نعرض طريقة بسيطة وسريعة لتحميل أرقام محددة مسبقا من الخلايا في الآبار وصيانتها microfabricated للتنمية الجسم مضغي الشكل.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
Shrinky - دينك قطرة الشنق : وسيلة بسيطة إلى نموذج الثقافة والأجرام مضغي الشكل
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الهيئات مضغي الشكل (EB) هي مجاميع من الخلايا الجذعية الجنينية. الطريقة الأكثر شيوعا لإنشاء هذه المجاميع هو الأسلوب قطرة شنقا ، نهجا شاقة من pipetting عدد التعسفي من الخلايا في لوحات جيدا. التفاعلات بين الخلايا الجذعية يجبرن على مقربة من بعضها البعض يروج لجيل من EBS. لأن وسائل الإعلام في كل من الآبار والتي يتم تبادلها يدويا كل يوم ، وهذا النهج هو مكثفة يدويا.
وعلاوة على ذلك ، لأن المعايير البيئية بما في ذلك خلية خلية ، والتفاعلات عامل الخلية القابلة للذوبان ، ودرجة الحموضة ، وتوافر الأكسجين ويمكن لحجم المهام EB ، يمكن الحصول عليها من السكان الخلية التقليدية قطرات شنقا حتى عندما تختلف بشكل كبير مثقف في ظل ظروف مماثلة. وقد أظهرت الدراسات الحديثة حقا أن العدد الأولي من الخلايا التي تشكل مجموع يمكن أن يكون لها آثار كبيرة على تمايز الخلايا الجذعية. طورنا طريقة بسيطة الثقافة وسريعة ، وقابلة لتحميل أرقام محددة مسبقا من الخلايا في الآبار وصيانتها microfabricated للتنمية الجسم مضغي الشكل. أخيرا ، فإن هذه الخلايا يمكن الحصول عليها بسهولة لمزيد من التحليل والتجريب. هذه الطريقة هي قابلة لأي مختبر ويتطلب أي معدات متخصصة. نظهر هذا الأسلوب من خلال إنشاء هيئات مضغي الشكل باستخدام الخلايا الحمراء الفلورسنت الماوس سطر (129S6B6 - F1).
البروتوكول
1. صنع قالب Shrinky - دينك
- طباعة النمط المطلوب على shrinky - دينك ورقة باستخدام الطابعة تعريف جيد.
- خبز shrinky - دينك ورقة في 163 درجة مئوية لمدة حوالي 10 دقيقة حتى ، أو تقلصت بشكل كامل وبعد أن حصلت على شكل منتظم.
- بعد shrinky - دينك العفن هدأت ، يغرق في حمام الأيزوبروبانول حتى بالكاد يغطي سطح كاملة.
- بعناية ، رش بعض الأسيتون على العفن ويهز الحاويات عدة مرات. لإضافة المزيد من الأيزوبروبانول تغس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
طورنا طريقة بسيطة الثقافة وسريعة ، وقابلة لتحميل أرقام محددة مسبقا من الخلايا في الآبار microfabricated (مصبوب من Dinks - Shrinky) والمحافظة عليها من أجل التنمية الجسم مضغي الشكل. أخيرا ، فإن هذه الخلايا يمكن الحصول عليها بسهولة لمزيد من التحليل والتجريب. هذه الطريقة هي قابلة لأي مختبر ويتطلب أي معدات مخصصة لأننا تغني عن الحاجة إلى ضوئيه. يمكننا أن يختلف حجم microwells فضلا عن تركيز خلايا / بئرا لتغيير عدد وحجم الهيئات مضغي الشكل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نود أن نشكر CIRM لدعم هذا العمل. وقد تم التبرع بسخاء خط خلية من الدكتور أندراس ناجي في مستشفى ماونت سيناي في تورنتو ، أونتاريو.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
لوسائل الإعلام مسك (مكلوسكي مختبر بروتوكول) : (مجموع وسائل الإعلام على استعداد : 50ml ؛ 100ML) KO DMEM : 40.8ml ؛ 81.6ml KSR 15 ٪ : 7.5ml ؛ 15ml - 1X بن بكتيريا : 0.5 مل ؛ 1ml 2mm والجلوتامين L - : 0.5 مل ؛ NEAA 1ml : 0.5 مل ؛ 1ml LIF : 100ul ؛ 200ul BMP - 4 (10ng/ml) : 50ul ؛ 100ul المخففة BME : 50ul ؛ 100ul (إضافة 35ul من العقيمة BME المصفاة ل5ml من برنامج تلفزيوني وتصفية تعقيم المحاقن تجاهل بعد 2 أسابيع. تركيز النهائي في الحل هو 0.1 ملم)
المراجع
- Keller, G. M. In vitro differentiation of embryonic stem cells. Curr Opin Cell Biol. 7, 862-869 (1995).
- Doetschman, T. C., Eistetter, H., Katz, M., Schmidt, W., Kemler, R. The in vitro de....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
