مقالة بحثية

التعبير والأهمية السريرية والدور في تقييم فعالية العلاج المناعي لجزيء التحفيز المشترك LLT1 في سرطان المعدة

619 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68827

⸱

أكتوبر 10, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of General Surgery, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 2Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 3Jiangsu Institute of Clinical Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 4Jiangsu Key Laboratory of Clinical Immunology, Soochow University, 5Jiangsu Key Laboratory of Gastrointestinal Tumor Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University

في هذه المقالة

ملخص

يبحث هذا البحث في LLT1 كمؤشر حيوي للعلاج المناعي التنبؤي في سرطان المعدة من خلال التحليلات المتعددة والسريرية. تقيم الدراسة دور LLT1 في التهرب المناعي وتعديل البيئة الدقيقة للورم لتسهيل مناهج العلاج المناعي الدقيق لتحسين نتائج العلاج.

الملخص

LLT1 هو جزيء نقطة تفتيش مناعي جديد وهدف علاجي محتمل. أدى العلاج المناعي إلى تحسين النتائج في سرطان المعدة المتقدم. ومع ذلك ، فإن العديد من المرضى لا يستجيبون أو يطورون مقاومة ، وتفتقر إلى المؤشرات الحيوية التنبؤية. لا يزال دور LLT1 في التهرب المناعي لسرطان المعدة وتأثيره على استجابة العلاج المناعي غير واضح. لتقييم ذلك ، تم تحليل تعبير LLT1 في مجموعة بيانات سرطان المعدة الغدي لأطلس جينوم السرطان (TCGA) باستخدام خوارزميات متعددة (TIMER و CIBERSORT و ESTIMATE) لتحديد تسلل الخلايا المناعية. تم التحقق من صحة تعبير البروتين عن طريق الكيمياء المناعية (IHC) في 268 عينة من سرطان المعدة الغدي وعن طريق التألق المناعي متعدد الإرسال (MIF) في 115 نسيجا بعد العلاج المناعي. تم تحليل البيانات النسخية والبروتينية المتكاملة للارتباط بميزات البيئة المكروية للورم ونتائج العلاج المناعي السريري. أظهرت النتائج أن ارتفاع تعبير بروتين LLT1 كان مرتبطا بشكل كبير بخصائص الورم الأقل تقدما (انخفاض عمق الغزو والورم الخبيث العقدي. ص < 0.05) وبقاء إجمالي أطول (ص = 0.012). ترتبط مستويات LLT1 mRNA والبروتين بتسلل أكبر للخلايا التائية CD8 + و M1 البلاعم وارتفاع تعبير PD-L1 في البيئة المكروية للورم. من بين المجموعة الأولى المكونة من 198 مريضا لديهم بيانات تنبؤية متاحة ، أظهر المرضى الذين يعانون من ارتفاع تعبير LLT1 (العدد = 117) بقاء إجماليا أطول بكثير مقارنة بأولئك الذين يعانون من انخفاض التعبير (العدد = 81). في المجموعة الثانية من المرضى الذين عولجوا بالعلاج المناعي والعلاج الكيميائي ، كان للأورام ذات التعبير العالي عن LLT1 (العدد = 48) بقاء أطول بدون تقدم (ص = 0.014) من تلك التي تعاني من انخفاض تعبير LLT1 (العدد = 67). لوحظت زيادة كبيرة (P < 0.05) في مجموعات الخلايا المناعية PD-1 + CD161 + في المرضى الفعالين في العلاج المناعي (العدد = 62) مقارنة بالمرضى المقاومين للعلاج (العدد = 53). بشكل قاطع ، يعد تعبير LLT1 مؤشرا حيويا واعدا للتشخيص الإيجابي في سرطان المعدة. على حد علمنا ، هذه هي الدراسة الأولى التي تثبت أن تعبير LLT1 يتنبأ باستجابة محسنة للعلاج الكيميائي والعلاج المناعي المشترك في سرطان المعدة ، مما يدعم إمكاناته في توجيه استراتيجيات العلاج المناعي.

المقدمة

يتميز سرطان المعدة المريئي ، وخاصة سرطان المعدة (GC) ، بكونه الشكلالخامس الأكثر شيوعا للسرطان في جميع أنحاء العالم و5 أكثر الأشكال فتكا. وتكشف الإحصاءات العالمية أنه يتم تحديد ما يقرب من مليون حالة جديدة كل عام، حيث تتحمل منطقة شرق آسيا حصة غير متناسبة من المرض، مما يساهم في أكثر من نصف الإصابة العالمية1. بالنسبة لأولئك الذين تم تشخيص إصابتهم ب GC في المرحلة المبكرة ، فإن احتمال البقاء على قيد الحياة مواتية بشكل كبير ، حيث حقق أكثر من 90٪ معدلات بقاء لمدة 5 سنوات بعد تسلخ تحت الغشاء تحت المخاطي بالمنظار (ESD) أو التدخل الجراحي الجذري2. ومع ذلك ، فإن العرض الدقيق للأعراض الأولية غالبا ما يؤدي إلى تشخيص المرحلة المتقدمة محليا أو النقيلية3،4. التوقعات بالنسبة للمرضى في هذه المراحل المتقدمة رهيبة ، حيث يعاني أولئك الذين تركوا دون علاج من متوسط البقاء على قيد الحياة بشكل عام (OS) بالكاد 6 أشهر. حتى مع إعطاء أنظمة العلاج الكيميائي المركبة القائمة على الفلورويوراسيل والبلاتين ، يتم تمديد متوسط نظام التشغيل فقط إلى ما يقرب منعام 5.

