مقالة منهجية

تصوير دوبلر بالموجات فوق الصوتية للتصوير الحي والقياس الكمي لوظيفة الأوعية الدموية للمبيض في الفئران

DOI:

10.3791/69169

⸱

نوفمبر 14, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Animal Science, Cornell University, 2Biotechnology Resource Center Imaging Facility, Cornell University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التغيرات في تدفق دم المبيض خلال فترة ما قبل الإباضة ضرورية للإباضة. تم استخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر في البشر الكبيرة لتقييم ديناميكا الدم في المبيض والتروية. يتم تقديم بروتوكول لتطبيق التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر لتقييم ديناميكا الدم المبيض خلال مرحلتي ما قبل الإباضة وحوائط الإباضة في الفئران.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لتقييم وظيفة الأوعية الدموية للمبيض بشكل فعال وفهم دورها في فسيولوجيا المبيض وعلم الأمراض ، تعد الأساليب غير الغازية في الجسم الحي ضرورية لالتقاط التغييرات في الوقت الفعلي دون تعطيل تدفق الدم الطبيعي. يعد التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر أداة راسخة وغير جراحية لتقييم تدفق دم المبيض في الأنواع الكبيرة ، ولكن تطبيقه كان محدودا في الفئران ، والتي تعد واحدة من أكثر النماذج الحيوانية استخداما للبحث في بيولوجيا المبيض ، مثل الإباضة. الإباضة هي عملية منظمة بإحكام تعتمد على النضوج المنسق للجريبات الذي يحفزه هرمون محفز للجريب ، يليه ارتفاع هرمون اللوتين قبل الإباضة (LH) يؤدي إلى تمزق جدار المسام وإطلاق البويضات للتخصيب. تؤدي زيادة الهرمون اللوتيني أيضا إلى سلسلة من التغييرات الهيكلية والوظيفية في الأوعية الدموية للمبيض (إعادة تشكيل الأوعية الدموية) ، مثل تكوين الأوعية الدموية وانقباض الشعيرات الدموية في موقع تمزق المسامي قبل وقت قصير من الإباضة. بالإضافة إلى ذلك ، تم الإبلاغ عن زيادة سريعة في تدفق دم المبيض بعد زيادة LH في أنواع متعددة ولكن ليس في الفئران. يستخدم هذا البروتوكول تصوير دوبلر بالموجات فوق الصوتية لتصور الأوعية الدموية لمبيض الفئران وتحديد معلمات ديناميكا الدم. يقدم البروتوكول المقدم هنا طرقا مفصلة لتحضير الهرمونات والتخدير ووضع الفأر وتحديد المبيض والأوعية الدموية باستخدام دوبلر القوة واللون وقياس سرعة تدفق الدم ومعلمات المقاومة. تتيح هذه الطريقة التقييم الطولي في الوقت الفعلي لوظيفة الأوعية الدموية للمبيض في الفئران الحية ، مما يوفر أداة قوية لدراسة وظيفة الأوعية الدموية للمبيض في كل من السياقات الفسيولوجية والمرضية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المبيض هو عضو شديد الأوعية الدموية ، والتغيرات الدورية والهيكلية والوظيفية المنظمة بإحكام في الأوعية الدموية (إعادة تشكيل الأوعية الدموية) ضرورية لفسيولوجيا المبيض الطبيعية ، بما في ذلك نمو البصيلات والإباضة وتكوين الجسم الأصفر1،2،3،4. تشمل إعادة تشكيل الأوعية الدموية سلسلة من العمليات المنسقة مثل التغيرات في نفاذية الأوعية الدموية ، وتكوين الأوعية الدموية ، وتوسع الأوعية ، وتضيق الأوعية ، والتغيرات في تدفق الدم (ديناميكا الدم). تمكن هذه العمليات المبيض من ضبط إمدادات الدم بسرعة استجابة للإشارات الهرمونية عبر دورة الشبق1،2،3،5،6،7،8،9. تؤدي الاضطرابات في إعادة تشكيل الأوعية الدموية وتدفق دم المبيض إلى إضعاف الإباضة وتتورط في اضطرابات الخصوبة مثل متلازمة المبيض المتعدد الكيسات2،3،10،11. وبالمثل ، ثبت أن السمنة تعطل تكوين الأوعية وتقلل من التعبير عن وسطاء الأوعية الدموية مثل البطانة -212،13. بالإضافة إلى ذلك ، غالبا ما تؤدي متلازمة فرط تحفيز المبيض ، وهي مضاعفات ترتبط في الغالب بتحفيز المبيض من خلال علاج موجهة الغدد التناسلية أثناء الإخصاب في المختبر ، إلى زيادة تدفق الدم اللحمي في المبيض ، مما يؤكد العواقب الضارة لوظيفة الأوعية الدموية غير المنظمة14. بشكل جماعي ، تسلط هذه الحالات الضوء على الدور المركزي لإعادة تشكيل الأوعية الدموية للمبيض في الحفاظ على خصوبة الإناث وتؤكد على أهمية ديناميكا الدم في دعم وظيفة المبيض.

يتطلب التقييم الدقيق لوظيفة الأوعية الدموية للمبيض قياسا في الوقت الفعلي لديناميكا الدم دون تعطيل البيئة الفسيولوجية. في البشر والنماذج الحيوانية الكبيرة مثل الماشية والأغنام والخيول ، يعد تصوير الموجات فوق الصوتية دوبلر أداة غير جراحية مستخدمة على نطاق واسع لتقييم تدفق دم المبيض وبنية الأوعية الدموية15،16،17،18. تتيح هذه التقنية التحليل الديناميكي للأوعية الدموية للمبيض وتلتقط التغيرات التي يحركها الهرمونات في تدفق الدم ، مما يقدم رؤى قيمة حول وظيفة المبيض والخلل الوظيفي15،16،17،18.

على الرغم من الاستخدام المكثف لفئران المختبر كنموذج للبحث في بيولوجيا المبيض نظرا لدورتها التناسلية القصيرة وقابليتها للتتبع الجيني ، إلا أن الطرق غير الغازية في الجسم الحي لدراسة تدفق دم المبيض في هذا النموذج لا تزال محدودة19،20. تعتمد الأساليب الحالية على إجراءات شديدة التوغل تتطلب إخراج المبيض (الفحص المجهري داخل الحيوية) ، أو على تقنيات مثل نهج CLARITY أو التصوير الكامل الذي يفتقر إلى الدقة الزمنية ويعطل السياق الفسيولوجي1،2،3،4. باعتباره نموذج الثدييات الأكثر استخداما للتلاعب الجيني والدراسات الإنجابية ، يقدم الفأر فرصة لاستكشاف الآليات الجزيئية لديناميكا الدم في المبيض وتقييم التدخلات المستهدفة. هذا يسلط الضوء على الحاجة إلى مناهج التصوير غير الغازية والطولية والكمية لمراقبة التغيرات الديناميكية في الأوعية الدموية للمبيض في الجسم الحي.

تجسد عملية التبويض ، وهي حدث مركزي في خصوبة الإناث ، أهمية إعادة تشكيل الأوعية الدموية للمبيض في خصوبة الإناث. يبدأ بالنضوج الجريبي الناجم عن الهرمون المنبه للجريب (FSH) ويبلغ ذروته في زيادة LH التي تؤدي إلى تمزق البصيلات وإطلاق البويضات1. بعد التحفيز باستخدام موجهة الغدد التناسلية المشيمية للخيول (eCG) ، والتي تحاكي تأثيرات FSH ، تتوسع شبكة الأوعية الدموية للمبيض2. يتقدم نمو الأوعية الدموية هذا إلى الخارج من نخاع المبيض باتجاه القشرة لدعم البصيلات النامية2. قبل فترة وجيزة من الإباضة ، تمتد الأوعية الدموية إلى طبقة الخلايا الحبيبية ، ويلاحظ تضيق الأوعية الموضعي في القمة المسامية - موقع التمزق النهائي وإطلاق البويضات3. هذه التغييرات المنسقة في الأوعية الدموية ضرورية لإباضة ناجحة1،2،3. كشفت دراسات دوبلر في النماذج الحيوانية الكبيرة والبشر عن تغيرات في ديناميكا الدم خلال فترة ما قبل الإباضة ، بما في ذلك الزيادة السريعة في تروية المبيض وإعادة التوزيع الموضعي لتدفق الدم داخل جريب ما قبل الإباضة ، والذي يتميز بزيادة التدفق في القاعدة (الأقرب إلى سدى المبيض - مقابل القمة) وانخفاض التدفق عند القمة16. ارتبطت الزيادة في سرعة تدفق الدم في المبيض مباشرة بعد زيادة LH بالإباضة الناجحة لدى النساء15. ومع ذلك ، لم تتتبع أي دراسات حتى الآن طوليا هذه التغيرات الديناميكية الدموية في مبيض الفئران السليم ، مما يحد من فهمنا لإعادة تشكيل الأوعية الدموية في هذا النموذج المستخدم على نطاق واسع.

لمعالجة هذه الفجوة ، نقدم بروتوكولا للتصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر يتيح التصور غير الجراحي لمبيض الفئران والأوعية الدموية ، جنبا إلى جنب مع القياس الكمي لديناميكا الدم المبيض ، بما في ذلك مؤشرات السرعة والمقاومة. على الرغم من أن مسبار MS-700 المستخدم في هذه الدراسة له دقة محدودة (محورية / جانبية: 30/58 ميكرومتر) ، مما يمنع التحليل التفصيلي للشعيرات الدموية ، إلا أنه لا يزال يسمح بتصور واضح وقياس الأوعية الدموية الرئيسية للمبيض. قد يؤدي استخدام عوامل التباين في التطبيقات المستقبلية إلى تعزيز تصور الأوعية الدموية. بشكل عام ، يسمح هذا النهج بإجراء قياسات طولية متكررة في نفس عبر نقاط زمنية محددة ، مثل فترة ما قبل الإباضة ، مع الحفاظ على السلامة الفسيولوجية ، وهي ميزة رئيسية على التقنيات الغازية الحالية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم الحفاظ على جميع الفئران المستخدمة بما يتفق بدقة مع دليل المعهد الوطني للصحة لرعاية واستخدام المختبر ، بموافقة أخلاقية من اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها في جامعة كورنيل. كانت جميع المستخدمة في هذا البروتوكول غير ناضجة (21-23 يوما) فئران C57BL6.

1. التحفيز الهرموني للإباضة الفائقة

  1. حقن الفئران التي يبلغ عمرها 21-23 يوما بوزن 10-12 جم داخل الصفاق مع 5 وحدة دولية من موجهة الغدد التناسلية المصلي للفرس الحامل (PMSG) متبوعة ب 5 وحدات دولية من موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (hCG) بعد 48 ساعة. يتم تحضير كل حقنة عن طريق تخفيف 50 ميكرولتر من الهرمون (المعاد تكوينه من قارورة مخزون 5000 وحدة دولية) في 950 ميكرولتر من محلول ملحي معقم بالفوسفات ، وتطبيق 0.1 مل لكل فأر.

2. جهاز الموجات فوق الصوتية تشغيل التسلسل وإعداد محول الطاقة

  1. قم بتشغيل الطاقة الرئيسية الموجودة في الجزء الخلفي من نظام التصوير. بعد تمهيد النظام، قم بتبديل مفتاح استعداد الكمبيوتر على الجانب الأيسر من عربة التسوق لتنبيه الشاشة والكمبيوتر.
  2. قم بتوصيل محول الطاقة المطلوب (MS-700 المستخدم هنا - 30-70 ميجاهرتز) بمنفذ محول الطاقة النشط في وحدة التصوير (المنفذ الموجود في أقصى اليمين). قم بمحاذاة دبوس القفل الموجود على موصل محول الطاقة مع الشق الموجود في المنفذ ، ثم ادفع الموصل بالكامل وأدر ذراع القفل إلى الوضع الرأسي لتثبيته.
  3. قم بتشغيل برنامج التحليل بالنقر فوق رمز البرنامج. بمجرد فتح البرنامج واكتشاف محول الطاقة (تلقائيا) ، حدد حزمة تطبيق المبيض . انقر فوق جديد لإنشاء دراسة جديدة واختر الاسم المناسب من القائمة المنسدلة. في نافذة معلومات الدراسة ، أدخل الحقول المطلوبة: اسم الدراسة؛ اسم السلسلة؛ حزمة التطبيق: المبيض. حزمة القياس: وعائية.

3. التخدير وإعداد الفأر وإعداد مرحلة الموجات فوق الصوتية

  1. قم بتشغيل وحدة المراقبة الفسيولوجية (درجة الحرارة ومعدل ضربات القلب). تأكد من تسخين المنصة (37 درجة مئوية).
  2. تأكد من أن مستوى الأيزوفلوران أعلى من الحد الأدنى لخط التعبئة في خزان المرذاذ. إذا لزم الأمر ، أضف الأيزوفلوران باستخدام معدات الحماية الشخصية المناسبة. افتح صمام خزان الأكسجين ببطء وبشكل كامل. اضبط معدل تدفق الأكسجين على 1 لتر في الدقيقة.
  3. اضبط محبس الموجود على أنبوب القطعة y للسماح للأكسجين والأيزوفلوران بالتدفق إلى غرفة الحث. تأكد من إغلاق محبس المؤدي إلى مخروط الأنف على منصة الماوس أثناء هذه الخطوة. اضبط قرص المرذاذ لتوصيل 3-4٪ من الأيزوفلوران (vol / vol) للتحريض.
  4. ضع الماوس في حجرة الحث وأغلق الغطاء بإحكام.
    ملاحظة: غرفة الحث محكمة الإغلاق وظيفيا. لا تترك في غرفة محكمة الغلق دون تدفق غاز نشط.
  5. قم بإعداد منصة التصوير عن طريق وضع كمية صغيرة من كريم القطب الكهربائي على كل قطب من الأقطاب الكهربائية لضمان التلامس المناسب لمراقبة معدل ضربات القلب.
  6. بمجرد تخدير بالكامل ، أعد توجيه تدفق الغاز عن طريق فتح محبس إلى مخروط الأنف على منصة التصوير وإغلاق محبس إلى غرفة الحث.
  7. انقل الماوس برفق إلى منصة التصوير المسخنة. ضع الماوس في وضع الانبطاح (الجانب الظهري متجها لأعلى) (الشكل 1 أ). ضع مخروط الأنف بإحكام فوق أنف ، مع التأكد من تغطية كل من الأنف والفم للحفاظ على التخدير. قم بلصق كل قدم في كريم القطب الكهربائي على وسادة القطب الكهربائي المقابلة للمراقبة الفسيولوجية. ضع مرهم العيون لمنع جفاف القرنية أثناء التخدير.
  8. قلل تركيز الأيزوفلوران إلى 1.5-2.0٪ للحفاظ على التخدير عن طريق تدوير المقبض إلى اليسار. تأكد من عمق التخدير الكافي باستخدام طريقة انعكاس إصبع القدم (يجب عدم ملاحظة الانسحاب). راقب بعناية العلامات الحيوية للحيوان كل 5 دقائق أثناء جلسة التصوير: (أنا) معدل التنفس. (ثانيا) معدل ضربات القلب. (3) أي حركات قد تشير إلى عدم الراحة؛ و (رابعا) التأكد من تسخين منصة التصوير إلى درجة الحرارة الصحيحة طوال الوقت.
  9. قم بإعداد الربع السفلي الأيمن من الظهر عن طريق حلق المنطقة باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. احلق من الطرف الخلفي الأيمن إلى خط الوسط من الظهر ، مع البقاء جانبيا للعمود الفقري. ضعي طبقة رقيقة من كريم مزيل شعر الجسم على المنطقة المحلوقة مسبقا لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة لإزالة أي شعر متبقي. امسحي جيدا بشاش رطب. ضع طبقة سخية ومتساوية من جل الموجات فوق الصوتية على المنطقة المحلوقة لضمان اقتران صوتي مثالي.
  10. ضع مسبار محول الطاقة في الوضع العرضي بالنسبة للماوس في الحامل الميكانيكي بحيث يكون شق الاتجاه متجها إلى يسار المشغل. قم بتثبيت المسبار في مكانه باستخدام المشبك.

4. تحديد أوعية المبيض والمبيض باستخدام الموجات فوق الصوتية دوبلر

  1. في لوحة التحكم ، اضغط على مفتاح B-Mode لتنشيط نافذة التصوير القياسية بتدرج الرمادي ، والتي تسمح بتصور الهياكل التشريحية.
  2. اخفض محول الطاقة برفق على المنطقة المحلوقة المطلية بجل الموجات فوق الصوتية.
    1. تأكد من وضع منصة التصوير والماوس بشكل مسطح (بالتوازي مع سطح المقعد) ، وأن محول الطاقة قد تم إنخازه بشكل عمودي (زاوية 90 درجة - عمودي) على الماوس والمنصة (الشكل 1 أ).
    2. لتحديد موقع المبيض ، اسحب الجلد باتجاه اليسار ، ثم ضع محول الطاقة بالقرب من المنطقة العلوية من الربع المحلوق ، بالقرب من خط الوسط في الظهر. قم بمحاذاة الحافة اليسرى للمسبار المجاور للعمود الفقري ، بحيث تمتد الحافة اليمنى قليلا فوق الجانب الجانبي الأيمن.
  3. للتعرف على المبيض ، اكتشف أولا الكلى ، وهي بنية بيضاوية كبيرة رمادية فاتحة (5 مم × 6 مم) مع قشرة ونخاع مرئية. ثم ادفع منصة التصوير للأمام قليلا (باتجاه رأس الفأر) ، مما يجعل المبيض والأنسجة الدهنية السمحاقة (POAT) تظهر.
    ملاحظة: المبيض عبارة عن بنية صغيرة دائرية وناقص الصدى (رمادي غامق) ، حوالي 1 × 2 مم (في مرحلة ما قبل الإباضة) ، وتقع بشكل جانبي للحبل الشوكي. يظهر POAT فرط الصدى (أبيض فاتح).
  4. لالتقاط مقاطع فيديو للمبيض وتخزينها في الوضع B ، انتظر حتى يزداد عدد الإطارات (حتى 100 إطار) ، واضغط على زر Cine Store على لوحة المفاتيح.
  5. لتأكيد تحديد المبيض وتصور الأوعية الدموية ذات الحساسية العالية للتدفق منخفض السرعة ، قم بالتبديل من الوضع B إلى وضع دوبلر الطاقة بالضغط على المفتاح المخصص على لوحة التحكم.
  6. اضبط إعدادات دوبلر الطاقة التالية للتصور الأمثل للأوعية الدموية للمبيض عن طريق تدوير المقابض على لوحة المفاتيح: كسب دوبلر: 32-55 ديسيبل; حساسية: 5; النطاق الديناميكي: 15 DR ؛ السرعة 1 كيلو هرتز.
    ملاحظة: يمكن عرض القيم على اللوحة الجانبية اليسرى وستتغير عند تدوير المقابض
  7. في وضع دوبلر الطاقة أو وضع دوبلر الملون (اضغط على المفتاح المعين على لوحة المفاتيح) ، حدد الأوعية التالية عن طريق تحريك المنصة برفق ذهابا وإيابا لتصور جوانب مختلفة من الأوعية الدموية: (ط) الشريان المبيض (OA) ، المتفرع من الشريان الأورطي البطني ويأتي من اتجاه POAT لدخول نقير المبيض ؛ (ثانيا) الأوعية النخاعي (MV) داخل النخاع المركزي; و (ثالثا) الأوعية القشرية (السيرة الذاتية) المحيطة بالبصيلات النامية في القشرة الخارجية (الشكل 1 ب).
    ملاحظة: قد لا تكون الأوعية القشرية مرئية باستمرار بسبب قطرها الصغير وسرعة التدفق المنخفضة. يمكن اكتشاف الأوعية الموجودة في قاعدة المسام بسهولة أكبر ، في حين أن الأوعية الموجودة في القمة غالبا ما تكون غير مرئية ، خاصة قبل الإباضة مباشرة.
  8. اضغط على Cine store لالتقاط مقاطع فيديو للمبيض والأوعية الدموية في وضع دوبلر الطاقة أو الملون في أي وقت لحفظ الفيديو المعروض حاليا على الشاشة.
  9. للتمييز بين التدفق الشرياني والوريدي، اضغط على مفتاح وضع دوبلر الملون على لوحة المفاتيح. في هذا الوضع ، يكون اتجاه التدفق مرمزا بالألوان: يشير اللون الأحمر إلى التدفق نحو محول الطاقة ، بينما يشير اللون الأزرق إلى التدفق بعيدا عنه. الوعاء ذو السرعة المتوسطة الأعلى هو الشريان المبيضي.
  10. يمكن تقدير التغييرات في نضح الدم في وضع دوبلر اللون أو الطاقة من خلال تصور حجم الأوعية الدموية وشدة اللون (أصفر في قوة دوبلر ، أحمر أو أزرق في دوبلر اللون).

5. تقييم ديناميكا الدم بالموجات فوق الصوتية دوبلر باللون والطاقة

  1. أثناء وجودك في وضع دوبلر ملون أو دوبلر كهربائي ، اضغط على زر دوبلر الموجة النبضية (PW) على لوحة مفاتيح نظام الموجات فوق الصوتية. يؤدي هذا إلى إظهار بوابة حجم العينة (أي الخطين الأفقيين). اضغط على زر PW مرة ثانية لتنشيط شكل موجة دوبلر الطيفية في اللوحة السفلية.
  2. ضع بوابة العينة (أداة قياس قابلة للتعديل - تسمح للمستخدم بتحديد المنطقة التي سيتم فيها قياس السرعات) داخل مركز تجويف الوعاء ، مما يضمن المحاذاة مع اتجاه تدفق الدم. اضبط زاوية الرنين لتكون موازية قدر الإمكان للوعاء وحافظ عليها عند ≤60 درجة لضمان حسابات دقيقة للسرعة. اضبط زاوية الرنين عن طريق تدوير مقبض الزاوية المقابل.
  3. ضع بوابة العينة في المواضع التالية لكل نوع من أنواع السفينة. الشريان المبيضي: داخل الوعاء القريب من نقطة دخوله إلى المبيض. الوعاء النخاعي: عند نقطة التفرع المركزية ، حيث يتفرع MV إلى أوعية قشرية. تظهر هذه النقطة المتفرعة على شكل بركة من الدم مباشرة بعد الدخول إلى المبيض. الوعاء القشري: داخل وعاء عند قاعدة بصيلات متنامية ، عند التعرف عليه.
  4. بمجرد وضع بوابة العينة في الموقع المطلوب وظهور شكل موجة نبضي واضح ، اضغط على Cine Store لتسجيل وحفظ كل من صورة الموجات فوق الصوتية وشكل موجة دوبلر الطيفي المقابل.
  5. بمجرد اكتمال التصوير ، قم بإزالة الماوس برفق من منصة التصوير. امسح أي جل بالموجات فوق الصوتية من الخلف وضع الماوس على وسادة تسخين حتى يستيقظ تماما.

6. تصدير وحفظ البيانات

  1. بعد الانتهاء من جميع التصوير وحفظ الإطارات الثابتة والحلقات السينمائية المطلوبة باستخدام وظيفة Cine Store ، اضغط على زر إدارة الدراسة الموجود في الجانب الأيسر العلوي من لوحة مفاتيح نظام الموجات فوق الصوتية. سيؤدي هذا إلى فتح نافذة متصفح الدراسة ، وعرض قائمة بجميع الصور المحفوظة والحلقات السينمائية من الجلسة الحالية.
  2. في نافذة مستعرض الدراسة ، حدد الملفات المراد حفظها.
    1. لحفظ سلسلة كاملة ، حدد اسم السلسلة المقابل - سيؤدي هذا تلقائيا إلى تمييز جميع الصور المرتبطة والحلقات السينمائية. انقر فوق الزر "نسخ إلى" للمتابعة.
    2. عندما يطلب منك ذلك ، انقر فوق المجلد الوجهة أو محرك الأقراص الخارجي حيث يجب حفظ الملفات المصدرة. تأكد من صحة تنسيق الملف ومسار الوجهة قبل الانتهاء من التصدير.

7. قم بإيقاف تشغيل التسلسل والتنظيف

ملاحظة: يجب إكمال هذه الخطوات فور الانتهاء من التصوير وحفظ جميع البيانات وتصديرها.

  1. بعد تصدير جميع البيانات الضرورية ، انقر فوق إيقاف التشغيل في نافذة متصفح الدراسة لتطبيق برنامج التحليل. سيؤدي ذلك إلى إيقاف تشغيل كل من كمبيوتر الاستحواذ ولوحة التحكم بأمان.
  2. اسمح لمراوح تبريد النظام بالعمل لمدة 5-10 دقائق. بمجرد اكتمال التبريد ، قم بإيقاف تشغيل الطاقة الرئيسية باستخدام مفتاح التبديل الموجود في الجزء الخلفي من عربة التصوير.
  3. قم بإيقاف تشغيل جميع المعدات المساعدة: إمداد الأكسجين ، ومبخر الأيزوفلوران ، ووحدة المراقبة الفسيولوجية.
  4. نظف محول الموجات فوق الصوتية: امسح أولا أي جل بالموجات فوق الصوتية متبقي باستخدام مناديل خالية من النسالة ، ثم قم بتطهير السطح بمناديل مبللة خالية من النسالة أو مناديل مطهرة موصى بها للمعدات الإلكترونية الحساسة.
  5. نظف منصة الماوس ولوحة المفاتيح بمناديل مطهرة. لا تستخدم الكحول الإيثيلي على أقطاب منصة الماوس ، لأنه قد يتلف المكونات الحساسة.
  6. امسح حجرة الحث بمناشف ورقية مبللة. تخلص من المناشف الورقية في حاوية النفايات البيولوجية.
  7. تخلص من جميع المواد ذات الاستخدام الواحد (مثل القفازات والشريط الجراحي والشاش وأدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية) في حاوية المخاطر البيولوجية المخصصة.

8. قياس المعلمات الديناميكية الدموية باستخدام أشكال موجة نبضات دوبلر

  1. في تطبيق التحليل، انقر فوق نسخ من، وحدد الاسم المناسب من القائمة المنسدلة، وانتقل إلى مكان حفظ الدراسة، وحددها، وانقر فوق موافق لاستيرادها.
  2. افتح صورة PW Doppler المطلوبة وانقر على أيقونة القياسات في الزاوية اليسرى السفلية لفتح لوحة القياس.
  3. انقر فوق أداة قياس السرعة في الزاوية العلوية اليسرى من لوحة القياس لتحديد أعلى ثلاث سرعات انقباضية للذروة (PSV) وسرعات نهاية الانبساطي (EDV) من شكل موجة دوبلر الطيفية بالنقر فوق أعلى موجات PSV و EDV (ستقيس الأداة تلقائيا حجم الموجة من نقطة النقر إلى المحور x. قم فقط بتضمين الأشكال الموجية التي تعرض ثلاث دورات قلبية مميزة على الأقل مع قمم PSV و EDV واضحة ومتسقة.
  4. لحساب متوسط السرعة ، احسب أولا متوسط قيم PSV الثلاث المحددة ومتوسط قيم EDV الثلاثة. ثم احسب متوسط السرعة باستخدام الصيغة: متوسط السرعة = (متوسط PSV + متوسط EDV) / 2.
  5. بالنسبة للسرعات التي تقل عن عتبة الكشف البالغة 10 مم / ثانية ، قم بتعيين قيمة 5 مم / ثانية (متوسط السرعة أقل من العتبة) أو تجاهل القياس بناء على الغرض من البحث.
  6. لحساب مؤشر المقاومة (RI) ، استخدم الصيغة القياسية: RI = (PSV - EDV) / PSV. يوفر هذا المؤشر مقياسا لمقاومة الأوعية الدموية ويجب حسابه باستخدام متوسط قيم PSV و EDV للتأكد من الدقة.
  7. لحساب مؤشر النبض (PI) ، استخدم الصيغة القياسية: PI = (PSV - EDV) / متوسط السرعة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من هذا البروتوكول هو تطبيق التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر لتصور مبيض الفئران والأوعية الدموية ، وتقييم التغيرات في تروية المبيض ، وتحديد ديناميكا الدم في المبيض.

يوضح الشكل 2 صورا تمثيلية لنفس المبيض عبر نقاط زمنية متعددة خلال فترة حوائط الإباضة (12 ساعة قبل الإباضة و 12 ساعة بعد الإباضة) بعد حقن قوات حرس السواحل الهايتية. يوضح الشكل 2 أ صور الوضع B المستخدمة لتحديد موقع المبيض بالنسبة إلى P...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه الدراسة طريقة غير جراحية لتصور وقياس ديناميكا الدم المبيض في الجسم الحي باستخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر. على عكس الطرق الحالية ، يتيح هذا النهج التقييم في الوقت الفعلي لتدفق الدم دون تعطيل وظيفة الأوعية الدموية. يعد التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر أداة فعالة ومستخدمة على نطاق واسع لتقييم مورفولوجيا المبيض ووظيفة الأوعية الدموية في البشر ونماذج الكبيرة15،16،17

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذه الدراسة من قبل NICHD 1R01HD109392. تم الحصول على بيانات التصوير من خلال مرفق التصوير في مركز موارد التكنولوجيا الحيوية في كورنيل (BRC) ، مع S10OD016191 المعاهد الوطنية للصحة للموجات فوق الصوتية VisualSonics Vevo-2100.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
شريط 3M الجراحيشركة VWR الدولية ذات المسؤولية المحدودةMMM1534-3
جل نقل الموجات فوق الصوتية Aquasonic Clear  باركرPKR-03-08
مقص الشعرشركة سكال شيفر ذ.م.مBBT 2020
الغونادوتروبين التشيمي البشريسيغما ألدريتش9002-61-3
مزيل الشعر Nair Body Creamنايرإزالة الشعر
Optixcare Eye Lube Plus أفينتيكسOPX-4252
كريم الألكترود باركر سيجنأكريمباركرPKR-17-05-CS
مصب فرس حامل الغدد التناسليةإنزيمات الإبداعNATE-0969
نظام التصوير VisualSonics Vevo 2100VisualSonics Inc.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Duffy, D. M., Ko, C., Jo, M., Brannstrom, M., Curry, T. E. Jr Ovulation: Parallels with inflammatory processes. Endocr Rev. 40 (2), 369-416 (2018).
  2. Feng, Y., et al. Clarity reveals dynamics of ovarian follicular architecture and vasculature in three-dimensions. Sci Rep. 7 (1), 44810(2017).
  3. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  4. Fan, H. Y., Liu, Z., Johnson, P. F., Richards, J. S. CCAAT/enhancer-binding proteins (C/EBP)-α and -β are essential for ovulation, luteinization, and the expression of key target genes. Mol Endocrinol. 25 (2), 253-268 (2011).
  5. Janson, P. O., Albrecht, I., Ahrén, K. Effects of prostaglandin F2α on ovarian blood flow and vascular resistance in the pseudopregnant rabbit. Acta Endocrinol (Copenh). 79 (2), 337-350 (1975).
  6. Brännström, M., et al. Preovulatory changes of blood flow in different regions of the human follicle. Fertil Steril. 69 (3), 435-442 (1998).
  7. Murdoch, W. J., Nix, K. J., Dunn, T. G. Dynamics of ovarian blood supply to periovulatory follicles of the ewe. Biol Reprod. 28 (4), 1001-1006 (1983).
  8. Siddiqui, M., et al. Temporal relationships of the LH surge and ovulation to echotexture and power Doppler signals of blood flow in the wall of the preovulatory follicle in heifers. Reprod Fertil Dev. 22, 1110-1117 (2010).
  9. Acosta, T. J., Miyamoto, A. Vascular control of ovarian function: Ovulation, corpus luteum formation and regression. Anim Reprod Sci. 82 - 83, 127-140 (2004).
  10. Tal, R., Seifer, D. B., Arici, A. The emerging role of angiogenic factor dysregulation in the pathogenesis of polycystic ovarian syndrome. Semin Reprod Med. 33 (3), 195-207 (2015).
  11. Di Pietro, M., Pascuali, N., Parborell, F., Abramovich, D. Ovarian angiogenesis in polycystic ovary syndrome. Reproduction. 155 (5), R199-R209 (2018).
  12. Velazquez, C., et al. Beneficial effects of metformin on mice female fertility after a high-fat diet intake. Mol Cell Endocrinol. 575, 111995(2023).
  13. Yang, P. -K., et al. Obesity alters ovarian folliculogenesis through disrupted angiogenesis from increased IL-10 production. Mol Metab. 49, 101189(2021).
  14. Agrawal, R., et al. Serum vascular endothelial growth factor and Doppler blood flow velocities in in vitro fertilization: Relevance to ovarian hyperstimulation syndrome and polycystic ovaries. Fertil Steril. 70 (4), 651-658 (1998).
  15. Waseda, T., et al. Hemodynamic response of ovarian artery after hCG injection. Mol Cell Endocrinol. 202 (1), 71-75 (2003).
  16. Acosta, T. J., Hayashi, K. G., Ohtani, M., Miyamoto, A. Local changes in blood flow within the preovulatory follicle wall and early corpus luteum in cows. Reproduction. 125 (5), 759-767 (2003).
  17. Petridis, I. G., et al. Doppler ultrasonographic examination in sheep. Small Rumin Res. 152, 22-32 (2017).
  18. Miro, J. Ovarian ultrasonography in the mare. Reprod Domest Anim. 47 (s3), 30-33 (2012).
  19. Cunha, G. R., et al. Reproductive tract biology: Of mice and. Differentiation. 110, 49-63 (2019).
  20. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  21. Lee, W., Novy, M. J. Effects of luteinizing hormone and indomethacin on blood flow and steroidogenesis in the rabbit ovary. Biol Reprod. 18 (5), 799-807 (1978).
  22. Janson, P. O. Effects of the luteinizing hormone on blood flow in the follicular rabbit ovary, as measured by radioactive microspheres. Acta Endocrinol (Copenh). 79 (1), 122-133 (1975).
  23. Dowell, R. T., Gairola, C. G., Diana, J. N. Reproductive organ blood flow measured using radioactive microspheres in diestrous and estrous mice. Am J Physiol. 262 (4 Pt 2), R666-R670 (1992).
  24. De Visscher, G., Haseldonckx, M., Flameng, W. Fluorescent microsphere technique to measure cerebral blood flow in the rat. Nat Protoc. 1 (4), 2162-2170 (2006).
  25. Deveci, D., Egginton, S. Development of the fluorescent microsphere technique for quantifying regional blood flow in small mammals. Exp Physiol. 84, 615-630 (1999).
  26. Raz, T., et al. The hemodynamic basis for positional- and inter-fetal dependent effects in dual arterial supply of mouse pregnancies. PLoS One. 7 (12), e52273(2012).
  27. Fiorentino, G., Parrilli, A., Garagna, S., Zuccotti, M. Three-dimensional micro-computed tomography of the adult mouse ovary. Front Cell Dev Biol. 8, e52273(2020).
  28. Christensen-Jeffries, K., Browning, R. J., Tang, M. X., Dunsby, C., Eckersley, R. J. In vivo acoustic super-resolution and super-resolved velocity mapping using microbubbles. IEEE Trans Med Imaging. 34 (2), 433-440 (2015).
  29. Bar-Zion, A., et al. Doppler slicing for ultrasound super-resolution without contrast agents. BioRxiv. , (2021).
  30. You, Q., et al. Contrast-free super-resolution power Doppler (CS-PD) based on deep neural networks. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 70 (10), 1355-1368 (2023).
  31. Harmon, J. N., et al. Quantitative tissue perfusion imaging using nonlinear ultrasound localization microscopy. Sci Rep. 12 (1), 21943(2022).
  32. Welsh, A. W., et al. Three-dimensional US fractional moving blood volume: Validation of renal perfusion quantification. Radiology. 293 (2), 460-468 (2019).
  33. Schnell, D., Darmon, M. Bedside Doppler ultrasound for the assessment of renal perfusion in the ICU: Advantages and limitations of the available techniques. Crit Ultrasound J. 7 (1), 24(2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة