مقالة منهجية

صياغة جرعات تتبع فيتامين أ للإعطاء للبشر باستخدام تقنية تخفيف نظائر الريتينول

186 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69240

⸱

مارس 31, 2026

 , 
1Human Nutrition and Exercise Research Centre, Newcastle University, 2Fera Science Ltd

في هذه المقالة

ملخص

يجب أن يتوافق تحضير فيتامين أ المستقر الموسوم بالنظير، الضروري لتقنية تخفيف نظير الريتينول، مع معايير سلامة الغذاء. يظهر البروتوكول تحضير الجرعة في زيت نباتي بتركيزات مناسبة لنظام التوصيل المختار والمنصة التحليلية المطبقة.

الملخص

تعتمد تقنية تخفيف نظائر الريتينول (RID) على إعطاء متتبعات فيتامين أ الموسومة بالنظائر للبشر. هنا، نقدم طريقة لتوجيه فرق البحث حول كيفية تحضير متتبعات نظائر فيتامين أ المستقرة لكل من الدراسات البحثية والمسوحات السكانية. تقدم المقالة نظرة عامة على تحضير المواد والمعدات المطلوبة والإجراءات لضمان سلامة أجهزة التتبع للاستهلاك البشري. يمكن الحصول على متتبعات نظائر فيتامين أ المستقرة تجاريا وعادة ما تصنف إما بالديوتيريوم [2H] أو الكربون-13 [13C] بنقاء متساوي بالكامل من الترانس بنسبة >95٪ و>99٪ تخصيب نظير. تحضير متتبعات نظائر فيتامين أ المستقرة يتضمن إذابة الناقل في زيت نباتي صالح للأكل من خلال الصوتية والحرارة. يجب تجهيز المتتبعات بتركيز يتجاوز الحدود الحجمية لنظام التوصيل. وأخيرا، يتم جمع المتتبع إلى قوارير زجاجية كهرمانية معقمة، ويتم تأكيد تركيزات التتبع طيافيا فوتومترية.

المقدمة

لتمكين المراقبة الفعالة لبرامج التدخل التي تهدف إلى تقليل نقص فيتامين أ، تم تطبيق طريقة تخفيف نظائر الريتينول (RID) بنجاح لتوفير معلومات حول إجمالي مخزون فيتامين أ في الجسم (TBS) في مجموعات سكانية مختلفة 1,2,3,4. بينما تستخدم اختبارات ريتينول5 في المصل، وبروتين ارتباط الريتينول في المصل (RBP)6,7,8، واختبارات استجابة الجرعة النسبيةالمعدلة (MRDR) 9 غالبا لتأكيد نقص فيتامين A، فإن RID هو الطريقة الوحيدة التي تقيس بدقة مخزون فيتامين A الكلي في الجسم عبر الطيف الكامل — من النقص تحت السريري إلى السمية 3,10. من خلال إعطاء جرعة معروفة من فيتامين A الموسوم وقياس تخفيفه في البلازما بعد التوازن، توفر طريقة RID تقديرات دقيقة لاحتياطيات TBS وفيتامين A في الكبد11,12. ومن المهم أن طريقة RID لا تزال موثوقة حتى في الفئات التي تعاني من التهاب، مما يجعلها ضرورية لتقييم فعالية التدخل وتقييم مخاطر السمية في برامج المكملات والتقوية المتداخلة13,14.

لتنفيذ طريقة RID، يجب إعطاء فيتامين A الموسوم نظيريا كجرعة فموية من ريتينيل إيستر، والذي في معظم الحالات هو أسيتات ريتينيل مذاب في زيت نباتي صالح للأكل. معظم المختبرات ستحصل على فيتامين أ الموسوم بالنظائر من الموردين التجاريين 1,3,7,15,16,17,18,19,20,21,22. يتم تصنيف جميع متتبعات نظائر فيتامين أ المتوفرة تجاريا تقريبا باستخدام نظائر مستقرة من الكربون-13 [13C] أو الديوتيريوم [2H] (الجدول 1). يعتمد اختيار جرعة النظير المطبقة على الأداة التحليلية المستخدمة لتحديد تركيز المصل أو البلازما للريتينول الموسوم بالكتلة. بينما يمكن لأجهزة كروماتوغرافيا الغاز-الطيف الكتلي (GC-MS) والكروماتوغرافيا السائلة-مطيافية الكتلة التاثنية (LC-MS/MS) تحليل كل من [13C] و[2H]22,23,24,25,26,27، يمكن لمطياف الكروماتوغرافيا الغازية-الاحتراق-نسبة النظائر (GC-C-IRMS) فقط تحليل متتبعات الريتينول الموسومة [13C] 4,25,28. حدود الكشف عن الأداة التحليلية المختارة، والمجموعة المستهدفة (الأطفال أو البالغين)، ومدة التحقيق ستحدد حجم الجرعة التي يجب تطبيقها 3,25,29. حتى الآن، تراوحت جرعات النظائر المطبقة بين 0.3 - 4.3 ملغ مكافئ ريتينول (RE؛ ما يعادل 1 - 15 ميكرومول RE) لدى الأطفالفي سن 3، 4، 30 وبين 0.6 - 10.0 ملغ ريتينول (ما يعادل 2 - 35 ميكرومول RE) لدى البالغين2، 3، 31، مع دراسة أحدث طبقت جرعات أقل تتراوح بين 0.3 - 0.6 ملغ ريتينول (1 - 3 ميكرومول RE) للأطفال و0.6 - 2.0 ملغ RE (2 - 7 ميكرومول RE) لدى البالغين. على الرغم من المخاوف من أن كتلة عالية من فيتامين أ في الجرعة قد تعكر الحركة الأساسية لفيتامين أ، أكد تحليل حديث باستخدام النمذجة المقسمة أن جرعات النظائر التي تصل إلى 7 ميكرومول من فيتامين أ للأطفال أو 14 ميكرومول للبالغين لا يجب أن تؤثر على دقة توقعات TBS29. هنا، سنوضح كيفية تحضير جهاز تتبع مميز بالنظائر للتطبيق الفموي لطريقة RID، مع مراعاة مخاوف سلامة الغذاء والحصول على تركيزات جرعات دقيقة. تحضير جرعة النظائر ضروري لطريقة RID.

البروتوكول

تمت الموافقة على الدراسة الأولى من قبل خدمة أخلاقيات البحث الوطني، لجنة شمال شرق سندرلاند (REC 09/H0904/20) قبل تسجيلها في شبكة البحوث السريرية البريطانية (UKCRN: 7413). تمت الموافقة على الدراسة الثانية من قبل مجلس أخلاقيات البحث في جامعة الفلبين، مانيلا (معرف IRB: UPMREB 2016-282-01)، ومجلس المراجعة المؤسسية في جامعة كاليفورنيا، ديفيس (رقم IRB: 903681-2)، وتم تسجيلها في ClinicalTrials.gov (المعرف: NCT03030339). كانت الدراسة الثانية جزءا من مشروع GloVitAS الممول من مؤسسة بيل وميليندا غيتس (OPP1115464: تقييم خطر تسمم فيتامين أ الناتج عن تقوية الطعام واسعة النطاق وتدخلات أخرى). كان جورج ليتز الباحث الرئيسي في مشروع GloVitAS وأشرف على تنفيذ الدراسة الميدانية. يتم تقديم نظرة عامة على بروتوكول الدراسة في الشكل 1.

1. معايير الإدراج والاستبعاد

  1. بالنسبة للدراسة الأولى، كانت المعايير المعطاة: معايير الشمول: تشمل متطوعين أصحاء من الذكور والإناث الذين تتراوح أعمارهم بين 18-45 سنة. معايير الاستبعاد: استبعاد المتطوعين الذين يعانون من الحمل، التدخين، ارتفاع ضغط الدم، السكري، مؤشر كتلة الجسم >30، أمراض الكبد/الكلى/الجهاز الهضمي، اضطرابات أيض الدهون، واستهلاك الفيتامينات المتعددة (التي تحتوي على فيتامينات A وC وE) أو مكملات β كاروتين قبل بدء الدراسة بثلاثة أشهر.
  2. بالنسبة للدراسة الثانية، كانت المعايير المعطاة: معايير الإدراج: تشمل الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 12 و18 شهرا والذين بقوا في منطقة الدراسة طوال مدة الدراسة. معايير الاستبعاد: استبعاد الأطفال إذا لم يتلقوا مكملات فيتامين أ بجرعات عالية وكانوا يعيشون في مناطق لم تتعرض للأطعمة المدعمة بفيتامين أ في الأسواق المحلية.

2. تحديد إجمالي كمية متتبع النظائر المستقرة ل RID

  1. تحديد كمية متتبع النظائر المستقرة التي يجب أن يحصل عليها كل شخص مع الأخذ في الاعتبار نقاء الإيزومير. يوصى باستخدام نظائر مستقرة لفيتامين أ بنقاء كامل >95٪ من الترانس، حيث يختلف النشاط البيولوجي ومسارات الأيض بشكل كبير بين النظائر الهندسية. احسب مستوى الجرعة بناء على مكافئات الريتينول (RE). مثال على كيفية حساب هذا مذكور في الجدول 2.
  2. اضرب مستوى الجرعة في إجمالي عدد المشاركين. العدد الكلي الأساسي للأشخاص بناء على حسابات الطاقة لحجم العينة المطلوبة ولكن الزيادة بناء على الانخفاض المتوقع (انظر الجدول 2 على سبيل المثال). زيادة إجمالي كمية التتبع المطلوبة من خلال أخذ خسائر التوصيل في الأنابيب تصل إلى 20٪ في الاعتبار.
    ملاحظة: كقاعدة عامة، يجب أن يتضمن تحضير النظائر فائضا، لأنه لا يمكن استرداد كل المادة من القارورة. ستحدث خسائر إضافية بسبب لزوجة الزيت التي تبقى على الجزء الخارجي من طرف الماصة. للحصول على أحجام دقيقة للجرعة أثناء التوصيل، يجب مسح الزيت الزائد على طرف الماصة الخارجي. يمكن للمشغلين تقليل خسائر التوصيل إذا لم يغمس رأس الماصة عميقا جدا في الزيت.

3. تحديد كمية الزيت النباتي اللازمة لإذابة جهاز تتبع النظير المستقر

  1. قرر أي زيت نباتي ستستخدم وحجم الجرعة لكل شخص (الجدول 2). تحديد كمية الزيت المضاف بواسطة نظام التوصيل المستخدم أثناء جرعة الموضوعات.
    ملاحظة: نستخدم زيت عباد الشمس بسبب محتواه العالي من فيتامين E، مما يساعد على استقرار تحضير فيتامين أ32,33. ومع ذلك، تم استخدام زيوت نباتية أخرى من قبل مجموعات أخرى لتلبية المعايير الغذائية المحلية. نظرا لأن RID تعتمد على توصيل دقيق لأجهزة تتبع ثابتة تحمل علامات النظير، ينصح باستخدام ماصة إزاحة إيجابية لتطبيق الجرعة المحضرة في زيت صالح للأكل. استخدمت معظم الدراسات الحديثة كميات تصل إلى 250 ميكرولتر، خاصة إذا تم إعطاء الجرعة للأطفالفي حجم 1,7,23.
  2. احسب تركيز جرعة متتبع النظير المستقر في [ملغ/مل] زيت نباتي. حدد الحجم الكلي للزيت النباتي المطلوب. احسب وزن الزيت المطلوب بناء على الحجم المحسوب والكثافة النسبية للزيت النباتي (انظر الجدول 2 كمثال).
    ملاحظة: من أجل الدقة، ينصح بوزن الزيت لتحضير متتبع النظائر المستقر. بمجرد حساب الحجم الكلي للزيت المطلوب، يمكن طلب جهاز تتبع النظير المستقر الموسوم بالنظير. من المهم طلب شحن متتبع النظائر في زجاجة ذات حجم كاف يمكن فريق البحث من وزن الزيت النباتي مباشرة إلى الزجاجة التي تحتوي على جهاز تتبع النظير.

4. تحضير جهاز تتبع ثابت مميز بالنظائر في مناطق مخصصة لتحضير الطعام

  1. افتح بعناية غطاء زجاجة العنبر التي تحتوي على الكمية الكلية المحددة مسبقا من متتبع النظير المستقر وضعه على ميزان تحليلي، ثم يتم تثبيته إلى الصفر.
  2. أضف الزيت بشكل قطري حتى يتم الوصول إلى الوزن المطلوب (بدقة ± 0.1 جم) باستخدام حقنة معقمة بسعة 10 مل.
    ملاحظة: نظرا لأن بعض بلورات الريتينيل-أسيتات قد تكون محبوسة داخل غطاء زجاجة العنبر، يجب فتح الزجاجة بحذر شديد. بعد إضافة الزيت النباتي إلى زجاجة الكهرمان، يعاد الغطاء بعناية إلى الزجاجة، ثم يهز بحذر يدويا لإعادة تعليق أي بلورات ريتينيل أسيتات تبقى داخل الغطاء.
  3. ضع الزجاجة في حمام ماء صوتي بقوة فوق صوتية: 14 واط/لتر وتردد التشغيل: 44 كيلوهرتز. املأ بالماء حتى يتجاوز مستوى الزيت في الزجاجة، ولكن تحت مستوى الغطاء، لمنع دخول الماء عن طريق الخطأ إلى التحضير.
  4. قم بعمل الزجاجة بصوت سونيك لمدة 15 دقيقة قبل الخلط يدويا بعناية، ثم السونيكس لمدة 15 دقيقة إضافية. يجب التأكد من ألا تتجاوز درجة حرارة حمام الماء الصوتي 50 درجة مئوية.
    ملاحظة: باستخدام زيت دوار الشمس للتحضير، وجدنا أن التماثل إلى الريتينويدات السائدة لا يحدث عندما تتعرض الجرعة إلى 50 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة (انظر الشكل 2). ومع ذلك، يجب تحليل التحضيرات بواسطة HPLC لتقييم مدى التماثل الحراري.
  5. ضع الزجاجة في حمام ماء ساخن على درجة حرارة 50 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لإذابة البلورات الدقيقة تماما.
  6. خذ عينة زيت بحجم 20 ميكرولتر للتحقق من وجود بلورات دقيقة تحت مجهر ضوئي بتكبير 200 مرة في المختبر. إذا كانت هناك بلورات دقيقة، كرر عملية التسخين الصوتي والتسخين.
  7. بمجرد تحقيق الذوبان الكامل، قم بتقسيم كمية تحضير الزيت إلى قوارير زجاجية معقمة بحجم 2 - 4 مل من الزجاج العنبي. استخدم ماصات ذات إزاحة إيجابية لهذا الإجراء لتجنب التلوث المتبادل.
    ملاحظة: يمكن توجيه حجم متعقب النظائر المستقرة المضاف إلى قوارير الكهرمان الزجاجية بناء على معدل التجنيد اليومي، على سبيل المثال، إذا تم تجنيد 5 أشخاص يوميا وحجم الجرعة 150 ميكرولتر، يجب أن تحتوي القارورة على حجم كاف لتعويض 5 جرعات بالإضافة إلى خسائر في استخدام الماصات: 5 × 150 ميكرولتر × 1.2 = 900 ميكرولتر.
  8. تحديد تركيز النظائر المستقر بثلاث نسخ. احتفظ ب 200 ميكرولتر من الزيت النباتي النقي (المستخدم لتحضير الفراغ الطيفي الضوئي) و200 - 350 ميكرولتر من جرعة النظير المستقر في قوارير كهرمانية منفصلة بحجم 2 مل أثناء تحضير النظير المستقر الموسوم بالمتتبع الموسوم.
    1. إذا كان تركيز الجرعة ≤ 0.5 ملغ من RE، احتفظ ب 350 ميكرولتر من النظير المستقر في قارورة كهرمانية منفصلة بسعة 2 مل. للحصول على تركيزات الجرعة > 0.5 ملغ RE، احتفظ ب 200 ميكرولتر من جرعة النظير المستقرة في قارورة كهرمانية منفصلة بحجم 2 مل.
  9. غطى القوارير بغاز خامل (Ar) لتأخير الأكسدة المحتملة لجهاز تتبع النظير الموسوم بالضبط، وأغلقه بإحكام، واحتفظ به في صندوق تجميد موسوم بتركيز النظير، حجم الجرعة (يحدد لاحقا)، تاريخ التحضير، واسم المشروع. احتفظ بصندوق التبريد في فريزر طعام بدرجة حرارة -20 درجة مئوية حتى الشحن. في هذه الظروف، تكون جرعة التتبع مستقرة لمدة لا تقل عن سنتين.

5. تحديد تركيز متعقب النظائر المستقر في المختبر

  1. قم بتخفيف متتبع النظير المستقر في 3 قوارير حجمية باستخدام n-هكسان. املأ القوارير الحجمية ب n-hexan حتى 1 سم تحت خط المعايرة قبل إضافة جرعة التتبع.
    1. تحديد تخفيف متتبع النظير المستقر بتركيز جرعة المتتبع. إذا كان تركيز جرعة متتبع النظير المستقر ≤ 0.5 ملغ RE، قم بتخفيف 100 ميكرولتر من جرعة النظير المستقر في قارورة حجمية بحجم 50 مل تحتوي على n-hexane. إذا كان تركيز الجرعة بين 0.5 - 2 ملغ RE، فإن 50 ميكرولتر من جرعة النظير المستقر في قارورة حجمية بحجم 50 مل تحتوي على n-هكسان. إذا كان تركيز الجرعة هو >2 ملغ من النظير المستقر، فيتم استخدام 50 ميكرولتر من النظائر المستقرة في قارورة حجمية بحجم 100 مل تحتوي على n-هيكسان.
    2. يتم صب 50 أو 100 ميكرولتر من الزيت مباشرة في الهكسان والقارورة المصنعة إلى حجم 50 أو 100 مل مع إضافة هيكسان باستخدام ماصة باستور زجاجية. اقلب القارورة 10 مرات لخلط الزيت مع الهكسان.
      تحذير: يجب التعامل مع الهيكسان في خزانة أبخرة، وارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة. يتم جمع الهيكسان في حاوية مخصصة للتخلص منها بشكل متخصص من قبل مقاول معتمد.
  2. جهز قارورة الزجاج البيضاء الطيفية عن طريق نقل نفس حجم الزيت النباتي لجهاز تتبع النظير المستقر (50 أو 100 ميكرولتر) وتصريفها في الهكسان. تأكد من أن التخفيف المطبق (50 أو 100 مل) هو نفسه المستخدم في متتبع النظير المستقر. اقلب القارورة 10 مرات لخلط الزيت مع الهكسان.
    ملاحظة: لاستخدام ماصرة متتبعة النظائر المستقرة أو الزيت النقي، تستخدم ماصة إزاحة موجبة بسعة 100 ميكرولتر. لضمان دقة الأحجام في الأنابيب (pipet)، من الضروري مسح الطرف للأسفل باستخدام ورق خال من الوبر لإزالة بقايا التتبع أو الزيت من خارج الرأس. يجب توخي الحذر عند مسح طرف الماصة البديل المباشر حتى لا يلامس الورق فتحة الرأس، حيث سيتم سحب الزيت من داخل الرأس.
  3. قس تركيزات متتبعات النظائر المستقرة في كوفيت كوارتز باستخدام مقياس طيفي مضبوط على طول موجي 325 نانومتر، باستخدام الزيت النباتي في الهكسان كأنبوب مطياف ضوئي (انظر الجدول 3 كمثال).
    1. ابدأ القياسات باستخدام زيت نباتي في الهيكسان كفارغ مطيع فوتومتري منفصل. نظف الكوارتز UV كوفيت بين كل قياس عن طريق شطفه 3 مرات ب n-hexane. بعد قياس جميع العينات، نظف الكوفيت بعناية باستخدام n-hexan النقي.
  4. حدد تركيز متتبع النظير المستقر باستخدام قراءات AU المتوسطة وتطبيق معامل انقراض الضرس الخاص بالنظير باستخدام قانون بير-لامبرت. من خلال ذلك، نحسب حجم متتبع النظائر المستقر المحضر المطلوب لكل جرعة (انظر المثال في النتائج التمثيلية أدناه وفي الجدول 3).

النتائج

حساب حجم جرعة متعقب النظائر الكلي
لدراسة على حجم عينة مكونة من 100 شخص، تم حساب الكمية الإجمالية من أسيتات [13C10] ريتينيل أسيتات لتحديد كمية [13C10] ريتينيل أسيتات التي يجب تصنيعها (الجدول 2). تعتمد الكمية على حسابات القدرة لحجم العينات المطلوبة (n = 100)، والاستنزاف المتوقع (n=15؛ فقدان 15٪)، وخسائر التوصيل (20٪)، وتركيز أسيتات الريتينيل [13مئوية10] لكل جرعة (0.4 ملغ RE؛ بناء على حساسية مطياف الكتلة المطبق، وطول التجربة، والفئة العمرية للمشاركين). يتم بعد ذلك تحويل الكمية الكلية المطلوبة من الريتينيل المقاوم (55.2 ملغ من الريتينيل المقاوم) إلى الوزن المطلوب ل [13مئوية10] أسيتات الريتينيل (63 ملغ).

لحساب حجم زيت دوار الشمس اللازم لإذابة أسيتات الريتينيل [13C10] بالتركيز المطلوب، نضبط أولا حجم توصيل الجرعة إلى 150 ميكرولتر/جرعة (0.15 مل/جرعة). بعد ذلك، يتم حساب تركيز أسيتات [13C10] من الريتينيل في 1 مل من زيت عباد الشمس (الجدول 2). بتقسيم الوزن المطلوب ل [13درجة مئوية10] ريتينيل أسيتات (63 ملغ) على تركيز الجرعة المطلوبة يعطي الحجم الكلي لزيت عباد الشمس المطلوب. وأخيرا، يتم تحديد وزن زيت عباد الشمس باستخدام الكثافة النسبية لزيت عباد الشمس.

تم تأكيد تركيز الجرعة المستهدفة الدقيقة ل [13C10] أسيتات الريتينيل في الزيت بقياس تركيزات متتبع النظائر المستقرة باستخدام مقياس طياف استناد إلى قانون بير-لامبرت (الجدول 3). عند أخذ تخفيف متتبع النظير المستقر أثناء القياس في الاعتبار (عامل التخفيف 500) يعطي تركيزا قدره 2.58 ميكرومول/ميكرولتر [13مئوية10] من أسيتات الريتينيل في الزيت. لذلك تم تحديد الحجم النهائي لجهاز تتبع النظائر المستقر الجاهز المطلوب لجرعة 0.4 ملغ من النظير المقاوم للريبيوت على أنه 155 ميكرولتر (الجدول 3).

فحص إمكانية الإيزوميريا لجرعة التتبع
تم تحديد نقاء الجرعة المتتبعة المتساوية من خلال فحص التماثل المتماثل باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC؛ الشكل 2). لتنفيذ ذلك، تم تجفيف عينة من محلول التتبع المخفف من الخطوة 5.1.2 تحت غاز النيتروجين وأعيد إذابة البقايا إلى إيثانول 100٪ للحقن. تم إجراء تحليل HPLC لثلاث عينات متكررة باستخدام طريقة ليو وآخرون للتحقق من وجود أي تماثل متماثل (انظر الشكل 2). يجب مراقبة نقاء جرعة التتبع طوال الدراسة للتأكد من أن الجرعة لا تسيء.

تأثير تركيزات جرعات التتبع على نسبة الجرعة مع مرور الوقت
تطبيق مستويات جرعات مختلفة سيؤدي إلى تفاوت نسبة الجرعة المبتلعة مع مرور الوقت، مما قد يؤثر على قدرة منصة التحليل على اكتشاف [13C10] ريتينول في جميع المشاركين في النقاط الزمنية المطلوبة. تطبيق جرعة إما 1 ملغ أو 0.4 ملغ من [13C10] أسيتات الريتينيل في الزيت لدى البالغين (الشكل 3A) أو الأطفال (الشكل 3B) أشار إلى نسبة أعلى من الجرعة بعد إعطاء 1 ملغ مقارنة ب 0.4 ملغ من [13C10] ريتينيل أسيتات وأكد قدرة LC-MS/MS المطبق على اكتشاف [13C10]الريتينول في الأشخاص حتى 28 يوما بعد الجرعة. وهذا يؤكد أن المعلومات المتعلقة بنسبة الجرعة عند نقاط زمنية متغيرة ضرورية لتحديد ما إذا كان مستوى الجرعة المطبقة مرتفعا بما يكفي للحصول على إشارة أعلى من مستوى الكشف للمنصة التحليلية المطبقة، وأنه من المثالي الحصول على هذه المعلومات خلال دراسة تجريبية مع عينات ممثلة.

figure-results-1
الشكل 1: مخطط تدفق لتحضير جرعات تتبع فيتامين أ. تشمل الخطوات الرئيسية لإعداد جرعة النظائر المستقرة تحديد الكميات المطلوبة، وتركيز جرعة التتبع المكتسبة، وتأكيد نقاء الجرعة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-2
الشكل 2: كروماتوجرام HPLC لجرعة التتبع لدراسة إيزوميرية أسيتات الريتينيل. تم تقييم التزوير المحتمل ل [13درجةمئوية 10] أسيتات الريتينيل بعد (أ) السونيكيشن و(ب) التسخين إلى 50 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لكل منهما باستخدام تحليل HPLC لجرعة النظير بعد كل خطوة. تم إجراء التحليل على جهاز HPLC مع اكتشاف مصفوفة الصمام الثنائية باستخدام طريقة ليو وآخرين. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-3
الشكل 3: المتوسطات المرصودة لنسبة الريتينول في البلازما مع مرور الوقت بعد تناول أسيتات [13C10]. جزء من الجرعة من (أ) 45 بالغا في المملكة المتحدة16 و(ب) 112 طفلا فلبينياتم إعطاؤهم جرعة إما 1 ملغ أو 0.4 ملغ [13C10] من أسيتات الريتينيل على التوالي. نسبة الجرعة = {تركيز الريتينول في البلازما [13مئوية]، (ميكرومول/لتر) X حجم البلازما المقدر (L) / [13C]، جرعة (μmol). تعرض البيانات كمتوسط هندسي ± SEM. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

نظير مستقرالمورد/المصنع
[D4]-ريتينيل أسيتاتشركة بوكيم بي في/ريسياكيم GmbH/ مختبر كامبريدج للنظائر
[D6]-ريتينيل أسيتاتشركة بوكيم بي في/ريسياكيم GmbH/ مختبر كامبريدج للنظائر
[D8]-أسيتات الريتينيلشركة بوكيم بي في/ريسياكيم GmbH/ مختبر كامبريدج للنظائر
[13C3]-ريتينيل أسيتاتبوكيم بي في/ريسياكيم GmbH
[13C4]-ريتينيل أسيتاتشركة بوكيم بي في/ريسياكيم GmbH/ مختبر كامبريدج للنظائر
[13C8]-أسيتات الريتينيلشركة بوكيم بي في/ريسياكيم GmbH/ مختبر كامبريدج للنظائر
[13C10]-أسيتات الريتينيلشركة بوكيم بي في/ريسياكيم GmbH/ مختبر كامبريدج للنظائر

الجدول 1: متتبعات نظائر فيتامين أ المستقرة المتوفرة تجاريا. قائمة بأجهزة تتبع أسيتات الريتينيل الموسومة ب 13C و2Hمن موردين مختلفين.

المعايير
حجم العينة [n]:100
الاستنزاف [n] (٪):15 (15%)
خسائر التوصيل بالقناة:20%
ميغاوات [13درجة مئوية10]أسيتات الريتينيل:338.5 ميكروغرام/ميكرومول
ميغاواط [13درجة مئوية10] ريتينول:296.46 ميكروغرام/ميكرومول
حجم الجرعة:0.4 ملغ RE من [13C10] ريتينيل أسيتات لكل متطوع
الحساب
إجمالي كمية المقاومة الاحتياطية المطلوبة:= حجم الجرعة بالملغ الريمينيولين × حجم العينة × فقدان القناة × فقدان القناة
= 0.4 ملغ RE × 100 × 1.15 × 1.2
= 55.2 ملغ من RE
الكمية الإجمالية من [13C10] من أسيتات الريتينيل المطلوبة:= ملغ RE × ميغاوات [13C10] ريتينيل أسيتات / ميغاواط [13C10] ريتينول
= 55.2 ملغ RE × 338.5 ميكروغرام/ميكرومول / 296.46 ميكروغرام/ميكرومول
= 63.0 ملغ [13درجة مئوية10] ريتينيل أسيتات
تركيز جرعة [13درجة مئوية10] أسيتات الريتينيل في الزيت:[13C10] أسيتات الريتينيل [mg/ml] =
(ملغ ريتينيل ريتينيل × ميغاوات [13مئوية10] ريتينيل أسيتات / ميغاواط [13مئوية10] ريتينول) / 0.15 مل
= (0.4 ملغ RE × 338.5 ميكروغرام/ميكرومول / 296.46 ميكروغرام/ميكرومول) / 0.15 مل
= 3.04 ملغ/مل
إجمالي حجم زيت عباد الشمس المطلوب:= إجمالي وزن / تركيز أسيتات الريتينيل [13C10] في الزيت
= 63.0 ملغ / 3.04 ملغ/مل
= 20.7 مل زيت
وزن زيت دوار الشمس المطلوب:= الحجم الكلي لزيت دوار الشمس × الكثافة النسبية زيت دوار الشمس
= 20.7 مل × 0.92 جم/مل
= زيت دوار الشمس 19.0 جرام

الجدول 2: مثال على حسابات حجم جرعة متعقب النظائر المستقرة. تحديد المعايير والحسابات لتحديد جرعة التتبع وكميات الزيوت النباتية.

المعايير
معامل انقراض الضرس (E1٪1 سم) ل [13C10] أسيتات ريتينيل في الهكسان:52718 لتر مول-1 سم-1 × 1 سم
عامل التخفيف:500 (100 ميكرولتر من تحضير الزيت في 50 مل من الهكسان)
متوسط الامتصاص المقاس:0.917
ميغاواط [13درجة مئوية10] ريتينول:296.46 ميكروغرام/ميكرومول
الحساب
تركيز (mol/L) ل [13C10] أسيتات الريتينيل في السكسان:التركيز (مول/لتر) = الامتصاص / E1٪1 سم × طول الكوفيت (1 سم)
= 0.917 / 52718 لتر مول-1 سم-1 × 1 سم = 1.739 × 10-5 مول/لتر
تحويل التركيز إلى ميكرومول/ميكرولتر:التركيز (mol/L) = التركيز (μmol/μL)
1.739 × 10-5 مول/لتر تعادل 1.739 × 10-5 ميكرومول/ميكرولتر
تصحيح التخفيف:1.739 × 10-5 ميكرومول/ميكرولتر × 500 = 8.697 × 10-3 ميكرومول/ميكرولتر في الزيت
الوزن لكل ميكرولتر (ميكروغرام/ميكرولتر):= [13C10] أسيتات ريتينيل ميكرومول/ميكرولتر في الزيت × ميغاواط [13مئوية10] ريتينول
= 8.697 × 10-3 ميكرومول/ميكرولتر × 296.45 ميكروغرام/ميكرومول = 2.58 ميكروغرام/ميكرولتر
حجم الجرعة:= الحجم (ميكرولتر / جرعة 400 ميكروغرام) = 400 ميكروغرام / 2.58 ميكروغرام/ميكرولتر = 155 ميكرولتر

الجدول 3: تحديد تركيز جرعة متعقب النظائر المستقر. المعايير والحسابات المطلوبة لتحديد تركيزات جرعات التتبع والأحجام المطلوبة للجرعات الفموية.

المناقشة

تعتبر متتبعات النظائر المستقرة المستخدمة في الدراسات البشرية آمنة عموما، دون أي آثار بيولوجية أو فسيولوجية سلبية عند التركيزات المطبقة25,35. ومع ذلك، نظرا لأن جهاز تتبع النظير المستقر يحتاج إلى إعطاء عن طريق الفم، فمن الضروري أن تتوافق جرعة المعالج مع معايير سلامة الغذاء. يمكن تحقيق ذلك من خلال مطالبة موردي ومصنعي فيتامين أ المستقر الموسوم بالنظائر لإجراء اختبارات سلامة الغذاء على النظائر 7,20,24 المرفقة. وبالمثل، من الضروري أن يتم تحضير وتخزين النظائر فقط في أماكن مخصصة لتحضير الطعام. علاوة على ذلك، يجب تخصيص جميع المعدات المستخدمة لتحضير النظائر المستقرة فقط لتحضير النظائر والاحتفاظ بها في مناطق تحضير الطعام.

تم إذابة نظائر موسومة بأسيتات ريتينيل سابقا باستخدام الإيثانول، ثم تجفيفها تحت غاز النيتروجين قبل إذابتها في زيت نباتي36. هنا، نقدم طريقة تسمح بإذابة المتتبع الموسوم بالنظير إلى زيت نباتي باستخدام مزيج من الصوتية والحرارة. على الرغم من أن هذه الطريقة أسهل في التحضير الغذائي، يجب توخي الحذر عند تطبيق الحرارة لإذابة التتبع في الزيت النباتي. يتم إيزوميرات الريتينول بالكامل إلى 13-سيس-ريتينول أثناء المعالجة الحرارية، والذي يتسارع مع درجات حرارة أعلى37. تزداد إيزوميرية الريتينول أكثر من خلال التعرض للضوء32. علاوة على ذلك، يتأثر استقرار الريتينول بخاصية أكسدة الدهون في زيت النبات32,38. نظرا لأن محتوى α توكوفيرول في زيت النبات له تأثير إيجابي على احتفاظ فيتامين A32، وزيت دوار الشمس يحتوي على أحد أعلى محتوى α-توكوفيرول33، اخترنا استخدام زيت دوار الشمس في تحضير جرعات التتبع. كان قرار تطبيق حرارة تصل إلى 50°C لإذابة التتبع بناء على تطبيق الحرارة لإذابة بلورات الريتينول في المنتجات التجميلية دون فقدان كبير39. على الرغم من أننا لم نشهد تحولا كبيرا في أسيتات الريتينيل بموجب البروتوكول المذكور، إلا أنه من الضروري التحقق من وجود تشابك الجرعة المتتبعة مباشرة بعد المعالجة الحرارية (الشكل 2). نوصي أيضا بمراقبة استقرار جرعة التتبع طوال الدراسة لتأكيد تركيز جرعة التتبع المطبقة.

يجب تحضير جهاز التتبع بتركيز ضمن حدود حجم نظام التوصيل المستخدم لإعطاء الجرعة المطلوبة. نظرا لأن RID تعتمد على توصيل دقيق لأجهزة تتبع مستقرة تحمل علامات النظير، ينصح باستخدام ماصة إزاحة إيجابية لتطبيق الجرعة. على الرغم من أن أحجام جرعات تصل إلى 1 مل قد تم تطبيقها سابقا على البالغين 16,20,40، إلا أنه من الأسهل تطبيق أحجام بين 100 - 250 ميكرولتر، حيث ثبت أن هذه الأحجام تتحمل جيدا من قبل الرضع والأطفال 1. بدلا من ذلك، يمكن إعطاء الجرعات أيضا في شكل كبسولات17، لكن من الضروري اختيار كبسولات مصممة خصيصا لمنع تسرب الزيت وضمان قبولها داخل مجموعة الدراسة. أخيرا، تعتمد مستويات الجرعات المطبقة على الفئة العمرية للفئة المستهدفة29، وقدرة المنصة التحليلية التطبيقية على اكتشاف المستويات المنخفضة3، ومخزون الجسم الكلي للفئة المستهدفة، مع نسبة بلازما أقل من الجرعة عند مخازن الجسم الكلي الأعلى1.

كما هو موضح في المثال أعلاه، فإن أسيتات ريتينيل [13C10] بتركيز 2.58 ميكروغرام/ميكرولتر في زيت عباد الشمس سيوفر جرعة 0.4 ملغ من متتبع RE في 155 ميكرولتر من زيت عباد الشمس، ويمكن توصيله بدقة باستخدام ماصة إزاحة إيجابية بسعة 250 ميكرولتر. للحصول على تركيزات ضمن حدود نظام التوصيل الحجمية، من الضروري وزن الزيت النباتي المختار لإذابة المتتبع بدقة باستخدام ميزان تحليلي (دقيق إلى 0.1 جم) داخل الزجاجة التي تحتوي على متتبع النظير المستقر. على سبيل المثال، إذا كان من المقرر تحضير 63 ملغ [13ملغ/10] ريتينيل أسيتات بتركيز 3.04 ملغ/مل في زيت عباد الشمس، وكانت الكثافة النوعية لزيت عباد الشمس 0.92 جم/مل عند 25 ◦ مئوية، فيجب وزن 19.0 جرام (20.7 مل × 0.92 جرام/مل) من الزيت في الزجاجة التي تحتوي على المتتبع. على الرغم من أن التركيز النهائي لمتتبع النظير المستقر سيتم تأكيده باستخدام قراءة مقياس الطيف الضوئي، فإن الوزن الدقيق لمتتبع النظير والزيت المطبق يضمن أن التركيزات الناتجة قريبة من حجم التوصيل المختار لكل جرعة.

ينصح بتقسيم مستحضرات الزيت بناء على المتطلبات اليومية المتوقعة لضمان استخدام جميع الجرعات في القارورة خلال أسبوعين من فتح القارورة. من الأفضل الاحتفاظ بمستحضرات الزيت على أكياس الثلج في الحقل أثناء الاستخدام وإعادة تجميدها في أقرب وقت ممكن بعد الانتهاء من الجرعة. على الرغم من أن تحضيرات الزيت لا تتأثر بدورات التجمد والذوبان المتكررة، إلا أنه يجب دائما حمايتها من الضوء وتجميدها عند عدم الاستخدام.

باختصار، يوضح هذا البروتوكول التحضير الدقيق ومراقبة الجودة لجرعات التتبع لطريقة RID، مما يضمن الجرعات الدقيقة، والاستقرار، والسلامة. تحسب الطريقة متطلبات المتتبعات، وتحسن الذوبان في الزيت النباتي، وتتحقق من النقاء والتركيز باستخدام القياس الطيفي وHPLC. تضمن إرشادات التعامل والتخزين الصارمة سلامة التتبع الموثوقة لتقييمات دقيقة قائمة على النظائر.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يعلنون عنه.

شكر وتقدير

وقد قدمت مؤسسة بيل & ميليندا غيتس (رقم المشروع: OPP1115464) والوكالة الدولية للطاقة الذرية (IAEA) في فيينا (رقم المشروع E4.30.30) دعم هذا العمل.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
قوارير زجاجية كهرمانية بحجم 2 مل لتحديد الجرعاتفيشر11573690اعتمادا على حجم عينة الدراسة وعدد المتطوعين الذين يتم إعطاؤهم جرعات يوميا، قد يكون من الأكثر كفاءة استخدام قوارير أكبر، مثل 4 مل، من العنكبوت الكهرمانية
قوارير حجمية بحجم 100 ملفيشر11323644زجاج بيركس بوروسيليكات من الفئة A المعتمد
قوارير حجمية بحجم 50 ملفيشر11313644زجاج بيركس بوروسيليكات من الفئة A المعتمد
ميزان الوزن التحليلي فيشر13592970
المكابس الشعرية (رؤوس الماصة) CP100 10x96 TIPACKجيلسونFD148314
المكابس الشعرية CP1000ST 2x91جيلسونF148180
المكابس الشعرية CP250ST 6x96جيلسونF148714
صندوق التجميد الكرتونيستارلابA9623-8181
كوارتز الأشعة فوق البنفسجية من هيلما كوفيتSLSCEL1600
هيكسان 95٪ n-Hexane ل HPLC معتمدفيشرH/0406/17
أغطية لقوارير زجاجية كهرمانية بحجم 2 ملفيشر11573542
مائية Microman E M1000E (إزاحة إيجابية)جيلسونFD10006
مائي Microman E M100E (إزاحة إيجابية)جيلسونFD10004
مائية Microman E M250E (إزاحة إيجابية)جيلسونFD10005
المجهرنيكونإكليبس E400
شرائح زجاجية المجهر  سيغما41122601
حمام مائي للصوتVWRUSC100T
مقياس الطيف الفوتونيثيرمو فيشر العلميA51119600C
نظير مستقر يحمل علامة متتبعة أسيتات الريتينيلبوكيم بي فيلا يوجديمكن استخدام مجموعة من النظائر المستقرة لطريقة RID. قائمة بالنظائر التجارية المختلفة المتاحة في الجدول 1. 
حمام ماء غير محركSLSSLS1176
زيت نباتيأي متجر بقالةلا يوجدمن المهم استخدام زيت نباتي طازج ذو عمر تخزين كاف لتحضير جرعات النظير.
ماصرة زجاجية مفكوكة فولاك مقطوعة 150 ممSLSPIP4150

