يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تطوير وتوحيد طريقة ميكرو خارج الجسم الحي لقياس كمية الفينكريستين داخل الخلايا في الخلايا الأولية ALL بواسطة LC-MS/MS

463 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69535

⸱

يناير 23, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Leukemia Biology Laboratory, Boldrini Children's Center, 2Mass Spectrometry Laboratory, Boldrini Children's Center, 3Boldrini Children's Center

في هذه المقالة

ملخص

هدف هذا البروتوكول إلى إنشاء وتحسين طريقة LC-MS/MS لقياس تراكم الفينكريستين النسبي في الخلايا الأولية لجميع الخلايا لدى الأطفال.

الملخص

يعد قياس الفينكريستين داخل الخلية (VCR) في خلايا سرطان الدم اللمفاوية الحادة الأولية للأطفال (ALL) ضروريا لفهم الفروق الخاصة بالعينة في امتصاص الأدوية ولدعم الدراسات التجريبية باستخدام مواد نادرة للمرضى. هنا، نقدم طريقة مصغرة مبسطة من نوع LC-MS/MS محسنة خصيصا لجميع الخلايا الأولية التي تم الحصول عليها من خلال الصناعات الغريبة المشتقة من المريض (PDX)، ومعالجة التحديات الرئيسية مثل محدودية توفر الخلايا، وصغر حجم الخلية، والحاجة إلى استعادة قابلة للتكرار بعد عدة خطوات غسيل. أظهرت اختبارات المسار الزمني التي تتراوح بين 1 إلى 5 ساعات أن فترة حضانة 3 ساعات تعطي أعلى وأكثر مستويات جهاز الفيديو داخل الخلية اتساقا، مع تباين أقل بين النسخ المكررة. كما أثبت تحسين الطريقة أن استخدام 2.5 × 106 خلايا لكل حالة يحسن من المتانة التحليلية مقارنة ب 1 × 106 خلايا، والتي أظهرت تشتت أكبر في التجارب المتكررة. شملت التحسينات الحاسمة استخدام الميثانول البارد لتعزيز كفاءة ترسيب البروتين ودمج معيار داخلي لمراقبة وتقليل التغيرات الإجرائية. تمكن الطريقة من قياس دقيق وحساس لجهاز الفيديو داخل الخلايا عبر نطاقات التركيز ذات الصلة، رغم أن أدنى جرعة مختبرة (0.01 ميكرومولار) لم تكن قابلة للقياس بعد الحضانة التي استمرت 3 ساعات. بشكل عام، توفر هذه الطريقة الدقيقة نهجا عمليا، قابلا للتكرار، وقابلا للتوسع لقياس جهاز الفيديو داخل الخلايا في العينات الأولية ALL. يدعم تصميمه التحليلات المقارنة، والتحقق من صحة نماذج الخارج الحي ، والتطبيقات المنهجية المستقبلية التي تهدف إلى دمج قياس الأدوية داخل الخلايا في التقييمات الدوائية الأوسع.

المقدمة

يمثل سرطان الدم اللمفاوي الحاد (ALL) حوالي 25٪ من جميع سرطانات الأطفال ويظل أكثر أنواع سرطان الأطفال شيوعا 1,2. على الرغم من أن التقدم في العلاج قد حسن معدلات البقاء بشكل ملحوظ، والتي تجاوزت الآن 90٪، إلا أن التعقيد البيولوجي ل ALL لا يزال يدفع الجهود لتطوير أدوات تصف المرض بشكل أفضل على المستوىالخلوي 3.

قلويدات فينكا، وخاصة أجهزة الفيديو، هي مكونات رئيسية في جميع بروتوكولات العلاج4. نظرا لأن جهاز الفيديو يمارس تأثيراته السامة داخل الخلية، فإن فهم امتصاصه وتجمعه في خلايا اللوكيميا أمر أساسي للدراسات التي تتعلق باستجابة الدواء، والديناميكا الدوائية، والسلوك الخلوي في أنظمة خارج الجسم الحي. ومع ذلك، تعتمد معظم الطرق المتاحة لتقييم مستويات الأدوية داخل الخلية على القياسات غير المباشرة أو الطرق شبه الكمية، مما يحد من قابلية التكرار والحساسية 5,6,7.

بالتوازي، لا تزال العديد من الدراسات تعتمد بشكل كبير على خطوط خلايا اللوكيميا، التي تفتقر إلى التغاير البيولوجي والأهمية السريرية للخلايا الأولية المشتقة من المرضى. غالبا ما تواجه العينات الأولية تحديات مثل محدودية أعداد الخلايا، وتغير جودة العينة، والحاجة إلى تقنيات تحليلية شديدة الحساسية قادرة على اكتشاف المركبات داخل الخلايا منخفضةالوفرة 8.

يوفر تحليل الكروماتوغرافيا السائلة - مطيافية الكتلة المزدوجة (LC-MS/MS) الخصوصية والحساسية المطلوبة لقياس العوامل الكيميائية بدقة، ومع ذلك لا تزال البروتوكولات الموحدة لقياس VCR داخل الخلايا مباشرة في خلايا اللوكيميا الأولية نادرة. قد يسهل تأسيس طرق دقيقة قوية متوافقة مع مواد محدودة للمرضى مجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك التحليل الدوائي، وتقييم التفاعلات بين الدواء والخلايا، والدراسات المقارنة عبر الأنواع الفرعية من الأمراض أو الحالات العلاجية.

هنا في هذا البروتوكول، نصف تطوير وتحسين طريقة دقيقة لقياس جهاز الفيديو داخل الخلايا خارج الجسم الخلوي في خلايا سرطان الدم الأولية باستخدام LC-MS/MS. للحصول على مواد كافية لتطوير الطريقة، تم زرع عينات المرضى في فئران NSG تعاني من نقص المناعة لتوليد نماذج PDX9. بعد التوسع الحي ، تم عزل خلايا اللوكيميا البشرية وحفظها بالتجميد10. بعد ذلك، تم إذابته، وحضنها بجهاز الفيديو، وغسلها، وتحليلها بواسطة LC-MS/MS لتحديد مستويات الأدوية داخل الخلية.

تقدم هذه الطريقة عدة مزايا: فهي تتطلب عددا قليلا من الخلايا (2.5 مليون)، وهي حساسة وسريعة، ومتوافقة مع العينات الأولية ذات الصلة سريريا. ونظرا لأنها تقيس محتوى الأدوية داخل الخلايا بشكل مباشر، فهي توفر أداة كمية موثوقة للباحثين الذين يحققون في امتصاص الدواء، أو الاستجابات الخلوية للعلاجات الكيميائية، أو الأسئلة الدوائية الأخرى في الأورام الخبيثة الدموية.

بشكل عام، يوسع هذا البروتوكول مجموعة الأدوات التحليلية المتاحة لدراسة ALL لدى الأطفال ويمكن تكييفه بسهولة لأدوية أو عينات أخرى، مما يدعم التحقيقات المستقبلية في بيولوجيا اللوكيميا، وسلوك الأدوية، وعلم الأدوية الدقيق.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم الحصول على عينات اللوكيميا المستخدمة في هذه الدراسة من قوارير بيولوجية محفوظة للمرضى الذين عولجوا في مركز إنفانتيل بولدريني، الذين سمحوا باستخدام خلاياهم من خلال نموذج موافقة مستنيرة. تمت الموافقة على المشروع من قبل لجنة الأخلاقيات المؤسسية (CAAE 34601120.7.0000.5376). تم تنفيذ بروتوكولات توليد PDX في وفقا للوائح والإرشادات الأخلاقية للجنة أخلاقيات (Comissão de Ética no Uso de Animais) التابعة لمركز الأطفال بولدريني (CEUA/Boldrini 0011-2020).

