يستخدم فحص الأنسجة الحيوانية الكشف عن التلألؤ النووي لتحديد النشاط الأنزيمي لسينسيز الجليكوجين عن طريق قياس دمج الجلوكوز المسمى راديو في الجليكوجين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التقييم الكيميائي الإشعاعي لنشاط إنزيم سينسيز الجليكوجين في الأنسجة الحيوانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الجليكوجين هو مستقلب مهم للعديد من الخلايا حقيقية النواة ، وهو جزء لا يتجزأ من تخزين الطاقة وإطلاق الطاقة بسرعة. يعتمد بناء الجزيء على سينسيز الجليكوجين ، وهو إنزيم عالي التنظيم وله وظيفته الأساسية تتمثل في تسهيل الارتباط المتسلسل لوحدات الجلوكوز في بوليمر الجليكوجين المتنامي. يتم تنشيط هذا الإنزيم خيفيا بواسطة الجلوكوز 6 فوسفات ويتم تثبيطه في مواقع متعددة عن طريق الفسفرة. تعد معرفة النشاط الأنزيمي لسينسيز الجليكوجين مكونا رئيسيا لفهم استقلاب الجليكوجين ومستويات طاقة العضلات واضطرابات التمثيل الغذائي مثل مرض السكري وأمراض تخزين الجليكوجين. الموصوفة هنا هي طريقة حساسة وفعالة للغاية لتحديد نشاط سينسيز الجليكوجين في أنسجة العضلات الحيوانية عن طريق قياس كمية الجلوكوز المتكامل ، من الجلوكوز المصنف بالراديو [14C] -UDP-glucose ، إلى جزيئات الجليكوجين. يستخدم هذا الإجراء 14درجة مئوية مشعة وسيتطلب الترخيص المناسب ومساحة المختبر للاستخدام والتخلص. سيتطلب هذا الإجراء أيضا الوصول إلى عداد تلألؤ السوائل.
المقدمة
الجليكوجين ، وهو عديد السكاريد شديد التفرع يتكون من وحدات الجلوكوز ، يعمل كاحتياطي مهم للطاقة في الأنسجة المختلفة ، بما في ذلك العضلات والكبد والدماغ1. يتم تنظيم تخليقها وتحللها بواسطة نظام معقد من الإنزيمات المتخصصة والبروتينات التنظيمية. حيوي لتخليقه الحيوي هو إنزيم السينثيز الجليكوجين (GYS) ، والذي يوجد منه شكلان إسويا (GYS1 و GYS2). GYS1 هو إنزيم تنظيمي مسؤول بشكل مباشر عن تكوين الجليكوجين من الجلوكوز في الخلايا غير الكبدية ، بينما يعمل GYS2 في الكبد. هذه العملية ، المعروفة باسم تكوين الجليكوز ، هي الإضافة المتسلسلة لوحدة فردية من الجلوكوز إلى سلسلة الجليكوجين المتنامية. يحفز GYS نقل الجلوكوز من جلوكوز ثنائي فوسفات يوريدين الوسيط (UDP-glucose) إلى نهاية سلسلة الجليكوجين ، مما يخلق رابطا ألفا 1،4 جليكوسيديك2. بالتنسيق مع إنزيم الجليكوجين المتفرع ، يوسع هذا التفاعل جزيئات الجليكوجين ، مما يوفر تخزينا فعالا للطاقة وإطلاقها.
