يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

يعزز PAK5 تطور سرطان الخلايا الحرشفية في المريء الذي يكشف عنه التنميط النصي

349 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69085

⸱

ديسمبر 16, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Cancer Center, The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, 2Department of Radiology, The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, 3Department of Pathology, The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University

في هذه المقالة

ملخص

تقدم هذه الدراسة طريقة لتقييم وظيفة PAK5 في ESCC، مما يظهر أن التعبير الزائد عنه يتنبأ بتوقعات سيئة ويعزز تقدم الورم عبر محور إشارة PAK5-GAREM1.

الملخص

سرطان الخلايا الحرشفية المريء (ESCC) هو سبب رئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان على مستوى العالم، وخاصة في آسيا. نظرا لعدم ظهور الأعراض المبكرة، يتم تشخيص معظم المرضى في مراحل متقدمة، مما يحد من فعالية العلاج ويزيد من سوء التشخيص. فهم الآليات الكامنة وراء ESCC وتحديد العلامات الحيوية أو الأهداف العلاجية أمر بالغ الأهمية لتحسين نتائج المرضى. تم تورط كيناز بروتين P21 المنشط 5 (PAK5)، وهو عضو في عائلة كيناز البروتين المنشط بالميتوجين، في العديد من الأورام الخبيثة من خلال تنظيم دورة الخلية والهجرة والغزو. ومع ذلك، لا يزال دوره في ESCC غير واضح. قامت هذه الدراسة بتقييم تعبير PAK5 في أنسجة ESCC والأنسجة الطبيعية المجاورة باستخدام الكيمياء المناعية النسية، وأجرت تحليل بقاء Kaplan-Meier لتقييم العلاقة بين PAK5 والتشخيص. تم إنشاء نماذج خلايا ESCC التي تحتوي على تعبير مفرط وتقليل PAK5، وأجريت اختبارات وظيفية، بما في ذلك CCK-8، وتكوين المستعمرات، وفحوصات ترانسويل. علاوة على ذلك، تم إجراء تسلسل mRNA لتحديد الأهداف في المراحل النهائية ومسارات الإشارة التي تنظمها PAK5. أظهرت هذه النتائج أن تعبير PAK5 كان مرتفعا بشكل ملحوظ في أنسجة ESCC مقارنة بالأنسجة الطبيعية، وكان مرتبطا بتوقعات ضعيفة. كشفت الفحوصات الوظيفية أن PAK5 عزز تكاثر خلايا ESCC، وتكوين المستعمرات، وهجرتها، وغزوها، بينما أبرز تحليل النسخ GAREM1 كعامل رئيسي في المراحل اللاحقة. تشير هذه النتائج إلى أن PAK5 يساهم في تقدم ESCC وقد يكون مؤشرا حيويا تنبؤيا وهدفا علاجيا.

المقدمة

على مستوى العالم، يعد سرطان المريء من بين أكثر الأورام الخبيثة فتكا. في الصين، يمثل سرطان الخلايا الحرشفية المريء (ESCC) النوع الفرعي النسيجي السائد. على الرغم من تحقيق تقدم علاجي، إلا أن التوقعات لمرضى ESCC لا تزال مخبئة، حيثتظهر بنسبة بقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات فقط تتراوح بين 10٪ إلى 25٪. ويرجع ذلك إلى حد كبير إلى تحديات الكشف المبكر وقلة توفر العلاجات الفعالة المستهدفة جزيئيا2. على عكس الأورام الصلبة الأخرى التي أظهرت فيها العلاجات المستهدفة وعدا كبيرا، فإن مثل هذه الأساليب في ESCC لا تزال في مراحلها الأولى، بسبب ندرة الأهداف الجزيئية القابلة للتنفيذ.

PAK5، وهو PAK من المجموعة الثانية، يدمج ديناميكيات الهيكل الخلوي وإشارات البقاء، وقد تم ربطه بمقاومة كيميائية في عدة أورامخبيثة 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10، 11. نظرا للدور البارز لإشارات MAPK في بيولوجيا ESCC والاستجابة العلاجية 1,2,12، فقد افترض أن PAK5 يرفع تنظيمه في ESCC ويعزز الأنماط الخبيثة من خلال تعديل إشارات MAPK، مما قد يشمل GAREM1 كمكيف/منظم 13,14,15,16. تم استخدام IHC الكمي، والاضطراب الجيني الوظيفي، والتنميط النصي لاختبار هذه الفرضية.

