تدرس هذه الدراسة الاختلافات اليومية في إطلاق عامل النمو من الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF) وتستكشف الارتباطات مع مستويات الكورتيزول ، بهدف تحسين توقيت إجراءات التجدد القائمة على PRF.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
تدرس هذه الدراسة الاختلافات اليومية في إطلاق عامل النمو من الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF) وتستكشف الارتباطات مع مستويات الكورتيزول ، بهدف تحسين توقيت إجراءات التجدد القائمة على PRF.
الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF) له تطبيقات سريرية واسعة النطاق في طب الأسنان ، لا سيما في تجديد الأنسجة الرخوة والصلبة ، والتئام تجويف الاستخراج ، وعلاج عيوب اللثة ، وتكبير الجيوب الأنفية ، وإجراءات اللثة المخاطية. PRF عبارة عن مادة حيوية مشتقة من الصفائح الدموية وغنية بعامل النمو يتم إعدادها عبر بروتوكول الطرد المركزي أحادي الخطوة. تهدف هذه الدراسة إلى تقييم ما إذا كانت عوامل النمو المشتقة من PRF تظهر تباينا يوميا بين ساعات الصباح والمساء. شارك عشرون متطوعا أصحاء ، قدم كل منهم ست عينات دم وريدية ، ثلاثة في الساعة 08:00 وثلاثة في الساعة 20:00. من كل نقطة زمنية ، تم استخدام أنبوب واحد لتعداد الدم الكامل ، وواحد لتحليل الكورتيزول في الدم ، وآخر لتحضير PRF (يتم طرد مركزي عند 708 × جملمدة 12 دقيقة). تم قياس عوامل النمو (IGF-1 ، PDGF ، FGFR ، VEGF ، TGFβ-1) في PRF في 24 ساعة و 72 ساعة باستخدام ELISA. تمت مقارنة مستوياتها بين النقاط الزمنية وربطها بمستويات الكورتيزول في الدم. كانت مستويات FGFR أعلى بشكل ملحوظ في 72 ساعة منها في 24 ساعة في العينات المسائية. ومع ذلك ، لم يتم العثور على فروق ذات دلالة إحصائية ل IGF-1 أو PDGF أو VEGF أو TGFβ-1 بين الصباح والمساء. كانت مستويات الكورتيزول مرتبطة سلبا مع PDGF في 72 ساعة في عينات الصباح ومع IGF-1 في 72 ساعة في عينات المساء; ومع ذلك ، لم يلاحظ أي ارتباطات مهمة أخرى. تشير هذه النتائج إلى أن توقيت جمع الدم لا يؤثر بشكل كبير على محتوى عامل نمو PRF ، مما يشير إلى المرونة في البروتوكولات السريرية فيما يتعلق بتوقيت العينة.
الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF) هو مركز الصفائح الدموية من الجيل الثاني يستخدم بشكل شائع في طب الأسنان المتجدد نظرا لأصله الذاتي وسهولة تحضيره ومحتواه النشط بيولوجيا1. يتكون PRF من الطرد المركزي للدم الكامل بدون مضادات التخثر ، ويوفر مصفوفة فيبرين غنية بالصفائح الدموية والكريات البيض التي تفرز عوامل النمو مثل عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية (PDGF) ، وعامل النمو المحول - بيتا 1 (TGF-β1) ، وعامل النمو الشبيه بالأنسولين -1 (IGF-1) ، وعامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) ، ومستقبلات عامل نمو الخلايا الليفية (FGFr). تلعب هذه الجزيئات الحيوية أدوارا مركزية في التكاثر الخلوي ، وتكوين الأوعية الدموية ، وإعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية ، وتجديد الأنسجة2. بالمقارنة مع البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) ، والتي تتطلب مضادات التخثر والتنشيط الخارجي ، يتم إنتاج PRF من خلال عملية خالية من مضادات التخثر من خطوة واحدة تنتج سقالة فيبرين فسيولوجية مع الكريات البيض والصفائح الدموية المحاصرة. تدعم هذه البنية إطلاقا أبطأ وأكثر استدامة لعوامل النمو والسيتوكينات ، مما قد يعزز استقرار الجرح وإصلاح الأنسجة المبكر مع تقليل تعقيد المناولة والتكلفة1،2. علاوة على ذلك ، فإن عدم وجود مضادات التخثر والمنشطات يقلل من التباين المرتبط بالتلاعب وقد يحافظ بشكل أفضل على سلوك الصفائح الدموية الأصلي ، مما يوفر مزايا عملية للاستخدام بجانب الكرسي والتوحيد القياسي عبر المشغلين2.
على الرغم من استخدامه السريري على نطاق واسع ، إلا أن الديناميكيات الزمنية للمكونات النشطة بيولوجيا ل PRF لا تزال غير مفهومة جيدا. يؤثر إيقاع الساعة البيولوجية ، وهو دورة بيولوجية جوهرية مدتها 24 ساعة ، على الأنظمة الفسيولوجية المختلفة ، بما في ذلك وظيفة المناعة وإفراز الهرمونات ومعلمات الدم3،4. الكورتيزول ، هرمون الساعة البيولوجية الأساسي ، يبلغ ذروته في الصباح الباكر وينخفض تدريجيا طوال اليوم5. الأهم من ذلك ، أظهرت الدراسات أن نشاط الصفائح الدموية والقدرة على التجميع والعدد يمكن تعديله أيضا بواسطة آليات الساعة البيولوجية ، مع آثار على التخثر والتئام الجروح6.
نظرا لأن PRF مشتق مباشرة من الدم المحيطي ، فإن توقيت الساعة البيولوجية لجمع الدم يمكن أن يؤثر على حالة تنشيط الصفائح الدموية والإفراج اللاحق عن عوامل النمو أثناء بلمرة الفيبرين. على الرغم من أن الاختلافات النهارية في عدد الصفائح الدموية وعوامل النمو في البلازما الغنية بالصفائح الدموية قد تم تحليلها مسبقا بواسطة Aoto et al.7 ، إلا أنه لا توجد دراسات تفحص بشكل منهجي ما إذا كان PRF المحضر في أوقات مختلفة من اليوم يظهر اختلافات قابلة للقياس في تكوين عامل النمو. لذلك ، تهدف هذه الدراسة التجريبية إلى التحقيق في التباين اليومي لعوامل النمو المشتقة من PRF من خلال مقارنة العينات التي تم جمعها في الصباح والمساء من الأفراد الأصحاء. بالإضافة إلى ذلك ، قمنا بتقييم مستويات الكورتيزول في الدم في كل نقطة زمنية واستكشفنا ارتباطاتها بإطلاق عامل نمو PRF. قد يساعد فهم هذا التباين الزمني في تحسين البروتوكولات السريرية والمساهمة في توحيد العلاجات التجديدية القائمة على PRF. كانت الفرضية الصفرية لهذه الدراسة هي أن توقيت الساعة البيولوجية لجمع الدم لا يؤثر بشكل كبير على تركيز عوامل النمو المنبعثة من الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF). ومع ذلك ، بناء على التنظيم اليومي المعروف لنشاط الصفائح الدموية وإفراز الهرمونات ، تم الافتراض في البداية أن وقت جمع الدم (الصباح مقابل المساء) قد يغير محتوى عامل نمو PRF. من منظور سريري ، يعد توضيح ما إذا كان محتوى عامل نمو PRF حساسا للتباين اليومي أمرا مهما لتوحيد البروتوكولات التجديدية. إذا ظل إطلاق عامل النمو مستقرا إلى حد كبير على مدار اليوم ، فيمكن للأطباء أن يطمئنوا إلى أن توقيت بزل الوريد قد لا يؤثر بشكل كبير على نتائج العلاج ، مما يسمح بالمرونة في جدولة الإجراءات. على العكس من ذلك ، إذا ظهرت اختلافات طفيفة في عوامل محددة ، مثل تلك المشاركة في تكوين الأوعية أو إصلاح الأنسجة ، فيمكن تحسين توقيت جمع الدم في الحالات التي يكون فيها الحد الأقصى من إمكانات التجدد مطلوبا ، على سبيل المثال ، في ظروف الشفاء المعرضة للخطر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أجريت هذه الدراسة في قسم أمراض اللثة ، كلية طب الأسنان ، جامعة تشوكوروفا ، أضنة ، تركيا ، بمشاركة 20 متطوعا صحيا. قبل التضمين ، تم إبلاغ جميع المشاركين بهدف الدراسة ومنهجيتها وإجراءاتها ، وتم الحصول على موافقة خطية مستنيرة. تم منح الموافقة الأخلاقية من قبل لجنة أخلاقيات البحث السريري بكلية الطب بجامعة تشوكوروفا (رقم الموافقة: 125/55 ، التاريخ: 16.09.2022). تم تنفيذ جميع الإجراءات ، بما في ذلك إرشادات السلامة الحيوية الأساسية للتعامل مع الدم البشري وتعليمات التخلص من النفايات للمواد الخطرة بيولوجيا والكواشف الكيميائية ، وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة ومراكز السيطرة على الأمراض8. يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.
1. اختيار المشاركين
كان المشاركون المشمولون في الدراسة أفرادا أصحاء تتراوح أعمارهم بين 18 و 25 عاما ، دون أي مرض جهازي معروف ، والذين أظهروا تعاونا كافيا أثناء الإجراءات. تم استبعاد الأفراد إذا كانوا يعانون من أي حالة جهازية ، أو كانوا حوامل أو مرضعات ، أو كانوا يستخدمون أي دواء أو عوامل هرمونية يمكن أن تؤثر على المعلمات الدموية أو الهرمونية.
2. جمع الدم وتخصيص المجموعات
تم جمع ما مجموعه ست عينات دم وريدية 10 مل من كل مشارك ، ثلاث في الصباح (08:00) وثلاث في المساء (20:00). تم استخدام أنابيب PRF المعقمة من الزجاج الخالي من المواد المضافة (10 مل) في الدراسة. في الجلسة الصباحية ، تم استخدام الأنبوب 1 لتعداد الدم الكامل (CBC) ، والأنبوب 2 لتحليل الكورتيزول في الدم ، والأنبوب 3 لتحضير PRF متبوعا بتحليل عامل النمو. في الجلسة المسائية ، تم استخدام الأنبوب 4 ل CBC ، والأنبوب 5 لتحليل الكورتيزول في الدم ، والأنبوب 6 لتحضير PRF وتحليل عامل النمو. بناء على وقت جمع الدم ، تم توزيع العينات إلى مجموعتين: المجموعة 1 تألفت من PRF نقي محضر من دم الصباح (08:00) ، وتألفت المجموعة 2 من PRF نقي محضر من دم المساء (20:00).
تحضير 3. PRF
تم طرد عينات الدم عند 708 × جم لمدة 12 دقيقة في درجة حرارة الغرفة باستخدام جهاز طرد مركزي مزود بدوار بزاوية ثابتة 40 درجة وأنابيب زجاجية 10 مل. الجهاز المستخدم كان نصف قطر الدوار قابل للتعديل بين 88 مم و 110 مم. في هذه الدراسة ، تم اختيار نصف قطر 88 مم لتوحيد البروتوكول. لم يتم استخدام مضادات التخثر أثناء العملية. بعد الطرد المركزي ، تم تقييم PRF الناتج بشكل مجهري لضمان التكوين السليم ، والذي يتميز بسطح أملس ومتجانس ، وشكل مرن وأسطاني ، واتساق مضغوط وثابت.
4. تحليل عامل النمو ELISA
تم فصل جلطات PRF بعناية عن طبقة خلايا الدم الحمراء باستخدام مقص معقم. تم وزن كل جلطة ، وتمت إضافة وسط ثقافة RPMI-1640 بنسبة 1: 1 بناء على الوزن (جم = مل) من أجل توحيد بيئة الحضانة عبر جميع العينات وضمان الانتشار المستمر لعوامل النمو القابلة للذوبان من مصفوفة PRF. تسمح هذه النسبة بالاستخراج النسبي بناء على حجم الجلطة ، مما يقلل من التباين في تركيزات عامل النمو بسبب كتل الجلطات غير المتكافئة. تم تحضين العينات في شاكر مداري عند 100 دورة في الدقيقة و 3 درجات مئوية لمدة 24 ساعة و 72 ساعة لتعزيز الانتشار المنتظم لعوامل النمو من مصفوفة PRF إلى وسط الاستزراع. بعد الحضانة ، تم جمع المواد الطافية وتخزينها عند -8 درجة مئوية حتى التحليل. تم تحديد تركيزات عامل النمو باستخدام مجموعات ELISA التجارية ، بما في ذلك FGFR و VEGF و IGF-1 و PDGF و TGF-β1 ، باتباع بروتوكول التحضير الخاص بالشركة المصنعة9،10.
5. خطوات ELISA
تمت إضافة المعايير والعينات (100 ميكرولتر لكل منهما) إلى الآبار واحتضانها عند 3 درجات مئوية لمدة 90 دقيقة. ثم تم غسل الآبار ثلاث مرات باستخدام مخزن مؤقت للغسيل. بعد ذلك ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة المسمى بالبيوتين إلى كل بئر واحتضانها عند 3 درجات مئوية لمدة 60 دقيقة ، تليها ثلاث غسلات إضافية. بعد ذلك ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من محلول بيروكسيداز الفجل (HRP) واحتضانه عند 3 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد ثلاث غسلات أخرى ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من كاشف الركيزة واحتضانه لمدة 15 دقيقة. أخيرا ، تمت إضافة 50 ميكرولتر من محلول التوقف إلى كل بئر ، وتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر.
6. التحليل الإحصائي
تم التعبير عن المتغيرات الفئوية كترددات ونسب مئوية ، بينما تم تقديم البيانات العددية كمتوسط ± الانحراف المعياري أو الوسيط (الحد الأدنى والحد الأقصى) ، حسب الاقتضاء. تم تقييم طبيعي المتغيرات العددية باستخدام اختبار شابيرو ويلك. تم تحليل المتغيرات التي لم تفي بافتراض الحالة الطبيعية ، وتحديدا تركيزات عامل النمو ومستويات الكورتيزول ، باستخدام اختبارات غير بارامترية ، بما في ذلك اختبار ويلكوكسون الموقع للمقارنات المزدوجة ومعامل ارتباط رتبة سبيرمان للارتباطات. تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج IBM SPSS Statistics. اعتبرت القيمة p <0.05 ذات دلالة إحصائية. أجريت جميع المقارنات داخل الموضوع للتحكم في التباين بين الأفراد.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أكمل جميع المشاركين المتطوعين البالغ عددهم 20 (10 إناث و 10 ذكور ، تتراوح أعمارهم بين 18 و 25 عاما) الدراسة دون أي فقدان للعينة. أكدت نتائج تعداد الدم الكاملة أن الصفائح الدموية ومعلمات الدم كانت ضمن النطاقات المرجعية الطبيعية في جميع العينات ، مما يثبت موثوقية مستحضرات PRF.
مقارنة بين معايير الدم بين الصباح والمساء
كانت مستويات الكورتيزول أعلى بشكل ملحوظ في عينات الصباح مقارنة بالمساء (ص < 0.001) ، مما يعكس إيقاع الساعة البيولوجية الفسيولوجية. كانت أعداد كرات الدم البيض...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بناء على التنظيم اليومي المعروف لنشاط الصفائح الدموية وإفراز الهرمونات ، تم الافتراض في البداية أن وقت جمع الدم (الصباح مقابل المساء) قد يغير محتوى عامل نمو PRF. هدفت هذه الدراسة إلى اختبار ما إذا كان هناك أي اختلاف زمني من هذا القبيل ، وإذا كان الأمر كذلك ، فما إذا كان مرتبطا بمستويات الكورتيزول في الدم والمعلمات الدموية. تم تصميم الدراسة كتحقيق تجريبي لاستكشاف التباين اليومي في إطلاق عامل النمو المشتق من PRF. لذلك ، لم يتم إجراء حساب رسمي لحجم العينة. ومع ذلك ، يشير تحليل القو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| آلة الطرد المركزي | الثنائي | 913023410238 | |
| أطقم إليسا | اختبار دقيق ، ووهان فاين بيوتك المحدودة ؛ | منتدى إدارة الإنترنت-1 (رقم الكتالوج: EH0165) | |
| أطقم إليسا | اختبار دقيق ، ووهان فاين بيوتك المحدودة ؛ | PDGF (رقم الكتالوج: EH3531) | |
| أطقم إليسا | اختبار دقيق ، ووهان فاين بيوتك المحدودة ؛ | FGFR (رقم الكتالوج: EH0715) | |
| أطقم إليسا | اختبار دقيق ، ووهان فاين بيوتك المحدودة ؛ | VEGF (رقم الكتالوج: EH0327) | |
| أطقم إليسا | اختبار دقيق ، ووهان فاين بيوتك المحدودة ؛ | TGF- & بيتا. 1 (رقم الكتالوج: EH0287) | |
| أنابيب PRF | ![]() | 6370 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.