توجد تقنيات الفحص لقياس نشاط الإنزيم ، مع واحدة من أكثر مجموعات الطرق شيوعا التي تتكون من تلك الموجودة في مجموعة الطيف الضوئي3،4. تعتمد هذه المقايسات عادة على نظام من التفاعلات المقترنة غير المباشرة وتقيس امتصاص المنتج النهائي ، NADH ، عند 340 نانومتر. يتم استهلاك وحدة واحدة من NADH لكل وحدة من UDP المحررة من UDP-glucose بواسطة سينسيز الجليكوجين ، مما ينتج عنه إثارة قابلة للقياس ترتبط ارتباطا مباشرا بنشاط سينسيز الجليكوجين5،6. في حين أن فحوصات قياس الطيف الضوئي غير مكلفة نسبيا ويمكن الوصول إليها ، إلا أنها تأتي مع جانب سلبي بسيط يتمثل في الاعتماد على تفاعل غير مباشر وسلبيات رئيسية للتداخل بسبب تعكر العينة وانخفاض الحساسية ، خاصة مشكلة بالنسبة للعينات الأصغر أو العينات التي تحتوي على القليل / عالي الفسفرة من السينسياز الجليكوجين. تم تطوير فحوصات القياس الفلوري ، باستخدام التفاعلات المقترنة الموضحة أعلاه ، لتحسين الحساسية في الأنسجة العضلية من الإنسان7 والفأر8. توجد تقنيات أخرى لقياس كمية سينسيز الجليكوجين ، مثل التنشيف المناعي9 ، والكيمياء المناعية10 ؛ ومع ذلك ، فإن هذه التقنيات قادرة فقط على تحديد الكمية المادية للإنزيم ، وفي أحسن الأحوال ، يمكن أن تستنتج النشاط من الفسفرة ولكن لا تحدد نشاط الإنزيم بشكل مباشر11.
من بين تقنيات فحص الإنزيم هذه ، تظل الطرق الكيميائية الإشعاعية هي الأكثر استخداما لتحديد نشاط سينسيز الجليكوجين في أنسجة الثدييات بسبب افتقارها إلى التداخل مع تعكر العينة وحساسيتها العالية8،9. تتضمن هذه المقايسات الجلوكوز المسمى إشعاعا من UDP-glucose المسمى إما ب 14C12 أو 3H13 في الجليكوجين ، مما يسمح بالقياس المباشر لنشاط الإنزيم خلال فترة زمنية محددة. في الإجراء التالي ، تتعرض عينة الأنسجة التي تحتوي على سينسيز الجليكوجين لبروكوجين UDP-الجلوكوز والتمهيدي الجليكوجين. يحفز سينسيز الجليكوجين التفاعل الموضح في المعادلة أدناه:
UDP- [14درجة مئوية] جلوكوز + (جليكوجين) ن → (جليكوجين) ن + 1 [14ج] + UDP
بعد فترة زمنية محددة ، يتم إنهاء التفاعل ويتم ترسيب الجليكوجين المحتوي على الجلوكوز المسمى إشعاعا على ورق الترشيح12 (كما هو موضح أدناه) أو يخضع لترشيح الهلام كما هو موضح من قبل Niederwanger et al.14 ويتم قياسه باستخدام كاشف التلألؤ. تتضمن هذه الطريقة أيضا تفاعلا منفصلا متطابقا يتضمن الجلوكوز 6-فوسفات (G6P) ، وهو منشط خيفي لسينسيز الجليكوجين. في ظل الظروف ذات المستويات الكافية من G6P ، يتم تنشيط نشاط سينسيز الجليكوجين إلى أقصى حد ، مما يعرض الإمكانات المطلقة لنشاط سينسيز الجليكوجين لعينة معينة. تم تعديل الطريقة الموضحة هنا من سوزوكي وزملاؤه15 إلى تنسيق 96 بئرا وتم تحسينها للاستخدام في أنسجة عضلات الفأر. ومع ذلك ، يمكن تغيير البروتوكول للأنسجة والأنواع الحيوانية الأخرى.
على الرغم من اعتبارات التكلفة والسلامة المتأصلة المرتبطة بالمواد المشعة ، فإن المقايسات الكيميائية الإشعاعية تقدم مزايا كبيرة على البدائل غير المشعة ، بشرط توفر الأدوات. يوضح الإجراء التالي بالتفصيل وسيلة حساسة وقوية للغاية لتحديد نشاط سينسيز الجليكوجين ، وهو إنزيم رئيسي في استقلاب الجليكوجين ، في أنسجة العضلات الحيوانية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل لجنة رعاية واستخدام بجامعة بول ستيت. مجموعات الذكور والإناث من B6 ؛ 129-Gaatm1Rbn / J الفئران البرية ، التي يبلغ عمرها 3 أشهر ، تستخدم كمثال تمثيلي في هذه المخطوطة. يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.
1. التحضير قبل الفحص
- احصد الأنسجة عن طريق خلع عنق الرحم16 وقم بتجميدها على الفور في سائل N2 للحفاظ على مخازن الجليكوجين وتخزينها في سائل N2 أو مجمد منخفض للغاية حتى بدء الفحص.
- قم بإعداد محاليل المخزون قبل بدء مقايسة سينسيز الجليكوجين (الجدول 1).
- تحديد عدد عينات الماوس المكررة وعناصر التحكم المطلوبة للمقايسة. تتطلب كل عينة فأر أربعة تكرارات إجمالية ، اثنان لكل تفاعل (وجود أو عدم وجود G6P) (انظر الشكل 1 والجدول 2).
- قطع ورق الكروماتوغرافيا إلى شرائح 4 سم. يعلق الجليكوجين على هذه الورقة ويظل مرتبطا أثناء عملية الغسيل. باستخدام عرض (6 مم) لآلة تمزيق الورق ، قم بتقطيع ورق الكروماتوغرافيا إلى أجزاء فردية رفيعة.
- باستخدام قلم رصاص ، قم بتسمية شرائط الورق المخصصة مع تعريف الماوس والفراغات والإجماليات. تجنب استخدام الحبر.
- قم بتحميل أوراق الكروماتوغرافيا في قالب الكتلة الخشبية. يحتوي كل قالب على ما يصل إلى 12 ورقة ، أي ما يعادل صفا واحدا من لوحة 96 بئرا.
- الحصول على مشابك ورق الكروماتوغرافيا (أسطح الحافظة).
- قم بإعداد مشبك واحد لكل صف من التفاعل عن طريق تثبيت حواف أوراق الكروماتوغرافيا ، مع ترك غالبية مساحة سطح الأوراق مكشوفة. تأكد من أن الحواف الملصقة مرئية.
- قم بتسمية أنابيب microfuge سعة 1.7 مل مع تحديد العينة. أنبوبان لكل عينة. واحد للتجانس والآخر للطايف.
- قبل بدء الفحص ، قم بإعداد كل من مخاليط تفاعل + و - G6P ، انظر الجدول 3 لمزيد من المعلومات. قم بإعداد 2,400 ميكرولتر من كل خليط تفاعل.
2. تفاعل نشاط سينسيز الجليكوجين الكيميائي الإشعاعي
تنبيه: تحتوي هذه الخطوة على استخدام [14C]-UDP-glucose، وهي مادة مشعة. التعامل معها وتخزينها والتخلص منها بطريقة معتمدة من قبل لجنة التنظيم النووي (NRC).
- أضف 30 ميكرولتر من [14C] -UDP-glucose (0.1 μCi / μL) إلى 2,400 ميكرولتر من كل من خلطات تفاعل (+/- G6P) للحصول على تركيز نهائي قدره 0.0012 μCi / μL. هذه الوصفة مناسبة ل 18 عينة.
ملاحظة: يمكن تغيير حجم [14C]-UDP-glucose للحفاظ على الاستخدام وضمان الحساسية الكافية. على سبيل المثال ، استخدم 50 ميكرولتر لأنسجة دماغ الفأر و 25 ميكرولتر لقلب الفأر. - مخاليط تفاعل دوامة وحصة 50 ميكرولتر لكل بئر من صفيحة 96 بئرا تحتوي على عينات وفراغات ومجاميع (الجدول 2). بعد ذلك ، غطيها بغشاء لوح وضعيها عند 4 درجة مئوية.
