مقالة منهجية

دراسة مقارنة لطرق اكتساب DDA و DIA على قياس الطيف الكتلي UPLC-Q-Orbitrap باستخدام مسحوق Huaihua

DOI:

10.3791/69227

⸱

أكتوبر 3, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacy, Shizuishan Maternal and Child Health Hospital, 3Department of Assets and Laboratory Management, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقارن هذه الدراسة أوضاع DDA و DIA (UPLC-QE-Orbitrap MS) لتحليل مسحوق Huaihua ، وهو مادة TCM معقدة. تم تطوير طرق DDA و DIA المحسنة ؛ تم تحديد المركبات عبر Compound Discoverer. تم تقييم الأداء (تحديد المركب ، التكاثر ، الجودة الطيفية ، الحساسية) ، مما يوفر إرشادات تجريبية لاختيار أسلوب مسح TCM.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقوم هذه الدراسة بتقييم الأداء المقارن لوضعين للحصول على قياس الطيف الكتلي ، الاكتساب المعتمد على البيانات (DDA) والاكتساب المستقل عن البيانات (DIA) ، إلى جانب قياس الطيف الكتلي عالي الدقة للكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) للتنميط الكيميائي الشامل لتركيبات الطب الصيني التقليدي المعقدة (TCM). تم استخدام مسحوق Huaihua ، وهو وصفة طبية كلاسيكية ، كنظام نموذجي للتقييم التجريبي. تم إنشاء طرق اكتساب DDA و DIA المحسنة بشكل منفصل: تضمنت طريقة DDA استراتيجية اختيار أيونات السلائف المستهدفة مع معلمات تجزئة مخصصة ، بينما استخدمت طريقة DIA استراتيجية نافذة متغيرة مجزأة لتغطية نطاق m / z المستهدف ، مما أدى إلى تجزئة غير متحيزة على جميع أيونات السلائف. تم تنفيذ تحديد المركب باستخدام برنامج Compound Discoverer. وركز التقييم المقارن على وجه التحديد على خصائص أداء وضعي الاكتساب، بما في ذلك عدد المركبات المحددة، وقابلية التكاثر، والجودة الطيفية للمتصلات المتنقلة/المتنقلة المتنقلة، وحساسية الكشف للمكونات النشطة منخفضة الوفرة. أظهرت النتائج أن وضع DDA أسفر عن عدد إجمالي أعلى من المركبات المكتشفة ، في حين أن وضع DIA ولد نسبة أكبر من التعريفات عالية الثقة (10.63٪ مع درجات المطابقة الطيفية >0.8). والجدير بالذكر أن نهج DIA أظهر قابلية استنساخ فائقة بشكل ملحوظ في وقت الاحتفاظ ومنطقة الذروة لستة مركبات تمثيلية ، حيث أظهر روتين اختلافا >3 أضعاف في وقت الاحتفاظ RSD بين وضعي الاستحواذ. ومع ذلك ، أنتجت DDA أطياف MS / MS أنظف مع أيونات شظايا مميزة ، بينما أظهرت أطياف DIA تداخلا من أيونات الملوثات. في الوقت نفسه ، اكتشف DIA بشكل فعال المكونات النشطة منخفضة الوفرة التي لا يمكن استخراج كروماتوجمات الأيونات وشظايا MS / MS في وضع DDA. تساهم هذه الدراسة في الأدلة التجريبية الهامة ومجموعات البيانات التحليلية لإبلاغ اختيار أنماط اكتساب قياس الطيف الكتلي عالي الدقة لأبحاث صياغة الطب الصيني التقليدي المعقدة. قد يدمج الباحثون اللاحقون المزايا التكميلية لكلا النهجين لتحقيق أهداف مزدوجة في التوصيف المركب الشامل.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمتلك تركيبات الطب الصيني التقليدي (TCM) أنظمة كيميائية معقدة مع اختلافات كبيرة في تركيزات المكونات ، لا سيما وجود العديد من المكونات النشطة منخفضة الوفرة ، والتي تشكل تحديات خطيرة للتقنيات التحليلية. مسحوق Huaihua ، تركيبة الطب الصيني التقليدي الكلاسيكي والمشهور ، يتكون من أربعة أعشاب طبية: Sophora japonica ، وأوراق Platycladus orientalis ، ومسامير Schizonepeta tenuifolia ، وقشر الحمضيات. تحتوي هذه التركيبة على مجموعة متنوعة من المواد النشطة بيولوجيا ، بما في ذلك مركبات الفلافونويد والقلويدات والزيوت المتطايرة ، مع اختلافات كبيرة في تركيزاتها. إنه بمثابة نموذج تمثيلي للأنظمة المعقدة1 لدراسة الأساس المادي لصيغ الطب الصيني التقليدي. يعد التوصيف الدقيق والشامل والموثوق لتركيبته الكيميائية شرطا أساسيا حاسما لتوضيح أساس المواد الدوائية وتحسين معايير مراقبة الجودة.

كروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء - رباعي الأقطاب - المجال الكهروستاتيكي Orbitrap برز مطياف الكتلة عالي الدقة (UPLC-QE-Orbitrap MS) كمنصة أساسية لتحليل المكونات الكيميائية في أنظمة TCM المعقدة ، نظرا لدقتها الاستثنائية وحساسيتها ودقتها الكتلية. فيما يتعلق باستراتيجيات الحصول على البيانات ، فإن الاستحواذ المعتمد على البيانات (DDA) والاكتساب المستقل عن البيانات (DIA) هما وضعان رئيسيان2،3،4 (الشكل 1). يؤدي وضع DDA بشكل انتقائي إلى تجزئة الأيونات عالية الوفرة بناء على قواعد محددة مسبقا (على سبيل المثال ، عتبات شدة أيونات السلائف ، والاستبعاد الديناميكي) ، مما ينتج عنه أطياف MS / MS مستهدفة عالية الجودة تسهل التوضيح الهيكلي. ومع ذلك ، فإن لها قيودا5،6،7،8 في تغطية الأيونات منخفضة الوفرة. في المقابل ، يقوم وضع DIA بتجزئة غير تمييزية لجميع أيونات السلائف ضمن نطاق محدد من نسبة الكتلة إلى الشحن باستخدام نوافذ مستمرة أو متغيرة. من الناحية النظرية ، يلتقط جميع الأيونات القابلة للاكتشاف ، مما يعزز بشكل كبير اتساع الكشف وقابليته للتكرار ، وهو مناسب بشكل خاص للتحليل العالمي غير المستهدف ، على الرغم من أن أطياف MS / MS المختلطة الناتجة أكثر تعقيدا لتفسير5،9.

في الوقت الحالي ، بينما تم تطبيق تقنيات DDA و DIA بشكل فردي في تحليل الطب الصيني التقليدي ، فإن الدراسات المقارنة المنهجية والتجريبية حول مؤشرات الأداء الأساسية ، مثل اتساع التعريف (خاصة بالنسبة للمكونات منخفضة الوفرة) ، وجودة طيف MS / MS ، وحساسية الكشف ، ضمن نفس نظام صيغة الطب الصيني التقليدي المعقد (على سبيل المثال ، مسحوق Huaihua) لا تزال غير كافية. يعد توضيح السيناريوهات والمزايا والقيود القابلة للتطبيق لهذين الوضعين في مصفوفات الطب الصيني التقليدي المعقدة أمرا بالغ الأهمية للباحثين لتحسين اختيار الإستراتيجية بناء على أهداف تجريبية محددة10.

يتم تلخيص المعلمات والقيود الرئيسية هنا لتوجيه القراء حول قابلية تطبيق هذا البروتوكول. هذه الطريقة فعالة للغاية في تحديد ملامح المصفوفات العشبية المعقدة ، مع معلمات محسنة لنظام يحتوي على مركبات الفلافونويد والقلويدات. تم ضبط النافذة المتغيرة DIA الحرجة على 30 م / z بعد الاختبار التجريبي. يجب ضبط هذه المعلمة للعينات ذات الخصائص الفيزيائية والكيميائية المختلفة. تكتشف الطريقة بشكل موثوق الأيونات منخفضة الوفرة (منطقة الذروة ~ 105) ولكنها تتطلب الحصول على أوضاع تأين موجبة وسالبة منفصلة لضمان جودة البيانات. يتمثل القيد الأساسي في اعتماد DIA على المكتبات الطيفية وبرامج إزالة الالتفاف المتقدمة لتحديد الهويات الواثقة ، مما يؤثر على متطلبات الموارد الحسابية.

