تم إجراء جميع الإجراءات السريرية وفقا لإعلان هلسنكي وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى شنغهاي تشانغهاي (رقم الموافقة. CHEC2022-156). تم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من جميع المشاركين. تمت الموافقة على التجارب على من قبل لجنة الأخلاقيات في كلية الطب تشانغهاي (رقم الموافقة. CHEC2022-156) وامتثلت للمعايير الوطنية لرعاية المختبر.
الميزات السريرية
توظيف المرضى وتجميعهم
من أغسطس 2022 إلى مارس 2023 ، تم تجنيد 78 مريضا بالعقم تم تشخيص إصابتهم بمتلازمة نقص الكلىيين 10 ويسعون للحصول على العلاج المضاد للفيروسات القهقرية من مركز الطب التناسلي التابع للمستشفى الأول التابع للجامعة الطبية البحرية وقسم العيادات الخارجية في مستشفى يويانغ ، جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي. تم تقسيم المشاركين عشوائيا إما إلى مجموعة ضابطة أو مجموعة معالجة (39 حالة لكل منهما) باستخدام SPSS 23.0 توليد الأرقام العشوائية.
معايير التشخيص
تبع التشخيص الطبي الغربي رأي لجنة الجمعية الأمريكية للطب التناسلي (ASRM) لعام 2020 حول مؤشرات احتياطي المبيض11. وشملت المعايير FSH ≥ 10 وحدة دولية / لتر ، واستراديول ≥ 80 بيكوغرام / مل ، وعدد بصيلات الخلاف (AFC) < 7 ، و AMH < 0.5-1.1 نانوغرام / مل. تم تشخيص متلازمة نقص الكلى يين وفقا لأمراض النساء في الطب الصيني التقليدي12 ومعايير الفعالية التشخيصية لمتلازمات الطب الصيني التقليدي13.
معايير الإدراج والاستبعاد
تم التخطيط لمعايير الإدراج IVF / ICSI-ET باستخدام بروتوكول مضاد. تاريخ من استجابة المبيض الضعيفة (< 5 البويضات المسترجعة); العمر 20-40 سنة ؛ تلبية كل من معايير متلازمة DOR و TCM ؛ وتوقيع موافقة مستنيرة. تضمنت معايير الاستبعاد أمراض بطانة الرحم (الاورام الحميدة ، السل ، خلل التنسج ، السرطان) ، تشوه الرحم ، الأمراض المصاحبة (السكري ، الذئبة) ، العلاج الهرموني الأخير (< 3 أشهر) ، تاريخ جراحة الحوض ، تشوهات الكروموسومات ، أو حساسية الأدوية. تم تطبيق معايير الإقصاء لانحراف البروتوكول أو الأحداث الضائرة أو الانسحاب أو الحمل التلقائي في غضون أسبوعين من التسجيل.
طريقة الدواء
خضعت كلتا المجموعتين لتقييم خط الأساس في يوم الحيض 2-3 عن طريق الموجات فوق الصوتية عبر المهبل واختبار الهرمونات. تلقت المجموعة الضابطة نظام المضاد: FSH المؤتلف أو موجهة الغدد التناسلية البشرية لانقطاع الطمث ، الجرعة الأولية 225 وحدة دولية / يوم في العضل لمدة 5 أيام ، تليها تعديل الجرعة بناء على نمو البصيلات. عندما تجاوز قطر المسام الرئيسي 12 مم ، بدأ مضاد GnRH (0.125 مجم / يوم تحت الجلد) واستمر حتى الزناد. عندما وصلت ≥ 1 بصيلات 1 إلى 18 مم ، ≥ 2 وصلت إلى 17 ملم ، أو ≥ 3 وصلت إلى 16 ملم ، تم تشغيل الإباضة ب 250 ميكروغرام من قوات حرس السواحل الهايتية المؤتلفة ، تليها استرجاع البويضات بعد 34-36 ساعة.
اتبعت مجموعة العلاج نفس البروتوكول مع إضافة يانغجينغ تشونغيو ديكوتيون (YZD), تدار عن طريق الفم 2x يوميا (صباحا ومساء), مغلي واحد يوميا, بدءا من أيام الدورة الشهرية 2-3 حتى يوم الزناد. احتوت الصيغة السريرية على رحمانيا 12 جم ، وبايونيا لاكتيفلورا 12 جم ، وكورنوس أوفيسيناليس 10 جم ، وحشيشة الملاك سينينسيس 12 جم.
مؤشرات الملاحظة
تضمنت النتائج السريرية المعلمات الأساسية للعمر ، ومؤشر كتلة الجسم (محسوبا بالوزن (كجم) / الطول² (م²)) ، ومدة العقم ، و FSH ، وجرعة / مدة موجهة الغدد التناسلية ، ودرجات متلازمة نقص الكلى يين ، وعدد البصيلات الغارة (تم تقييمها بالموجات فوق الصوتية عبر المهبل ، قطرها 2-9 مم) ، والبويضات المسترجعة ، وبويضات الطور الثاني (MII) (المحددة عند استرجاع البويضات) ، والأجنة المخصبة ، والانقسامات ، والأجنة عالية الجودة (المحددة بمعايير مختبر علم الأجنة القياسية) ، ومعدل الحمل السريري ، والذي تم تعريفه على أنه وجود كيس حمل على الموجات فوق الصوتية في 6-7 أسابيع من الحمل.
التجارب
هنا ، تم تأقلم 30 من أنثى فئران Sprague-Dawley من فئة SPF (عمر 8 أسابيع ، 160-200 جم) في ظل ظروف خاضعة للرقابة (23 ± 2 درجة مئوية ، 40٪ -45٪ رطوبة ، دورة ضوء / مظلمة 12 ساعة) مع الطعام والماء المجاني .
تحضير الدواء
تم تحضير YZD ب Rehmannia 30 جم ، حشيشة الملاك 15 جم ، Paeonia lactiflora 15 جم ، و Cornus officinalis 15 جم. تم تقليب الأعشاب في الماء ، وترشيحها من خلال مرشح 200 شبكة ، وتركيزها تحت ضغط منخفض عند 70 درجة مئوية. كانت الحلول النهائية للجرعات المنخفضة والمتوسطة والعالية 0.34 جم / مل و 0.68 جم / مل و 1.35 جم / مل ، بما يعادل 0.5x و 1.0x و 1.2x من الجرعة السريرية من YZD. تم تخزين مغلي في 4 درجات مئوية.
النمذجة والتجميع
تم إحداث نموذج DOR عن طريق الحقن داخل الصفاق من جليكوسيدات ثلاثي التريجيجيوم (40 مجم / كغ يوميا لمدة 15 يوما). تم تعيين الفئران بشكل عشوائي إلى مجموعات علاج فارغة (ن = 6) ، ونموذج (ن = 6) ، ومجموعات علاج YZD (جرعات منخفضة ومتوسطة وعالية ؛ ن = 6 لكل منهما). تم إعطاء التزقيم (10 مل / كغ من وزن الجسم) 1x يوميا ، بدءا من اليوم الأول من حقن جليكوسيدات ثلاثي التريجيج لمدة 15 يوما.
علم الخلايا المهبلية
تم تقييم مراحل الدورة الاسترجمية بواسطة علم الخلايا التقشري المهبلي. تم جمع اللطاخات المهبلية مرة واحدة يوميا (08:00-10:00) باستخدام مسحات قطنية معقمة ، مخففة في 30 ميكرولتر من المحلول الملحي ، وفحصها تحت المجهر الضوئي بتكبير 100x. استمرت فترة المراقبة 15 يوما متتاليا. تم تعريف مؤشر دورة الشبق الطبيعية على أنه نسبة الفئران التي تظهر دورات شبق منتظمة لمدة 4-5 أيام خلال هذه الفترة.
فحوصات الهرمونات
تم جمع الدم الكامل تحت التخدير عن طريق ثقب القلب في نهاية فترة العلاج التي استمرت 15 يوما ، وسمح له بالتجلط في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة ، وتم طرده بالطرد المركزي عند 1000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية للحصول على المصل. تم قياس مستويات E2 و FSH بواسطة ELISA وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
أنسجة المبيض
تم جمع أنسجة المبيض مباشرة بعد القتل الرحيم عن طريق الاستئصال الجراحي لكلا المبيضين ، وشطفها في محلول ملحي بارد لإزالة الدم ، ثم تثبيتها في 4٪ بارافورمالديهايد عند 4 درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة. تم تجفيف الأنسجة في الإيثانول المتدرج ، وتطهيرها في الزيلين ، وتضمينها في البارافين ، وتقسيمها عند 4-5 ميكرومتر. تم تلطيخ الأقسام بالهيماتوكسيلين واليوزين ، وتجفيفها ، وتنظيفها ، وتركيبها.
التحليل الإحصائي
تم تحليل البيانات باستخدام SPSS 26.0. تم التعبير عن المتغيرات الطبيعية كمتوسط ± SD ومقارنتها باختبار t. المتغيرات غير الطبيعية كوسيط (IQR) ومقارنتها باختبار مان ويتني يو. تم التعبير عن المتغيرات الفئوية على أنها ٪ ومقارنتها باختبار مربع كاي. واعتبر P < 0.05 ذا دلالة إحصائية. من أجل الاتساق ، تم تطبيق نفس الأساليب الإحصائية على تحليلات الأرقام (لا يوجد وصف منفصل لاختبار t للطالب).
السلامة والتخلص من النفايات
تم التعامل مع جليكوسيدات بارافورمالديهايد والزيلين والتريتريجيوم في أغطية دخان معتمدة مع قفازات ونظارات واقية ومعاطف مختبر. تم جمع الانسكابات والمستهلكات الملوثة في حاويات النفايات الخطرة المصنفة والتخلص منها وفقا لإجراءات التشغيل القياسية للسلامة البيولوجية المؤسسية. تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على البارافورمالديهايد والزيلين وجليكوسيدات ثلاثي التريجييوم في أغطية دخان مع معدات الحماية الشخصية المناسبة (القفازات ومعاطف المختبر والنظارات الواقية). تم التخلص من النفايات الكيميائية وجثث وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية للسلامة البيولوجية.