- ضع مثبطات البروتياز لتذوب في درجة حرارة الغرفة. يتم تفصيل هذه المثبطات في الجدول 4 مع معلومات إضافية.
- كتلة 30-50 مجم من الأنسجة المجمدة. ~ 30 ملغ هو الأمثل لعينات العضلات والعضلات والقلب. ~ 50 ملغ للدماغ. احتفظ بالأنسجة وأنابيب الصغر في سائل N2 وقم بوزن الأنسجة بسرعة لضمان بقاء الأنسجة مجمدة. استخدم مدقة مبردة لطحن الأنسجة أكثر.
- قم بإعداد عازلة التجانس مع مثبطات البروتياز على الجليد.
- عينة واحدة في كل مرة ، انقل الأنبوب مع الأنسجة من السائل N2 إلى الثلج بغطاء بارد لمدة 1 دقيقة. أضف غطاء بارد (غطاء أنبوب به ثلاثة ثقوب صغيرة مبردة في السائل N2) إلى أنبوب العينة بينما لا يزال في السائل N2. هذا يمنع فقدان الأنسجة حيث يتبخر السائل المتبقي N2 في الأنبوب. بمجرد الخروج من السائل N2 ، يجب أن تبقى العينات في الجليد.
- بمجرد وضعه على الجليد ، أضف حجما (10-30 ميكرولتر / ملغ من الأنسجة) من عازلة التجانس إلى العينة وقم بتجانس العينة باستخدام Tissue-Tearor. بعد الانتهاء من هاتين الخطوتين ، انتقل إلى العينة التالية.
ملاحظة: يمكن تحسين حجم المخزن المؤقت المضاف إلى العينات اعتمادا على مصدر الأنسجة. على سبيل المثال: 30 ميكرولتر / مجم للعضلات الهيكلية ، و 15 ميكرولتر / مجم للقلب ، و 10 ميكرولتر / مجم للدماغ. - عينات أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية عند 3,600 جم ونقل المادة الطافية إلى أنبوب ميكروفوج نظيف. احرص على عدم لمس الحبيبات. دوامة وإضافة ~ 150 ميكرولتر إلى الآبار المقابلة في صفيحة ذات 96 بئر على شكل حرف V على الجليد. احتفظ بالباقي للطافية لمقايسة برادفورد (انظر الخطوة 2.15)
ملاحظة: إذا رغبت في ذلك ، يمكن حفظ عينات إضافية من العينات للمقايسات اللاحقة مثل المسح المناعي.
تنبيه: تتطلب الخطوات من 2.9 إلى 2.14 التعامل مع 14ج. تخلص من جميع المواد الملوثة بطريقة معتمدة من قبل المجلس النرويجي للاجئين - قم بإزالة لوحة خلط التفاعل من 4 درجات مئوية وقم بتسخين 30 درجة مئوية على جهاز التدوير الحراري مع إزالة الفيلم. خلال هذا الوقت ، احصل على 1 لتر من -20 درجة مئوية 66٪ إيثانول وأضفه إلى دورق الغسيل بقضيب تقليب على طبق التقليب.
- ابدأ التفاعل بإضافة 25 ميكرولتر من المادة الطافية للعينة إلى آبار التفاعل و 25 ميكرولتر من عازلة التجانس إلى الآبار الفارغة والكلية. استخدم ماصة متعددة القنوات لإضافتها إلى صف واحد على لوحة التفاعل في كل مرة ، وانتظر لمدة دقيقة واحدة على الأقل بين الصفوف. سجل الوقت الذي بدأ فيه التفاعل لكل صف. انظر الجدول 2 لمزيد من المعلومات. استخدم ماصة متعددة القنوات وتأكد من إضافة كميات متساوية من السائل.
- اترك 10-15 دقيقة حتى يتم تشغيل رد الفعل ؛ ومع ذلك ، يجب أن يكون وقت التشغيل متطابقا بين الصفوف.
- استنشق 55 ميكرولتر من كل بئر باستخدام ماصة متعددة القنوات ووزعها على أوراق الكروماتوغرافيا المعنية المعدة مسبقا. امزج التفاعل عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل قبل الشفط. ضع سائلا موضعيا في وسط أوراق الكروماتوغرافيا.
- قم بإزالة الأوراق التي تحتوي على مجاميع من المشبك باستخدام الملقط بعد اكتشاف السائل من البئر. يمكن وضعها على رقائق الألومنيوم بأمان حتى تجف. قم بإسقاط جميع أوراق الكروماتوغرافيا الأخرى في حمام الإيثانول 66٪ مع التحريك. الجليكوجين غير قابل للذوبان في 66٪ إيثانول ، في حين أن [14C] -UDP-glucose قابل للذوبان وسيغسل أوراق الكروماتوغرافيا.
- كرر الخطوتين 2.11 و 2.12 لكل صف على لوحة التفاعل. تأكد من أن وقت رد فعل كل صف هو نفسه عن طريق تسجيل أوقات بدء وإيقاف التفاعل.
- بمجرد إضافة جميع الصفوف إلى الإيثانول التقليب بنسبة 66٪ ، اغسلها لمدة 15 دقيقة.
ملاحظة: خلال هذه الخطوة وخطوات الغسيل اللاحقة ، يمكن تحضير عينات من العينات للمقايسات التكميلية ، مثل مقايسة برادفورد ، المسؤولة عن تحديد الحجم الإجمالي للبروتين للتطبيع ، وهو أمر ضروري في حساب النشاط الأنزيمي. - تخلص من 66٪ إيثانول دون فقد أوراق الكروماتوغرافيا. يغسل ب 1 لتر من الإيثانول الجديد 66٪ لمدة 30 دقيقة. يمكن أن يكون هذا الإيثانول بنسبة 66٪ في درجة حرارة الغرفة.
- كرر الخطوة السابقة ليصبح المجموع ثلاث غسلات بالإيثانول لمدة 30 دقيقة بنسبة 66٪.
ملاحظة: إذا رغبت في ذلك ، يمكن حفظ الإيثانول بنسبة 66٪ من خطوة الغسيل النهائية وتخزينه عند -20 درجة مئوية للمقايسات اللاحقة. - بعد إزالة 66٪ من الإيثانول ، اغمر جميع أوراق الكروماتوغرافيا في دورق الغسيل في الأسيتون. الأسيتون يسهل عملية التجفيف.
- قم بإزالة أوراق الكروماتوغرافيا من الأسيتون وضعها على ورق الألمنيوم. حفظ الأسيتون أو التخلص منه.
- أوراق كروماتوغرافيا جافة تحت مصباح حراري لمدة 15 دقيقة.
ملاحظة: يمكن تخزين الأوراق الجافة إلى أجل غير مسمى. يمكن تخزين الأوراق بأمان حتى تصبح جاهزة للمضي قدما في اكتشاف التلألؤ.
3. قياس النشاط مع كشف التلألؤ
- باستخدام الملقط ، انقل أوراق الكروماتوغرافيا إلى قوارير متلألئة مثبتة في رفوف متلألئة. سجل كيفية توجيه نماذج الأوراق.
- أضف 5 مل من سائل التلألئ إلى كل قارورة باستخدام مضخة الغطاء. قم بربط الأغطية لكل قارورة.
- قم بتحميل العينات في كاشف التلألؤ وقم بتحميل رف التوقف خلف العينات. تأكد من تحديد برنامج مراقبة 14درجة مئوية. ابدأ الاكتشاف عن طريق تحديد العد التلقائي.