1. تحضير العينات وحضانة الأدوية (اليوم الأول)

  1. تحضير المخزون والحلول العاملة
    1. يزن 2.5 ملغ من كبريتات فينكريستين (الوزن الجزيئي: 923 جرام/مول) ويذيبه في 2.0 مل من كبريتات ثنائي ميثيل (DMSO) في أنبوب دقيق بحجم 2.0 مل لتحضير محلول مخزون بحجم 1.354 ملم. دوامة حتى تذوب تماما.
      تحذير: DMSO هو مصدر إزعاج؛ ارتد قفازات وتعامل معه بغطاء بخار كيميائي.
    2. تحضير محلول العمل بسعة 100 ميكرومول عن طريق خلط 147.71 ميكرولتر من محلول مخزن VCR مع 1,852.28 ميكرولتر من DMSO في أنبوب ميكرو بسعة 2.0 مل. فورتكس تماما.
    3. وزع 500 ميكرولتر من محلول العمل في أربعة أنابيب دقيقة بحجم 0.6 مل وتخزينه عند -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى عدة أشهر. تجنب إذابة الأليكوات أكثر من ثلاث مرات.
    4. تحضير محلول عمل فينبلاستين (VINB) بسعة 100 ميكرومولار عن طريق خلط 181.81 ميكرولتر من محلول مخزون بسعة 1.1 ملليمولار (كبريتات فينبلاستين 1 ملغ/مل، الوزن الجزيئي: 909.07 جم/مول) مع 1,818.19 ميكرولتر من ماء فائق النقاء المعقم في أنبوب دقيق بسعة 2.0 مل. دوامة حتى تصبح متجانسة.
    5. أليكوت حل VINB الذي يعمل بنفس الطريقة التي تم بها مع جهاز الفيديو.
    6. تحضير محلول VINB بحجم الميثانول + 0.1 ميكرومولار عن طريق خلط 49.95 مل من الميثانول مع 50 ميكرولتر من محلول VINB العامل في أنبوب بسعة 50 مل. دوامة حتى تصبح متجانسة. خزنها على -20 درجة مئوية حتى 3 أشهر.
      تحذير: الميثانول سام وقابل للاشتعال؛ ممسكا بمعدات الحماية الشخصية المناسبة داخل غطاء بخار.
    7. تحضير محلول ماء + حمض الفورميك 0.1٪ عن طريق خلط 49.95 مل من الماء فائق النقاء مع 50 ميكرولتر من حمض الفورميك في أنبوب بسعة 50 مل. الدوامة جيدا. خزن في درجة حرارة الغرفة (RT).
      تحذير: حمض الفورميك مسبب للتآكل؛ مقبض عليه بالقفازات وحماية للعين.
  2. إذابة وغسل الخلايا الأولية
    1. إذابة عينات الخلايا المحفوظة بالتجميد عن طريق تدوير القارورة بلطف في كأس يحتوي على 15 مل من ماء مقطر بدرجة حرارة 37 درجة مئوية حتى تذوب تماما.
      ملاحظة: يمكن العثور على معلومات حول بروتوكولات جمع الخلايا وتجميدها في المنشورات السابقة 9,10.
    2. انقل محتويات القارورة إلى أنبوب مخروطي بحجم 50 مل يحتوي على 10-15 مل من PBS معقمة 1x مع ماصة باستور معقمة قابلة للتخلص منها. الطرد المركزي عند 300 × جرام لمدة 5 دقائق في RT.
    3. تخلص من المادة الفائقة عن طريق قلب الأنبوب.
    4. أعد تعليق الحبيبة في 10 مل من AIM V متوسطة باستخدام ماصة باستور قابلة للاستبدال. عد الخلايا الصالحة وقس متوسط حجم الخلايا باستخدام عداد تلقائي.
      ملاحظة: يوصى باستخدام خلايا تظهر قدرة على البقاء بنسبة لا تقل عن 80٪ مقارنة بعدد الخلايا الإجمالي المجمع.
    5. احسب الحجم اللازم لجمع 2.5 × 106 خلايا صالحة باستخدام نسبة بسيطة بناء على التركيز المقاس. على سبيل المثال، إذا كان التركيز 5 × 106 خلايا/مل، فإن الحجم المطلوب هو 0.5 مل.
      ملاحظة: أجر كل معالجة على ثلاث نسخ لضمان إمكانية تكرار البيانات. حفظ الحجم المتوسط للخلية المتوفرة في عداد الخلايا الآلي؛ استخدمه لحساب حجم الخلايا.
  3. إعداد علاج الإدمان
    1. احسب حجم محلول تشغيل جهاز الفيديو المطلوب للوصول إلى تركيز نهائي 1 ميكرومولا في حجم إجمالي 2.0 مل. قم بعمل دوامة للمحلول الأصلي قبل وضع الماصات.
    2. أضف متوسط AIM V، ثم 2.5 × 10خلايا 6، وأخيرا محلول VCR إلى أنبوب ميكرو بسعة 2.0 مل. الدوامة لفترة وجيزة ثم الدوران قليلا (5 ثوان) لجمع أي سائل من غطاء الأنبوب.
    3. حضن الأنابيب المفتوحة عند 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربونلمدة 3 ساعات.
    4. بعد الحضانة، أغلق الأغطية وقم بعمل طرد مركزي على العينات عند 300 × جرام لمدة 5 دقائق عند التريت.
    5. تخلص من الفائق بحذر باستخدام ماصة، ثم أضف 1 مل من PBS عند RT إلى الأنبوب.
    6. كرر الطرد المركزي عند 300 × جرام لمدة 5 دقائق عند إزالة المادة الفوقية، وغسل PBS مرتين إضافيتين، ليصبح المجموع ثلاث غسولات.
    7. قم بإزالة كل الفائق بعناية باستخدام معصة، وأعد تعليق الحبيبة في 100 ميكرولتر من PBS، ثم استمر الدوامة حتى تعاد تعليق الحبيبة بالكامل.
    8. أضف 400 ميكرولتر من الميثانول البارد + 0.1 ميكرومول فينبلاستين (-20 درجة مئوية) مباشرة إلى العينة، مع تجنب ملامسة جدران الأنبوب.
    9. احتفظ بالعينات طوال الليل عند -80 درجة مئوية.
      ملاحظة: يمكن تخزين العينات عند -80 درجة مئوية لبضعة أسابيع (توقف آمن).

