ألياف الكولاجين الزجاجية ضعيفة إلى حد ما ، لذلك يمكن أن تؤثر ضوضاء الخلفية على القدرة على تصوير الألياف. لوحظت نسبة إشارة إلى ضوضاء محسنة بطول موجي يبلغ 473 نانومتر ، لكننا تمكنا من تصوير ألياف الكولاجين الزجاجية بأطوال موجية تتراوح من 405 نانومتر إلى 635 نانومتر.
  3. اضبط الأطوال الموجية للكشف لتشمل الطول الموجي لليزر المضيء.
  4. لتوجيه موضع Z داخل العينة، قم بتقليل طاقة الليزر إلى أدنى إعداد ممكن وتحديد وميض الضوء المنعكس من انزلاق الغطاء. سيحدث هذا في الجزء السفلي والعلوي من الغطاء (الشكل 6).
    ملاحظة: بالقرب من انزلاق الغطاء، توجد إشارة عاكسة كبيرة في الخلفية. بعيدا عن الغطاء ، تنخفض الإشارة من الضوء المنعكس من ألياف الكولاجين.
  5. اضبط موضع z بحيث يكون موجودا فوق الجزء العلوي من الغطاء وداخل العينة.
  6. قم بزيادة طاقة الليزر إلى مستوى أعلى مما هو معتاد لتطبيق التألق.
    ملاحظة: هناك قطعة أثرية حلقية عاكسة ستكون في وسط مجال التصوير. يمكن أن يساعد الجمع بين التكبير وتفكيك مجال التصوير في استبعاد هذه القطعة الأثرية (الشكل 7).
  7. استخدم متوسط الخط وقم بزيادة وقت بقاء البكسل في إعدادات الحصول على الصور ، وهي طرق قياسية لزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء في المجاهر متحد البؤر.

4. تحليل صورة عرض الألياف باستخدام CT-FIRE 14

  1. قم بتثبيت CT Fire باتباع الإرشادات الموجودة على هذا الموقع: https://github.com/uw-loci/curvelets/wiki/Downloads-and-Installation-(CTF).
    ملاحظة: كانت الإصدارات المستخدمة هنا هي "CT-FIRE V3.0 BetaWindows64-2018b" ووقت تشغيل MATLAB ، "MCR-2018b-win64". يجب تنزيل كلاهما حتى يعمل البرنامج.
  2. قم بتحويل الصور إلى 8 بت tif وافتح صور tif 8 بت في CT-FIRE.
  3. تأكد من ضبط البرنامج على CT-Fire في الزاوية اليمنى العليا ، ثم حدد تشغيل.
  4. سيقوم CT-FIRE تلقائيا بتحميل نتائج التحليل إلى مجلد يسمى "ctfireout" موجود في نفس المجلد مثل الصورة الأصلية. افحص جودة الاستخراج من خلال مقارنة الملف الذي يبدأ بالاسم "OL_ctFIRE" بالصورة الأصلية. لاتباع هذا البروتوكول ، استخدم الإعدادات الافتراضية التالية لتجزئة الصور (أي تحديد الألياف): thresh_im2: 5 ؛ s_xlinkbox: 8. thresh_ext: 70 ؛ thresh_dang_L: 15 ؛ thresh_short_L: 15 ؛ s_fiberdir: 4 ؛ thresh_linkd: 15 ؛ thresh_linka: -150 ؛ thresh_flen: 15
    1. إذا لم يتم تحديد الألياف بدقة ، فاضبط المعلمات بالنقر فوق الزر تحديث أسفل قسم المعلمات في الزاوية اليمنى العليا.
      ملاحظة: يمكن العثور على إرشادات حول كيفية ضبط المعلمات في الصفحة 20 في القسم "3 ملاحظات" من دليل CT-FIRE ، الموجود في مجلد تطبيق CTFIRE. يمكن العثور على نصائح إضافية في مقال ليو وآخرون في القسم 3.5.215.
  5. اضبط إعدادات الإخراج إذا رغبت في ذلك للحد من الألياف التي تظهر على الصور الناتجة. لاتباع هذا البروتوكول ، استخدم الإعدادات الافتراضية التالية: الحد الأدنى لطول الألياف [بكسل]: 30 ؛ الصورة Res. [نقطة في البوصة]: 300; عرض خط الألياف [0-2]: 0.5 ؛ أقصى عرض للألياف [بكسل]: 15
  6. لتحويل وحدات العرض من بكسل إلى ميكرومتر ، افتح الصورة الأصلية في فيجي. استخدم أبعاد الصورة التي تظهر بالبكسل والميكرومتر في الزاوية العلوية اليسرى من نافذة العرض لحساب النسبة.

5. تحليل الصور لكثافة الألياف ، والانحناء ، والمحاذاة ، والثغرة ، ووحدة نمو الخيط ، والبعد الكسوري باستخدام TWOMBLI16

  1. قم بتنزيل TWOMBLI من https://github.com/wershofe/TWOMBLI.
  2. اتبع التعليمات الموجودة في الملف: TwombliDocumentation ضمن "التثبيت والتبعيات".
  3. افتح مجلد TWOMBLI_v1 / البرامج واستبدل AnamorfProperties.xml الملف بملف AnamorfPropertiesEH.xml (الملف التكميلي 1).
  4. في المجلد TWOMBLI_v1/programs، استبدل ملف Twombli_v1.ijm بملف Twombli_v2.ijm (الملف التكميلي 2).
  5. قم بإنشاء مجلد به مجلدات فارغة بداخله يسمى "اختبار HDM" و "أقنعة الاختبار" و "HDM" و "الأقنعة".
  6. قم بتحويل الصور إلى 8 بت tif.
  7. ضع 3-5 صور في مجلد "اختبار مجموعة الإدخال".
  8. ضع جميع الصور المراد تحليلها في مجلد واحد بدون مجلدات فرعية تسمى "مؤهل".
  9. في فيجي، انقر على الإضافات | وحدات الماكرو | تشغيل | اختر Twombli_v2.ijm في twombli/البرامج.
  10. اتبع التعليمات لتشغيل TWOMBLI. لاتباع هذا البروتوكول ، استخدم المعلمات التالية: تشبع التباين ، 0.35 ؛ الحد الأدنى لعرض الخط ، 3 ؛ أقصى عرض للخط ، 3 ؛ دقيقة نافذة الانحناء ، 40 ؛ ماكس انحناء النافذة, 40; الحد الأدنى لطول الفرع ، 10 ؛ الحد الأقصى لشاشة HDM ، 100 ؛ الحد الأدنى لقطر الفجوة ، 0
    ملاحظة: قد تحتاج معلمات الصور إلى الضبط. سيوجه البرنامج المستخدم من خلال اختيار المعلمات ، ويمكن العثور على تعليمات إضافية في TwombliDocumentation.docx الملف ، الذي يأتي مع البرنامج.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم تصوير عين واحدة من كل من الخنازير البالغة الثلاثة (أنثى تبلغ من العمر 4 أشهر ، وذكر يبلغ من العمر 5 أشهر ، وأنثى تبلغ من العمر 6 أشهر) بعد تقسيم العين في مستوى محوري عبر الأطراف السفلية. تم الحصول على ستة مواقع تصوير في مستوى التقسيم XY ، متباعدة 4 مم. في كل موقع تصوير ، تم الحصول على شبكة متجاورة 4 × 4 من صور 70 ميكرومتر × 70 ميكرومتر (الشكل 8). لكل خنزير ، تم تحليل كل صورة على حدة لعدة معلمات (الجدول 1).

تم قياس كثافة الألياف بطريقتين: 1) الط...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أظهرت طرق التصوير الزجاجي السابقة تجميع الأليافالمصطنعة 13 ، أو فقدان تنظيم الألياف ، والاتجاه ، والموقع17 ، أو اعتمدت على دقة أعلى بكثير مع مجال رؤية أصغر ، مما يحد من الرؤى في توزيع الألياف10. يوفر الفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر للأنسجة الطازجة المقسمة بشكل كبير صورا على نطاق ميكرون لألياف الكولاجين الزجاجية مع الحفاظ على تنظيم الألياف الطبيعية واتجاهها وموقعها. في أيدينا ، أدخلت مناهج التلوين القائمة على الصبغة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لا يبلغ جميع المؤلفين عن تضارب المصالح ذي الصلة.

شكر وتقدير

منحة المعاهد الوطنية للصحة الأساسية EY014800 ؛ منحة غير مقيدة من أبحاث الوقاية من العمى ، نيويورك ، نيويورك ، إلى قسم طب العيون والعلوم البصرية ، جامعة يوتا. المعاهد الوطنية للصحة NEI K08 EY034549; مؤسسة مستشفى الأطفال الابتدائية. مؤسسة E. Matilda Ziegler; نشكر الدكتورين غيوم إل هوريو وإم أوستن جونسون على عيون الخنازير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أغاروز الأولVWR0710-500G
سيليكون متعدد الاستخدامات 1 سد، شفافجنرال الكتريك2795576
إسفنجة السليلوز (رمح عين ويك-سيل)بيفر -فيزيتيك000865
قاعدة مخصصة بثلاث شوك NANA
محول مخصص لتركيب زجاج الغطاء الكبيرNANA
زجاج غطاء كبير بقطر 1.42" x  2.36" رقم 1تيد بيلا260460-100
ليغو (قاعدة كلاسيكية، 1 × 8 بلاطات، 1 × 8 طوب، 1 × 6 لوحات)ليغو11023, 3008, 3666, 4162
شفرات الميكروتوم (ملف عالي) ليكا بيوسيستمز14035838926
هدف سيليكون 30x من أوليمبوس UPlanSApoأوليمبوسUPLSAPO30XS
صينية مكعبات ثلج كبيرة من السيليكون (Samuelworld)الامازون713243280060
مناديل الأنسجة (Kimwipes) كيمبرلي كلارك34120

المراجع

  1. Sebag, J. Vitreous and vision degrading myodesopsia. Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).
  2. Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. Structure and mechanics of the vitreoretinal interface. J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).
  3. Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. Complications of acute posterior vitreous detachment. Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).
  4. Ketkar, M., et al. Vitreomacular traction - a review. Eye. 39 (4), 710-717 (2025).
  5. Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).
  6. Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices. PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).
  7. Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).
  8. Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'. Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).
  9. Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro. Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).
  10. Bos, K. J., et al. Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy. Micron. 32 (3), 301-306 (2001).
  11. Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body. Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).
  12. Filas, B. A., et al. Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).
  13. Los, L. I. The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration. Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).
  14. Bredfeldt, J. S., et al. Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer. J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).
  15. Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. Methods for quantifying fibrillar collagen alignment. Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).
  16. Wershof, E., et al. A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix. Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).
  17. François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy. Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).
  18. Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye. Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).
  19. Harris, J. R. Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy. Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).
  20. Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. Size-dependent rheology of type I collagen networks. Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).
  21. Raub, C. B., et al. Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy. Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

شبكة كولاجين الجسم الزجاجيتشريح عين الخنزيرتصوير الهلام الزجاجيتنظيم ألياف الكولاجينمجهر مقلوبالطمر في الآغاروزانفصال الشبكيةتحليل شبكة الأليافصلابة الهلام
تحضير عيون الخنازير للفحص المجهري للانعكاس متحد البؤر لتصور شبكة ألياف الكولاجين الزجاجي
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.