- نتائج الطباعة
- تخلص من أنابيب ومحتويات التلألؤ بطريقة معتمدة من قبل المجلس النرويجي للاجئين
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باتباع البروتوكول ، ستحتوي النسخة المطبوعة التي تم إنشاؤها من كاشف التلألأ على الكمية المقاسة من الإشعاع المؤين المنبعث من كل ورقة كروماتوغرافيا تحتوي على قارورة ، مرتبطة ارتباطا مباشرا بمستوى نشاط سينسيز الجليكوجين. سيقوم كاشف التلألؤ بحساب عدد الإشعاع في الدقيقة (CPM) لكل عينة فارغة وإجمالي على مدى فترة زمنية محددة. قم أولا بتحويل CPM إلى DPM (التفكك في الدقيقة) ، والذي يعتمد على كفاءة عداد التلميع المستخدم (DPM = CPM / الكفاءة). يتم تحديد الكفاءة عن طريق حساب مصدر قياسي مع DPM معروف. ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يعد قياس نشاط إنزيم سينسيز الجليكوجين أداة قيمة لمراقبة استقلاب الجليكوجين في حالات التمثيل الغذائي والمرضية المختلفة. يوفر القياس في حالة عدم وجود ووجود الجلوكوز 6-فوسفات (G6P) نظرة ثاقبة للحالة التنظيمية للإنزيم وفهرسا غير مباشر لحالة الفسفرة. [U-14C] -UDP-مقايسة دمج الجلوكوز هي تقنية فعالة وموثقة جيدا لقياس النشاط الأنزيمي لسينسيز الجليكوجين ، مما يوفر حساسية عالية ، وخصوصية الركيزة ، والقدرة على التكيف مع عينات الأنسجة الصغيرة مثل العضلات الهيكلية للفأر. في هذه المقالة ، ت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم توفير التمويل جزئيا من قبل جامعة بول ستيت ، وكلية الطب بجامعة إنديانا - مونسي ، وآرو بيوثيرابيوتيكس.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| [<الأخبار>14C] يوريدين 5-ديفوسفو-جلوكوز | الكيميكيات الأمريكية ذات العلامات الإشعاعية | ARC 0154 | |
| ورق كروماتوغرافيا ETCHR 31 | واتمان | 3031 915 | |
| هيدرات هيدروكلوريد البنزاميدين | سيغما | B6506 | |
| بيتا ميركابتوإيثانول | سيغما | M3148 | |
| حمام جاف | توري باينز العلمي | SC25 | |
| الإيثانول (200 بروف) | فارمكوآبر | 111000200 | |
| حمض الإيثيلين غليكول رباعي الأسيتيك (EGTA) | سيغما | E4378 | |
| حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (EDTA) | سيغما | E5134 | |
| ملح الصوديوم جلوكوز-6-فوسفات | سيغما | G7879 | |
| الجليكوجين من كبد الأرنب (النوع الثالث) | سيغما | G8876 | |
| ميكروبلايت، مسطح القاع، 96 بئر | غرينر | 655101 | |
| ميكروبلايت، pcr، 96 بئر | DOT Scientific | 951-PCR | |
| عداد الوميض متعدد الأغراض | بيكمان كولتر | LS 6500 | |
| ديهيدرات فلوريد البوتاسيوم | سيغما | 221872 | |
| كوكتيل مثبط البروتين | جولد بيو | GB-108-2 | |
| كوكتيل الوميض | منتجات البحث الدولية | 111195 | |
| قوارير الوميض | منتجات البحث الدولية | 125509 | |
| فلوريد الصوديوم | سيغما | S7920 | |
| تمزق الأنسجة | منتجات بايوسبك | الطراز 398 | |
| توسيليزين كلوروميثيل كيتون (TLCK) | سيغما | T7254 | |
| قاعدة تريزما (99.9٪) | سيغما | T1503 | |
| هيدروكلوريد تريزما | سيغما | T3253 | |
| يوريدين 5-ديفوسبو-جلوكوز | سيغما | U-4625 |
المراجع
- Preiss, J., Walsh, D. A. Biology of Carbohydrates. Ginsburg, V., Robbins, P. 1, John Wiley. 199-314 (1981).
- Pederson, B. A. Enzymology of Complex Alpha-Glucans. , CRC Press. 84-137 (2021).
- Wayllace, N. Z., et al. An enzyme-coupled continuous spectrophotometric assay for glycogen synthases. Mol Biol Rep. 39 (1), 585-591 (2012).
- Wilson, W. A. Spectrophotometric Methods for the Study of Eukaryotic Glycogen Metabolism. J Vis Exp. (174), e63046(2021).
- Danforth, W. H. Glycogen synthetase activity in skeletal muscle. Interconversion of two forms and control of glycogen synthesis. J Biol Chem. 240, 588-593 (1965).
- Leloir, L. F., Olavarria, J. M., Goldemberg, S. H., Carminatti, H. Biosynthesis of glycogen from uridine diphosphate glucose. Arch Biochem Biophys. 81 (2), 508-520 (1959).
- Schalin-Jantti, C., Harkonen, M., Groop, L. C. Impaired activation of glycogen synthase in people at increased risk for developing NIDDM. Diabetes. 41 (5), 598-604 (1992).
- Huang, X., Hansson, M., Laurila, E., Ahren, B., Groop, L. Fat feeding impairs glycogen synthase activity in mice without effects on its gene expression. Metabolism. 52 (5), 535-539 (2003).
- Holt, B. D., et al. A novel CD71 Centyrin: Gys1 siRNA conjugate reduces glycogen synthesis and glycogen levels in a mouse model of Pompe disease. Mol Ther. 33 (1), 235-248 (2025).
- Prats, C., et al. Phosphorylation-dependent translocation of glycogen synthase to a novel structure during glycogen resynthesis. J Biol Chem. 280 (24), 23165-23172 (2005).
- Perezleon, J. A., Osorio-Paz, I., Francois, L., Salceda, R. Immunohistochemical localization of glycogen synthase and GSK3beta: Control of glycogen content in retina. Neurochem Res. 38 (5), 1063-1069 (2013).
- Thomas, J. A., Schlender, K. K., Larner, J. A rapid filter paper assay for UDP-glucose-glycogen glucosyltransferase, including an improved biosynthesis of UDP-14C-glucose. Analytical Biochemistry. 25 (1), 486-499 (1968).
- Parker, G. J., Lund, K. C., Taylor, R. P., McClain, D. A. Insulin resistance of glycogen synthase mediated by O-linked N-acetylglucosamine. J Biol Chem. 278 (12), 10022-10027 (2003).
- Niederwanger, A., Kranebitter, M., Ritsch, A., Patsch, J. R., Pedrini, M. T. A gel filtration assay to determine glycogen synthase activity. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 820 (1), 143-145 (2005).
- Suzuki, Y., et al. Insulin control of glycogen metabolism in knockout mice lacking the muscle-specific protein phosphatase PP1G/RGL. Mol Cell Biol. 21 (8), 2683-2694 (2001).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Quick and humane sacrifice of a mouse by cervical dislocation. CSH Protoc. 2006 (1), prot4357(2006).
- Gomes, F. R., et al. Glycogen storage and muscle glucose transporters (GLUT-4) of mice selectively bred for high voluntary wheel running. J Exp Biol. 212 (Pt 2), 238-248 (2009).
- Greenberg, C. C., Jurczak, M. J., Danos, A. M., Brady, M. J. Glycogen branches out: new perspectives on the role of glycogen metabolism in the integration of metabolic pathways. Am J Physiol Endocrinol Metab. 291 (1), E1-E8 (2006).
- Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).
- Gilboe, D. P., Larson, K. L., Nuttall, F. Q. Radioactive method for the assay of glycogen phosphorylases. Anal Biochem. 47 (1), 20-27 (1972).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