في الآونة الأخيرة ، كان هناك تغيير كبير في علاج سرطان المعدة في مراحله المتأخرة ، بسبب هذه الأدوية الجديدة التي تسمى مثبطات نقاط التفتيش المناعية. إنها تشبه الرصاصة السحرية للخلايا السرطانية التي تحتوي على علامة معينة ، PD-L1 ، تظهر عليها - على الأقل درجة 1 على مقياس النتيجة الإيجابية المجمعة (CPS). هذه العلاجات فعالة للغاية أيضا للسرطانات التي تختلط جميعها في الحمض النووي الخاص بها ، وهو ما يسمى عدم استقرار الأقمار الصناعية الدقيقة العالي (MSI-H). يحدث هذا النهج الجديد فرقا في تزويد المرضى بمزيد من الوقت6،7. تشير التجارب السريرية المحورية إلى أنه ضمن المجموعة الإيجابية ل PD-L1 ، يكتسب الأفراد الذين لديهم CPS 10 أو أعلى زيادة أكثر وضوحا في البقاء على قيد الحياة بعد العلاج بالأجسام المضادة أحادية النسيلة PD-18،9. ومع ذلك ، لا يزال العلاج المناعي الحالي يواجه تحديات سريرية متعددة: معدلات الاستجابة الموضوعية (ORR) بشكل عام أقل من 20٪ ، ومعدلات مقاومة ثانوية تصل إلى 40٪ -60٪ ، وأنظمة التنبؤ بالمؤشرات الحيوية غير الكاملة (يمكن للمؤشرات الحيوية الحالية تحديد 30٪ -40٪ فقط من المستفيدين المحتملين) ، وصعوبات في إدارة الأحداث الضائرة المرتبطة بالمناعة (irAEs) 10،11،12،13،14. على الرغم من أن حصار نقاط التفتيش المناعية المزدوجة (على سبيل المثال ، تثبيط PD-1 / CTLA-4 المشترك) أو أنظمة العلاج المناعي الكيميائي يمكن أن تزيد من معدلات الاستجابة إلى 40٪ -60٪ ، إلا أن ما يقرب من نصف المرضى لا يزالون يفشلون في تحقيق فوائد سريرية مستدامة15. لذلك ، فإن إنشاء أنظمة تصنيف دقيقة تعتمد على ميزات omics المتعددة ، واكتشاف مؤشرات حيوية تنبؤية جديدة ، وتحديد نقاط تفتيش مناعية جديدة ، أصبحت اتجاهات بحثية مهمة لتحسين النتائج السريرية للعلاج المناعي GC.

النسخ 1 الشبيه بالليكتين (LLT1) هو بروتين مرتبط بالليكتين من النوع C ، مع CD161 ، وهو مكون من عائلة مستقبلات الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) ، والتي تعمل كشريك ربط محدد. يؤدي جين CLEC2D ، المسؤول عن توليفه ، إلى ظهور خمسة أشكال إسوية متميزة من خلال أحداث الربط البديلة التي تتجاوز بعض الإكسونات. تم التحقق من صحة المتغير 1 ، المعروف باسم LLT1 ، باعتباره المتغير الوحيد الموجود على غشاء الخلية16،17. لوحظ تعبير LLT1 في الغالب في أنواع مختلفة من الخلايا المناعية ، مثل الخلايا الليمفاوية البائية ، والخلايا القاتلة الطبيعية ، والخلايا المتغصنة (DCs) ، ومجموعات الخلايا التائية المحددة (بما في ذلك الخلايا التائية المنشطة والتنظيمية) ، والخلايا الوحيدة ، والضامة ، كما يتم ملاحظته في بعض الخلايا الخبيثة وأثناء النوبات الالتهابية18. تشير النتائج الأولية إلى أن LLT1 يتم تنظيمه في الخلايا DCs والخلايا البائية بعد تحفيز المستقبلات الشبيهة بالحصيلة (TLR). ثبت أن مشاركة LLT1 مع CD161 تثبط السمية الخلوية بوساطة الخلايا القاتلة الطبيعية ، مما يشير إلى مشاركتها في تعديل الاستجابة المناعية18. في الخلايا البائية ، يتم تنظيم تعبير LLT1 عن طريق العدوى الفيروسية أو التحفيز الالتهابي. عند العمل كخلايا عارضة للمستضد (APCs) ، فإن تفاعل LLT1-CD161 يمارس تأثيرات مناعية مزدوجة عن طريق قمع وظيفة الخلايا القاتلة الطبيعية مع تحفيز تكاثر الخلايا التائية أو إنتاج IFN-γ19.

من المعروف أن LLT1 موجود في مجموعة من الخلايا السرطانية ، بما في ذلك سرطان الثدي الثلاثي السلبي ، والورم الأرومي الدبقي ، وسرطان الغدد الليمفاوية اللاهودجكين للخلايا البائية. يتفاعل هذا البروتين مع مستقبلات CD161 الموجودة في الخلايا القاتلة الطبيعية ، مما يمنع بشكل فعال قدرتها على تدمير الخلايا السرطانية ، وبالتالي يساعد في التهرب من الاستجابة المناعية20،21،22. من الملاحظة البارزة في سرطان الخلايا الحرشفية الفموية البلعومية السلبية لفيروس الورم الحليمي البشري التعبير المتغير عن LLT1 ، والذي ، وفقا للدراسات الكيميائية المناعية ، يشير إلى أهمية تنبؤية إيجابية عند التعبير عنها بشكل كبير داخل الهياكل اللمفاوية الثلاثية (TLS) ، في حين أن وجودها على الخلايا السرطانية مرتبط بنتيجة أسوأ23. علاوة على ذلك ، في سياق سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) ، لم يتم اكتشاف LLT1 في الخلايا السرطانية نفسها ولكنه موجود داخل البيئة المكروية للورم (TME) ، ويرتبط مستوى تعبير mRNA بتشخيص أفضل24.