2. معالجة العينات ل LC-MS/MS (اليوم الثاني)

  1. استخراج العينات
    1. قم بتبريد جهاز الطرد المركزي إلى 4 درجات مئوية قبل إزالة العينات من الفريزر بدرجة حرارة -80 درجة مئوية.
    2. بعد أخذ العينات من الفريزر مباشرة، قم بعمل الطرد المركزي عليها عند 13,000 × جرام لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
    3. نقل 300 ميكرولتر من المادة الفائقة إلى أنبوب ميكرو بحجم 1.5 مل.
    4. جفف العينات بالكامل باستخدام مكثف فراغ عند 40-45 درجة مئوية لمدة ساعة و40 دقيقة.
      ملاحظة: يمكن تخزين الحبيبات المجففة عند -20 درجة مئوية لبضعة أسابيع (توقف آمن).
    5. أعد تعليق كل حبيبة في 400 ميكرولتر من الماء + 0.1٪ حمض الفورميك (التحضير مسبقا). الدوامة بلطف حتى تذوب الحبيبات بالكامل.
    6. قم بعمل الطرد المركزي للعينات مرة أخرى عند 13,000 × جرام لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
    7. انقل 300 ميكرولتر من المادة الفائقة إلى قارورة لولبية بحجم 2.0 مل لتحليل LC-MS/MS.

3. إعداد LC-MS/MS وجمع البيانات

  1. تحضير الطور المتنقل وتكييف الأعمدة
    1. حضر المذيب A بخلط ماء فائق النقاء مع حمض الفورميك بنسبة 0.1٪.
    2. تحضير المذيب B عن طريق خلط الأسيتونيتريل مع حمض الفورميك بنسبة 0.1٪.
      تحذير: الأسيتونيتريل سام وقابل للاشتعال؛ مقبض في غطاء أبخرة كيميائي.
    3. قم بسونيكس كل مذيب في حمام فوق صوتي لمدة 5 دقائق. وصل الزجاجات بوحدة المضخة وقم بتفريغ النظام عند تدفق عالي لإزالة الملوثات.
    4. تركيب عمود BEH C18 بطور معكوس (1.7 ميكرومتر، 2.1 مم × 50 مم).
      ملاحظة: لإجراء التحليل، استخدمت هذه الدراسة نظام كروماتوغرافي من فئة H من نوع Acquity مرتبط بمطياف كتلة ثلاثي رباعي الأقطاب Xevo TQS-Micro.
    5. استخدم تدرج ثنائي مكون من مذيبين A و B، وكلاهما معد مسبقا.
    6. قم بتشغيل التدرج الكروماتوغرافي من 5٪ إلى 95٪ من المذيب B خلال أول دقيقتين، تليها دقيقتين من المذيب A لغسل الأعمدة وإعادة التوازن.
    7. اضبط معدل التدفق على 0.2 مل/دقيقة طوال فترة الرحلة التي تستمر 4 دقائق. حافظ على درجة حرارة العمود عند 40 درجة مئوية وحقن 10 ميكرولتر من كل عينة.
  2. إعداد طريقة LC-MS/MS
    1. افتح برنامج LC-MS/MS. انقر على ملف > > طريقة MS الجديدة لبدء طريقة جديدة.
    2. اذهب إلى تبويب الوظائف وحدد نوع الوظيفة لمراقبة تفاعلات متعددة (MRM). أدخل انتقالات الأيونات والمعاملات المدرجة في الجدول 1 لأجهزة الفيديو وVINB (المعيار الداخلي).
    3. اضبط وقت الاستحواذ على 4 دقائق. انقر على التقديم للحفظ.
      ملاحظة: لا تتجاوز 4 دقائق لضمان إعادة توازن الأعمدة بين الحقن.
    4. قم بتكوين معلمات UHPLC تحت طريقة الإدخال > طريقة تحرير LC وحفظها كملف .mth (الجدول 2).
    5. اضبط معلمات المصدر تحت تبويب اللحن وفقا للجدول 3. حفظها كملف .tun.
    6. احفظ الطريقة الكاملة: الملف > الحفظ باسم، والتصدير كملف .mth.
  3. إنشاء قائمة عينات وبدء الجولة
    1. في الشاشة الرئيسية للبرنامج، افتح قائمة العينات وأنشئ قائمة بأسماء العينات، وأحجام الحقن، ومواقع القوارير، والطريقة المراد استخدامها.
    2. ضع قارورة ماء فائق النقي في صينية السامبلر التلقائي وخصصها كزجاجة فارغة. قم بتشغيل الفراغ بين كل مجموعة حقن ثلاثية لتجنب الانتقال.
      ملاحظة: قبل بدء التشغيل، تأكد من أن ضغط العمود (ΔP) مستقر وأقل من 10 psi.
    3. اختر الصفوف المطلوبة في قائمة العينات واضغط على تشغيل > موافق لبدء جمع البيانات.

4. تحليل البيانات

  1. تصور البيانات وتصديرها
    1. بعد انتهاء التشغيل، عرض الكروماتوغرامات باختيار عينة والنقر على كروماتوجرام في شريط القائمة العلوي.
    2. في الشاشة الرئيسية، انقر على TargetLynx، اختر الملفات التي تم تشغيلها للتو، ثم اضغط على معالجة > اختيار طريقة vincristine > OK، لتوليد جداول الإخراج.
    3. انقر على تقرير > تصدير الجدول واحفظ البيانات المعالجة كملف .csv أو .xlsx.
      ملاحظة: تصدير مناطق الذروة الخام لكل من التحليل والمعيار الداخلي.
  2. تنظيم البيانات وحساب النسب
    1. افتح الملف المصدر وأنشئ الأعمدة التالية:
      1. العينة: أضف اسم العينة أو القارورة.
      2. تشغيل: يشير إلى أي نسخة تمثل القيمة التي تقابلها.
      3. منطقة جهاز الفيديو: أدخل المنطقة تحت القمة للفينكريستين.
      4. منطقة VINB: أدخل المنطقة تحت القمة لفينبلاستين.
      5. نسبة VCR/VINB: يتم تطبيع كل قيمة VCR عن طريق تقسيمها على قيمة VINB المقابلة لها.
    2. أضف أعمدة لقيم الانحراف المعياري لمساحة جهاز الفيديو، مساحة VINB، ونسبة VCR/VINB لكل مجموعة ثلاثية.
      ملاحظة: يسمح التطبيع باستخدام المعيار الداخلي بتصحيح التغيرات في حجم الاستخراج أو الحقن.
  3. نتائج الرسم
    1. افتح برنامج الرسوم البيانية المفضل واختر تنسيق الجدول المجمع .
    2. اختر إدخال أو استيراد البيانات إلى جدول جديد، وتحت الخيارات، اختر إدخال 3 لتكرار القيم في الأعمدة الفرعية جنبا إلى جنب.
    3. ارسم فقط نسب VCR/VINB الموحدة لكل عينة، مع حذف قيم المساحة الخام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تظهر النتائج الكروماتوغرافية الممثلة التي تم الحصول عليها بعد اختبارات التراكم داخل الخلايا باستخدام جميع خلايا PDX الأولية المحضنة بجهاز VCR وVINB في الشكل 1. تم تحضير العينات باستخدام 2.5 × 106 خلايا لكل حالة. تحت الظروف الكروماتوغرافية الموصوفة، تم الاحتفاظ بجهاز الفيديو بشكل ثابت عند 2.85 دقيقة مع تأثير مصفوفة ضئيل، وكان شكل الذروة متماثلا ودقيقا بشكل جيد. توضح هذه الملفات السلوك الكروماتوغرافي المتوقع لأجهزة VCR وVINB عند تنفيذ البروتوكول بشكل صحيح.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يعد التقييم الدقيق لمستويات الأدوية داخل الخلايا في الخلايا الأولية لسرطان الدم أمرا أساسيا لفهم التعامل مع الأدوية على المستوى الخلوي ولدعم تطوير اختبارات وظيفية تكمل التحليل الجزيئي. غالبا ما تتطلب الأساليب التحليلية الحالية أعدادا كبيرة من الخلايا، أو تتطلب خطوات معالجة طويلة، أو تعتمد على قراءات غير مباشرة لا تعكس التوفر الحقيقي داخل الخلايا للعوامل الكيميائيةالعلاجية 5,6. تسلط هذه القيود الضوء على الحاجة إلى طرق سريعة وحساسة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب مصالح.

شكر وتقدير

نشكر مركز إنفانتيل بولدريني وجميع المرضى الذين تبرعوا بعيناتهم للدراسة. حصل أدرييلي سي. سواريز على زمالة من مجلس المهندسين البحريين في بيفيل سوبرايور البرازيل (CAPES) ومن مؤسسة أبحاث ساو باولو (FAPESP، 2023/18389-3). حصل خوسيه أ. يونس على زمالة الإنتاجية من المجلس الوطني للتنمية التكنولوجية والعلمية (CNPq، 308399/2021-2028). وقد تم دعم هذا العمل بتمويل بحثي من وزارة الصحة البرازيلية من خلال برنامج PRONON (البرنامج الوطني للبؤن في الأطباق العلمية، NUP 25000.211174/2019-45).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
قارورة لولبية بسعة 2.0 ملتدفق الإمداد8-2400استخدم مع إدخالات زجاجية مع نابض (5 × 29 مم) من نفس الشركة (الفئة 5-29015)
قارورة لولبية بسعة 2.0 ملتدفق الإمداد8-2400استخدم مع إدخالات زجاجية مع نابض (5 × 29 مم) من نفس الشركة (الفئة 5-29015)
الأسيتونيتريلميرك (سيغما-ألدريتش)100030
الأسيتونيتريلميرك (سيغما-ألدريتش)24010152
AIM Vثيرمو فيشر العلمي12055091
نظام الكروماتوغرافي أككويتي UPLC من الفئة Hشركة ووترزhttps://www.waters.com/nextgen/br/pt/products/chromatography/chromatography-systems/acquity-uplc-h-class-plus-system.html?srsltid=AfmBOoo0mjNgaucBI-Exv97cEmWE96_lVkqKi2IR0IPtA-h1feG-WvtW
الكونتيسة الثالثة من الفلوريداثيرمو فيشر العلميA49892
DMSOميرك (سيغما-ألدريتش)D 8418
فالكون 50 ملسارستيدت62.547.254
حمض الفورميكميرك (سيغما-ألدريتش)F0507
زجاجة زجاجيةميرك (سيغما-ألدريتش)41121800
الحاضنةPHCBIMCO-50M-PE
الميثانولميرك (سيغما-ألدريتش)34860
ميكروتيوب 1.5 ملإبندورف41121702
ميكروتيوب 2.0 ملإبندورف30120094
PBSميرك (سيغما-ألدريتش)PPB006
سبيفاك ميفاكفيشر ساينتيفك56340
برنامج جمع البياناتشركة ووترزماس لينكس
مطياف الكتلة الرباعي الثلاثة أقطاب Xevo TQ-S microشركة ووترزhttps://www.waters.com/nextgen/us/en/products/mass-spectrometry/mass-spectrometry-systems/xevo-tq-s-micro.html?srsltid=AfmBOoqqmLRNfHGqvtnwaL7xYOOEXPV3NJ9qYNH9HAwqXKXrMvLRQXSW
جهاز الموجات فوق الصوتيةالكيميسQ335D
فينبلاستين 1 ملغ/ملليبسhttps://www.libbs.com.br/nossos-produtos/antineoplasico-faulblastina/كبريتات الفينبلاستين
فينكريستينشركة كايمان للكيماويات11764

المراجع

  1. Inaba, H., Pui, C. H. Advances in the diagnosis and treatment of pediatric acute lymphoblastic leukemia. J Clin Med. 10 (9), 1926(2021).
  2. Pui, C. H., et al. Childhood acute lymphoblastic leukemia: progress through collaboration. J Clin Oncol. 33 (27), 2938-2948 (2015).
  3. Gaudichon, J., et al. Mechanisms of extramedullary relapse in acute lymphoblastic leukemia: reconciling biological concepts and clinical issues. Blood Rev. 36, 40-56 (2019).
  4. Dhyani, P., et al. Anticancer potential of alkaloids: a key emphasis on colchicine, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine and vincamine. Cancer Cell Int. 22, 206(2022).
  5. Mateus, A., Matsson, P., Artursson, P. Rapid measurement of intracellular unbound drug concentrations. Mol Pharmaceutics. 10 (6), 2467-2478 (2013).
  6. Chien, H. C., et al. Rapid method to determine intracellular drug concentrations in cellular uptake assays: application to metformin in organic cation transporter 1-transfected human embryonic kidney 293 cells. Drug Metab Dispos. 44 (3), 356-364 (2016).
  7. Calcagno, A. M., Ambudkar, S. V. Analysis of expression of drug resistance-linked ABC transporters in cancer cells by quantitative RT-PCR. Methods Mol Biol. 637, 121-132 (2010).
  8. Richter, M., et al. From donor to the lab: a fascinating journey of primary cell lines. Front Cell Dev Biol. 9, 648272(2021).
  9. Borgmann, A., et al. Childhood ALL blasts retain phenotypic and genotypic characteristics upon long-term serial passage in NOD/SCID mice. Pediatr Hematol Oncol. 17 (8), 635-650 (2000).
  10. Rosati, M. M., Corrêa, J. R., de Sousa Mariano, S., Cardoso, A., Andrés Yunes, J. Murine model of leukemia relapse to induction chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia. J Vis Exp. (224), e68797(2025).
  11. Dams, R., Huestis, M. A., Lambert, W. E., Murphy, C. M. Matrix effect in bioanalysis of illicit drugs with LC-MS/MS: influence of ionization type, sample preparation, and biofluid. J Am Soc Mass Spectrom. 14 (11), 1290-1294 (2003).
  12. Yang, Y., Cruickshank, C., Armstrong, M., Mahaffey, S., Reisdorph, R., Reisdorph, N. New sample preparation approach for mass spectrometry-based profiling of plasma results in improved coverage of metabolome. J Chromatogr A. 1300, 217-226 (2013).
  13. Zhang, J., Dasgupta, A., Ayala, R., Bonapace, C., Kassim, S., Faustino, P. J. Internal standard variability: root cause investigation, parallelism for evaluating trackability and practical considerations. Bioanalysis. 16 (15), 771-776 (2024).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تطوير وتوحيد طريقة ميكرو خارج الجسم الحي لقياس كمية الفينكريستين داخل الخلايا في الخلايا الأولية ALL بواسطة LC-MS/MS
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.