يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

التأثيرات المضادة للسرطان للمكونات الرئيسية ل Pileostegia tomentella عن طريق موت الخلايا المبرمج الكلاسيكي بوساطة ROS في خلايا سرطان الرئة ذات الخلايا غير الصغيرة

449 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69008

⸱

سبتمبر 19, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1International Zhuang Medicine Hospital affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Zhuang Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, 3Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute of Ethnic Medicine, 4Graduate School of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يقدم هذا البروتوكول طريقة لتقييم موت الخلايا المبرمج بوساطة أنواع الأكسجين التفاعلي (ROS) الناجم عن المركبات الطبيعية في خلايا سرطان الرئة ذات الخلايا غير الصغيرة (NSCLC).

الملخص

تستكشف هذه الدراسة الإمكانات المضادة للسرطان ل Pileostegia tomentella ، مع التركيز بشكل خاص على قدرتها على إحداث موت الخلايا المبرمج الكلاسيكي في خلايا سرطان الرئة ذات الخلايا غير الصغيرة H1299 (NSCLC) من خلال المسارات بوساطة أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS). باستخدام نهج العزل الموجه بالنشاط الحيوي ، تم تحديد مركبين نشطين ، umbelliferone (UMB) و epi-Vogeloside ، على أنهما مكونات سامة للخلايا رئيسية. أظهر كلا المركبين تأثيرات مثبطة كبيرة على بقاء الخلية وأدى بشكل فعال إلى موت الخلايا المبرمج في خلايا H1299. أظهرت التحقيقات الميكانيكية أن العلاج ب UMB و epi-Vogeloside أدى إلى زيادة ملحوظة في مستويات ROS داخل الخلايا ، مما يعني الإجهاد التأكسدي كوسيط رئيسي. كشف تحليل اللطخة الغربية عن زيادة مستويات الكاسباز المشقوق -3 وانخفاض التعبير عن البروتين المضاد للموت البرمج Bcl-2 ، مما يشير إلى تنشيط مسار موت الخلايا المبرمج الجوهري للميتوكوندريا. بالإضافة إلى ذلك ، أظهر التنميط النسخي تغيرات واسعة النطاق في التعبير الجيني ، مما زاد من دعم اضطراب التوازن الخلوي. تشير هذه النتائج إلى أن Pileostegia tomentella ومكوناته النشطة تبشر بالخير كعوامل علاجية محتملة لسرطان الرئة.

المقدمة

يمثل السرطان تحديا عالميا هائلا للصحة العمومية ، يتميز بمعدل وفيات سنوي كبير. سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) هو المحرك العالمي الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان ، ويشكل ما يقرب من 85٪ من حالات سرطان الرئة1. يتأثر التسرطن ، وهو تفاعل معقد بطبيعته للعمليات الجزيئية والخلوية ، بشكل حاسم بالاضطرابات في توازن أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS). ROS ، التي تشمل المؤكسدات غير المستقرة مثل أنيونات الأكسيد الفائق وجذور الهيدروكسيل وبيروكسيد الهيدروجين ، هي منتجات ثانوية لعملية التمثيل الغذائي الخلوي الطبيعي وتؤدي وظائف أساسية في الإشارات والتكاثر والتمايز وموت الخلايا المبرمج2. يمكن أن يؤدي عدم التوازن في تركيزات ROS إلى التعجيل بالإجهاد التأكسدي ، مما قد يؤدي إلى تنشيط مسارات موت الخلايا المبرمجة ، ولا سيما الالتهام الذاتي وموت الخلايا المبرمج ، وبالتالي إعاقة تكاثر الخلايا السرطانية وبقائها على قيد الحياة3. وبالتالي ، يظهر ROS دورا مزدوجا في علم الأورام ، حيث يعمل كمحفزات ومثبطات لتطور الورم. في العقد الماضي ، تقدمت الاستراتيجيات العلاجية ل NSCLC بشكل كبير ، مع تطوير عوامل جديدة مضادة للسرطان مصممة لاستغلال هذه الطبيعة الثنائية التفرع ل ROS التي تمثل مجالا نابضا بالحياة بشكل خاص من التحقيق4.

من المعروف أن العديد من العوامل المضادة للسرطان المركبة كيميائيا ، مثل الأدرياميسين (دوكسوروبيسين) ، وسيسبلاتين ، وسيكلوفوسفاميد ، تحفز موت الخلايا المبرمج في الخلايا السرطانية عن طريق تعزيز إنتاج أنواع الأكسجينالتفاعلية 5. على الرغم من التقدم في العلاجات المستهدفة والأجسام المضادة للعلاج المناعي ، لا يزال العلاج الكيميائي القائم على البلاتين حجر الزاوية في علاج مرضى NSCLC. ومع ذلك ، فإن ظهور المقاومة والآثار الجانبية الضارة من العلاج الكيميائي يستلزم تطوير أدوية جديدة مضادة ل NSCLC. وبالتالي ، فإن استكشاف المصادر الطبيعية للمركبات المضادة للسرطان معترف به بشكل متزايد لأهميته وإمكاناته. سلطت الأبحاث الحديثة الضوء على أن بعض المستخلصات النباتية ومكوناتها النشطة تظهر خصائص قوية مضادة للسرطان ، تتميز بسمية منخفضة وخصوصية عالية والقدرة على استهداف مسارات متعددة6. والجدير بالذكر أن بعض هذه المركبات الطبيعية يمكن أن تعدل مستويات ROS والإشارات7 ، وبالتالي إحداث الالتهام الذاتي أو موت الخلايا المبرمج في الخلايا السرطانية وممارسة التأثيرات العلاجية8،9.

Pileostegia tomentella يد. Zucc ، عشب معمر من جنس ياسمين في البر داخل عائلة Buttercupaceae ، يوجد في الغالب في مناطق مثل اليابان وكوريا الشمالية والصين. تشتهر المكونات المختلفة للنبات ، بما في ذلك الجذور والسيقان والأوراق والزهور ، بخصائصها الطبية ، حيث تقدم فوائد مثل إزالة الحرارة ، وإزالة السموم ، وتقليل التورم ، وتخفيف الآلام ، والتأثيرات المضادة للبكتيريا والمضادة للالتهابات. ألقت الأبحاث الحديثة الضوء على الأنشطة المضادة للسرطان لمستطفعات Hoshi Hairy Vine أو المكونات النشطة ، مما يدل على تأثيرات مثبطة للورم على مجموعة من السرطانات ، بما في ذلك سرطان الورم الدبقي والثدي والقولون وعنق الرحم10. ومع ذلك ، فإن الآليات المحددة المضادة للسرطان ل Pileostegia tomentella ، لا سيما دورها المحتمل في تعديل ROS للحث على الالتهام الذاتي أو موت الخلايا المبرمج في الخلايا السرطانية ، لا تزال غير مستكشفة إلى حد كبير.

على الرغم من الاهتمام المتزايد بالمركبات الطبيعية لعلاج السرطان ، إلا أن الآليات المؤيدة لموت الخلايا المبرمج للمكونات الرئيسية من Pileostegia tomentella في سرطان الرئة لا تزال غير مستكشفة. هذه الدراسة رائدة في تحديد وتشريح السرة و epi-Vogeloside كمحفزات موت الخلايا المبرمج الانتقائي المعتمدة على ROS في NSCLC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.

1. التركيب الكيميائي للتنبؤ بهدف Pileostegia tomentella و NSCLC

تم تحليل المكونات الكيميائية ل Pileostegia tomentella باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء جنبا إلى جنب مع مصيدة الأيونات الخطية - قياس الطيف الكتلي Orbitrap (HPLC-LTQ / MS). تم إذابة المستخلصات في مذيبات مناسبة وتصفيتها قبل الحقن. تم تحقيق الفصل الكروماتوغرافي باستخدام عمود الطور العكسي في إطار برنامج شطف التدرج المصمم خصيصا للفئات المركبة. تم جمع بيانات قياس الطيف الكتلي في وضع التأين بالرش الكهربائي الإيجابي عبر نطاق كتلي يتراوح بين 100-1500 م / ز. تم رسم الهياكل الجزيئية للمركبات المحددة باستخدام برنامج الرسم الكيميائي العام وحفظها بتنسيق SDF. تم تقديم هذه الملفات الهيكلية إلى أداة التنبؤ بالهدف عبر الإنترنت لتحديد الأهداف البيولوجية المحتملة ، مع اختيار أفضل 20 هدفا لمزيد من التحقق من الصحة. تم استرداد الأهداف المرتبطة ب NSCLC من قاعدة بيانات جينية متاحة للجمهور. تم تحديد الأهداف المتداخلة من مجموعتي البيانات كأهداف علاجية محتملة ل Pileostegia tomentella.

2. بناء شبكة المكون المستهدف

تم الحصول على بيانات تفاعل البروتين والبروتين للأهداف المتوقعة من قاعدة بيانات تفاعل البروتين مفتوحة الوصول. تم استيراد بيانات التفاعل إلى برنامج تصور الشبكة العام لبناء شبكة التفاعل المركبة المستهدفة. تم تحليل الخصائص الطوبولوجية للشبكة ، بما في ذلك مركزية الدرجة ، والمسافة الوسطية ، والقرب ، باستخدام أدوات تحليلية مدمجة لتحديد العقد التنظيمية الرئيسية.

3. تحليل إثراء مسار KEGG

تم إجراء التخصيب الوظيفي للبروتينات المستهدفة المتوقعة باستخدام تحليل مسار KEGG عبر أدوات التخصيب المتاحة للجمهور والبرامج الإحصائية. اعتبرت المسارات ذات القيم p المعدلة أقل من 0.05 مهمة. تم دمج المسارات المهمة مع البيانات المركبة المستهدفة لبناء شبكة تفاعل "مسار مركب مستهدف" باستخدام برنامج تصور الشبكة العام. سلط تحليل طوبولوجيا الشبكة الضوء على المراكز التنظيمية البيولوجية الرئيسية ، موضحا الآليات متعددة المكونات والأهداف ل Pileostegia tomentella.

4. استخراج مكونات Pileostegia tomentella

تم طحن سيقان العنب المجففة من Corydalis spinosa إلى مسحوق ناعم. تم استخراج مادة المسحوق بنسبة 70٪ من الإيثانول تحت المعالجة بالموجات فوق الصوتية في درجة حرارة الغرفة لفترة محددة. تم ترشيح المستخلص الخام وتركيزه تحت ضغط منخفض. تم إجراء التقسيم السائل والسائل باستخدام مذيبات ذات قطبية متزايدة ، بما في ذلك الأثير البترولي ، أسيتات الإيثيل ، و n-butanol. تم جمع جزء أسيتات الإيثيل ، الذي أظهر أعلى نشاط بيولوجي في المقايسات الأولية ، وتركيزه وتجفيفه بالتجميد وتخزينه عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام مرة أخرى.

5. خط الخلية وظروف العلاج

تمت زراعة خط خلايا سرطان الرئة البشرية H1299 في وسط RPMI 1640 المكمل ب 10٪ مصل أبقار جنيني عند 37 درجة مئوية في جو مرطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون2. تم زرع الخلايا بكثافة مناسبة وسمح لها بالالتصاق طوال الليل قبل العلاج. تعرضت الخلايا لتركيزات متفاوتة (500 ميكروغرام / مل ، 750 ميكروغرام / مل ، و 1,000 ميكروغرام / مل) من مركبين للاختبار ، UMB و epi-Vogeloside ، كما هو موضح في الجدول 1. بعد 24 ساعة من الحضانة في ظل ظروف الاستزراع القياسية ، تم حصاد الخلايا لإجراء تحليلات لاحقة لتقييم التأثيرات البيولوجية للمركبات.

6. اختبار MTT لبقاء الخلية

تم تقييم التأثيرات السامة للخلايا للمركبات باستخدام مقايسة MTT اللونية. تم زرع خلايا H1299 في صفيحة 96 بئرا بكثافة محددة وسمح لها بالالتصاق طوال الليل. ثم تمت معالجة الخلايا بمركبات الاختبار لمدة 72 ساعة في ظل ظروف الاستزراع القياسية. بعد العلاج ، تمت إضافة محلول MTT إلى كل بئر واحتضانه للسماح للخلايا القابلة للحياة بتحويل MTT إلى بلورات فورمازان أرجوانية غير قابلة للذوبان. بعد الحضانة ، تمت إزالة الوسط ، وتم إذابة بلورات الفورمازان في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO). تم قياس الامتصاص عند 570 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة. تتوافق قيم الامتصاص مع بقاء الخلية ، مما يوفر تقييما كميا للسمية الخلوية المركبة.

7. تقييم سلامة الغشاء عن طريق إطلاق LDH

تم تقييم سلامة غشاء الخلية عن طريق قياس إطلاق نازعة هيدروجين اللاكتات (LDH) كمؤشر على السمية الخلوية. تمت معالجة خلايا H1299 بمركبات الاختبار لمدة 24 ساعة أو 48 ساعة أو 72 ساعة. في كل نقطة زمنية ، تم جمع المواد الطافية المزرعة وإخضاعها لمقايسة نشاط LDH وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. نظرا لأن LDH يتم إطلاقه فقط من الخلايا ذات الأغشية التالفة ، فإن قيم الامتصاص المقاسة تعكس مدى تلف الغشاء الناجم عن المركبات بمرور الوقت.

8. تحليل التدفق الخلوي لموت الخلايا المبرمج

تم تقييم تحريض موت الخلايا المبرمج عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام تلطيخ Annexin V و 7-Aminoactinomycin D (7-AAD). بعد المعالجة بمركبات الاختبار ، تم جمع خلايا H1299 عن طريق الطرد المركزي ، وغسلها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات البارد ، وإعادة تعليقها في مخزن مؤقت ملزم. ثم تم تحضين الخلايا مع Annexin V المقترن بصبغة فلورية و 7-AAD وفقا لبروتوكول التلوين. تم تحليل العينات على الفور عن طريق قياس التدفق الخلوي. سمحت هذه الطريقة بالتمايز بين الخلايا القابلة للحياة (غير الملوطخة) ، والخلايا المبرمج المبكرة (Annexin V إيجابية ، 7-AAD سلبية) ، والخلايا المبرمج المتأخرة أو الميتة (إيجابية لكلا البقعين).

9. القياس الكمي داخل الخلايا ROS

تم قياس مستويات أنواع الأكسجين التفاعلي داخل الخلايا (ROS) باستخدام مقايسة قائمة على التألق. تم زرع خلايا H1299 في صفيحة من 12 بئرا بكثافة 1 × 105 خلايا لكل بئر وتمت زراعتها حتى تصل إلى ما يقرب من 80٪ من التقاء. ثم تمت معالجة الخلايا بالمركبات المحددة لمدة 72 ساعة. بعد العلاج ، تم تحضين الخلايا ب 1 ميكرومتر من مسبار الفلورسنت الحساس ل ROS 2 '، 7'-ثنائي كلورو ثنائي هيدروفلوريسين ثنائي الأسيتات (DCFH-DA) عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في الظلام. بعد الحضانة ، تم حصاد الخلايا ، وتم قياس شدة التألق بطول موجة انبعاث يبلغ 525 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة مضانة. تتوافق شدة التألق مع مستويات ROS داخل الخلايا.

10. تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)

تم زرع خلايا H1299 في ألواح من 6 آبار بكثافة 2 × 105 خلايا لكل بئر وتم زراعتها حتى تصل إلى ما يقرب من 80٪ من التقاء. ثم تمت معالجة الخلايا بالمركبات المحددة لمدة 72 ساعة. تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام طريقة الفينول كلوروفورم المستخدمة على نطاق واسع. تم إجراء تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) باستخدام مجموعة النسخ العكسي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qRT-PCR) باستخدام نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي مع بادئات محددة (مدرجة في الجدول 2). تم حساب مستويات التعبير الجيني النسبية باستخدام طريقة Ct المقارنة ، مع استخدام جينات التدبير المنزلي كضوابط داخلية.

11. التنشيف المناعي للتعبير عن البروتين

تم إجراء تحليل اللطخة الغربية على خلايا H1299 المزروعة والمعالجة. تم استخراج البروتين الكلي باستخدام محلول تحلل مناسب ، وتم توضيح المحللات عن طريق الطرد المركزي عند 10,000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم تحديد تركيزات البروتين باستخدام مقايسة الطيف الضوئي. تم فصل كميات متساوية من البروتين من كل عينة بواسطة SDS-PAGE ونقلها إلى غشاء ثنائي فلوريد البولي فينيلدين (PVDF). تم حظر الأغشية بحليب جاف خالي الدسم بنسبة 5٪ لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة ثم تم احتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية الخاصة ب Bcl-2 و caspase-3 و PARP1 و BAX و GAPDH و Tubulin في التخفيفات الأمثل. بعد الغسيل ، تم تحضين الأغشية بأجسام مضادة ثانوية مناسبة لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. تم تصور عصابات البروتين وتصويرها باستخدام ركيزة كيميائية. تم إجراء تحليل قياس الكثافة باستخدام برنامج تحليل الصور ، وتم تطبيع شدة النطاق إلى GAPDH و Tubulin كعناصر تحكم في التحميل.

12. الفحص المجهري المناعي من Caspase-3

تم تقييم التعبير والتوطين تحت الخلوي ل caspase-3 ، وهو بروتين رئيسي للموت المبرمج ، عن طريق تلطيخ التألق المناعي. بعد العلاج ، تم تثبيت خلايا H1299 ببارافورمالديهايد ، واختراقها بمحلول منظف معتدل ، واحتضانها بجسم مضاد أولي ضد الكاسباز -3. ثم تم تطبيق جسم مضاد ثانوي مصنف بالفلورسنت للكشف عن إشارة الجسم المضاد الأولية. تم تلطيخ نوى الخلية باستخدام صبغة فلورسنت مرتبطة بالحمض النووي. تم تصور الخلايا الملطخة تحت مجهر مضان. قدمت شدة إشارة التألق وتوزيعها الخلوي معلومات نوعية ومكانية حول تنشيط الكاسباز -3 ، مما يدعم مشاركته في استجابة موت الخلايا المبرمج الناجم عن المركب.

13. تسلسل النسخ

لتحديد ملامح استجابة النسخ الخلوي لمركبات الاختبار ، تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من خلايا H1299 المعالجة وتقييمها للتأكد من سلامتها باستخدام طرق مراقبة الجودة القياسية. تم إعداد مكتبات التسلسل وفقا للبروتوكولات المعمول بها وخضعت لتسلسل عالي الإنتاجية باستخدام منصة تسلسل من الجيل التالي. تمت معالجة بيانات التسلسل الأولية من خلال خط أنابيب المعلوماتية الحيوية التقليدي ، والذي تضمن تصفية مراقبة الجودة ، والمحاذاة مع الجينوم المرجعي ، والتقدير الكمي لوفرة النص. تم إجراء تحليل التعبير الجيني التفاضلي لتحديد الجينات ذات التغيرات ذات الدلالة الإحصائية في التعبير بعد العلاج. تم إجراء تحليلات التخصيب والمسار للجينات المعبر عنها تفاضليا لتوضيح العمليات البيولوجية الرئيسية المتأثرة بالمركبات ، وبالتالي توفير نظرة عامة شاملة على النسخ لتأثيراتها الجزيئية.

14. التحليل الإحصائي

يتم التعبير عن جميع البيانات على أنها متوسط ± الانحراف المعياري (SD) من ثلاث تجارب مستقلة على الأقل. تم تحديد الدلالة الإحصائية بين المجموعات باستخدام الطرق القياسية ، بما في ذلك اختبار الطالب أو تحليل مستمر أحادي الاتجاه ، عند الاقتضاء. اعتبرت الفروق ذات دلالة إحصائية بالنسبة للقيم P أقل من 0.05.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

فحص المكونات الرئيسية ل Pileostegia tomentella ضد سرطان الرئة
يتم تقديم نظرة عامة على التصميم التجريبي في الشكل 1. تم استخدام HPLC-LTQ / Orbitrap MS لتوصيف سبعة مكونات رئيسية نشطة بيولوجيا موجودة في Pileostegia tomentella (الجدول 3). بعد ذلك ، تم إجراء تنبؤ بهدف السيليكو على هذه المركبات باستخدام قاعدة بيانات SwissTargetPrediction11 ، وتصفية النتائج لتشمل فقط تلك التي تتجاوز احتما...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

لا يزال سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) مصدر قلق صحي عالمي ملح ، ويتميز ببيولوجيته العدوانية ، وتقدمه السريري السريع ، وإمكاناته النقيلية العالية ، مما يؤدي في كثير من الأحيان إلى نتائج سيئة للمرضى12. على الرغم من أن التدخلات القياسية ، مثل الاستئصال الجراحي والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي ، تقدم فائدة علاجية في المراحل المبكرة من المرض ، إلا أن فعاليتها تتضاءل في المراحل المتقدمة بسبب ظهور مقاومة الأدوية وعبء السمية الجهازية. التسبب الأساسي لسرطان ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى أصحاب البلاغ تضارب في المصالح للإعلان.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل مشروع بناء الانضباط الرئيسي رفيع المستوى للطب الصيني التقليدي - صيدلية الأقليات العرقية (صيدلية تشوانغ) من إدارة الدولة للطب الصيني التقليدي (رقم zyyzdxk-2023165) ؛ برنامج زراعة المواهب "مشروع الشباب" لمستشفى قوانغشي الدولي تشوانغ الطبي (رقم 2022001) ؛ مشروع فريق الابتكار متعدد التخصصات في الطب الصيني في قوانغشي (رقم. GZKJ2309) ؛ برنامج فريق ابتكار تنمية المواهب رفيع المستوى التابع لجامعة قوانغشي للطب الصيني التقليدي (رقم 2022A008) ؛ مشروع البحث والتطوير الرئيسي لقسم العلوم والتكنولوجيا في قوانغشي (رقم. Gui Ke AB21196057) ؛ خطة العمل الثلاثية لعام 2023 لبناء فريق المواهب رفيع المستوى لمستشفى قوانغشي الدولي تشوانغ الطبي (الأرقام GZCX20231203 ، GZCX20231202) ؛ الدفعة الثالثة من برنامج زراعة فريق المواهب رفيع المستوى "مشروع Qihuang" التابع لجامعة قوانغشي للطب الصيني التقليدي (رقم 202414).

مساهمة المؤلف:

ساهم ون تشونغ وليمين جيانغ وبينج تشينغ بالتساوي في هذا العمل ويتشاركون التأليف الأول. كانوا مسؤولين بشكل أساسي عن التصميم التجريبي والحصول على البيانات وتفسير النتائج. أجرى Xiumei Ma تحليل البيانات وساهم في إعداد المخطوطة. شارك شي شياني ودينغ تشينغمي وتشو قوانغيون في تصميم الدراسة وجمع البيانات وأبحاث الأدبيات. أشرف Jiangcun Wei ، المؤلف المقابل ، على تحليل البيانات وتفسيرها ولعب دورا رائدا في صياغة المخطوطة وتنقيحها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الملحق الخامس - طقم الكشف عن موت الخلايا المبرمج PE / 7-AADBD Biosciences556547الكشف عن موت الخلايا المبرمج القائم على قياس التدفق الخلوي
الأجسام المضادة: BAXأبكامأب32503وصمة عار غربية للبروتين المؤيد لموت الخلايا المبرمج
الأجسام المضادة: Bcl-2أبكامأب182858اللطخة الغربية / التألق المناعي
الأجسام المضادة: كاسپاز المشقوق -3أبكامأب32042لطخة غربية / IF
الأجسام المضادة: GAPDHأبكامأب8245الرقابة الداخلية في اللطخة الغربية
الجسم المضاد: PARP1أبكامأب32064وصمة عار غربية لعلامة موت الخلايا المبرمج
الأجسام المضادة: توبولينأبكامأب78078الرقابة الداخلية في اللطخة الغربية
كيم دروبيركين إلمر للمعلوماتيةCCG821391رسم هيكل الجزيئات الصغيرة
نظام التصوير الكيميائيتانون للعلوم و التقنيةتانون 5200لتصور عصابات البروتين
CytoscapeCytoscape.orghttps://cytoscape.orgبناء الشبكة وتحليلها
وصمة عار نووية دابيسيجما د9542وصمة عار نووية زرقاء ل IF
داوودالمؤسسهhttps://david.ncifcrf.govالتعليق التوضيحي الوظيفي وإثراء مسار KEGG
DMSOسيجما 
MFCD00002089		تستخدم لإذابة بلورات الفورمازان
الإيثانول (للاستخراج)سيغماMFCD00003568مذيب استخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية
خلات الإيثيلسيغماMFCD00009171تستخدم للتجزئة النشطة بيولوجيا
الأجسام المضادة الثانوية المقترنة ب FITCأبكامأب6785تستخدم في التألق المناعي
مقياس التدفق الخلويثيرمو ساينتفيكأ29001تستخدم لموت الخلايا المبرمج والكشف عن ROS
مجهر مضانشركة أوليمبوسبي اكس 53 إفلتصوير شرائح التألق المناعي
مجفف التجميدشركة لابكونكو7670520لعينات التجميد والحفاظ عليها
بطاقات الجيناتمعهد وايزمانhttps://www.genecards.orgقاعدة بيانات الجينات لأهمية المرض
HPLC-LTQ-Orbitrap قياس الطيف الكتليثيرمو ساينتفيكإقلاايجافففاسكزميكتحديد المركب بواسطة MS
منصة تسلسل Illumina NovaSeqIllumina Inc.20012850تستخدم لتسلسل الحمض النووي الريبي
طقم فحص السمية الخلوية LDHبيوتايمج0016لقياس إطلاق LDH كمؤشر للسمية الخلوية
قارئ الصفيحة الصغيرةثيرمو ساينتفيكVL0000D0لقياسات الامتصاص في فحوصات MTT و LDH
طقم فحص قابلية خلية MTTBeyotime C0009Sتستخدم لمقايسة MTT لتقييم صلاحية الخلية
آلة qPCRثيرمو ساينتفيك4485701لتحليل التعبير الجيني
برنامج Rمؤسسة Rhttps://www.r-project.orgالحوسبة الإحصائية ورسم المسار
مجموعة النسخ العكسي (RT Kit)فازيمMR201لتخليق (كدنا)
مجموعة إعداد مكتبة RNA-seqIllumina Inc.20020594إعداد المكتبة للتسلسل
SwissTargetPredictionالمعهد السويسريhttp://www.swisstargetprediction.chأداة التنبؤ بالهدف المركب
SYBR مزيج أخضر qPCRفازيمس 311-02لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي
كاشف TRIzol (استخراج الحمض النووي الريبي)سيجما تي 3934لاستخراج الحمض النووي الريبي الكلي
منظف بالموجات فوق الصوتيةبرانسونM1800-CPXHللاستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية
جهاز اللطخة الغربيةثيرمو ساينتفيكأ 56727الرحلان الكهربائي للهلام ونقل البروتين

المراجع

  1. Fan, D., Yu, S., Yang, Y., Qu, S. Pyoluteorin induces apoptosis and autophagy in NSCLC cells. Biol Pharm Bull. 44 (7), 976-983 (2021).
  2. Cui, Q., et al. Modulating ROS to overcome multidrug resistance in cancer. Drug Resist Updat. 41, 1-25 (2018).
  3. Wang, Y., et al. The double-edged roles of ROS in cancer prevention and therapy. Theranostics. 11 (10), 4839-4857 (2021).
  4. Sahoo, B. M., Banik, B. K., Borah, P., Jain, A. Reactive oxygen species (ROS): Key components in cancer therapies. Anticancer Agents Med Chem. 22 (2), 215-222 (2022).
  5. Perillo, B., et al. Ros in cancer therapy: The bright side of the moon. Exp Mol Med. 52 (2), 192-203 (2020).
  6. Luo, H., et al. Naturally occurring anticancer compounds: Shining from Chinese herbal medicine. Chin Med. 14, 48(2019).
  7. Han, X., et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 44, 102010(2021).
  8. Lv, C., et al. Ainsliadimer a induces ROS-mediated apoptosis in colorectal cancer cells via directly targeting peroxiredoxin 1 and 2. Cell Chem Biol. 30 (3), 295-307.e5 (2023).
  9. Jiaqi, L., et al. Andrographolide promoted ferroptosis to repress the development of non-small cell lung cancer through activation of the mitochondrial dysfunction. Phytomedicine. 109, 154601(2023).
  10. Liu, Y., et al. Total coumarins of Pileostegia tomentella induces cell death in SCLC by reprogramming metabolic patterns, possibly through attenuating β-catenin/AMPK/sirt1. Chin Med. 18 (1), 1(2023).
  11. Daina, A., Michielin, O., Zoete, V. Swisstargetprediction: Updated data and new features for efficient prediction of protein targets of small molecules. Nucleic Acids Res. 47 (W1), W357-W364 (2019).
  12. Catania, C., et al. New options and open issues in the management of unresectable stage III and in early-stage NSCLC: A report from an expert panel of Italian medical and radiation oncologists - interaction group. Crit Rev Oncol Hematol. 190, 104108(2023).
  13. Guo, H., et al. Biomarker-targeted therapies in non-small cell lung cancer: Current status and perspectives. Cells. 11 (20), 3200(2022).
  14. Mcnamee, N., Da Silva, I. P., Nagrial, A., Gao, B. Small-cell lung cancer update on targeted and immunotherapies. Int J Mol Sci. 24 (9), 8129(2023).
  15. Jiang, R., et al. The sodium new houttuyfonate suppresses NSCLC via activating pyroptosis through tcons-14036/mir-1228-5p/prkcdbp pathway. Cell Prolif. 56 (7), e13402(2023).
  16. Chen, P., Liu, Y., Wen, Y., Zhou, C. Non-small cell lung cancer in China. Cancer Commun (Lond). 42 (10), 937-970 (2022).
  17. Amorim, R., et al. Mitochondriotropic antioxidant based on caffeic acid antioxcin(4) activates Nrf2-dependent antioxidant defenses and quality control mechanisms to antagonize oxidative stress-induced cell damage. Free Radic Biol Med. 179, 119-132 (2022).
  18. Long, K., et al. Small-molecule inhibition of ape1 induces apoptosis, pyroptosis, and necroptosis in non-small cell lung cancer. Cell Death Dis. 12 (6), 503(2021).
  19. Lin, Z., Cheng, X., Zheng, H. Umbelliferon: A review of its pharmacology, toxicity and pharmacokinetics. Inflammopharmacology. 31 (4), 1731-1750 (2023).
  20. Cruz, L. F., et al. Umbelliferone (7-hydroxycoumarin): A non-toxic antidiarrheal and antiulcerogenic coumarin. Biomed Pharmacother. 129, 110432(2020).
  21. Zheng, S., et al. Systematic review of lonicerae japonicae flos: A significant food and traditional Chinese medicine. Front Pharmacol. 13, 1013992(2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

موت الخلايا المبرمج بوساطة أنواع الأكسجين التفاعليةوأمبريليفيرونوإيبي-فوجيلوسيدوحيوية الخلاياوالإجهاد التأكسديومسار موت الخلايا المبرمج الميتوكوندريوبصمة ويسترن
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.