مقالة منهجية

تقنيات الخياطة لإعادة بناء الأوعية الدموية في زراعة الكبد بتقويم العظام في الفئران

642 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69234

⸱

أكتوبر 14, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Graduate School of Medicine, Kyoto University

في هذه المقالة

ملخص

تعد عمليات إعادة بناء الأوعية الدموية لدى المتلقين ، بما في ذلك الوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي (SHIVC) ، والوريد البابي ، والوريد الأجوف السفلي تحت الكبد (IHIVC) ، هي الإجراءات الرئيسية لنجاح عملية زرع الكبد العظامية للفئران. نقدم هنا تقنيات ونصائح للخياطة لإعادة بناء SHIVC و IHIVC في نموذج زراعة كبد الفئران.

الملخص

يعد البحث الانتقالي باستخدام النماذج الحيوانية أمرا ضروريا لمعالجة المشكلات السريرية في عمليات زرع الأعضاء. على الرغم من أن زراعة الكبد لتقويم العضلات بالفئران (LT) هي أداة مفيدة للتحقيق في آليات تجديد الكبد ، وإصابة نقص تروية التروية ، والاستجابات المناعية بعد LT ، إلا أن التحديات الفنية في هذا الإجراء تحد من جدواه. الجوانب الرئيسية لنجاح تقويم العضلات LT هي إعادة بناء الأوعية الدموية لدى المتلقين ، بما في ذلك الوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي (SHIVC) ، والوريد البابي (PV) ، والوريد الأجوف السفلي للكبد (IHIVC). بالإضافة إلى الصعوبات الفنية في إعادة بناء هذه الأوعية ، فإن الحد الزمني للمرحلة الخالية من الكبد في غضون 20 دقيقة يجعل هذا الإجراء أكثر صعوبة. على الرغم من أنه يمكن استخدام تقنية الكفة لإعادة بناء الكهروضوئية ، إلا أن تقنية الخياطة الآمنة والسريعة مطلوبة لإعادة بناء SHIVC خلال مرحلة انعدام الكبد. بالنسبة لإعادة بناء IHIVC ، في حين أن كل من تقنيات الكفة والخياطة قابلة للتطبيق ، فإن تقنية الخياطة تؤدي إلى وقت تشغيل أقصر في جراحة المتبرعين وإعداد الطاولة الخلفية ويمكن أن تحافظ على تجويف الأوعية الدموية أكبر من تقنية الكفة. نقدم هنا إرشادات لإعادة بناء SHIVC و IHIVC باستخدام تقنية خياطة لتسهيل تقويم الفئران LT.

المقدمة

مع التقدم في التقنيات الجراحية والأدوية المثبطة للمناعة وطب العناية المركزة ، تم تأسيس زراعة الأعضاء كعلاج قياسي لأمراض الأعضاء في المرحلة النهائية. زراعة الكبد (LT) هي حاليا العلاج العلاجي الوحيد لأمراض الكبد في المرحلة النهائية وبعض الأورام الخبيثة الكبدية. يعد البحث الانتقالي باستخدام النماذج الحيوانية أمرا ضروريا لمعالجة المشكلات السريرية في LT. نظرا لتوفر العديد من المعدلة وراثيا في نماذج الفئران ، فإن تقويم الفئران LT هو أداة مهمة لاستكشاف الأفكار الميكانيكية في تجديد الكبد ، وإصابة نقص تروية التروية ، والاستجابات المناعية بعد LT1. ومع ذلك ، نظرا لأن التحديات التقنية في هذا الإجراء تحد من جدواه ، فإن مجموعات البحث التي تعمل على هذا النموذج محدودة2،3،4،5،6،7،8،9،10.

تم وصف تقويم الفن LT لأول مرة بواسطة Qian et al. في عام 19912. يتكون الإجراء الجراحي ، الذي تم تطويره من خلال تطبيق تقنيات تقويم العظام LT في الفئران ، من ثلاث خطوات: جراحة المتبرع ، وإعداد الطاولة الخلفية لترقيع الكبد ، وعملية المتلقي6. الأجزاء الصعبة تقنيا من الفأر LT هي إعادة بناء القنوات الصفراوية والأوعية الدموية في المتلقين ، بما في ذلك الوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي (SHIVC) ، والوريد البابي (PV) ، والوريد الأجوف السفلي تحت الكبد (IHIVC). بالإضافة إلى التقنيات الجراحية ، يجب أن تكون المرحلة الخالية من الكبد من التثبيت إلى إطلاق التدفق الكهروضوئي في غضون 20 دقيقة لنجاح تقويم الفأر LT 2،6،11. علاوة على ذلك ، من واقع خبرتنا ، يجب أن يكون إجمالي وقت إعادة التروية من التثبيت الكهروضوئي إلى إطلاق IHIVC في غضون 30 دقيقة لتحقيق البقاء على المدى الطويل في الفأر LT. يتوافق هذا مع التقرير السابق ل Rat LT الذي يصف الوقت المفضل لحالة الديناميكا الدموية الجهازية غير المستقرة في غضون 30 دقيقة تقريبا12. وبالتالي ، فإن الصعوبات الفنية والقيود الزمنية في LT الماوس تجعل هذا الإجراء أكثر صعوبة.

على الرغم من أنه يمكن استخدام تقنية الكفة لإعادة بناء الكفة الكهروضوئية ، إلا أن تقنية الخياطة مطلوبة لإعادة بناء SHIVC خلال مرحلة انعدام الكبد. لذلك ، فإن تقنية الخياطة الآمنة والسريعة ضرورية لمفاغرة SHIVC. في حين أن كل من تقنيات الكفة والخياطة قابلة للتطبيق لإعادة بناء IHIVC ، فقد استخدمت معظم الدراسات السابقة تقنية الكفة5،6،7،11،13. ومع ذلك ، فإن استخدام تقنية الكفة في إعادة بناء IHIVC يؤدي إلى وقت تشغيل أطول في عمليات المانحين والمائدة الخلفية. بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون إدخال الكفة أصعب من الخياطة للمبتدئين بسبب الهامش القصير للوريد الأجوف السفلي المتلقي (IVC) 13.

نقدم هنا إرشادات لإعادة بناء SHIVC و IHIVC الناجحة باستخدام تقنية الخياطة في تقويم الفئران LT.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع التجارب على من قبل لجنة التجارب على بجامعة كيوتو وتم إجراؤها وفقا لإرشادات جامعة كيوتو لحماية. تم إجراء جراحات الفئران تحت التخدير العام باستخدام استنشاق الأيزوفلوران. تم ضبط المرذاذ على 3٪ إيزوفلوران مع 1 لتر / دقيقة أكسجين للحث على التخدير. بعد شق البطن ، تم تقليل الأيزوفلوران إلى 1٪ للحفاظ على التخدير. يتم سرد أدوات الجراحة المجهرية المستخدمة في هذا البروتوكول ، بما في ذلك تلك المستخدمة في بروتوكول إعادة بناء الأوعية الدموية13 المنشور سابقا ، في جدول المواد. كان هناك حاجة إلى مجهر لإجراء تقويم العظام LT13. تم استخدام وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة جسم الماوس13.

1.

  1. استخدم فأرة تزن 25-30 جم.
    ملاحظة: على الرغم من أنه يمكن استخدام الفئران التي تزن 20-35 جراما ، إلا أن ما يقرب من 25 جراما من الفئران مناسبة لكل من المتبرعين والمتلقين. نظرا لأن العمر والتنكس الدهني في الكبد يؤثران على نتائج LT ، يجب اختيار الفئران المناسبة لكل غرض من أغراض التجارب.

2. تشريح IHIVC في الكبد المتبرع

  1. عزل IHIVC عن الأنسجة المحيطة. أغلق الأوردة القطنية بالكي الكهربائي إذا لزم الأمر.
  2. قم بإزالة الدهون من IHIVC لفضح جدار الوعاء الدموي.
  3. تشريح IHIVC فوق الشريان الكلوي الأيمن والوريد (الشكل 1).
    ملاحظة: إذا تم استخدام تقنية الخياطة لإعادة بناء IHIVC ، فإن تشريح الوريد الكلوي الأيمن في الموقع المتبرع غير ضروري. عادة ما تستغرق جراحة المتبرعين أقل من 30 دقيقة عند تطبيق تقنية الخياطة لإعادة بناء IHIVC.

3. تشريح SHIVC في كبد المتبرع

  1. بعد تروية محلول التخزين من الكهروضوئية ، قم بقطع الجدران الأمامية والخلفية ل SHIVC (الشكل 1).
    ملاحظة: يعد عزل الجدار الخلفي SHIVC عن الحجاب الحاجز أمرا بالغ الأهمية للحصول على هامش كاف لإعادة البناء.

4. إعداد الطاولة الخلفية لطعم الكبد

  1. قم بتوصيل الكفة بالكهروضوئية ، كما هو موضح سابقا13.
  2. قم بتوصيل مشبك مشبك ب IHIVC.
  3. اقلب الكبد رأسا على عقب واكشف جذع SHIVC.
  4. ضع خياطة بقوة 10-0 من النايلون على كلا حواف SHIVC وامسكها بمشابك البلدغ.
    ملاحظة: يستغرق إعداد الطاولة الخلفية حوالي 10 دقائق دون إرفاق الكفة ب IHIVC.

5. إعادة بناء SHIVC في المتلقي

  1. قم بتطويق SHIVC بحرير 4-0 لسحب الكبد لأسفل.
  2. تقليل تركيز الأيزوفلوران إلى 0.3-0.5٪ قبل مرحلة انعدام الكبد.
  3. قم بتثبيت IHIVC فوق الوريد الكلوي الأيمن باستخدام microserrefine.
  4. قم بتثبيت الكهروضوئية باستخدام ملقط البازلاء13.
  5. قم بتثبيت SHIVC بالحجاب الحاجز باستخدام مشبك البلدغ أثناء سحب الكبد لأسفل.
  6. اقطع الجدار الأمامي ل SHIVC ، ثم اقطع الجدار الخلفي (الشكل 1).
    ملاحظة: يعد عزل الجدار الخلفي SHIVC عن الحجاب الحاجز في المتلقي والمتبرعين أمرا بالغ الأهمية للحصول على هامش كاف لإعادة البناء.
  7. بعد تشريح PV و IHIVC عن كثب إلى كبد المتلقي ، قم بإزالة الكبد من المتلقي (الشكل 1).
  8. ضع طعم الكبد المحضر في تجويف البطن للمتلقي وضع الكبد بشكل مناسب.
  9. ضع خياطة البقاء وربطها على الطرف الأيمن من SHIVC وامسكها بمشبك بلدغ لسحب الخيط باتجاه الجانب البطني للمتلقي (الشكل 2 أ).
    ملاحظة: يقع الجانب الأيمن من SHIVC في عمق تجويف البطن. اسحب الجانب الأيمن من SHIVC بحيث يتم وضع الجدار الخلفي في المقدمة.
  10. ضع خياطة البقاء وربطها على الطرف الأيسر من SHIVC.
  11. ابدأ الخياطة المستمرة بطريقة داخل اللمعة على الجدار الخلفي ل SHIVC من الجانب الأيسر (الشكل 2 أ).
  12. عند الوصول إلى الطرف الأيمن من الجدار الخلفي ل SHIVC ، أدر طاولة العمليات بزاوية 90 درجة عكس اتجاه عقارب الساعة.
    ملاحظة: قم بتدوير طاولة العمليات بزاوية 90 درجة في اتجاه عقارب الساعة للجراحين الذين يستخدمون اليد اليسرى. بدلا من ذلك ، يمكن للجراحين خياطة الجدار الأمامي من الأمام باتجاه الخلف دون دوران.
  13. استمر في الخيط بخيطة أكثر من اللازم على الجدار الأمامي ل SHIVC من الجانب الأيمن (الشكل 2 أ).
    ملاحظة: مطلوب ما يقرب من ست إلى ثماني غرز للجدار الخلفي وثماني إلى عشر غرز للجدار الأمامي. الخيط الموجود على الطرف الأيسر من الجدار الأمامي مهم لمنع النزيف.
  14. بعد شطف الهواء في SHIVC ، قم بربط الخيط المستمر بخيطة الثبات على الجانب الأيسر من SHIVC.
  15. قم بتدوير طاولة التشغيل بزاوية 90 درجة في اتجاه عقارب الساعة لاستعادة موضع المستلم إلى الموضع الأصلي.
  16. بعد إعادة بناء وإعادة تروية الكهروضوئية ، قم بفك SHIVC.
    ملاحظة: يستغرق الأمر من 10 إلى 15 دقيقة لإعادة بناء SHIVC. نظرا لأن وقت التثبيت الكهروضوئي يمكن أن يؤثر على نتائج LT ، يجب تثبيت وقت انعدام الكبد (من التثبيت الكهروضوئي إلى فك التثبيت الكهروضوئي) لمدة تصل إلى 20 دقيقة بناء على مهارة الجراح. بعد إعادة التروية الكهروضوئية ، يتم إعادة ضبط الأيزوفلوران إلى 1٪ للحفاظ على التخدير.

6. إعادة بناء IHIVC في المتلقي

  1. ضع خيوط البقاء مع 10-0 نايلون على طرفي IHIVC.
  2. أمسك خيوط التثبيت باستخدام مشابك البلدغ للسحب نحو كلا الجانبين ، بحيث يصبح جذع IHIVC عريضا ومستقيما.
  3. ابدأ الخياطة المستمرة بطريقة داخل اللمعة على الجانب الأيسر من الجدار الخلفي (الشكل 2 ب).
  4. بعد الوصول إلى الجانب الأيمن ، استمر في الخياطة مرارا وتكرارا على الجدار الأمامي من الجانب الأيمن من المتلقي (الشكل 2 ب).
    ملاحظة: دوران طاولة العمليات غير مطلوب لإعادة بناء IHIVC. ما يقرب من ست إلى ثماني غرز لكل جدار خلفي وأمامي كافية.
  5. اغسل الهواء في IHIVC.
  6. قم بفك مشابك IHIVC من جانب الكسب غير المشروع ، ثم الجانب المتلقي.
    ملاحظة: ربط الخيط المستمر مع خياطة التثبيت على الجانب الأيسر من IHIVC غير ضروري. يستغرق إعادة بناء IHIVC من 8 إلى 10 دقائق. يجب أن يكون إجمالي وقت إعادة التروية من التثبيت الكهروضوئي إلى إطلاق IHIVC في غضون 30 دقيقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تعافى متلقي الفأر من التخدير في غضون 30 دقيقة عندما تم إجراء إعادة بناء الأوعية الدموية بنجاح باستخدام طعم كبد طبيعي دون وقت إقفاري طويل من البرد. يمكن اعتبار معدل نجاح >90٪ ماهرا في هذا الإجراء. قمنا بفحص منحنيات التعلم في جراح واحد لمعدلات التعافي بعد LT (التعافي من التخدير) ، ووقت انعدام الكبد (من التثبيت إلى إطلاق التدفق الكهروضوئي) ، وإجمالي وقت إعادة التروية (من لقط PV إلى إطلاق تدفق IHIVC). كانت هناك حاجة إلى أكثر من 60 حالة للحصول على معدلات تعافي مرضية ، وكانت هناك حاجة إلى أكثر من 80 حالة للحصول على وقت ثابت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وثقت هذه المقالة التقنيات التفصيلية لإعادة بناء SHIVC و IHIVC بتقنية الخياطة في تقويم العظام LT. تعد إعادة بناء الأوعية الدموية ، وخاصة مفاغرة SHIVC ، والتي تتطلب تقنية خياطة أثناء مرحلة انعدام الكبد ، مهارة حاسمة لنجاح الفأر LT. بالإضافة إلى تقنية الخياطة الآمنة والمأمونة ، فإن الخياطة السريعة ضرورية للحفاظ على مرحلة انعدام الكبد في غضون 20 دقيقة للحصول على نتائج قابلة للتكرار في تقويم العظام للفئران LT2،7،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين تضارب في المصالح للإفصاح عنها.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (رقم المنحة: 24K19356).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10-0 خياطة صغيرةAROSurgical Instruments CorporationT4A10N07
16 جرام قسطرة وريديةتيروموSR-FF2032صفعة IHIVC
20 جرام قسطرة وريديةتيرومور.س-FF1651الكفة الكهروضوئية
8-0 جديلة الحريرناتسومي سيساكوشوCR9-80B28-0 حرير
حل التخزين البارد Belzer UW أستيلاسسائل الحفاظ على الأعضاء
البلدغ المشبكبي براونFB329Rالبلدغ المشبك
مشابك البلدغناتسومي سيساكوشوسي -42 - إس -2لقط SHIVC
C57BL / 6 الفئران   ؛  الخدمات الحيوية الشرقية
ملقطأدوات العلوم الجميلة11231-30
محلول استنشاق الأيزوفلورانفياتريسالتخدير
أطراف غير واضحة صغيرة 0.1 مم × 0.06 مم   ؛أدوات العلوم الجميلة11253-20ملقط مستقيم
مقص صغيرأدوات موراناكا الطبية451-609-13
مايكرو سيرفينأدوات العلوم الجميلة18055-03لقط IHIVC
مايكرو سيرفينأدوات العلوم الجميلة18055-04لقط الكهروضوئية
قضيب المشبك Micro Serrefine مع قفلأدوات العلوم الجميلة18056-14قضيب مشبك السفينة
مايكرو سيريفينز أدوات العلوم الجميلة18055-4مشبك السفينة
الخياطة الدقيقة foecepsإيسكولابFD281R
قضيب المشبك Micro-serrefineأدوات العلوم الجميلة18056-14
حامل إبرةإيسكولابFD231R
رقم 11 شفرات احتياطيةماكينة حلاقة أمان الريش11نصول
مقص العيون ، مقبض دائريبي براونFD103Rمقص مجهري
حاوية بلاستيكية مستطيلة الشكل   ؛  دايسوطول 10 سم وعرض 15 سم وارتفاع 6 سم
نصائح SuperGripأدوات العلوم الجميلة00649-11 ملقط منحني
إس زكس 7أوليمبوسإس زكس 7مجهر
مقص فاناسالأدوات الدقيقة العالمية501232
مشبك الأوعية الدمويةشركة بير ميكيرTKF-1-30لتثبيت IHIVC على الكسب غير المشروع

المراجع

  1. Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance. Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).
  2. Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
  3. Tian, Y., Rudiger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model. Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).
  4. Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).
  5. Klein, I., Gassel, H. J., Thiede, A., Crispe, I. N., Steger, U. A microsurgical approach to hepatic and extrahepatic antigen presentation and its effects on the migration pattern of activated CD8(+) T cells. Microsurgery. 27 (4), 289-294 (2007).
  6. Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).
  7. Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model. World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).
  8. Kageyama, S., et al. Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury. Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).
  9. Kojima, H., et al. T cell CEACAM1-TIM-3 crosstalk alleviates liver transplant injury in mice and humans. Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248.e9 (2023).
  10. Tanaka, K., et al. Recipient toll-like receptor 4 determines the outcome of ischemia-reperfusion injury in steatotic liver transplantation in mice. Am J Transplant. 25 (6), 1168-1179 (2025).
  11. Chen, J., et al. A review of various techniques of mouse liver transplantation. Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).
  12. Hori, T., et al. Comprehensive and innovative techniques for liver transplantation in rats: A surgical guide. World J Gastroenterol. 16 (25), 3120-3132 (2010).
  13. Tanaka, K., et al. Vascular reconstruction with the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation. J Vis Exp. (202), e66215(2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة