تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات المؤسسية في مستشفى مقاطعة آنهوي للأطفال. تم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من أولياء الأمور أو الأوصياء القانونيين لجميع المشاركين قبل جمع البيانات. تم إجراء جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات المرضى وفقا للوائح السلامة الحيوية المؤسسية والمعايير الأخلاقية المعترف بها دوليا. يتم سرد المعدات والبرامج المستخدمة في جدول المواد.
1. تصميم الدراسة
سجلت هذه الدراسة الجماعية بأثر رجعي الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 5 و 12 عاما المصابين بالالتهاب الرئوي المؤكد بالميكوبلازما الرئوية (MP) بين يونيو 2021 وديسمبر 2024 في مركز طب الأطفال من الدرجة الثالثة. تم تأكيد التشخيص عن طريق كشف تفاعل البوليميراز المتسلسل ل MP-DNA من مسحات الحلق أو سائل الغسيل القصبي السنخي (BALF) 20،21. تم استبعاد الأطفال الذين يعانون من نقص المناعة المعروف أو الأمراض الرئوية المزمنة (مثل الربو) أو السجلات السريرية غير المكتملة22.
2. جمع البيانات السريرية
تم تسجيل درجة حرارة الإبط مرتين يوميا (07:00 و 19:00) ، مع توثيق نوبات حمى إضافية عند حدوثها. تم تقييم تشبع الأكسجين المحيطي الأساسي باستخدام مقياس التأكسج النبضي. تم جمع عينات الدم الوريدية في غضون 24 ساعة من القبول لتحليل المؤشرات الحيوية الالتهابية23،24. تم تخزين الدم الكامل والمصل في 2-8 درجة مئوية ومعالجته في غضون ساعتين من التجميع. ثم تم تجميد حصص المصل / البلازما عند -80 درجة مئوية حتى التحليل.
3. تنظير القصبات وجمع العينات
تم إجراء تنظير القصبات المرن مع الغسل تحت التخدير باستخدام منظار القصبات الليفي البصري للأطفال. تمت مراقبة تشبع الأكسجين ومعدل ضربات القلب باستمرار أثناء الإجراء25. تم الحفاظ على ضغط الشفط عند 100-120 مم زئبق مع قناة عمل 2.0 مم. تم غرس ثلاثة إلى خمسة ملليلتر من المحلول الملحي المعقم لكل جزء ، واعتبرت جودة الغسيل كافية عندما وصل حجم الاسترداد إلى 50٪ على الأقل من المحلول الملحي المغرس. تم وضع BALF على الفور على الجليد ، وتم طرده بالطرد المركزي عند 1,500 جرام لمدة 10 دقائق لإزالة الخلايا والحطام ، وتم تخزين المواد الطافية عند -80 درجة مئوية حتى اختبار MP-DNA وقياسات السيتوكينات.
4. فحوصات المؤشرات الحيوية الالتهابية
تم تحليل CRP باستخدام تعزيز الجسيمات. تم قياس IL-6 عن طريق المقايسة المناعية الكيميائية. تم تحديد نشاط LDH طيفيا ضوئيا عن طريق تحويل البيروفات إلى اللاكتات26. تم قياس D-dimer باستخدام قياس مناعة معزز باللاتكس. تم اتباع أوقات الحضانة الموصى بها من قبل الشركة المصنعة ، والمعايرة ، وضوابط الجودة الداخلية بدقة ؛ تم إجراء تقييم الجودة الخارجية وفقا لجدول اعتماد المختبر. تم الإبلاغ عن الوحدات على أنها ملغم / لتر (CRP) ، و pg / mL (IL-6) ، و U / L (LDH) ، و mg / L FEU (D-dimer) ، و MP-DNA كنسخ / ميكرولتر.
5. التقييم السيكومتري
تم تقييم الإجهاد النفسي باستخدام استبيان إجهاد الطفل الذي أبلغ عنه الوالدان في غضون 72 ساعة من القبول. كان نطاق الدرجات الإجمالية من 0 إلى 80 ، وتم تفسير الدرجات ≥30 على أنها إجهاد متوسط إلى شديد. قدمت الممرضات المدربات تعليمات موحدة وأمثلة على مستوى العنصر لتقليل تحيز الاستدعاء ، وأعيد فحص الاستبيانات غير المكتملة في نفس اليوم لضمان سلامة البيانات.
6. اعتبارات السلامة
تم التعامل مع جميع عينات الدم و BALF في خزانة سلامة حيوية معتمدة من الفئة الثانية مع معدات الحماية الشخصية المناسبة (القفازات ، والعباءة ، والقناع / جهاز التنفس الصناعي ، وحماية العين). تم التخلص من الأدوات الحادة في حاويات مقاومة للثقب. تمت معالجة النفايات السائلة الخطرة بيولوجيا مسبقا بمادة تبييض بنسبة 10٪ لمدة 30 دقيقة قبل التخلص منها. وتطهير الأسطح بعد كل جلسة، وامتثلت جميع الإجراءات للوائح المؤسسية والوطنية (مثل دليل السلامة الأحيائية المختبرية الصادر عن منظمة الصحة العالمية؛ والسلامة البيولوجية المختبرية الصادرة عن منظمة الصحة العالمية؛ ومكافحة الشفافية في المختبرات؛ ووضع دليل للسلامة البيولوجية في المختبرات؛ ووضع دليل للسلامة البيولوجية في المختبرات؛ ووضع دليل للسلامة البيولوجية في المختبرات؛ ووفقا لما إذا كان الصادر عن المنظمة؛ ووفقا لما إذا كان BMBL).
7. التحليل الإحصائي
تم إجراء التحليلات باستخدام IBM SPSS Statistics. تم اختبار البيانات الطبيعية باستخدام اختبار شابيرو ويلك. تم التعبير عن المتغيرات المستمرة كمتوسط ± الانحراف المعياري أو الوسيط مع نطاق رباعي ، بينما تم تلخيص المتغيرات الفئوية على أنها أعداد ونسب مئوية (الجدول 1). تم فحص الارتباطات بين درجات CSQ والوسطاء الالتهابيين والمؤشرات السريرية باستخدام ارتباطات بيرسون أو سبيرمان. تم استخدام الانحدار اللوجستي لتقييم تنبؤات الاستشفاء المطول (>7 أيام) والالتهاب الرئوي الوخيم ، المعرف على أنه توحيد الرئة أو الانصباب الجنبي أو انخماص الرئة أو فشل الجهاز التنفسي27. تم بناء منحنيات ROC لتقييم تمييز النموذج ، والإبلاغ عن AUC ، والحساسية ، والخصوصية ، و 95٪ CI. تم تطبيق التحقق المتبادل عشرة أضعاف لتقييم المتانة. تم التعامل مع البيانات المفقودة (<5٪) عن طريق الإسناد المتوسط. تم توحيد قيم المؤشرات الحيوية على درجة z قبل النمذجة. تم تحديد الدلالة الإحصائية عند p < 0.05 (على الوجهين) (الجدول 2).
8. النتائج المرئية ونقاط تفتيش التكاثر
تم تعريف BALF الكافي على أنه ≥50٪ من المحلول الملحي المغرس بمظهر واضح وغير دموي. تم تعريف إدارة CSQ المقبولة على أنها الإكمال في غضون 72 ساعة من القبول مع ≤1 عنصر مفقود لكل مجال. تتطلب عمليات الفحص اجتياز مراقبة الجودة الداخلية لكل أهداف الشركة المصنعة قبل إصدار نتائج المريض.
يوفر هذا البروتوكول إطارا قابلا للتكرار لتقييم التفاعل بين الإجهاد النفسي والوسطاء الالتهابيين والمؤشرات الحيوية السريرية في الالتهاب الرئوي الميكوبلازما لدى الأطفال ويؤسس نقاط تفتيش عملية (جودة BALF ، توقيت CSQ ، فحص QC) لدعم التنفيذ الموثوق به عبر المراكز.