كما أوضح ماثيوسون وآخرون في أبحاث الورم الدبقي ، فإن حجب CD161 يعزز قتل خلايا الورم الدبقي بوساطة الخلايا التائية في المختبر ويحسن وظيفتها المضادة للورم في الجسم الحي ، مما يسلط الضوء على الإمكانات العلاجية ل CD161 كهدف نقطة تفتيش مناعية25. بالنظر إلى أن LLT1 هو الترابط الكنسي ل CD16118 ، فإن دوره كهدف للعلاج المناعي يستدعي دراسة جادة. على غرار التفاعل الحاسم بين PD-1 و PD-L1 في العلاج المناعي ، فإن التحقيق في الوظائف البيولوجية ل LLT1 في سرطان المعدة وعلاقته بنتائج العلاج المناعي له قيمة سريرية كبيرة.

تقدم هذه الدراسة تحليلا شاملا لأنماط تعبير LLT1 داخل البيئة المكروية لورم سرطان المعدة ، ودمج كل من الفحوصات على مستوى mRNA والبروتين. يقوم بتقييم منهجي إمكانات LLT1 كمؤشر حيوي تنبؤي في سرطان المعدة المتقدم وتقييم قيمته التنبؤية لفعالية العلاج المناعي. تساهم هذه الأفكار في فهم أعمق لإمكاناتها الانتقالية السريرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت مراجعة البحث الذي شمل الأشخاص والموافقة عليه من قبل لجنة الأخلاقيات في المستشفى الأول التابع لجامعة سوشو (الموافقة رقم 2019026). وافق مجلس المراجعة الأخلاقية للمستشفى الأول التابع لجامعة سوشو أو منح إعفاء للمراجعة الأخلاقية لاستخدام البيانات هذه. بالإضافة إلى ذلك ، تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين.

تحليل بيانات المعلوماتية الحيوية
بعد فحص شامل لتحليل تعبير عموم السرطان لقواعد بيانات TCGA و Tumor IMmune Estimation Resource (TIMER) ، تم التحقيق في سلوك LLT1 عبر أنواع مختلفة من السرطان ، مع التركيز بشكل خاص على سرطان المعدة. تم استخدام قاعدة بيانات TISIDB للتحقيق في العلاقة بين مستويات تعبير LLT1 والأنواع الفرعية الجزيئية المختلفة لسرطان المعدة. تم تحليل العلاقة بين الخصائص السريرية للمرضى وتعبير LLT1 بشكل أكبر باستخدام بيانات TCGA من خلال برمجة R. تم استخدام تحليلات GO و KEGG للتحقيق في الدور الوظيفي ل LLT1 في تسرطن المعدة. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام خوارزمية ESTIMATE (تقدير الخلايا الحمضية والمناعية في الأنسجة السرطانية الكبيرة باستخدام بيانات التعبير) لتحديد مستويات تسلل الخلايا المناعية واللحمية في أنسجة الورم وفقا لأنماط تعبير LLT1. تم إجراء مزيد من التحليل باستخدام خوارزمية CIBERSORT لتقييم الارتباطات بين مستويات تعبير LLT1 وأنماط تسلل الخلايا المناعية المحددة داخل البيئة المكروية للورم. تم إجراء تحليل المعلوماتية الحيوية الشامل باستخدام مجموعات بيانات TCGA والبرمجة الإحصائية R (الإصدار 4.4.1) لاستجواب الارتباطات المحتملة بين ملفات تعريف تعبير LLT1 والمؤشرات الحيوية التنظيمية للمناعة. أخيرا ، تم استخدام قاعدة بيانات TCIA (أطلس مناعة السرطان) للتحقيق فيما إذا كان تعبير LLT1 يمكن أن يتنبأ بالاستجابة لعلاج حصار نقاط التفتيش المناعية PD-1 / PD-L1.

عينات GAC وبناء المصفوفات الدقيقة للأنسجة (TMA)
تم إنشاء مجموعتين من بيانات المصفوفات الدقيقة للأنسجة على النحو التالي:

قامت المجموعة الأولى بتحليل عينات بأثر رجعي من 268 مريضا مصابا ب GAC خضعوا لعملية جراحية في عام 2011. اختار علماء الأمراض كتل البارافين ، وحددوا المناطق الأساسية للورم ، وقاموا ببنائها في مصفوفات دقيقة للأنسجة. تم تخصيص معرف مميز لكل موقع عينة فردي لمراقبة المعلمات السريرية المرتبطة بدقة مثل الجنس والعمر وأبعاد الأورام ودرجة تمايز الأورام ومرحلة تطور السرطان وعمق الغزو والإصابة اللمفاوية ووجود انتشار بعيد. تم تعريف مدة البقاء على قيد الحياة الكلي (OS) على أنها الفترة من بدء العلاج حتى حدوث الوفيات أو تاريخ التوقف في ديسمبر 2017. وتجدر الإشارة إلى أن البيانات الشاملة لنظام التشغيل لا تتاح إلا لمجموعة فرعية من 198 مشاركا.

تضمنت المجموعة الثانية 115 مريضا ساذجا للعلاج يعانون من GC المتقدم ، والذين خضعوا للاستئصال الجراحي / بالمنظار في المستشفى الأول التابع لجامعة سوشو بين عامي 2016 و 2023. قام علماء الأمراض بتقييم كتل البارافين وبناء مصفوفات الأنسجة الدقيقة مع المتابعة الدقيقة لتطور المرض. والجدير بالذكر أنه تم جمع جميع العينات قبل أي علاج قبل الجراحة ، ويتألف العلاج بعد الجراحة بشكل أساسي من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة PD-1 جنبا إلى جنب مع العلاج الكيميائي.

تم جمع جميع عينات الاستئصال الجراحي من انتروم المعدة. تم تثبيت جميع العينات في الفورمالين المخزنة المحايدة وجزءا لا يتجزأ من البارافين. بناء على تقييم الأقسام الملطخة ب H & E ، حدد اثنان من كبار علماء الأمراض بشكل مستقل مناطق الأنسجة الأكثر تمثيلا من العينات المدمجة بالبارافين. تم إنشاء المصفوفات الدقيقة للأنسجة (TMAs) باستخدام مصفيف الأنسجة الآلي ، مع وضع نوى الأنسجة بدقة في كتل TMA وفقا لوحدات محددة مسبقا. أخيرا ، تم تقسيم كتل التحليل الحراري الميكانيكي المكتملة بسمك 4 ميكرومتر بواسطة أخصائي نسيجي متمرس.

الكيمياء المناعية (IHC) والتألق المناعي متعدد الإرسال (mIHC)
تم إجراء فحوصات التألق المناعي الكيميائي المناعي ومتعدد الإرسال على مصفوفة دقيقة للأنسجة المبنية. تم تلطيخ IHC وفقا لمنهجية محددة سابقا26. تم نقل المجموعة الأولى من أقسام البارافين الدقيقة إلى شرائح زجاجية وخبزها عند 72 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. بعد إزالة البارافين من الأقسام بالزيلين وإعادة ترطيبها في زيادة تخفيفات الإيثانول بشكل متتالي ، تم حظر نشاط البيروكسيديز الداخلي عن طريق تطبيق محلول مانع البيروكسيديز لمدة 30 دقيقة. تم إجراء استرجاع المستضد عن طريق غلي الشرائح عند 110 درجة مئوية في محلول استرجاع مستضد السترات (الرقم الهيدروجيني 6.0) لمدة 3 دقائق. بعد الحظر باستخدام مخزن مؤقت لحجب BSA بنسبة 5٪ ، تم احتضان الأقسام بأحادي النسيلة CLEC2D المضاد للإنسان للفأر ، CD3 أحادي النسيلة المضاد للإنسان (جاهز للاستخدام) ، أحادي النسيلة CD4 المضاد للإنسان (جاهز للاستخدام) ، أحادي النسيلة CD8 المضاد للإنسان (جاهز للاستخدام) ، أحادي النسيلة CD11c المضاد للإنسان (1:50) أحادي النسيلة CD19 المضاد للإنسان (جاهز للاستخدام) ، الماوس المضاد للإنسان CD31 أحادي النسيلة (جاهز للاستخدام) ، الماوس المضادة للإنسان CD56 أحادي النسيلة (جاهز للاستخدام) ، الماوس المضاد للإنسان CD68 أحادي النسيلة (جاهز للاستخدام) ، أرنب مضاد للإنسان Foxp3 أحادي النسيلة (1:50) ، الماوس المضاد للإنسان IL-17 أحادي النسيلة (1:50) ، الماوس المضاد للإنسان IFN-γ أحادي النسيلة (1:50) ، الماوس المضاد للإنسان Ki67 أحادي النسيلة (1:50) ، الماوس المضاد للإنسان PD-L1 أحادي النسيلة (جاهز للاستخدام) عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها27,28. ثم تم غسل الشرائح واحتضانها بأجسام مضادة ثانوية تحمل علامة بيروكسيداز الفجل (مضادة للفئران والأرانب) في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد الحضانة ، تم غسل العينات ، وتم استخدام نظام الكشف عن EnVision للكشف عن المناعة. تحت المجهر ، عندما تبدأ المناطق البنية في الظهور على الرقاقة ، يلزم المراقبة الدقيقة. يجب إيقاف التفاعل الكروموجيني بمجرد زوال المناطق البنية عن الزيادة. تم تلطيخ الشرائح بهيماتوكسيلين ماير وتركيبها بغراء محايد. في التحكم السلبي ، تم استخدام IgG للفأر أو الأرنب بدلا من الجسم المضاد الأساسي. كانت السيطرة الإيجابية هي أنسجة اللوزتين البشرية. تستخدم المجموعة الثانية من أقسام المصفوفات الدقيقة للكيمياء المناعية متعددة الإرسال (mIHC). عند إعادة استخدام ظروف استرجاع المستضد وحظره المذكورة أعلاه ، تم تحسين لوحة الأجسام المضادة طيفيا على النحو التالي: PD-L1 (480 نانومتر) ، CD161 (520 نانومتر) ، LLT1 (570 نانومتر) ، PD-1 (620 نانومتر) ، CD8 (690 نانومتر) ، و PAN-CK (780 نانومتر). تم تحضين الأجسام المضادة الأولية في ظل نفس الظروف كما في البروتوكولالأصلي 29 (باستثناء PANCK و CD161 ، اللذين تم إدخالهما حديثا) ، في التخفيف الموصى به بنسبة 1: 100 ، متبوعا بتلطيخ مضان لتضخيم إشارة التيراميد (TSA). بعد كل جولة من تلطيخ التألق ، يتم إجراء تجريد الأجسام المضادة ، متبوعا باسترجاع المستضد المتكرر ، وحجب البيروكسيديز الداخلي ، وحجب الهدف غير المحدد قبل احتضان الجسم المضاد الأساسي التالي. عند إجراء الكيمياء المناعية متعددة الإرسال ، هناك ثلاث نقاط حاسمة: يجب إجراء تجارب مسبقة لكل صبغة فلورية ، ويجب إقران الأجسام المضادة المعبر عنها بقوة بإشارات فلورية ضعيفة ، بينما يجب إقران الأجسام المضادة المعبر عنها بشكل ضعيف بإشارات فلورسنت قوية ، وبعد تلطيخ كل علامة فلورية ، يجب ملاحظة نتائج التلوين تحت المجهر في ظل ظروف محمية من الضوء. بعد التلوين بصبغةالفلورسنت 6 ، يتم تطبيق تلطيخ DAPI على نوى خلية الملصق ، ويتم تركيب الشرائح. أخيرا ، تم مسح جميع المصفوفات الدقيقة للأنسجة باستخدام ماسح ضوئي رقمي لعلم الأمراض وتحليلها باستخدام برنامج تحليل صور علم الأمراض الرقمي المدعوم بالذكاء الذكاء الاصطناعي.

تقييم تلطيخ IHC / mIHC
تم تفسير نتائج التلوين من قبل اثنين من أخصائيي علم الأمراض الخبيرين بطريقة مزدوجة التعمية. قاموا بقياس عمق التلوين باستخدام هدف عالي الطاقة (تكبير 200x) أو إعداد الفلورسنت المطابق (200x) ، وتعيين درجات تتراوح من 0 (بدون تلطيخ) إلى 3 (تلطيخ مكثف). تم تقسيم أجزاء الخلايا الإيجابية LLT1 داخل عينات سرطان المعدة إلى أربعة طبقات: 0 (<5٪) ، 1 (5-25٪) ، 2 (26-50٪) ، و 3 (>50٪). تم اشتقاق درجة النشاط المناعي (IRS) من ناتج عمق التلوين ونسبة الخلايا الإيجابية LLT1. اعتبرت العينات التي سجلت صفرا سلبية ، في حين أن الدرجات من 1-4 أشارت إلى تعبير ضعيف ، و 5-7 معتدل ، و 8-9 تعبير قوي. تم تطبيق نفس المعايير لتقييم التعبير عن علامات أخرى مثل Ki67 و CD3. بناء على منهجية التقييم والتجميع ، تم تصنيف العينات على أنها قوية (IRS8-9) أو متوسطة (IRS5-7) أو ضعيفة (IRS1-4) أو معدومة (IRS0). تم تعيين المرضى الحاصلين على أدنى الدرجات (IRS≤4) إلى مجموعة التعبير المنخفض ، وتم تعيين المرضى الحاصلين على درجات أعلى (IRS≥5) إلى مجموعة التعبير العالي.

ومع ذلك، بالنسبة لعلامة PD-L1، تم اعتماد نهج مختلف باستخدام CPS. تم تحديد هذه النتيجة من خلال نسبة الخلايا الإيجابية PD-L1 (بما في ذلك الخلايا السرطانية والمناعية واللحمية) إلى العدد الإجمالي للخلايا السرطانية القابلة للحياة التي تم توسيعها بمعامل 100. تم وضع الأفراد الذين لديهم CPS يتجاوز خمسة في مجموعة عالية التعبير ، بينما تم تجميع أولئك الذين لديهم CPS خمسة أو أقل في مجموعة منخفضة التعبير.

تجميع استجابة العلاج المناعي
تماشيا مع معايير تقييم الاستجابة في الأورام الصلبة الإصدار 1.1 (RECIST 1.1) ، ينقسم تقييم الآفات المستهدفة لدى المرضى إلى أربع فئات متميزة: (أ) الاستجابة الكاملة (CR): اختفت جميع الآفات المستهدفة تماما ، ويجب أن يقيس المحور القصير لجميع الغدد الليمفاوية المرضية (المستهدفة وغير المستهدفة) أقل من 10 مم ؛ (ب) الاستجابة الجزئية: انخفض القطر التراكمي لجميع الآفات المستهدفة القابلة للقياس بنسبة 30 في المائة على الأقل من قياسات خط الأساس؛ (ج) المرض التقدمي: تنطبق هذه الفئة عندما يزداد القطر التراكمي للآفات المستهدفة بنسبة 20 في المائة على الأقل مقارنة بأصغر قيمة مسجلة أثناء الدراسة (باستخدام خط الأساس كمرجع إذا كان يمثل أصغر قيمة)، مع عدم تقل الزيادة المطلقة عن 5 مم؛ بالإضافة إلى ذلك ، يصنف ظهور آفات جديدة أيضا على أنه مرض تقدمي (PD). (د) المرض المستقر (SD): القطر التراكمي للآفات المستهدفة لا يحقق معايير التخفيض للنشاط المرضي النسبي ولا معايير الزيادة لمرض باركنسون طوال الدراسة. تم تنفيذ تقنيتين للتقسيم الطبقي. تضمنت الطريقة الأولى فصل المرضى بناء على حالة استجابتهم ، حيث كان مرضى باركنسون (العدد = 53) و SD (العدد = 46) يتألف من المجموعة غير المستجيبة (العدد = 99) ، بينما شكل مرضى PR (ن = 15) و CR (ن = 1) مجموعة المستجيبين (ن = 16). استلزم النهج الثاني تصنيف المرضى وفقا لتطور المرض ، مع تصنيف مرضى CR و PR و SD على أنهم مجموعة فعالة في العلاج المناعي (ن = 62) ومرضى باركنسون كمجموعة غير فعالة للعلاج المناعي (ن = 53).

التحليل الإحصائي
تم إجراء التقييمات التجريبية باستخدام منصة الحوسبة R (الإصدار 4.4.1) وحزمة البرامج الإحصائية SPSS (الإصدار 27.0). تم فحص التفاوتات بين مجموعات الدراسة من خلال تطبيق تحليل جدول الطوارئ مربع كاي. تم استخدام تقنية الارتباط غير البارامتري الخاصة بسبيرمان للتحقيق في قوة واتجاه الارتباطات بين المتغيرات. تم تحليل الاختلافات في وقت البقاء على قيد الحياة من خلال بناء مقدرات Kaplan-Meier التي تكملها اختبار الترتيب اللوغاريتمي للأهمية. بعد ذلك ، تم استخدام نماذج انحدار المخاطر النسبية كوكس لتحديد العوامل التي يحتمل أن تؤثر على نتائج بقاء المرضى. تم تعريف الدلالة الإحصائية مسبقا على أنها عتبة قيمة p على الوجهين تبلغ <0.05. لضمان متانة النتائج ، تم إجراء تحليلات حساسية شاملة لتقييم المتغيرات المربكة المحتملة ، مع تعديل نماذج متعددة المتغيرات وفقا لذلك. علاوة على ذلك ، تم تقديم تفسيرات صريحة لنسب الخطر لتسهيل الفهم السريري ، مع التركيز على الآثار العملية لعوامل الخطر المحددة على تشخيص المريض.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

العلاقة بين تعبير الرنا المرسال CLEC2D والتصنيف الفرعي لسرطان المعدة / المعلمات السريرية
كشف فحص أولي شامل للسرطان باستخدام مجموعة بيانات TCGA ، بتسهيل من خلال قاعدة بيانات TIMER ، عن ارتفاع ملحوظ في مستويات نسخ CLEC2D عبر الأنسجة السرطانية المختلفة ، كما هو موضح في الشكل 1 أ. تشير هذه الملاحظة إلى أن CLEC2D قد يكون بمثابة عامل مسرطن عام متورط في التسبب في الإصابة بتطور أنواع السرطان المختلفة. تم إجراء مقارنة د...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أظهرت دراستنا تعبيرا أعلى عن CLEC2D mRNA في أنسجة الورم مقارنة بالأنسجة الطبيعية. كشفت نتائج الكيمياء المناعية لسرطان المعدة أن ارتفاع تعبير بروتين LLT1 في أنسجة الورم كان مرتبطا بتشخيص أفضل ويرتبط ارتباطا إيجابيا بتسلل الخلايا المناعية في البيئة المكروية للورم. أشار تحليل الأنسجة من مرضى سرطان المعدة الذين يتلقون العلاج المناعي إلى أن التعبير العالي عن LLT1 يتنبأ باستجابة أفضل للعلاج المناعي. استكشف بحثنا التعبير عن LLT1 وأهميته السريرية في أنسجة سرطان المعدة ، مما يوفر علامة ت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يبلغ المؤلفون عن أي تضارب محتمل في المصالح.

شكر وتقدير

يتم تقديم شكر وتقدير ممتن لقاعدة بيانات TCGA لتقديم دعم البيانات. تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 81974375) ومنح خطة تطوير العلوم والتكنولوجيا في سوتشو (SKY2022129). تلتزم الدراسة بإرشادات ARRIVAL.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
5٪ BSA حجب المخزن المؤقتبكين سولاربيو للعلوم & التكنولوجيا المحدودة ، الصينسويه 3015
مكافحة CD11c   ؛ZSGB-BIO ، الصين5D11
مضاد CD161أبكام ، كامبريدج ، المملكة المتحدةأب302564
مكافحة CD19   ؛  ZSGB-BIO ، الصينEPl69
مكافحة CD3  ZSGB-BIO ، الصينLNl0
مضاد CD31ZSGB-BIO ، الصين  يو ايم اي بي 30
مكافحة CD4ZSGB-BIO ، الصينأوماب64
مكافحة CD56   ؛ZSGB-BIO ، الصينأوماب83
مكافحة CD68   ؛ZSGB-BIO ، الصينKP1
مضاد CD8ZSGB-BIO ، الصينEP334
مضاد CLEC2Dأبكام ، كامبريدج ، المملكة المتحدةأب197341
مكافحة Foxp3آر آند D Systems ، الولايات المتحدة الأمريكية1054 ج
مكافحة IFN- وجاما.  سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةإس سي -74108
مضاد IL-17آر آند D Systems ، الولايات المتحدة الأمريكية  MAB317 
مكافحة Ki67   ؛ZSGB-BIO ، الصين8H5
مضاد للسيتوكيراتين المضاد للعموم   ؛أبكام ، كامبريدج ، المملكة المتحدةأب7753
مضاد PD-1أبكام ، كامبريدج ، المملكة المتحدةأب137132
مضاد PD-L1داكو ، الدنمارك22C3
معدات مصفوفة الأنسجة الآليةEstigen OU ، تارتو ، إستونيابيتشر ATA 27تستخدم هذه الأداة بشكل أساسي لبناء المصفوفات الدقيقة للأنسجة.
محلول استرجاع مستضد الستراتشركة علاء الدين للتكنولوجيا الكيميائية الحيوية المحدودة ، الصينC752119
طقم الكروموجين DAB   ؛AiFang البيولوجية ، الصينAFIHC004
ماسح ضوئي رقمي لعلم الأمراضنينغبو جيانغفنغ تكنولوجيا المعلومات الحيوية المحدودة ، الصينKF-FL-020تستخدم هذه الأداة بشكل أساسي لمسح الكيمياء المناعية ورقائق الكيمياء المناعية المتعددة.
GraphPad Prism 10برنامج GraphPad ، الولايات المتحدة الأمريكيةالإصدار 10.0.3هذا البرنامج مخصص لرسم منحنيات كابلان ماير (مع التحليل الإحصائي لترتيب السجل) ، وتصور البيانات العلمية ، وإعداد الشكل.
برنامج تلفزيونيشركة علاء الدين للتكنولوجيا الكيميائية الحيوية المحدودة ، الصينP743267
محلول حجب البيروكسيديزAiFang البيولوجية ، الصينAFIHC012
بوليمر - HRP مقترن الماعز المضاد للفأر / الأرانب الأجسام المضادة الثانويةAiFang البيولوجية ، الصينAFIHC001
طقم تلطيخ مضان مناعي متعدد الإرسال بستة ألوانAiFang البيولوجية ، الصينAFIHC037تم تصميم مجموعة الكاشف هذه للكيمياء المناعية متعددة الإرسال (mIHC)
SPSSشركة IBM ، الولايات المتحدة الأمريكيةIBM SPSS Statistics 27تم استخدام البرنامج للتحليل الإحصائي للبيانات.
مشروع Rفريق R الأساسيالإصدار 4.4.1تم تحميل جميع حزم R والتعليمات البرمجية ذات الصلة والملفات الأصلية إلى قاعدة البيانات العامة.
برنامج VISIOPHARMفيسيوفارم ، الدنمارك2025.02.2.18022 x64تم تصميم هذا البرنامج بشكل أساسي للتحليل الكمي للصور المرضية.

المراجع

  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: Globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  2. Suzuki, H., et al. Long-term survival after endoscopic resection for gastric cancer: Real-world evidence from a multicenter prospective cohort. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (2), 307-318.e2 (2023).
  3. Ma, S., et al. Clinical application and detection techniques of liquid biopsy in gastric cancer. Mol Cancer. 22 (1), 7(2023).
  4. Ugai, T., et al. Is early-onset cancer an emerging global epidemic? Current evidence and future implications. Nat Rev Clin Oncol. 19 (10), 656-673 (2022).
  5. Wagner, A. D., et al. Chemotherapy for advanced gastric cancer. Cochrane Database Syst Rev. 8 (8), Cd004064(2017).
  6. Chao, J., et al. Assessment of pembrolizumab therapy for the treatment of microsatellite instability-high gastric or gastroesophageal junction cancer among patients in the keynote-059, keynote-061, and keynote-062 clinical trials. JAMA Oncol. 7 (6), 895-902 (2021).
  7. Lee, K. W., et al. Association of tumor mutational burden with efficacy of pembrolizumab±chemotherapy as first-line therapy for gastric cancer in the phase III Keynote-062 study. Clin Cancer Res. 28 (16), 3489-3498 (2022).
  8. Wainberg, Z. A., et al. Efficacy of pembrolizumab monotherapy for advanced gastric/gastroesophageal junction cancer with programmed death ligand 1 combined positive score ≥10. Clin Cancer Res. 27 (7), 1923-1931 (2021).
  9. Zhao, J. J., et al. Low programmed death-ligand 1-expressing subgroup outcomes of first-line immune checkpoint inhibitors in gastric or esophageal adenocarcinoma. J Clin Oncol. 40 (4), 392-402 (2022).
  10. Zhu, Q., Zhang, R., Zhao, Z., Xie, T., Sui, X. Harnessing phytochemicals: Innovative strategies to enhance cancer immunotherapy. Drug Resist Updat. 79, 101206(2025).
  11. Khosravi, G. R., et al. Immunologic tumor microenvironment modulators for turning cold tumors hot. Cancer Commun (Lond). 44 (5), 521-553 (2024).
  12. Gibney, G. T., Weiner, L. M., Atkins, M. B. Predictive biomarkers for checkpoint inhibitor-based immunotherapy. Lancet Oncol. 17 (12), e542-e551 (2016).
  13. Sharma, P., Hu-Lieskovan, S., Wargo, J. A., Ribas, A. Primary, adaptive, and acquired resistance to cancer immunotherapy. Cell. 168 (4), 707-723 (2017).
  14. Naidoo, J., et al. Toxicities of the anti-PD-1 and anti-PD-L1 immune checkpoint antibodies. Ann Oncol. 27 (7), 1362(2016).
  15. Yang, M., Lin, W., Huang, J., Mannucci, A., Luo, H. Novel immunotherapeutic approaches in gastric cancer. Precis Clin Med. 7 (4), pbae020(2024).
  16. Germain, C., et al. Characterization of alternatively spliced transcript variants of clec2d gene. J Biol Chem. 285 (46), 36207-36215 (2010).
  17. Boles, K. S., Barten, R., Kumaresan, P. R., Trowsdale, J., Mathew, P. A. Cloning of a new lectin-like receptor expressed on human NK cells. Immunogenetics. 50 (1-2), 1-7 (1999).
  18. Rosen, D. B., et al. Cutting edge: Lectin-like transcript-1 is a ligand for the inhibitory human nkr-p1a receptor. J Immunol. 175 (12), 7796-7799 (2005).
  19. Germain, C., et al. Induction of lectin-like transcript 1 (llt1) protein cell surface expression by pathogens and interferon-γ contributes to modulate immune responses. J Biol Chem. 286 (44), 37964-37975 (2011).
  20. Marrufo, A. M., et al. Blocking llt1 (clec2d, ocil)-nkrp1a (cd161) interaction enhances natural killer cell-mediated lysis of triple-negative breast cancer cells. Am J Cancer Res. 8 (6), 1050-1063 (2018).
  21. Germain, C., et al. Lectin-like transcript 1 is a marker of germinal center-derived B-cell non-Hodgkin's lymphomas, dampening natural killer cell functions. Oncoimmunology. 4 (8), e1026503(2015).
  22. Roth, P., et al. Malignant glioma cells counteract antitumor immune responses through expression of lectin-like transcript-1. Cancer Res. 67 (8), 3540-3544 (2007).
  23. Sanchez-Canteli, M., et al. Lectin-like transcript 1 (llt1) checkpoint: A novel independent prognostic factor in hpv-negative oropharyngeal squamous cell carcinoma. Biomedicines. 8 (12), 535(2020).
  24. Braud, V. M., et al. Expression of llt1 and its receptor CD161 in lung cancer is associated with better clinical outcome. Oncoimmunology. 7 (5), e1423184(2018).
  25. Mathewson, N. D., et al. Inhibitory CD161 receptor identified in glioma-infiltrating T cells by single-cell analysis. Cell. 184 (5), 1281-1298.e26 (2021).
  26. Guo, L., et al. Association of increased B7 protein expression by infiltrating immune cells with progression of gastric carcinogenesis. Medicine (Baltimore). 98 (8), e14663(2019).
  27. Quan, Q., et al. Expression and clinical significance of PD-L1 and infiltrated immune cells in the gastric adenocarcinoma microenvironment. Medicine (Baltimore). 102 (48), e36323(2023).
  28. Varaden, D., Moodley, J., Onyangunga, O. A., Naicker, T. Morphometric image analysis of placental c-type lectin domain family 2, member d (clec2d) immuno-expression in hiv associated pre-eclampsia. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol X. 3, 100039(2019).
  29. Chen, S., et al. B7-h3 and CD47 co-expression in gastric cancer is a predictor of poor prognosis and potential targets for future dual-targeting immunotherapy. J Cancer Res Clin Oncol. 149 (18), 16609-16621 (2023).
  30. Cancer Genome Atlas Research Network. Comprehensive molecular characterization of gastric adenocarcinoma. Nature. 513 (7517), 202-209 (2014).
  31. Cristescu, R., et al. Molecular analysis of gastric cancer identifies subtypes associated with distinct clinical outcomes. Nat Med. 21 (5), 449-456 (2015).
  32. Thorsson, V., et al. The immune landscape of cancer. Immunity. 48 (4), 812-830.e14 (2018).
  33. Tumeh, P. C., et al. Pd-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance. Nature. 515 (7528), 568-571 (2014).
  34. Lopez De Rodas, M., et al. Biological and clinical significance of tumour-infiltrating lymphocytes in the era of immunotherapy: A multidimensional approach. Nat Rev Clin Oncol. , (2025).
  35. Myojin, Y., et al. Multiomics analysis of immune correlatives in hepatocellular carcinoma patients treated with tremelimumab plus durvalumab. Gut. , (2025).
  36. Marvel, D., Gabrilovich, D. I. Myeloid-derived suppressor cells in the tumor microenvironment: Expect the unexpected. J Clin Invest. 125 (9), 3356-3364 (2015).
  37. Sautès-Fridman, C., Petitprez, F., Calderaro, J., Fridman, W. H. Tertiary lymphoid structures in the era of cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 19 (6), 307-325 (2019).
  38. Ye, Z., et al. Gastric cancer-derived exosomal let-7 g-5p mediated by serpine1 promotes macrophage m2 polarization and gastric cancer progression. J Exp Clin Cancer Res. 44 (1), 2(2025).
  39. Gajewski, T. F., Schreiber, H., Fu, Y. X. Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment. Nat Immunol. 14 (10), 1014-1022 (2013).
  40. Vivier, E., et al. Innate or adaptive immunity? The example of natural killer cells. Science. 331 (6013), 44-49 (2011).
  41. Xiong, S., Dong, L., Cheng, L. Neutrophils in cancer carcinogenesis and metastasis. J Hematol Oncol. 14 (1), 173(2021).
  42. Mantovani, A., Locati, M. Tumor-associated macrophages as a paradigm of macrophage plasticity, diversity, and polarization: Lessons and open questions. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1478-1483 (2013).
  43. Niu, X., et al. Autophagy in cancer development, immune evasion, and drug resistance. Drug Resist Updat. 78, 101170(2025).
  44. Ikeda, H., et al. Immune evasion through mitochondrial transfer in the tumour microenvironment. Nature. 638 (8049), 225-236 (2025).
  45. Gabrilovich, D. I., Nagaraj, S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system. Nat Rev Immunol. 9 (3), 162-174 (2009).
  46. Pan, Y., et al. The protective and pathogenic role of Th17 cell plasticity and function in the tumor microenvironment. Front Immunol. 14, 1192303(2023).
  47. Smyth, M. J., et al. Perforin-mediated cytotoxicity is critical for surveillance of spontaneous lymphoma. J Exp Med. 192 (5), 755-760 (2000).
  48. Galon, J., et al. Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome. Science. 313 (5795), 1960-1964 (2006).
  49. Galon, J., Bruni, D. Approaches to treat immune hot, altered, and cold tumours with combination immunotherapies. Nat Rev Drug Discov. 18 (3), 197-218 (2019).
  50. Chen, D. S., Mellman, I. Elements of cancer immunity and the cancer-immune set point. Nature. 541 (7637), 321-330 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

LLT1 PD L1 T CD8

مقالات ذات صلة