المراجع

  1. Ford, J. L., et al. Use of Model-Based Compartmental Analysis and a Super-Child Design to Study Whole-Body Retinol Kinetics and Vitamin A Total Body Stores in Children from 3 Lower-Income Countries. J Nutr. 150 (2), 411-418 (2020).
  2. Haskell, M. J., Jamil, K. M., Peerson, J. M., Wahed, M. A., Brown, K. H. The paired deuterated retinol dilution technique can be used to estimate the daily vitamin A intake required to maintain a targeted whole body vitamin A pool size in men. J Nutr. 141 (3), 428-432 (2011).
  3. Lietz, G., et al. Current Capabilities and Limitations of Stable Isotope Techniques and Applied Mathematical Equations in Determining Whole-Body Vitamin A Status. Food Nutr Bull. 37, S87-S103 (2016).
  4. Pinkaew, S., et al. Triple-Fortified Rice Containing Vitamin A Reduced Marginal Vitamin A Deficiency and Increased Vitamin A Liver Stores in School-Aged Thai Children. J Nutr. 144 (4), 519-524 (2014).
  5. VMNIS: Serum retinol concentrations for determining the prevalence of vitamin A deficiency in populations. , World Health Organisation. https://www.who.int/publications/i/item/WHO-NMH-NHD-MNM-11.3 (2011).
  6. Engle-Stone, R., et al. Plasma retinol-binding protein predicts plasma retinol concentration in both infected and uninfected Cameroonian women and children. J Nutr. 141 (12), 2233-2241 (2011).
  7. Engle-Stone, R., et al. Filipino Children with High Usual Vitamin A Intakes and Exposure to Multiple Sources of Vitamin A Have Elevated Total Body Stores of Vitamin A But Do Not Show Clear Evidence of Vitamin A Toxicity. Curr Dev Nutr. 6 (8), nzac115(2022).
  8. Larson, L. M., et al. Approaches to Assess Vitamin A Status in Settings of Inflammation: Biomarkers Reflecting Inflammation and Nutritional Determinants of Anemia (BRINDA) Project. Nutrients. 10 (8), (2018).
  9. Sheftel, J., Tanumihardjo, S. A. Systematic Review and Meta-Analysis of the Relative Dose-Response Tests to Assess Vitamin A Status. Adv Nutr. 12 (3), 904-941 (2021).
  10. Tanumihardjo, S. A., et al. Biomarkers of Nutrition for Development (BOND)-Vitamin A Review. J Nutr. 146 (9), 1816-1848 (2016).
  11. Furr, H. C., et al. Vitamin A concentrations in liver determined by isotope dilution assay with tetradeuterated vitamin A and by biopsy in generally healthy adult humans. Am J Clin Nutr. 49 (4), 713-716 (1989).
  12. Haskell, M. J., et al. Assessment of vitamin A status by the deuterated-retinol-dilution technique and comparison with hepatic vitamin A concentration in Bangladeshi surgical patients. Am J Clin Nutr. 66 (1), 67-74 (1997).
  13. Green, M. H., Ford, J. L., Green, J. B. Development of a Compartmental Model to Investigate the Influence of Inflammation on Predictions of Vitamin A Total Body Stores by Retinol Isotope Dilution in Theoretical Humans. J Nutr. 151 (3), 731-741 (2021).
  14. Suri, D. J., et al. Association between Biomarkers of Inflammation and Total Liver Vitamin A Reserves Estimated by (13)C-Retinol Isotope Dilution among Preschool Children in 5 African Countries. J Nutr. 153 (13), 622-635 (2023).
  15. Furr, H. C., et al. Stable isotope dilution techniques for assessing vitamin A status and bioefficacy of provitamin A carotenoids in humans. Public Health Nutr. 8 (6), 596-607 (2005).
  16. Green, M. H., et al. A Retinol Isotope Dilution Equation Predicts Both Group and Individual Total Body Vitamin A Stores in Adults Based on Data from an Early Postdosing Blood Sample. J Nutr. 146 (10), 2137-2142 (2016).
  17. Green, M. H., et al. Use of Population-Based Compartmental Modeling and Retinol Isotope Dilution to Study Vitamin A Kinetics and Total Body Stores among Ghanaian Women of Reproductive Age. Curr Dev Nutr. 8 (11), 104484(2024).
  18. Haskell, M. J., et al. Population-based plasma kinetics of an oral dose of [2H4]retinyl acetate among preschool-aged, Peruvian children. Am J Clin Nutr. 77 (3), 681-686 (2003).
  19. Lopez-Teros, V., et al. Use of a "Super-child'' Approach to Assess the Vitamin A Equivalence of Moringa oleifera Leaves, Develop a Compartmental Model for Vitamin A Kinetics, and Estimate Vitamin A Total Body Stores in Young Mexican Children. J Nutr. 147 (12), 2356-2363 (2017).
  20. Oxley, A., et al. An LC/MS/MS method for stable isotope dilution studies of beta-carotene bioavailability, bioconversion, and vitamin A status in humans. J Lipid Res. 55 (2), 319-328 (2014).
  21. Ribaya-Mercado, J. D., et al. Quantitative assessment of total body stores of vitamin A in adults with the use of a 3-d deuterated-retinol-dilution procedure. Am J Clin Nutr. 77 (3), 694-699 (2003).
  22. Tang, G. W., Qin, J., Hao, L. Y., Yin, S. A., Russell, R. M. Use of a short-term isotope-dilution method for determining the vitamin A status of children. Am J Clin Nutr. 76 (2), 413-418 (2002).
  23. Oxley, A., et al. Determination of Vitamin A Total Body Stores in Children from Dried Serum Spots: Application in a Low- and Middle-Income Country Community Setting. J Nutr. 151 (5), 1341-1346 (2021).
  24. Oxley, A., Lietz, G. Use of stable isotopes to study bioconversion and bioefficacy of provitamin A carotenoids. Methods Enzymol. 670, 399-422 (2022).
  25. Preston, T. Existing and emerging technologies for measuring stable isotope labelled retinol in biological samples: isotope dilution analysis of body retinol stores. Int J Vitam Nutr Res. 84 (Suppl 1), 30-39 (2014).
  26. Tang, G. W., Qin, J., Dolnikowski, G. Deuterium enrichment of retinol in humans determined by gas chromatography electron capture negative chemical ionization mass spectrometry. J Nutr Biochem. 9 (7), 408-414 (1998).
  27. Wang, J., et al. Vitamin A equivalence of spirulina beta-carotene in Chinese adults as assessed by using a stable-isotope reference method. Am J Clin Nutr. 87 (6), 1730-1737 (2008).
  28. Gannon, B., et al. Biofortified orange maize is as efficacious as a vitamin A supplement in Zambian children even in the presence of high liver reserves of vitamin A: a community-based, randomized placebo-controlled trial. Am J Clin Nutr. 100 (6), 1541-1550 (2014).
  29. Green, M. H., Lopez-Teros, V., Green, J. B. Does the Amount of Stable Isotope Dose Influence Retinol Kinetic Responses and Predictions of Vitamin A Total Body Stores by the Retinol Isotope Dilution Method in Theoretical Children and Adults. J Nutr. 152 (1), 86-93 (2022).
  30. Ribaya-Mercado, J. D., et al. Bioconversion of plant carotenoids to vitamin A in Filipino school-age children varies inversely with vitamin A status. Faseb J. 14 (4), A486-A486 (2000).
  31. Valentine, A. R., Davis, C. R., Tanumihardjo, S. A. Vitamin A isotope dilution predicts liver stores in line with long-term vitamin A intake above the current Recommended Dietary Allowance for young adult women. Am J Clin Nutr. 98 (5), 1192-1199 (2013).
  32. Hemery, Y. M., et al. Influence of light exposure and oxidative status on the stability of vitamins A and D3 during the storage of fortified soybean oil. Food Chem. 184, 90-98 (2015).
  33. Shahidi, F., de Camargo, A. C. Tocopherols and Tocotrienols in Common and Emerging Dietary Sources: Occurrence, Applications, and Health Benefits. Int J Mol Sci. 17 (10), (2016).
  34. Liu, Z., Lee, H. J., Garofalo, F., Jenkins, D. J. A., El-Sohemy, A. Simultaneous Measurement of Three Tocopherols, All-trans-retinol, and Eight Carotenoids in Human Plasma by Isocratic Liquid Chromatography. J Chromatograph Sci. 49 (3), 221-227 (2011).
  35. Davies, P. S. W. Stable isotopes: their use and safety in human nutrition studies. Eur J Clin Nutr. 74 (3), 362-365 (2020).
  36. Haskell, M. J., Ribaya-Mercado, J. D. Handbook on Vitamin A Tracer Dilution Methods to Assess Status and Evaluate Intervention Programs. , Harvest Plus Technical Monographs. (2005).
  37. Han, S. H., et al. Quantitative characterization of degradation behaviors of antioxidants stabilized in lipid particles. Talanta. 71 (5), 2129-2133 (2007).
  38. Park, H., Mun, S., Kim, Y. R. UV and storage stability of retinol contained in oil-in-water nanoemulsions. Food Chem. 272, 404-410 (2019).
  39. Retinol 50C, 15D and 10S. , BASF. https://www.skinident.world/fileadmin/img/spanish-pictures/pdf/BASF_Vitamin_A.pdf (2005).
  40. Green, M. H., et al. Plasma Retinol Kinetics and beta-Carotene Bioefficacy Are Quantified by Model-Based Compartmental Analysis in Healthy Young Adults with Low Vitamin A Stores. J Nutr. 146 (10), 2129-2136 (2016).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

13
صياغة جرعات تتبع فيتامين أ للإعطاء للبشر باستخدام تقنية تخفيف نظائر الريتينول
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.