مقالة منهجية

تأسيس خثر الجيوب الجينية العلوي الناجم عن كلوريد الحديد المعدل

379 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69563

⸱

ديسمبر 30, 2025

 ,  ,  , 
1Department of Neurology, Xuanwu Hospital Capital Medical University, 2Department of Neurosurgery, Xuanwu Hospital Capital Medical University

في هذه المقالة

ملخص

تقدم هذه الدراسة بروتوكولا لإنشاء نموذج جرذان قابل للتكرار وقليل التوغل لجلطة الجيب السهمي العلوي الناتج عن كلوريد الحديد، باستخدام طريقة خياطة الحرير مع تصوير التباين بالليزر والموجات فوق الصوتية عالية الدقة للتقييم.

الملخص

الجلطة الوريدية الدماغية (CVT) هي اضطراب عصبي نادر لكنه قد يهدد الحياة. توفر نماذج منصات حيوية للتحقيق في فيزيولوجيتها المرضية وتقييم العلاجات المحتملة. في هذه الدراسة، نقدم نموذجا معدلا للفئران لجلطة الجيب السهمي العلوي (SSS) باستخدام تقنية خياطة مشبعة ب FeCl₃. خضع ذكور فئران سبراج-داولي (220-250 جم) لشق في فروة الرأس الباراميدية وإنشاء نافذة عظمية بقطر 1 سم فوق ال SSS. مقارنة بالشق التقليدي في منتصف الخط، يمنع هذا الأسلوب الالتصاق الجلد المشقوق، ونافذة العظم، والجافة الجافية تحتها. بالإضافة إلى ذلك، يتجنب التداخل الناتج عن عقد الغرز الموجودة فوق SSS، مما يحسن جودة التصوير بالموجات فوق الصوتية. تم تطبيق غرزة حرير 2-0 مشبعة بنسبة 40٪ من FeCl3 مباشرة على الجيب المكشوف لفترتين متتاليتين مدة كل منهما 5 دقائق. مقارنة بطريقة ورق FeCl التقليدية ذاتالثلاثة مرشحات، تقلل هذه التقنية من الضرر الكيميائي المباشر للقشرة الباراساجيتالية. تم استخدام تصوير التباين بالليزر لتقييم تروية الورد الدماغي قبل وبعد تطبيق FeCl3 . أكد انخفاض كبير في تدفق الدم نجاح الجلطة. بعد سبعة أيام من الجراحة، تم تقييم تكوين الجلطات والتغيرات الديناميكية الدموية عبر الموجات فوق الصوتية عالية الدقة وتحليلها باستخدام برنامج Vevo LAB، الذي قدم بيانات حجمية وديناميكية دموية للجلطة. يقدم هذا النموذج المعدل نهجا قابلا للتكرار، قليلة التوغل، ومتوافقا مع التصوير لأبحاث CVT قبل السريرية.

المقدمة

الجلطة الوريدية الدماغية (CVT) هي نوع خاص من أمراض الأوعية الدموية الدماغية، حيث تشكل 0.5-3٪ من جميع السكتات الدماغية وتعد سببا مهما للسكتة الدماغية لدى الشباب1. التغير المرضي الأساسي لهذا المرض هو الجلطة داخل الجيوب الوريدية الجافية و/أو الأوردة الدماغية، مما يؤدي إلى ضعف تصريف الأوردة الدماغية، مما يؤدي لاحقا إلى زيادة الضغط داخل الجمجمة، وذمة دماغية، احتشاء وريدي، أو نزيف2. لتوضيح آلياته الأساسية بشكل أفضل وتقييم التدخلات العلاجية الجديدة، لا غنى عن نماذج حيوانية موثوقة وقابلة للتكرار. نظرا لأن الجيب السهمي العلوي (SSS) هو الموقع الأكثر تأثرا وموقعه السطحي يسهل الإجراءات التشغيلية 2,3، فإن التجارب الحيوانية الحالية تستخدم بشكل أساسي نموذج جلطة الجيب السهمي العلوي (SSST).