عادة ما تتضمن إدارة ESCC مزيجا من استئصال المريء، والعلاج الكيميائي، والعلاج الإشعاعي. بينما يمكن أن يكون استئصال المريء علاجيا، إلا أنه يحمل خطرا عاليا للمرض4،8. بالإضافة إلى ذلك، غالبا ما يفشل كل من العلاج الكيميائي والإشعاعي في القضاء على جميع خلايا السرطان، مما يؤدي إلى مقاومة وعودةوانتشار السرطان. برز العلاج المناعي كمحور بارز في علم الأورام مؤخرا، مما أظهر فعاليته في علاج السرطانات المتقدمة. يبرز هذا الاهتمام المتزايد الحاجة الملحة إلى مؤشرات حيوية جديدة يمكن أن تساعد في التشخيص المبكر وتخطيط العلاج ل ESCC. أظهرت دراسات سابقة أن أفراد عائلة PAK الآخرين، مثل PAK1 وPAK4، يشجعون على التكاثر، والغزو، ومقاومة العلاج في ESCC، مما يؤكد أهمية هذه العائلة في بيولوجيا ESCC. ومع ذلك، لا يزال دور PAK5، وهو PAK أقل دراسة من المجموعة الثانية، غير محدد جيدا، مما يحفز الدراسة الحالية17,18.

كيناز 5 المنشط ب P21 (PAK5)، وهو عضو في العائلة الفرعية PAK II، تم التعرف عليه لأول مرة ككيناز خاص بالدماغ في عام 2002. يقع PAK5 على كروموسوم 20p12، ويشفر بروتين يقارب 80 كيلو دالتون، ويوجد بشكل أساسي في الميتوكوندريا والنواة، حيث يلعب أدوارا متنوعة في تنظيم الخلايا 10,11,13. تشمل وظائفه في الميتوكوندريا استقلاب الطاقة وتنظيمها، بينما يرتبط وجوده النووي بنسخ الجينات والتحكم في دورة الخلية. على الرغم من أن PAK5 أقل دراسة من نظيره، يعتقد أنه ضروري لتطور الأعصاب، وبقاء الخلايا، وتطور السرطان10. ومن الجدير بالذكر أن PAK5 تم تورطه في تنظيم الهيكل الخلوي، والآليات المضادة للاستماتة، وتكاثر الخلايا12. تم ربط زيادة تنظيمها في الخلايا الأورامية بمقاومة الأدوية الناشئة، مما يتوافق مع النتائج التي تربط فرط تعبير PAK5 بزيادة مقاومة خلايا الورم للعلاجالكيميائي 10,11,13,14. ومع ذلك، لا تزال وظيفة PAK5 الدقيقة في تقدم ESCC بعيدة المنال. تستكشف هذه الدراسة تأثير PAK5 على بيئة النسخ النصي في ESCC وتداعياته الوظيفية. تم إجراء تحليل التوصيف النصي لتحديد تغيرات التعبير الجيني المرتبطة بنشاط PAK5 في خلايا ESCC. بالإضافة إلى ذلك، تم إنشاء نموذج خلوي ESCC مع تعديل PAK5 متحكم به لتوضيح دوره في نمو الورم وإمكانية النقلة. على عكس استراتيجيات اكتشاف العلامات الحيوية التقليدية في ESCC التي تعتمد بشكل أساسي على الطباعة الغربية أو قياسات النسخ ذات النمط الواحد، يدمج سير العمل الحالي الكيمياء المناعية الكمية، والتحليل النصي، والاختبارات الوظيفية. يتيح هذا النهج المشترك التحقق الجزيئي والظاهري في نفس الوقت، مما يوفر رؤى ميكانيكية مع تحسين الصلة البيولوجية. بالإضافة إلى ذلك، يركز البروتوكول على قابلية التكرار التجريبي، باستخدام عينات الأورام والأنسجة المجاورة المزدوجة، وإجراءات التلوين المناعي الموحدة، ومدخلات RNA عالية الجودة (رقم سلامة RNA ≥ 7) للتسلسل. تعزز هذه الميزات متانة وقابلية تطبيق الاختبارات عبر المختبرات، خاصة للدراسات التي تسعى لتعريف شبكات تنظيمية مدفوعة بالكيناز ذات معنى سريري في ESCC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل لجنة الأخلاقيات في المستشفى الثاني التابع لجامعة هاينان الطبية (رقم الموافقة) LW2022602)، وتم الحصول على موافقة مستنيرة من كل مشارك وفقا لإعلان هلسنكي. الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. جمع عينات من المرضى والأنسجة

تم تسجيل ما مجموعه 40 مريضا لديهم اضطراب كبدي وكلوي مؤكد مرضيا، جميعهم لديهم وظائف كبدية وكلوية طبيعية قبل الجراحة. تم جمع عينات الأورام (المجموعة T) والأنسجة الطبيعية المجاورة (المجموعة N؛ على بعد ≥2 سم من هامش الورم) مباشرة بعد الاستئصال الجراحي. تم تثبيت الأنسجة في 4٪ بارافورمالديهايد (PFA) في PBS في درجة حرارة الغرفة لمدة 7 أيام قبل دمج البارافين.

2. التلوين الكيميائي المناعي

تم تقسيم الكتل المدمجة في البارافين عند 5 ميكرومتر وخبزت عند 60 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. تم إزالة البارافين من الأقسام باستخدام بديل الزيلين، وإعادة ترطيبها عبر الإيثانول المتدرج، وخضعت لاسترجاع المستضدات في محلول سترات الصوديوم بحجم 10 ملليمولار (pH 6.0) عند 95-98 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. تم تبريد نشاط البيروكسيداز الداخلي ب 3٪ بيروكسيد الهيدروجين لمدة 10 دقائق، تلاها الحجب بمصل طبيعي بنسبة 5٪ لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تم حضن الأقسام طوال الليل (12-16 ساعة) عند 4 درجات مئوية باستخدام الأجسام المضادة الأولية المضادة لPAK5 (تخفيف 1:100، انظر جدول المواد). بعد غسلات PBS، تم حضن الشرائح بأجسام مضادة ثانوية مرافق من بيروكسيداز الفجل الحار لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم تم تطويرها باستخدام DAB حتى يظهر اللون (1-5 دقائق، تمت مراقبتها تحت المجهر لتجنب التلوين الزائد)، ثم تم صبغها بالهيماتوكسيلين لمدة 30-60 ثانية. تم تجفيف المقاطع وتركيبها وتصويرها تحت مجهر مجال ساطع. تم قياس شدة التلوين ونسبة الخلايا الموجبة باستخدام برنامج تحليل الصور مع وجود خمسة حقول عشوائية على الأقل لكل قسم (تكبير 200×). اعتمدت طريقة القياس حساب درجة H، مع الصيغة: درجة H = ∑ (درجة شدة التلوين × نسبة الخلايا الإيجابية) (درجة الشدة مصنفة 0 = سالب، 1 = ضعيف، 2 = متوسط، 3 = قوي؛ النسبة المئوية مصنفة من 0-25٪، 26-50٪، 51-75٪، 76-100٪). لضمان الموثوقية، قام اثنان من علماء الأمراض المستقلين بتقييم أعمى، مع اتفاق بين المراقبين κ بقيمة ≥ 0.75. تم تنفيذ معايير مراقبة الجودة بدقة: يجب أن تجتاز الضوابط الإيجابية (نسيج ESCC المعروف ب PAK5 إيجابي في PAK5) والمواد الضابطة السلبية (استبدال الجسم المضاد الأولي ب PBS) بالتحقق من الصحة؛ يجب أن تكون شدة التلوين في الخلفية أقل من حد محدد مسبقا (مثل درجة H < 50)؛ يجب أن يكون معامل التباين (CV) لنتائج التلوين عبر دفعات مكررة <20٪ لاستبعاد التباين التجريبي.

3. خطوط الخلايا والثقافة

تم التحقق من صحة خلايا KYSE-150 (ESCC البشرية) وHEK-293 (التعبئة الفيروسية) بواسطة تحليل التكرار القصير (STR) وتم تأكيد خلوها من الميكوبلازما. تمت زراعة خلايا KYSE-150 في وسط RPMI-1640 مع مكمل 10٪ مصل البقري الجيني (FBS) و1٪ بنسلين-ستربتوميسين (100 U/mL بنسلين و100 ميكروغرام/مل ستربتومايسين). تم الحفاظ على خلايا HEK-293 في DMEM مع نفس الإضافات. تم زراعة الخلايا الفرعية باستخدام 0.25٪ تريبسين-إيدتا عندما وصلت إلى التقاء بنسبة 70٪-80٪، وتم زرعها إلى كثافات مناسبة قبل كل تجربة ب24 ساعة.

4. بناء وعدوى ناقل اللينتيفيروس

تم تصميم ناقلات الفيروسات اللينتيفيرالية إما لزيادة تعبير PAK5 (pLV-EF1α-PAK5-PGK-Puro) أو لإسكات PAK5 (pLV-U6-shRNA-PAK5-PGK-Puro). تم زرع خلايا HEK-293 في أطباق بحجم 10 سم ونقلها عند التقاء بنسبة 70٪-80٪ مع البلازميد الناقل، وبلازميدات التغليف (gag/pol وrev)، وبلازميد الغلاف (VSV-G) بنسبة 4:3:1 باستخدام مادة تحويل دهونية، بإجمالي كمية DNA ~20 ميكروغرام لكل طبق 10 سم. تم استبدال الوسيط بعد 6-8 ساعات من النقل. تم جمع المواد الفائقة الفيروسية عند 48 ساعة و72 ساعة، وتم طرد مركزها بحرارة 500 × جرام لمدة 10 دقائق لإزالة الحطام، وتصفيتها عبر مرشح بحجم 0.45 ميكرومتر، وتركيزها أو تخزينها عند −80 درجة مئوية. للتحويل، تم زرع خلايا KYSE-150 قبل يوم واحد من العدوى وتعرضت لفائق الفيروس عند تعدد العدوى (MOI) بين 5-10 في وجود 8 ميكروغرام/ملتر بوليبرين. تم تعريف MOI بأنه نسبة الوحدات المعدية إلى عدد الخلايا المستهدفة. تم إجراء تجربة تمهيدية لتقدير MOI باستخدام عد GFP أو qPCR، وتم اختيار MOI بين 5-10. تم استبدال الوسط بعد 12-16 ساعة، وتم إنشاء منحنى قتل للبوروميسين من خلال معالجة الخلايا غير المحولة بتركيزات بوروميسين تتراوح بين 0-4 ميكروغرام/مل لمدة 72-96 ساعة لتحديد الحد الأدنى من التركيز القاتل. كان التركيز المختار للاختيار 1-2 ميكروغرام/مل، وتركيز الصيانة 0.5-1 ميكروغرام/مل. تم اختيار الخلايا باستخدام البوروميسين (1-2 ميكروغرام/مل) بدءا من 48 ساعة بعد ذلك. تم التحقق من فرط التعبير أو إسكات PAK5 بواسطة RT-qPCR باستخدام بادئات محددة ل PAK5 (5′-CCAAAGCCTATGGTGGGGGGCC-3′ للأمام، 5′-AGGCCGTTGATGGGGGTTC-3′) وGAPDH (5′-GTGGACATCCGCAAAGAC-3′، العكسي 5′-AAAGGGTGTAACGCAACTA-3′). تم حساب التعبير النسبي ل PAK5 باستخدام طريقة 2−ΔΔCt . أجريت جميع التجارب على ثلاثة نسخ بيولوجية على الأقل.

5. اختبار بقاء خلايا CCK-8

تم تقييم بقاء الخلايا باستخدام مجموعة عد الخلايا 8 (CCK-8)، والتي تعتمد على تقليل مادة WST-8 بواسطة ديهيدروجينات الخلايا. تم زرع خلايا KYSE-150 التي تنمو لوغاريتميا عند 2000 خلية لكل بئر في 96 صفيحة بئر في وسط كامل بسعة 100 ميكرولتر. عند 0 ساعة، 24 ساعة، 48 ساعة، 72 ساعة، و96 ساعة، أضيف 10 ميكرولتر من كاشيف CCK-8 (يحتوي على WST-8) إلى كل بئر. بعد الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين، تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر (A450) باستخدام قارئ الألواح الدقيقة. تم تضمين آبار فارغة تحتوي على وسط فقط. احتوت كل مجموعة تجريبية على ما لا يقل عن ثلاث نسخ بيولوجية، وتم إجراء كل قياس باستخدام خمسة نسخ تقنية.

6. اختبار تكوين المستعمرة

تم زرع معلقات KYSE-150 أحادية الخلية بمقدار 1000 خلية لكل بئر في صفائح ذات 6 آبار وزرعت لمدة 14 يوما، مع استبدال الوسط كل 2-3 أيام. تم تثبيت المستعمرات ب 4٪ PFA لمدة 15 دقيقة، ثم صبغت ب 0.1٪ بنفسجي كريستالي في 20٪ ميثانول لمدة 15 دقيقة، ثم شطفت بالماء، وجفت بالهواء. تم عد المستعمرات التي تحتوي على أكثر من 50 خلية باستخدام برنامج تحليل الصور، وتم حساب معدل تكوين المستعمرات.

7. اختبار غزو البئر

تم طلاء الإدخالات التي تحتوي على مسام 8 ميكرومتر مسبقا بمصفوفة غشاء قاعدي (50 ميكرولتر لكل إدخال، تخفيف بنسبة 1:8) وحضنتها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة؛ تم إجراء مراقبة الجودة قبل زراعة الخلايا: تم إعداد إدخالات فارغة (بدون خلايا) ومضافات تحكم سالبة (بدون جاذب كيميائي) للتحقق من صحة الاختبار، وتم تأكيد تجانس طبقة مصفوفة الغشاء القاعدي من خلال الفحص البصري (أو قياس الوزن لمراقبة أكثر صرامة). تم حرمان الخلايا من المصل في وسط FBS بنسبة 1٪ لمدة 6-12 ساعة، وتم زرع 2 × 10⁵ خلية/مل (200 ميكرولتر لكل إدخال) في الحجرة العلوية. احتوت الحجرة السفلية على متوسط 600 ميكرولتر مع 20٪ من FBS كجاذب كيميائي. بعد 24 ساعة حضانة، تمت إزالة الخلايا غير المتضررة من السطح العلوي، وتم تثبيت الخلايا الغزو على السطح السفلي بالميثانول لمدة 10 دقائق وصبغها ببنفسج بلوري بنسبة 0.1٪ لمدة 15 دقيقة. تم تصوير الخلايا الملونة تحت مجهر سbrightfield وتم عدها في خمسة حقول مجهرية عشوائية على الأقل لكل إدخال (200× تكبير); تم إجراء العد باستخدام طريقة عمياء (حيث لم يكن موظفو العد على علم بتوزيع المجموعات) لتجنب التحيز الذاتي.

8. الكشف الخلوي بالتدفق الخلوي لموت المبرمج

تم جمع الخلايا (بما في ذلك الخلايا العائمة)، وغسلها مرتين باستخدام PBS، وأعيد تعليقها في مخزن الارتباط عند 1 × 106 خلايا/مل. تمت إضافة Annexin V-FITC (5 ميكرولتر) ويوديد البروبيديوم (5 ميكرولتر) إلى 100 ميكرولتر من التعليق، تلاها الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة في الظلام؛ بعد الحضانة، أضيف 400 ميكرولتر لمخزن ارتباط لكل عينة. قبل تحليل تدفق الخلايا المعدنية، تم إجراء تعديل التعويض باستخدام عناصر التحكم ذات اللون الواحد (Annexin V-FITC ذات الألوان الواحدة وPI ذات اللون الواحد) للقضاء على تسرب الفلورة، وتم ضبط بوابة FSC/SSC لاختيار الخلايا الفردية (باستثناء الحطام الخلوي والتجميعات). تم تحليل العينات خلال ساعة واحدة باستخدام مقياس تدفق وخلايا مزود بليزر 488 نانومتر، مع تم التقاط ما لا يقل عن 10,000 حدث لكل عينة. تم قياس مؤشرات الاستماتة باستخدام برنامج تحليل قياس تدفق الخلايا الخلية: تم تطبيق عتبة بوابة موحدة عبر جميع العينات لضمان الاتساق، وتم الإبلاغ عن نسب الخلايا الماستوية المبكرة (Annexin V⁺/PI⁻) وخلايا الاستماتة المتأخرة (Annexin V⁺/PI⁺) بشكل منفصل لتوصيف ملف الاستماتة لكل مجموعة.

9. تسلسل الحمض النووي الريبي وتحليل المعلوماتية الحيوية

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي وتقييمه للنقاء (A260/280 بين 1.8 و2.1) والنزاهة (RIN ≥7 كعتبة مراقبة جودة). تم تنقية mRNA باستخدام خرزات oligo(dT)، وتجزئتها عند 94 درجة مئوية لمدة 5-7 دقائق، ثم تم نسخها عكسيا إلى cDNA. تم تجهيز المكتبات عن طريق إصلاح الطرف، وربط المحول، وتضخيم PCR (8-12 دورة)، وتم تسلسلها على منصة Illumina لتوليد قراءات مزدوجة السرعة بسرعة 150 بت في عمق يتراوح بين 30-50 مليون زوج قراءة لكل عينة. تم تقليم الريد ومحاذاته مع الجينوم المرجعي البشري باستخدام STAR أو HISAT2. تم الحصول على عداد جيني باستخدام featureCounts، وأجري تحليل التعبير التفاضلي باستخدام DESeq2، مع تطبيق عتبات FDR < 0.05 و |log 2 fold change| ≥ 1. تم إجراء تحليل إثراء وظيفي للجينات المعبر عنها بشكل مختلف باستخدام clusterProfiler لمسارات أنطولوجيا الجينات وKEGG (مع تصحيح FDR ببنجاميني-هوشبرغ (BH) < 0.05)، وتم بناء شبكات تفاعل البروتين والبروتين باستخدام قاعدة بيانات STRING.

10. التحليل الإحصائي

تم التعبير عن البيانات المستمرة كمتوسط ± SD من ثلاث تجارب مستقلة على الأقل. أجريت مقارنات بين مجموعتين باستخدام اختبارات t ثنائية الذيل غير المرتبطة، وأجريت مقارنات بين ثلاث مجموعات أو أكثر باستخدام تحليل أنوفاي أحادي الاتجاه تلاها اختبار ما بعد الحدث لتوكي. تم تطبيق اختبارات غير بارامتري حيثما كان ذلك مناسبا. تم تقدير توزيعات البقاء من خلال تحليل كابلان-ماير باستخدام اختبارات التصنيف اللوغاريتمية. بالنسبة لبيانات تسلسل الحمض النووي الريني، تم إجراء تصحيح متعدد للاختبارات باستخدام طريقة بنجاميني-هوشبرغ. يتم الإبلاغ عن قيم p الدقيقة في أساطير الأرقام؛ تم النظر في الدلالة الإحصائية عند P < 0.05، حيث يشير * إلى P < 0.05 و**يشير إلى p < 0.01.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يعبر عن PAK5 بشكل كبير في ESCC ويرتبط بسوء التوقعات
يوضح الشكل 1 سير العمل العام، من التحقق السريري ل PAK5 إلى التحليل الوظيفي والتحليل النصي، الذي يحدد GAREM1 كهدف لاحق. لاختبار فرضية أن PAK5 يعزز تقدم ESCC من خلال تعديل مسار MAPK عبر GAREM1، تم فحص أنماط تعبير PAK5 في أنسجة ESCC وارتباطها بالتوقعات السريرية. أولا، تم استخدام مجموعة بيانات التعبير الجيني GSE269447، المستمدة من قاعدة بيانات التعبير الجيني (GEO)، لفحص الجينات الم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

توفر هذه الدراسة دراسة متعمقا لدور PAK5 في تطور سرطان الخلايا الحرشفية المريء (ESCC) من خلال دمج العينات السريرية، والاختبارات الوظيفية، والتحليل النصي. توسع هذه النتائج فهم مشاركة PAK5 في ESCC، مما يبرز إمكاناته كمؤشر تنبؤي وهدف علاجي في آن واحد.

يتوافق التعبير المفرط الملحوظ عن PAK5 في أنسجة ESCC وارتباطه بضعف بقاء المرضى مع نتائج من سرطانات أخرى، حيث تم ربط PAK5 بتقدم الورم وسوء التوقعات10,11. من خل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه لا توجد مصالح مالية متنافسة أو علاقات شخصية قد تبدو وكأنها تؤثر على العمل المبلغ عنه في هذه الورقة.

شكر وتقدير

وقد دعم هذا العمل مؤسسة هاينان الإقليمية للعلوم الطبيعية في الصين (منحة رقم 822QN474).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مجموعة كشف الاستماتة المبرمج من Annexin V-FITCبيوتايم بيوتكنولوجيC1062Sمجموعة تلوين كشف الخلايا المبرمجة
الأجسام المضادة المضادة ل-PAK5أبكامab110069الجسم المضاد الأساسي ل IHC، التخفيف 1:100
نظام الرحلان الكهربائي الآليأجيلينت2100 بايومحللتقييم سلامة الحمض النووي الريبي
مجموعة تخليق الحمض النوويإنفيتروجين1896649مجموعة النسخ العكسي
محلول البنفسجي الكريستاليسيغما-ألدرتشC3886صبغة المستعمرات والغزو
DMEM ميديومجيبكو (ثيرمو فيشر)11965092وسط زراعة الخلايا
مصل الأبقار الجنيني (FBS)جيبكو (ثيرمو فيشر)16000044مكمل زراعة الخلايا
مقياس التدفق الخلويبكالوريوس العلوم الحيويةFACSCanto IIأداة لتحليل الخلايا
منشور جراف بادبرنامج جراف بادالإصدار 8برامج التحليل الإحصائي والرسوم البيانية
H& مجموعة التلوين الإلكترونيسولاربيولوجياG1120محلول تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين
IgG مضاد للفئران مرتبط ب HRPأبكامab150165الأجسام المضادة الثانوية ل IHC
متسلسل Illumina NovaSeqإلوميناNovaSeq 6000منصة تسلسل عالية الإنتاجية
خط خلايا KYSE-150بنك RIKEN CellRCB2057خط خلايا سرطان المريء الحرشفي البشري
ليبوفكتامين 3000ثيرموفيشرL3000008كاشف النقل
قارئ الميكروبليتبيو-تيك إنسترومنتسELx808جهاز قياس الامتصاص
داينابيد<سوب>TM أوليغو(dT)25sثيرمو فيشر العلمي61005لتنقية mRNA
البنسلين-ستريبتوميسينجيبكو (ثيرمو فيشر)15140122المضادات الحيوية لزراعة الخلايا
يوديد البروبيديوم (PI)سيغما-ألدرتشP4864صبغة تلوين الحمض النووي
RPMI-1640 متوسطجيبكو (ثيرمو فيشر)11875093وسط زراعة الخلايا
مقياس الطيف الفوتونيثيرمو فيشرنانوسدروب ND-1000تركيز الحمض النووي الريبي وقياس النقاء
برمجيات SPSSآي بي إمالإصدار 23برنامج التحليل الإحصائي
إدخالات ترانسويلكورنينغ3422إدخالات اختبار غزو الخلايا

المراجع

  1. Chen, W., et al. Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin. 66 (2), 115-132 (2016).
  2. Pennathur, A., Gibson, M. K., Jobe, B. A., Luketich, J. D. Oesophageal carcinoma. Lancet. 381 (9864), 400-412 (2013).
  3. Zhang, D. G., et al. P21-activated kinase 5 potentiates the chemoresistant phenotype of liver cancer. Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 47(2021).
  4. Kumar, R., Sanawar, R., Li, X., Li, F. Structure, biochemistry, and biology of PAK kinases. Gene. 605, 20-31 (2017).
  5. Wang, X. X., et al. PAK5-EGR1-MMP2 signaling controls the migration and invasion in breast cancer cell. Tumour Biol. 34 (5), 2721-2729 (2013).
  6. Li, D., Yao, X., Zhang, P. The overexpression of p21-activated kinase 5 (PAK5) promotes paclitaxel-chemoresistance of epithelial ovarian cancer. Mol Cell Biochem. 383 (1-2), 191-199 (2013).
  7. Zhang, D. G., et al. P21-activated kinase 5 affects cisplatin-induced apoptosis and proliferation in hepatocellular carcinoma cells. Tumour Biol. 36 (5), 3685-3691 (2015).
  8. Li, T. T., et al. Microrna-138-1-3p sensitizes sorafenib to hepatocellular carcinoma by targeting PAK5 mediated β-catenin/ABCB1 signaling pathway. J Biomed Sci. 28 (1), 56(2021).
  9. Huo, F. C., Pan, Y. J., Li, T. T., Mou, J., Pei, D. S. PAK5 promotes the migration and invasion of cervical cancer cells by phosphorylating satb1. Cell Death Differ. 26 (6), 994-1006 (2019).
  10. Zhang, Y. C., et al. PAK5-mediated phosphorylation and nuclear translocation of nf-κb-p65 promotes breast cancer cell proliferation in vitro and in vivo. J Exp Clin Cancer Res. 36 (1), 146(2017).
  11. Chen, S., et al. Vaccinia-related kinase 2 blunts sorafenib's efficacy against hepatocellular carcinoma by disturbing the apoptosis-autophagy balance. Oncogene. 40 (19), 3378-3393 (2021).
  12. Cao, J. X., Lu, Y. Targeting CDC7 improves sensitivity to chemotherapy of esophageal squamous cell carcinoma. Onco Targets Ther. 12, 63-74 (2019).
  13. Blagoev, B., Ong, S. E., Kratchmarova, I., Mann, M. Temporal analysis of phosphotyrosine-dependent signaling networks by quantitative proteomics. Nat Biotechnol. 22 (9), 1139-1145 (2004).
  14. Kratchmarova, I., Blagoev, B., Haack-Sorensen, M., Kassem, M., Mann, M. Mechanism of divergent growth factor effects in mesenchymal stem cell differentiation. Science. 308 (5727), 1472-1477 (2005).
  15. Olsen, J. V., et al. Global, in vivo, and site-specific phosphorylation dynamics in signaling networks. Cell. 127 (3), 635-648 (2006).
  16. Tashiro, K., et al. a novel adaptor protein for growth factor receptor-bound protein 2, contributes to cellular transformation through the activation of extracellular signal-regulated kinase signaling. J Biol Chem. 284 (30), 20206-20214 (2009).
  17. Zou, X., et al. PRMT5-PAK1 signaling participates in metastasis and is associated with poor prognosis in human esophageal carcinoma. Anticancer Res. 44 (2), 593-604 (2024).
  18. Wei, Y., et al. Nuplazid suppresses esophageal squamous cell carcinoma growth in vitro and in vivo by targeting PAK4. Br J Cancer. 126 (7), 1037-1046 (2022).
  19. Nakagawa, S., et al. An organoid library of human esophageal squamous cell carcinomas (ESCCs) uncovers the chemotherapy-resistant ESCC features. Commun Biol. 8 (1), 507(2025).
  20. Huang, H., et al. P21-activated kinase 4 promotes the progression of esophageal squamous cell carcinoma by targeting lasp1. Mol Carcinog. 60 (1), 38-50 (2020).
  21. Zhong, H., et al. Overexpression of microrna-19a-3p promotes lymph node metastasis of esophageal squamous cell carcinoma via the rAC1/CDC42-PAK1 pathway. Transl Cancer Res. 10 (6), 2694-2706 (2021).
  22. Yu, G., Wang, L. G., Han, Y., He, Q. Y. Clusterprofiler: An R package for comparing biological themes among gene clusters. Omics. 16 (5), 284-287 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تعبير PAK5مؤشر حيوي إنذاريهدف علاجيتكاثر الخلاياهجرة الخلاياالكيمياء النسيجية المناعيةتحليل كابلان-مايرتسلسل mRNA
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.