وفقا لذلك ، تهدف هذه الدراسة إلى إجراء مقارنة متعمقة ومنهجية للأداء الشامل لأوضاع مسح DDA و DIA على منصة UPLC-QE-Orbitrap MS ، باستخدام الصيغة الكلاسيكية Huaihua Powder كدراسة حالة. سيتم تطوير طرق مسح DDA و DIA المحسنة المصممة لتحليل مسحوق Huaihua. سيتم إجراء معالجة البيانات باستخدام برنامج Compound Discoverer لتقييم ومقارنة الوضعين في الأبعاد التالية: (1) العدد الإجمالي للمركبات المحددة. (2) جودة أطياف التصلب المتعدد/التصلب المتعدد المكتسب؛ (3) قابلية تكرار مناطق الذروة وأوقات الاحتفاظ بالمركبات التمثيلية ؛ و 4) حساسية الكشف عن المكونات النشطة منخفضة الوفرة. من المتوقع أن يوفر هذا البحث أدلة تجريبية قوية ودعم بيانات لاختيار أنماط مسح قياس الطيف الكتلي عالية الدقة في دراسات أنظمة الطب الصيني التقليدي المعقدة ، واستكشاف إمكانات المزايا التكميلية ل DDA و DIA لتحقيق "توازن بين العرض والعمق" وتحديث الطب الصيني التقليدي المتقدم.

أثناء التجربة ، فيما يتعلق بإعداد المعلمة للنافذة المتغيرة المجزأة في وضع اكتساب DIA ، نقترح ضبطها على 30 م / z. في الوقت نفسه ، يكون تأثير جمع الأيونات الموجبة والسالبة بشكل منفصل أفضل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.

1. تحضير محلول اختبار مسحوق Huaihua

  1. وفقا لمعايير معالجة "زهرة الصفيراء المقلية" في إصدار 2020 من دستور الأدوية الصيني (الجزء الأول) ، خذ كمية مناسبة من مادة زهرة الصفيراء الأصلية ، وقم بإزالة الشوائب والأغصان ، وقم بغربلة الرماد والحطام ، وضعها في مقلاة ساخنة ، واقليها على نار خفيفة (100 درجة مئوية) حتى يصبح لونها أصفر داكن. يرفع ويبرد.
  2. قم بإعداد المنتجات المصنعة لأوراق Platycladus orientalis وفقا ل "0213 القواعد العامة للتحضير" في طبعة 2020 من دستور الأدوية الصيني (الجزء الرابع). خذ كمية مناسبة من أوراق Platycladus orientalis الأصلية ، وقم بإزالة الشوائب ، وضعها في مقلاة ساخنة ، واقليها على نار خفيفة (100 درجة مئوية) حتى تصبح صفراء. يرفع ويبرد.
  3. قم بإعداد المنتجات المصنعة من Zhike وفقا لطريقة "النخالة المقلية Fructus Aurantii" في طبعة 2020 من دستور الأدوية الصيني (الجزء الأول). خذ كمية مناسبة من مادة Zhike الخام ، وقم بإزالة الشوائب ، وقم بتسخين 100 درجة مئوية ، ورش كمية مناسبة من نخالة القمح بنسبة 1:10 (المواد إلى سواغ).
    1. بمجرد أن يرتفع الدخان ، أضيفي شرائح Zhike النيئة واقليها بسرعة. عندما يتحول لون السطح إلى اللون الأصفر أو الأصفر الداكن ، قم بإزالة النخالة ونخلها وتبريدها واتركها جانبا.
  4. قم بإعداد مسحوق Huaihua وفقا لوصفة نسبة الوزن 1: 1: 1: 1 من الفورمولولوجيا الطبية الصينية (القرن الجديد 3rd Edition). تزن بدقة 1 غرام من كل مسحوق عشبي (منخل من خلال غربال رقم 5).
    1. تمزج المساحيق في الهاون وتخلط وفقا ل "طريقة التشويش والخلط" لمساحيق الطب الصيني التقليدي: طحنها برفق وثبات في اتجاه واحد لمدة 10 دقائق.
    2. ضع في اعتبارك المسحوق الممزوج بشكل موحد عندما لا يتم ملاحظة خطوط مرئية أو تكتلات أو اختلافات في اللون ، مما يؤدي إلى مظهر متجانس عبر الخليط بأكمله. قم بإعداد عينة مسحوق Huaihua النهائية باستخدام هذه الطريقة.
  5. تقييم توحيد الخلط باستخدام بروتوكول الفحص البصري الموحد. افحص خليط المسحوق في ظل ظروف إضاءة متسقة على خلفية بيضاء.
    ملاحظة: اعتبر الخليط متجانسا فقط إذا كان يفي بجميع المعايير التالية: لون موحد طوال الوقت مع عدم وجود خطوط مرئية أو بقع من المكونات الفردية. نسيج متسق بدون تباعد خشن أو دقيق ؛ لا يوجد اختلاف واضح في ظل اللون عند أخذ عينات من نقاط متعددة ؛ ولا توجد كتل حبيبية مجمعة يمكن اكتشافها عند الفحص الدقيق. قم بإجراء هذا التقييم من قبل اثنين من المحللين المستقلين لضمان الاتساق.
  6. تزن بدقة 0.1 جرام من عينة مسحوق Huaihua المخلوطة جيدا. انقل العينة إلى قارورة حجمية سعة 10 مل. أضف 8 مل من الميثانول.
  7. قم بإجراء الاستخراج بالموجات فوق الصوتية لمدة 60 دقيقة بقوة 500 واط وتردد 40 كيلو هرتز. تبرد إلى درجة حرارة الغرفة. اصنع الحجم إلى العلامة بالميثانول.
    1. رج العبوة جيدا للحصول على تركيز نهائي من 10 مجم / مل مستخلص مسحوق Huaihua. قم بالتصفية من خلال غشاء صغير يسهل اختراقه 0.22 ميكرومتر (PVDF). انقل المرشح إلى قارورة عينة للاختبار.
      ملاحظة: أثناء التجربة ، تم تصنيف سائل النفايات العضوية والكواشف السامة والضارة الأخرى ذات الصلة ووسمها. وكل أسبوعين ، يقوم موظفو مكتب إدارة الأصول والتجارب بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي بنقلها إلى مؤسسة مؤهلة لإعادة التدوير والمعالجة الموحدة.

2. شروط الكشف عن نظام إدارة الموارد البشرية UPLC-Q-Orbitrap

  1. إعدادات معلمات النظام الكروماتوغرافي
    1. استخدم عمودا C18 (3.0 مم × 100 مم ، 2.6 ميكرومتر). حافظ على درجة حرارة العمود عند 30 درجة مئوية. استخدم المرحلة المتنقلة A (0.1٪ حمض الفورميك في الماء) والمرحلة المتنقلة B (الأسيتونيتريل).
    2. برمجة التدرج على النحو التالي: 0-10 دقائق ، 5٪ -20٪ B ؛ 10-25 دقيقة ، 20٪ -50٪ ب ؛ 25-40 دقيقة ، 50٪ -95٪ ب ؛ 40-45 دقيقة ، 95٪ ب. اضبط معدل التدفق على 0.3 مل / دقيقة. حقن 5 ميكرولتر من العينة.
  2. قم بإجراء دراسة قياس الطيف الكتلي باستخدام إعدادات المعلمات التالية.
    ملاحظة: مصدر الأيونات: التأين بالرش الكهربائي الساخن (H-ESI) ؛ وضع المسح: في وضع اكتساب DDA ، اكتساب كل من الأيونات الموجبة والسالبة في وقت واحد ؛ في وضع اكتساب DIA ، اكتساب الأيونات الموجبة والسالبة بشكل منفصل ؛ معلمات مصدر الأيونات: جهد الرش + 3.5 كيلو فولت (أيونات موجبة) / -2.8 كيلو فولت (أيونات سالبة) ؛ غمد سرعة تدفق الهواء 40 arb ؛ سرعة تدفق الهواء الإضافية 10 ARB ؛ تهب سرعة الغاز 1 arb ؛ درجة حرارة أنبوب نقل الأيونات: 320 درجة مئوية ؛ درجة حرارة التبخر: 350 درجة مئوية ؛ مستوى التردد اللاسلكي للعدسة S: 55٪.
    1. بناء وتحسين طريقة الاستحواذ المعتمد على البيانات (DDA)
      1. للحصول على فحص التصلب المتعدد الكامل (التصلب المتعدد الكامل)، اختر الإعدادات التالية:
        ملاحظة: القرار: 000 35؛ نطاق المسح: 100-1000 م / ز ؛ هدف التحكم التلقائي في الكسب (AGC): 3e6 ؛ الحد الأقصى لوقت الحقن (الحد الأقصى لتكنولوجيا المعلومات): 100 مللي ثانية.
      2. بالنسبة لفحص MS/MS المعتمد على البيانات (dd-MS2)، اختر الإعدادات التالية:
        1. لاختيار الأيونات الجزيئية ، حافظ على عتبة الشدة 5e4. استبعاد الأيونات غير المشحونة وقمم النظائر (تمكين استبعاد النظائر). تطبيق الاستبعاد الديناميكي مع وقت استبعاد يبلغ 15 ثانية وتحمل كتلة يبلغ ±10 جزء في المليون لمنع الاختيار المتكرر للأيونات عالية الكثافة.
        2. بالنسبة لإعدادات التجزئة ، حافظ على ما يلي: نافذة العزل: 1.0 م / z ؛ طريقة التجزئة: تفكك التصادم عالي الطاقة (HCD) ؛ طاقة الاصطدام الطبيعية (NCE): 20 ، 40 ، 60 فولت ؛ الدقة الثانوية: 17,500; هدف AGC: 1e5 ؛ الحد الأقصى لتكنولوجيا المعلومات: 50 مللي ثانية ؛ استراتيجية TopN: حدد أفضل 3 أيونات جزيئية بأعلى كثافة للتجزئة في كل دورة مسح.
    2. بناء وتحسين طريقة DIA
      1. بالنسبة لفحص MS الكامل، استخدم نفس المعلمات كما في طريقة DDA.
      2. بالنسبة لفحص MS / MS المستقل عن البيانات (DIA-MS / MS) ، قم بإنشاء استراتيجية نافذة عزل متغير مجزأة.
      3. حدد النطاق المستهدف على أنه 100-1000 م / ز. قسم النوافذ بناء على توزيع وفرة الأيونات عبر نطاق m / z بأكمله باستخدام أطياف DDA عالية الجودة في ظل ظروف كروماتوغرافية محسنة. قم بتعيين نوافذ متغيرة لموازنة الوفرة الأيونية الكلية عبر المقاطع ، وتجنب التشبع أو القصر.
      4. قم بالتحسين إلى 30 نافذة لتحقيق التوازن بين التغطية ووقت الدورة.
        ملاحظة: إعدادات التجزئة - طريقة التجزئة: HCD; NCE: 20 ، 40 ، 60 فولت ؛ الدقة: 17,500; هدف AGC: 1e6 ؛ ماكس تكنولوجيا المعلومات: تلقائي. نافذة متغيرة مجزأة: 30 م / ز ؛ عدد الحلقات: 30.
      5. قم بإنشاء قائمة التضمين بناء على الوزن الجزيئي المركزي لكل جزء من نافذة العزل ، على سبيل المثال ، m / z 115 ، 145 ، 175 ، 205 ... 925, 955, 985.
    3. عملية الحصول على البيانات
      1. توازن النظام: قم بموازنة العمود الكروماتوغرافي مع الطور المتنقل لمدة 5 دقائق على الأقل.
      2. تشغيل عينة ما قبل التجربة: قم بإعداد محلول اختبار مسحوق Huaihua وفقا لإجراء التحضير. حقن 5 عينات متتالية. تقييم استقرار النظام (وقت الاستبقاء RSD < 2٪ ، إجمالي شدة تيار الأيونات RSD < 5٪).
      3. تشغيل فارغ: قم بحقن محلول الميثانول الفارغ لطرح الخلفية.
      4. تشغيل عينة مسحوق Huaihua: قم بتحليل كل عينة عن طريق الحقن بترتيب عشوائي. قم بتشغيل جميع العينات بشكل مستقل لكل وضع مسح ضوئي (DDA ، DIA).
    4. معالجة البيانات
      1. تحديد المركب
        1. استيراد البيانات الأولية التي تم الحصول عليها بواسطة قياس الطيف الكتلي إلى برنامج Compound Discoverer. إنشاء سير عمل تعريف للمكونات غير المعروفة. إجراء معالجة الذروة ومحاذاة الذروة. قم بمطابقة أطياف MS/MS المقاسة مع قاعدة بيانات MS/MS عبر الإنترنت mzCloud وقاعدة بيانات MS/MS المحلية mzVault.
        2. قم بتطبيق معلمات التصفية التالية: عتبة منطقة الذروة 105 ، انحراف الكتلة ± 5 جزء في المليون لكل من الأيونات الأولية والثانوية ، ودرجة المطابقة ≥80. قارن الأيونات التي تمت تصفيتها بالمعلومات المركبة من قواعد البيانات والمعايير المرجعية والأدبيات ذات الصلة لتحديد المكونات الكيميائية.
        3. عملية محددة في برنامج Compound Discoverer: قم بإنشاء عملية تحليل جديدة وحدد سير عمل Natural Product/Natural Product Unknown ID w Stats Online وLocal Database Searchers .
        4. تأكد من تضمين عقدة مركبات الكشف لتحديد الذروة والاستخراج. أضف قواعد بيانات البحث mzCloud والبحث mzVault إلى سير العمل.
        5. أضف ملف البيانات الأولية وقم بتعيين معلمات التصفية (عتبة منطقة الذروة 105 ، انحراف الكتلة ± 5 جزء في المليون لكل من الأيونات الأولية والثانوية). انقر فوق تشغيل لتنفيذ التحليل.
      2. التحليل المقارن للمؤشرات ذات الصلة
        1. كمية التعريف: قارن العدد الإجمالي للمركبات المحددة في أوضاع الأيونات الموجبة والسالبة لكل من وضعي DDA و DIA. إنشاء خرائط توزيع الأيونات لكل وضع.
        2. دراسة التكاثر: قارن بين وقت الاستبقاء (RT) ومنطقة الذروة (AA) الاختلافات بين المركبات التمثيلية ذات الوفرة العالية (روتين ، كيرسيترين) ، ووفرة متوسطة (neohesperidin ، نارينجين) ، ووفرة منخفضة (السورالينول ، حمض ثلاثي ميثيل كولشيسينيك) بين أوضاع DDA و DIA (ن = 5).
        3. جودة طيف MS / MS: تقييم جودة أطياف أيونات شظايا MS / MS من بوليجون ، وهو مركب رئيسي في Q-Marker ، في ظل أوضاع DDA و DIA.
        4. الكشف عن المكونات منخفضة الوفرة: قارن الكشف عن شظايا التصلب العصبي المتعدد / التصلب العصبي المتعدد للمركبات التمثيلية منخفضة الوفرة (كارفون ، الأدينوزين) في وضعي DDA و DIA5.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التحديد العام للمركبات

يتم عرض الكروماتوغرامات التيار الأيوني الكلي لمسحوق Huaihua تحت وضعي الاستحواذ في الشكل 2 ، مع الحد الأدنى من الاختلافات الإجمالية. في وضع اكتساب DDA ، تم تحديد ما مجموعه 14,958 مركبا في كل من وضعي الأيونات الموجبة والسالبة ، بينما تم تحديد 9,489 مركبا في وضع اكتساب DIA (الشكل 3 أ). من بينها ، كانت نسبة المركبات ذات درجات المطابقة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة ، تجدر الإشارة بشكل خاص إلى أننا وجدنا أنه في وضع اكتساب DIA ، يجب ألا يكون إعداد القيمة للنافذة المتغيرة المجزأة كبيرا جدا. حاولنا ضبطه على 300 ميجا هرتز و 100 ميجا هرتز ، لكن التأثير الطيفي النهائي كان ضعيفا. بعد الاستكشاف والمحاولات المتكررة ، اخترنا أخيرا نافذة الاستحواذ البالغة 30 ميجا هرتز باعتبارها الأنسب. لذلك ، فإن إعداد نافذة الاستحواذ له تأثير حاسم على نجاح أو فشل التجربة.

في الوقت نفسه ، تم إجراء تجربة مسبقة أيضا حول تأثير الاكتساب ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذه الدراسة ماليا من قبل صندوق الشباب التابع لمؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة سيتشوان (رقم 2025ZNSFSC1823). مشروع شتلات الابتكار في العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (MZGC20230055) ؛ وبرنامج تعزيز أبحاث المواهب في الانضباط التابع لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي "علماء Xinglin" للمشروع الخاص لمواهب الحضانة (MPRC2022017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أسيتونيتريلثيرمو فيشر/النقاء الكروماتوغرافي
برنامج Compound Discoverer 3.3ثيرمو فيشر/معالجة بيانات قياس الطيف الكتلي وتحديد المركبات
فركتس أورانتيسيتشوان نيجيانغ220709الأعشاب في وصفة طبية مسحوق Huaihua
أوراق Platycladus orientalisشاندونغ ليني240619الأعشاب في وصفة طبية مسحوق Huaihua
سبايك Schizonepetaجيانغسو تايتشو240601الأعشاب في وصفة طبية مسحوق Huaihua
زهرة الصفيراءسيتشوان غوانجان241017الأعشاب في وصفة طبية مسحوق Huaihua
آلة التنظيف بالموجات فوق الصوتيةJietuo بالموجات فوق الصوتية معدات التنظيف المحدودة240 هايتايتاستخراج المكونات من مسحوق Huaihua
نظام إدارة الموارد البشرية UPLC-Q-Orbitrapثيرمو فيشر/مطياف الكتلة عالي الدقة
الماءشركة واتسونز/مياه فائقة النقاء

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, D., et al. Establishment of fingerprint and chemical composition study of the classic formula Huaihua San based on two mass spectrometry techniques. Chin Herb Med. 56 (10), 3499-3512 (2025).
  2. Stincone, P., et al. Evaluation of data-dependent MS/MS acquisition parameters for non-targeted metabolomics and molecular networking of environmental samples: Focus on the Q Exactive platform. Anal Chem. 95 (34), 12673-12682 (2023).
  3. Guo, J., Huan, T. Comparison of fullscan, datadependent, and dataindependent acquisition modes in liquid chromatographymass spectrometry based untargeted metabolomics. Anal Chem. 92 (12), 8072-8080 (2020).
  4. FernándezCosta, C., et al. Impact of the identification strategy on the reproducibility of the DDA and DIA results. J Proteome Res. 19 (8), 3153-3161 (2020).
  5. Wang, H. D., et al. A novel hybrid scan approach enabling the ionmobility separation and the alternate datadependent and dataindependent acquisitions (HDDIDDA): Its combination with offline two-dimensional liquid chromatography for comprehensively characterizing the multicomponents from Compound Danshen Dripping Pill. Anal Chim Acta. 1193, 339320(2022).
  6. El Boudlali, H., et al. High-resolution accuratemass spectrometry-baseduntargeted metabolomics: Reproducibility and detection power across data-dependent acquisition, dataindependent acquisition, and AcquireX. Comput Struct Biotechnol J. 27, 2412-2423 (2025).
  7. Guo, J., Shen, S., Xing, S., Huan, T. DaDIA: Hybridizing data-dependent and data-independent acquisition modes for generating high-quality metabolomic data. Anal Chem. 93 (4), 2669-2677 (2021).
  8. Wu, Y., Wang, Y. A comparative study of dataindependent acquisition and datadependent acquisition in liquid chromatographymass spectrometrybased untargeted metabolomics analysis of Panax genus sample. Anal Bioanal Chem. 417 (14), 3215-3228 (2025).
  9. Barkovits, K., et al. Reproducibility, specificity, and accuracy of relative quantification using spectral library-based data-independent acquisition. Mol Cell Proteomics. 19 (1), 181-197 (2020).
  10. Barbier Saint Hilaire, P., et al. Comparative evaluation of data-dependent and data-independent acquisition workflows implemented on an Orbitrap Fusion for untargeted metabolomics. Metabolites. 10 (4), 158(2020).
  11. Zheng, R. L., et al. Screening and extraction process optimization for potential α-glucosidase inhibitors from quinoa seeds. Food Med Homol. 1, 9420004(2024).
  12. Cao, Z. X., et al. Analysis and comparison of staminate flowers components in five Chinese walnut varieties. Food Med Homol. 1, 9420005(2024).
  13. Zhou, J. W., et al. Anti-virulence potential of carvone against Serratia marcescens. Food Med Homol. 1, 9420001(2024).
  14. Tabb, D. L., et al. Interrogating dataindependent acquisition LCMS/MS for affinity proteomics. J Proteins Proteom. 15 (3), 281-298 (2024).
  15. Wartmann, Y., Boxler, M. I., Kraemer, T., Steuer, A. E. Impact of three different peak picking software tools on the quality of untargeted metabolomics data. J Pharm Biomed Anal. 248, 116302(2024).
  16. Bilbao, A., et al. Processing strategies and software solutions for data-independent acquisition in mass spectrometry. Proteomics. 15 (56), 964-980 (2015).
  17. Guan, S., Taylor, P. P., Han, Z., Moran, M. F., Ma, B. Data-dependentindependent acquisition (DDIA) proteomics. J Proteome Res. 19 (8), 3230-3237 (2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DDA MS MS

مقالات ذات صلة