من بين طرق النمذجة المختلفة، أصبحت طريقة الحث بكلوريد الحديديك (FeCl3) واحدة من أكثر التقنيات استخداما بسبب بساطتها التشغيلية وفعاليتها من حيث التكلفة4. في هذا النموذج، يؤدي التطبيق الموضعي لمحلول FeCl3 إلى تلف بطانة الجيوب الوريدية بشكل مباشر، مما يكشف مصفوفة البطانة تحت البطانية من خلال خصائصها التأكسدية القوية. هذا التعرض ينشط تجمع الصفائح الدموية وتسلسل التخثر، مما يؤدي في النهاية إلى جلطة الجيوب الوريدية5. ومع ذلك، مقارنة بالطرق الأخرى، فإن نموذج الورق التقليدي FeClبثلاثة مرشحات له عدة عيوب. المشكلة الأكثر أهمية هي أن الخصائص البارامغناطيسية والقابلية العالية للمغناطيس ل FeCl3 تولد تشوهات كبيرة أثناء تصوير الرنين المغناطيسي، مما يؤثر بشدة على دقة تقييم الجلطات وملاحظة إعادة تشكيل الجيوب الوريدية6. علاوة على ذلك، شكل ورق المرشح لا يتناسب جيدا مع SSS، مما يجعله عرضة لإصابة نسيج الدماغ المحيط بالجيوب الأنفية. لذلك، من الصعب تحديد ما إذا كان الضرر المحيطي حول SSS ناتج عن الجلطة نفسها أو عن إصابة كيميائية مباشرة ناتجة عن FeCl3.

الهدف العام من العمل الحالي هو إنشاء نموذج معدل لجرذان SSST المستحث بواسطة FeCl3 يقلل من الإصابات القشرية المباشرة الناتجة عن FeCl3 ويسمح بتقييم تدفق الدم وحجم الخثرات داخل SSS. تقدم هذه الدراسة نهجا باراميديا مدمجا مع تقنية خياطة مغمورة ب FeCl3، مما يقلل من الإصابة الكيميائية القشرية المباشرة الناتجة عن FeCl3، ويتيح مراقبة تدفق الدم الوريدية وتكوين الجلطات بشكل فوري وغير جراحي وكمية باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية الدقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل لجنة تجارب والرفاهية التجريبية للحيوان في جامعة كابيتال الطبية برقم الموافقة. AEEI-2025-138. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. إنشاء نموذج SSST الجرذان المعدل المستحث بواسطة FeCl3

  1. استخدم ذكور فئران سبراج-داولي (SD) التي تتراوح أعمارها بين 6-7 أسابيع، ووزنها 220-250 جرام للتجربة. قبل العمليات الجراحية، اعتاد الفئران لمدة أسبوع وامتنع عن الطعام لمدة 12 ساعة.
  2. جهز المواد والكواشف والمعدات التالية: محلول بنتوباربيتال 2٪، محلول FeCl3 بنسبة 40٪، يود بوفيدون-5٪، محلول ملحي عادي، مرهم عيون، شفرات حلاقة قابلة للاستخدام، مشارط، مقص جراحي، ملاقط، غرز حرير 2-0 و4-0، إبر قص عكسي، حاملات إبر، حقن بسعة 1 و5 مل، أشرطة طبية، منصة لتشغيل القوارض، وسادة تسخين مع مسبار درجة حرارة المستقيم، ومثقاب جمجمي صغير محمول.
  3. بعد الوزن، تخدر الفأر بحقن بنتوباربيتال 2٪ داخل الصفاق (50 ملغ/كغ) (وفقا للبروتوكولات المعتمدة مؤسسيا). ثم اضغط جلد الطرف الخلفي بالملاقط للتأكد من غياب الانسحاب وردود فعل الألم.
  4. ضع مرهم العيون واحلق شعر فروة رأس الجرذ باستخدام شفرة حلاقة قابلة للتخلص منها.
  5. ثبت الفأر في وضعية الاستلقاء على منصة تشغيل القوارض باستخدام أشرطة طبية، وحافظ على درجة حرارة الجسم عند 37 ± 0.2 درجة مئوية باستخدام وسادة تدفئة وراقب درجة حرارة النواة باستمرار باستخدام مسبار شرجي.
  6. عقم فروة الرأس ب 5٪ بوفيدون-يود.
  7. قم بعمل شق جلدي بارامي بقطر 15 مم في فروة الرأس، ثم قم بتشريح اللفافة الأساسية والبيريوستيم بشكل غير مباشر لكشف الجمجمة بالكامل.
  8. قم بتخفيف الجمجمة باستخدام مثقاب جمجمي حتى يصبح الجزء السطحي مكشوفا بوضوح، بدءا من لامبدا وتمتد 10 مم إلى الأمام على طول الدرز السهمي. استخدم تقنية حفر متقطعة لتجنب إتلاف المادة الجافية الأساسية وSSS، وقم بري رأس الحفر بمحلول ملحي عادي مرارا لمنع الإصابة الحرارية للقشرة.
  9. ضع قطعة بحجم 10 مم من غرز حرير 2-0 منقوعة بمحلول 40٪ FeCl3 على سطح SSS المكشوف لمدة 5 دقائق، ثم استبدل الغرز بقطعة منقوعة حديثا لتطبيق آخر لمدة 5 دقائق.
  10. اشطف الحقل الجراحي بمحلول ملحي طبيعي 0.5 مل ثلاث مرات لإزالة بقايا FeCl3.
  11. أغلق الجلد بغرز متقطعة باستخدام خياطة حرير 4-0، تليها تعقيم ببوفيدون-يود.
  12. راقب الفأر حتى يستيقظ تماما، ثم أعده إلى القفص.

2. تقييم نجاح تأسيس النموذج

ملاحظة: خلال الإجراء الجراحي، استخدم LSCI لقياس تدفق الدم الوريدي في SSS بعد إنشاء نافذة الجمجمة وقبل تطبيق FeCl3 ، ومرة أخرى بعد تطبيق FeCl3 وغسل الحقل الجراحي، ولكن قبل إغلاق الجلد. يعتبر النموذج قد تم تأسيسه بنجاح عندما يظهر تدفق الدم الوريدي في SSS انخفاضا ملحوظا.

  1. شغل LSCI والبرمجيات المقابلة (RFLSI v5.0)، ثم اضغط على زر وضع الإنترنت .
  2. قم بضبط ارتفاع وموقع الجهاز حتى يصبح ليزر المؤشر في مجال الرؤية.
  3. ضع الجرذ على منصة رغوية وعدل الوضع حتى يتوافق SSS مع ليزر المؤشر.
  4. قم بضبط التكبير والتركيز حتى تظهر الصورة بوضوح. اضبط الحدود الدنيا والعليا لعتبة اللون الزائف إلى 10 و200 لتحسين المظهر البصري للصورة شبه الملونة (شبه الملونة البصرية).
  5. اضغط على زر تعيين العائد على العائد ، اختر الأداة الدائرية ، وحدد منطقة SSS.
  6. اضغط زر التسجيل للحصول على تدفق الدم الوريدي والتقاط الصور الأصلية والألوان الزائفة.

3. تقييم منطقة/حجم الجلطة والتغيرات الديناميكية الدموية

ملاحظة: بعد عدة أيام إلى أسابيع من الإجراء، استخدم الموجات فوق الصوتية عالية الدقة لتقييم تغيرات الجلطات وإعادة القناة الوعائية.

  1. جهز الأدوية والأدوات والمعدات التالية: الإيزوفلوران، جل الموجات فوق الصوتية، شفرات الحلاقة ذات الاستخدام الواحد، أشرطة طبية، جهاز تخدير للحيوانات الصغيرة، نظام تصوير بالموجات فوق الصوتية والفوتوأكوستيك عالي الدقة للحيوانات الصغيرة، محول مصفوفة خطية عالية التردد UHF57x بسرعة 70 ميجاهرتز فائقة التردد، ومحرك اكتساب ثلاثي الأبعاد.
  2. قم بتركيب محرك الاستحواذ ثلاثي الأبعاد ومحول UHF57x. ثم قم بتهيئة المحرك.
  3. تخدير الجرذ في غرفة تحفيز تحتوي على 3٪ من الأيزوفلوران ممزوج ب1 لتر/دقيقة من الأكسجين.
  4. ضع الفأر في وضعية الاستلقاء على لوحة التصوير الحراري بدرجة حرارة 37 درجة مئوية، مع تثبيت الرأس والأطراف بلطف باستخدام أشرطة طبية، وحافظ على التخدير بنسبة 1.5٪-2٪ من الإيزوفلوران عبر مخروط أنف.
  5. احلق شعر فروة الرأس باستخدام شفرة حلاقة لكشف منطقة الكشف، ثم ضع جل الموجات فوق الصوتية.
  6. قم بضبط موقع واتجاه الفأر بالنسبة للمحول حتى يتم رؤية SSS والجلطة داخل اللمعان بوضوح.
  7. التقاط صور مقطعية متتالية لنظام SSS في كل من المستويين السهمي والإكليل باستخدام التصوير ثلاثي الأبعاد في وضع B بحجم خطوة 0.04 مم.
  8. استخدم وضع دوبلر الملون لمراقبة تدفق الدم في SSS، ثم تطبيق وضع دوبلر الموجة النبضية (PW) لقياس سرعة تدفق الدم.
  9. أوقف التخدير وأعد الفأر إلى القفص بعد أن يستيقظ تماما.
  10. تصدير الصور وتحليلها باستخدام برنامج Vevo LAB. سجل أقصى مناطق مقطع عرضي سهمي وإكليلية، وحجم الجلطة في SSS، بالإضافة إلى أقصى سرعة تدفق دم للجيب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

المخطط التخطيطي لنموذج SSST المعدل المحفز FeCl3 موضح في الشكل 1. أظهرت النتائج التجريبية أنه بعد تطبيق خياطة الحرير المشبعة ب FeCl3 على SSS، اكتشف LSCI انخفاضا كبيرا في تدفق الدم المحلي، مما يشير إلى انسداد ناجح للجيوب الوريدية وتأكيد حساسية LSCI لاكتشاف التغيرات الديناميكية في التروية (الشكل 2). في اليوم السابع بعد العملية، أكد الموجات فوق الصوتية للحيوانات الصغيرة وجود جلطة في SSS مع إعادة إنتاج جزئي للضو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

CVT هو نوع نادر لكنه قد يهدد الحياة من أمراض الأوعية الدموية الدماغية1. ولدراسة آلياته المرضية بشكل أعمق وتطوير استراتيجيات تدخل فعالة، أنشأ الباحثون نماذج حيوانية متنوعة ل SSST، وتشمل بشكل رئيسي ربط أو انسداد SSS 7,8,9، وحقن المادة الأولية10، وحقن جلطة الدم الذاتية11، والتحفيز الضوئيالكيميائي 12، وتح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.

شكر وتقدير

وقد دعم هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82401527).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حقنة 1 ملشركة شنتشن هوايون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.21-3020
غرز حرير 2-0شركة شنغهاي بودونغ جينهوان للمنتجات الطبية المحدودةA224
محرك الاستحواذ ثلاثي الأبعادفوجي فيلم فيجوالسونيكسhttps://www.visualsonics.com/gallery/extended-3d-motor
غرز حرير 4-0شركة شنغهاي بودونغ جينهوان للمنتجات الطبية المحدودةA222
5٪ بوفيدون-يودينشركة شاندونغ ليركون للتكنولوجيا الطبية، المحدودة.https://www.lircon.cn/products_details/100.html
حقنة 5 ملشركة شنتشن هوايون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.21-3023
شفرة حلاقة ذات مرة واحدةشركة دونغيانغ جينمين للتجارة المحدودةST300
FeCl3ماكلينI811935
وسادة التدفئةشركة شنتشن هوايون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.36-0001
إيزوفلورانعلم الحياة للدفع الخلفيR510-22-10
نظام تصوير الليزر البقععلم الحياة للدفع الخلفيRFLSI III
محول المصفوفة الخطيةفوجي فيلم فيجوالسونيكسUHF57x
شريط طبيشركة سوتشو كونليدا لللوازم الطبية المحدودةB02
مثقاب جمجمي صغير محمولعلم الحياة للدفع الخلفي78001
حامل الإبرعلم الحياة للدفع الخلفيF31025-13
محلول ملحي عاديشركة شنغهاي بيوتايم للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.ST341-500ml
مرهم العيونشركة شنتشن هوايون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.19-7223
إبر القطع العكسيشركة شنغهاي بودونغ جينهوان للمنتجات الطبية المحدودةTJ-3-514
منصة تشغيل القوارضشركة شنغهاي يويان للأدوات العلمية المحدودة30150
شفرة المشرطعلم الحياة للدفع الخلفيS31015-01
مقبض المشرطعلم الحياة للدفع الخلفيS32003-12
آلة تخدير الحيوانات الصغيرةعلم الحياة للدفع الخلفيR500
نظام الموجات فوق الصوتية وتصوير الحيوانات الصغيرة والضوء الصوتيفوجي فيلم فيجوالسونيكسفيفو F2
الملقط الأملسعلم الحياة للدفع الخلفيF12013-10
الصوديوم بنتوباربيتالشركة سيغما-ألدريتش (شنغهاي) للتجارة المحدودة.P3761
مقص جراحيعلم الحياة للدفع الخلفيS14014-10
الملقط المسننةعلم الحياة للدفع الخلفيF12011-13
جل الموجات فوق الصوتيةشركة شاندونغ ليركون للتكنولوجيا الطبية، المحدودة.https://www.lircon.cn/products_details/230.html

المراجع

  1. Saposnik, G., et al. Diagnosis and management of cerebral venous thrombosis: a scientific statement from the American Heart Association. Stroke. 55 (3), e77-e90 (2024).
  2. Cohen, O., Pegoraro, S., Ageno, W. Cerebral venous thrombosis. Minerva Med. 112 (6), 755-766 (2021).
  3. Li, M., Chen, J., Meng, R., Ji, X. Rhythmic deep-brain magnetic stimulation promotes angiogenesis and inhibits apoptosis by regulating the JAK2/STAT3 pathway in rats with superior sagittal sinus thrombosis. Brain Res. 1852, 149509(2025).
  4. Röttger, C., et al. A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes. Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).
  5. Schoenwaelder, S. M., Jackson, S. P. Ferric chloride thrombosis model: unraveling the vascular effects of a highly corrosive oxidant. Blood. 126 (24), 2652-2653 (2015).
  6. Hachenberger, M., et al. Aluminium chloride instead of ferric chloride for inducing superior sagittal sinus thrombosis to reduce ferromagnetic artifacts on MRI imaging in experimental models. Sci Rep. 14 (1), 10998(2024).
  7. Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion. Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).
  8. Mu, S., et al. A novel rat model for cerebral venous sinus thrombosis: verification of similarity to human disease via clinical analysis and experimental validation. J Transl Med. 20 (1), 174(2022).
  9. Fries, G., et al. Occlusion of the pig superior sagittal sinus, bridging and cortical veins: multistep evolution of sinus-vein thrombosis. J Neurosurg. 77 (1), 127-133 (1992).
  10. Wang, J., Ji, X., Ling, F., He, X. Comparison of anticoagulation and thrombolysis treatments in a rat model of superior sagittal sinus thrombosis. Int J Neurosci. 124 (7), 532-541 (2014).
  11. Ye, Y., et al. Impacts on thrombus and chordae Willisii during mechanical thrombectomy in the superior sagittal sinus. Front Neurol. 12, 639018(2021).
  12. Chen, C., et al. Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis. Neuroscience. 306, 39-49 (2015).
  13. Rahal, J. P., Malek, A. M., Heilman, C. B. Toward a better model of cerebral venous sinus thrombosis. World Neurosurg. 82 (1-2), 50-53 (2014).
  14. Kim, D. E., Schellingerhout, D., Jaffer, F. A., Weissleder, R., Tung, C. H. Near-infrared fluorescent imaging of cerebral thrombi and blood-brain barrier disruption in a mouse model of cerebral venous sinus thrombosis. J Cereb Blood Flow Metab. 25 (2), 226-233 (2005).
  15. Srivastava, A. K., Kalita, J., Haris, M., Gupta, R. K., Misra, U. K. Radiological and histological changes following cerebral venous sinus thrombosis in a rat model. Neurosci Res. 65 (4), 343-346 (2009).
  16. Wang, W., et al. Establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion and recanalization via a thread-embolism method. Neuroscience. 416, 41-49 (2019).
  17. Hachenberger, M., et al. Comparison of edoxaban and enoxaparin in a rat model of AlCl3-induced thrombosis of the superior sagittal sinus. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 396 (12), 3887-3892 (2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة