يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

توحيد نموذج MCAO داخل الضوئي من Rat Intraluminal: بروتوكول مفصل مع تدابير مراقبة الجودة

121 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69573

⸱

أغسطس 7, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Xuanwu Hospital, Capital Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يظهر هذا البروتوكول تقنية محسنة لإغلاق الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) لمدة 60 دقيقة في الفئران. تم التحقق من صحة البروتوكول باستخدام طرق متعددة الوسائط، محققا معدل نجاح 87.5٪ مع وفيات قليلة، وحقق نتائج قابلة للتكرار في حالات الاحتراق والسلوك لأبحاث السكتة الدماغية.

الملخص

يظل نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط للفئران (MCAO) هو المعيار المرجعي لتوضيح الفيزيولوجيا المرضية للسكتة الدماغية الإقفاري والتحقق من صحة العلاجات الواقية العصبية. ومع ذلك، يمكن للانحرافات الجراحية الطفيفة أن تغير بشكل عميق حجم الاحتشاء والنتائج السلوكية. باستخدام إطار عمل "التصور ثم التنظيم"، أعدنا فحص كل خطوة من مراحل إنشاء النموذج والتحقق منه. تم إجراء توثيق فوتوغرافي مفصل للمعالم الجراحية الرئيسية والخطوات الحرجة لتوحيد التوجيه التشريحي ووضع الخيط. تم استخدام تلوين كلوريد 2,3,5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم (TTC) لرسم خرائط دقيقة لحجم وطوبولوجيا الالتهابات عند 24 ساعة و72 ساعة بعد إعادة التروية. تم تصنيف العجز العصبي باستخدام مقاييس زي-لونغا، بيدرسون، وغارسيا المعدلة. خضع أربعة وعشرون ذكرا من جرذ سبراج-داولي لعملية MCAO عابرة لمدة 60 دقيقة؛ تم تقييم حجم الالتهاب الدماغي ودرجات الأعصاب عند 24 ساعة و72 ساعة. حققت حوالي 87.50٪ من الحيوانات حجب تدفق الدم الدماغي بنجاح (زي-لونغا ≥ 1 والانفاركت المعرف بشكل لا لبس فيه من قبل TTC)، مع معدل وفيات إجمالي بلغ 12.50٪، مما يدل على دقة النموذج العالية. يوفر هذا البروتوكول الموحد أساسا تقنيا قابلا للتكرار لأبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية، مما يسهل الاتساق بين المختبرات في الدراسات التي تحقق فيزيولوجيا أمراض السكتة الدماغية والتدخلات العلاجية.

المقدمة

السكتة الدماغية هي ثاني أكبر سبب للوفاة وثالث أكبر سبب للإعاقة على مستوى العالم 1,2. تؤثر السكتة الدماغية بشكل غير متناسب على الدول ذات الدخل المنخفض والمتوسط، حيث تحدث في المتوسط قبل 15 عاما من الدول ذات الدخل المرتفع1. النوعان الرئيسيان هما السكتة الدماغية الإقفارية (85٪) والنزيف داخل الدماغ (15٪)3. السكتة الدماغية الإقفاري، التي تمثل الغالبية العظمى من السكتات الدماغية، تنتج عن انسداد تدفق الدم الدماغي، مما يؤدي إلى موت الخلايا واحتشاء الدماغ4. تتضمن السلسلة الإقفارية عدة أحداث كيميائية حيوية، بما في ذلك عمليات مؤكسدة مؤكدة مهمة 5,6.

على الرغم من الجهود الواسعة قبل السريرية والسريرية، إلا أن عددا قليلا فقط من العلاجات — وأبرزها الانفصال الوريدي مع محفز البلازمينجين النسجي واستئصال الجلطة الميكانيكية — أثبتت فعاليتها، وهذه العلاجات محدودة بنوافذ علاجية ضيقة ومعايير صارمة لاختيار المرضى. وبالتالي، هناك حاجة ملحة لتوضيح الآليات الخلوية والجزيئية الكامنة وراء الإصابة الإقفاري، وإصلاح الأوعية العصبية، والتعافي بعد السكتة الدماغية. نموذج حيواني قابل للتكرار وذو صلة سريرية لا غنى عنه لتحقيق هذا الهدف.

يستخدم نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) على نطاق واسع لاستكشاف السكتة الدماغية الإقفاري في القوارض7،8. طريقة انسداد الخيوط داخل الضوئي هي واحدة منأكثر تقنيات MCAO الكلاسيكية والأكثر استخداما. يمكن لهذه التقنية نمذجة كل من الإسدادات الدائمة والمؤقتة دون الحاجة إلى استئصال الجمجمة. أظهرت تقنية أحدث عبر الفخذ باستخدام الأسلاك الداخلية وعائية واعدة في تحفيز MCAO العابر في الفئران، مما يوفر نتائج أكثر اتساقا10. يتضمن هذا النموذج إغلاق الشريان الدماغي الأوسط، عادة باستخدام تقنية خيط داخل الضوء. يسبب MCAO نقص تروية الدماغ البؤري، مما يؤدي إلى نقص التروية وإصابة إعادة التروية12.

بينما تعتبر MCAO ذات قيمة في دراسة فيزيولوجيا مرضية السكتة الدماغية والعلاجات المحتملة، إلا أنها يمكن أن تنتج متغيرات في حجم آفة7. لذلك، يمكن أن تقلل التحسينات على نموذج MCAO — مثل تحسين تقنيات إعادة التروية، ووضع بروتوكولات تشغيل موحدة، وتطوير معايير تقييم موحدة — من التباين في موقع وحجم الالتهاب الداخلي، مما يعزز فائدته في أبحاث السكتة الإقفارية.

يتطلب هذا البروتوكول منحنى تعلم يتكون من حوالي 10–15 عملية جراحيةلتحقيق نتائج متسقة. قد تختلف معدلات النجاح بناء على خبرة المشغل وسلالة الفئران14. النموذج مناسب لدراسة السكتة الدماغية الإقفارية الحادة لكنه قد لا يحاكي بشكل كامل الأمراض المصاحبة البشرية مثل ارتفاع ضغط الدم أو السكري15. وبناء عليه، سعينا لوضع والتحقق بدقة من بروتوكول MCAO المحسن يهدف إلى تقليل التغيرات التجريبية من خلال إجراءات موحدة وتدابير صارمة لمراقبة الجودة. تم دمج أربع ابتكارات تكميلية لتحقيق مكاسب مزدوجة في التوحيد القياسي وموثوقية البيانات: (1) التقييم الزمني الطولي المزدوج — تم الحصول على درجات عصبية من مقاييس زي-لونغا، بيدرسون وغارسيا المعدلة بالتوازي مع أحجام الاحتماء المشتقة من 2,3,5-تريفينيل تيترازوليوم كلوريد (TTC) عند 24 ساعة و72 ساعة بعد إعادة التروية، مما يوضح العلاقة الزمنية بين حل الوذمة والتعافي الوظيفي؛ (2) التحقق المتقاطع ثلاثي المقياس—التقييم المزدوج المعمى للمحققين مع معايرة ثلاثية المقياس المتكاملة زاد بشكل ملحوظ من حساسية ودقة التقييم السلوكي؛ (3) تم إنشاء إجراء تشغيلي قياسي (SOP) لاستخراج حمام الثلج في 90 ثانية متبوعا بتقطيع إكليل 2 مم بخطوة واحدة في قوالب مبردة مسبقا" لتقليل التحلل الذاتي والخطأ البشري، وضمان قياسات حجمية عالية الدقة؛ (4) تم إنشاء إطار عمل متكامل لمراقبة الجودة—وهو نظام شامل يشمل الصيام قبل العملية، والتحكم في عمق التخدير، وتنظيم الحرارة قبل العملية، والوقاية من التلوث المتقاطع لتقديم إجراء تشغيل قياسي يمكن تكراره وسهل النقل في MCAO، مما يضع أساسا قويا للاتساق بين المختبرات وقابلية المقارنة بين الدراسات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة والإشراف على التجربة من قبل لجنة التجارب المؤسسية للحيوانات ورعاية الحيوانات التجريبية في جامعة كابيتال الطبية. جميع البروتوكولات امتثلت لدليل NIH لرعاية واستخدام الحيوانات المخبرية (منشورات NIH 80-23، مراجعة 1996)، وتتطلب معدات معقمة وتقنيات معقمة.

1. اختيار الحيوانات

  1. استخدم ذكور فئران سبراج-داولي (بعمر 6–8 أسابيع، ووزنها 240–270 جم) تم الحصول عليها من مورد معتمد للحيوانات المخبرية (رقم الرخصة: SCXK (بكين) 2021-0011) لتأسيس نموذج MCAO.
  2. تؤوي الحيوانات بشكل تقليدي مع الطعام والماء بإجازة؛ جميع الإجراءات اتبعت مدونة الأخلاقيات الدولية.
  3. استخدم المعايير التالية بناء على وزن جسم الحيوان لاختيار حجم الخيط لضمان انسجام مستمر:
    - 220–250 جم: قطر 0.33–0.35 مم
    - 250–280 جم: 0.35–0.38 مم قطر
    - 280–310 جم: 0.38–0.40 مم قطر
    ملاحظة: تأخذ هذه المواصفات في الاعتبار الزيادات المرتبطة بالعمر في قطر الأوعية وتقلل من حدوث الالتهاب الهوكي الهوكي أو الانسداد غير الكامل13.

2. حجم العينة

  1. احسب حجم العينة باستخدام برنامج حساب حجم العينة. استنادا إلى بيانات أولية تظهر حجم احتشام متوقع بنسبة 35٪ ± 10٪ (متوسط ± SD) في مجموعة MCAO مقابل 0٪ ± 2٪ في مجموعة SHAM، تقدير حجم التأثير (د) كوهين. بالنسبة لاختبار مان-ويتني U ذو الذيلين (بديل غير معلمي لاختبار t)، مع α = 0.05 والقدرة (1-β) = 0.80، احسب الحد الأدنى لحجم العينة.
    ملاحظة: قدر حجم التأثير ب 3.5 وحجم العينة الأدنى 6 حيوانات لكل مجموعة.
  2. لأخذ الوفيات المتوقعة (12.5٪) ومعدل الاستبعاد (5–10٪) في الاعتبار، أدرج 24 فأرا في مجموعة MCAO و6 فئران في مجموعة SHAM، مما يوفر طاقة كافية (>0.90) للنقطة النهائية الأساسية (حجم الاحتضام عند 24 ساعة).

3. معايير الإدراج والاستبعاد

  1. يشمل الحيوانات إذا استوفرت المعايير التالية: (1) ذكور فئران سبراج-داولي، 240–270 جرام، عمرهم 6–8 أسابيع؛ (2) غياب عجز عصبي موجود مسبقا (الدرجة العصبية قبل العملية = 0); (3) تحفيز التخدير بنجاح دون مضاعفات.
  2. استبعد الحيوانات من التحليل إذا أظهرت: (1) نزيف تحت عنكبوتية (SAH) واضح عند التشريح؛ (2) الوفاة المبكرة (<24 ساعة بعد إعادة التروية) غير مرتبطة بالتدخل التجريبي؛ (3) فشل في الإغلاق (الدرجة العصبية = 0 وغياب الانقسام المعرف ب TTC); (4) الفشل الجراحي التقني (مثل تمزق CCA).
    ملاحظة: تم تحديد هذه المعايير مسبقا قبل بدء الدراسة لتقليل التحيز في الاختيار.
  3. سياسة استبدال الحيوانات: استبدال الحيوانات فقط التي تم استبعادها بسبب فشل جراحي تقني أو وفاة أثناء العملية للحفاظ على القوة الإحصائية. لا تستبدل الحيوانات بنمذجة غير ناجحة (فشل في الإخراج)، بل قم بالإبلاغ عنها كجزء من حساب معدل النجاح لتجنب تقليل التباين بشكل مصطنع.

4. التحضيرات قبل الجراحة

  1. جهز أدوات معقمة، وخيط معقم، وحقل مغطى.
  2. لا يشترط الصيام الروتيني؛ عند الضرورة، حدد مدة الصيام إلى 2–4 ساعات. تحفز التخدير باستخدام الإيزوفلوران (3–4٪) وحافظ عليه عند 1.5–2٪ في 30–40٪ O₂ أثناء الإجراء. تأكد من عمق التخدير بفقدان رد الفعل التصحيحي وضغط إصبع القدم.
  3. حافظ على درجة حرارة الجسم عند 37 ± 0.5 درجة مئوية باستخدام وسادة تدفئة يتم التحكم بها مع مراقبة درجة الحرارة المستقيمة.
  4. احلق الرقبة وفروة الرأس، ثم نظف المنطقة بالبوفيدون-يود، ثم 70٪ إيثانول.
  5. أعط البوبرينورفين (0.05 ملغ/كغ، تحت الجلد) قبل الجراحة 30 دقيقة وكل 12 ساعة بعد العملية لمدة 48 ساعة، أو ميلوكسيكام (1 ملغ/كغ، تحت الجلد) مرة واحدة يوميا لمدة 3 أيامو16. تقييم الألم من خلال مراقبة سلوك العناية بالعناية، ووضعية الجسم، والنشاط العفوي؛ قدم مسكنات إضافية إذا استمرت علامات الانزعاج.

5. انسداد MCA

  1. ضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهرية مع تمديد الرأس برفق لكشف الرقبة البطنية.
  2. قم بعمل شق في منتصف الرقبة (1.5–2.0 سم) باستخدام مقص القزحية.
  3. يتم فصل عضلات القص وعضلة الأومو هيويد بشكل واضح باستخدام ملقط منحني لكشف انقسام الشريان السباتي المشترك الأيسر (CCA).
  4. قم بربط الشريان السباتي الخارجي (ECA) من الخلف بخيط حرير دائم 4-0 وبالقرب منه بربط مؤقت. قم بإنشاء شق صغير بين رباطي ECA باستخدام المقص المجهري.
  5. قم بإغلاق مؤقت للشرايين السباتي الخارجي (ICA) باستخدام مشابك الأوعية الدموية الدقيقة (ضغط 60 جرام).
  6. أدخل خيط أحادي مغطى بالسيليكون بحجم 4-0 (قطر 0.35–0.40 مم) عبر شق ECA. تقدمها بالتراجع إلى CCA، ثم أعد توجيهها إلى ICA بعد تقسيم CCA.
    ملاحظة: تأكد من دخول الخيط إلى ال ICA باتجاه قاعدة القحفية، وليس الشريان الجناحية الحنكية (PPA) الذي يتفرع جانبا. إذا واجه مقاومة عند <10 مم، اسحب الخيط، وقم بتدوير رأس الحيوان 30° نحو الجانب المقابل، ثم أعد التقدم لإعادة توجيه ما وراء مصدر PPA.
  7. تقدم الخيط بمقدار 18–20 مم من انقسام CCA حتى تشير مقاومة طفيفة إلى انسداد أصل MCA. تحقق من العمق باستخدام الخط المرجعي المحدد مسبقا على الخيط (موضوع على بعد 2 مم قريبا من سدادة السيليكون)، والمقاس باستخدام كاليبر من نقطة إدخال الجذع في ECA. حرر مشبك CCA بمجرد أن يصبح الخيط في مكانه.

6. إعادة التروية

  1. بعد 60 دقيقة من الإغلاق، أعد فتح الشق وقم بفك رباط ECA المؤقت.
  2. اسحب الخيط بلطف حتى يتجاوز طرفه جذع ECA، مما يعيد تدفق الدم. ضع رباطا دائما قريبا من الجذع فورا لمنع النزيف الخلفي. أغلق الجرح على طبقات.
  3. انقل الفأر إلى قفص تعافي دافئ للمراقبة المستمرة.

7. جراحة الوهم

  1. جهز الحيوان باتباع نفس الإجراء الموضح أعلاه لعلاج MCAO (الصيام، التخدير، التحكم في درجة الحرارة، التدشين المعقم).
  2. قم بإجراء شق عنق الرحم والتعرض لتشعب CCA كما ذكر أعلاه.
  3. تشريح وكشف الوعاء. لا تدخل الخيط.
  4. دع الشرايين تبقى براءة اختراع؛ لا تسببوا في نقص التروية الدماغية.
  5. أغلق الشق على طبقات بعد 10 دقائق من التعرض. انقل الحيوان إلى قفص تعافي دافئ للمراقبة.

8. نتائج الأعصاب بعد العملية

  1. التقييم عند 24 ساعة و72 ساعة بعد إعادة التروية، مباشرة قبل التضحية لقياس حجم الاحتشاء.
  2. اعتاد الحيوان في غرفة هادئة على درجة حرارة 25 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  3. اجعل محققين مستقلين غير مبالين بتوزيع المجموعات. اجعل كل محقق يسجل النتائج على أوراق منفصلة دون استشارة؛ أي فرق بين التقييمين ≥نقطة واحدة يؤدي إلى إعادة تقييم.
  4. المقاييس (حسب ترتيب الإعطاء): أداء تقييم زي-لونغا17 (الجدول 1)، بيدرسون18 (الجدول 2)، وغارسيا المعدل19 (الجدول 3)، وفقا لأحدث البروتوكولات المنشورة لمعايير متسقة.
  5. استخدم متوسط المراقبين الاثنين للتحليل الإحصائي. استبعد البيانات من أي حيوان إذا اختلفت متوسط الدرجات بنسبة >10٪ واستبدلها بموضوع جديد.

9. قياس حجم احتشاء الدماغ

  1. بعد 24 ساعة و72 ساعة بعد إعادة التروية، قم بتخدير عميق للفئران باستخدام 5٪ من الإيزوفلوران. تأكد من التخدير العميق عن طريق فقدان رد الفعل الصحيح واستجابة ضغط الأصابع، مع تنفس مستقر، قبل المتابعة.
  2. قم بإزالة الدماغ بسرعة خلال 90 ثانية من تأكيد التخدير العميق، وشطفه ب PBS البارد جدا، وقطعه إلى شرائح تاجية بقطر 2 مم باستخدام مصفوفة دماغ الفئران المبردة. أثناء التقطيع، التزم بالاحتياطات التالية
    1. حافظ على الإجراء بالكامل على التجميد عند 0–4 درجات مئوية؛ احصد الدماغ خلال 90 ثانية ووضعه مسطحا في مصفوفة مبردة مسبقا.
    2. استخدم شفرة حادة لعمل قطع واحدة ونظيفة لمقاطع تاجية دقيقة بقطر 2 مم، مع جمع كل شريحة بترتيب الروسترو-ذيلي إلى PBS بارد كالثلج.
    3. نظف المصفوفة والشفرة فورا بإيثانول بنسبة 75٪ بين الحيوانات لمنع التلوث المتبادل.
  3. بعد تسخين 2٪ من محاولة الحمل إلى 37 درجة مئوية، اغمر الشرائح بالكامل وحضنها في الظلام لمدة 20 دقيقة، مع حركتها بلطف كل 5 دقائق على 20 دقيقة.
  4. أوقف التفاعل فورا عن طريق الشطف ثلاث مرات ب PBS بدرجة حرارة 4 °C. ثم تثبيتها في 4٪ بارافورمالديهايد عند 4 درجات مئوية خلال الليل.
  5. عند 300 نقطة في البوصة، قم بتصوير جانبي كل شريحة مرة واحدة.
    1. استخدم إضاءة ثابتة على خلفية بيضاء لإزالة الظلال والانعكاسات.
    2. الشرائح المسطحة بدون تداخل، وأضف شريط مقياس وعلامة تعريف في كل إطار. أمسك الكاميرا بشكل عمودي على الأقسام وحافظ على البعد البؤري وتوازن اللون الأبيض ثابتين طوال الوقت.
  6. قم بقياس حجم النوبة باستخدام ImageJ.
    1. استيراد صورة 300 dpi (بتنسيق RGB) وتحويلها إلى تدرج رمادي 8-بت (صورة > النوع > 8-بت).
    2. طبق عتبة أوتسو التلقائية (الصورة > ضبط > العتبة التلقائية > اختيار أوتسو) لفصل النسيج الحادي (الأبيض) عن الأنسجة الصالحة (الأحمر).
    3. استخدم أداة الاختيار الحرة لتحديد حدود نصف الكرة الأرضية من نفس الجانب.
    4. قس المساحة (تحليل > قياس) وسجل عدد البكسلات.
    5. احسب حجم الفتحة: Σ (مساحة الانسداد × سمك الشريحة [2 مم]) × (حجم نصف الكرة المقابل/حجم نصف الكرة المقابل)، معبرا عنه كنسبة مئوية من نصف الكرة المقابل.

10. التحليل الإحصائي

  1. قدم البيانات كمتوسط ± انحراف معياري (SD) أو متوسط [نطاق رباعي] حسب الحاجة.
  2. قم بإجراء مقارنات بين المجموعات باستخدام اختبار t الطالب غير المقترن أو اختبار مان-ويتني U للبيانات غير الموزعة بشكل طبيعي.
  3. اضبط الدلالة الإحصائية عند P < 0.05. قم بإجراء جميع التحليلات باستخدام برنامج تحليل إحصائي مناسب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم تخصيص الحيوانات عشوائيا إلى مجموعات بقاء بعد إعادة التروية لمدة 24 ساعة (n = 10) أو 72 ساعة (n = 10) لصبغ TTC النهائي. خضع 4 فئران إضافية لعلاج MCAO لكنها توفيت قبل نقطة النهاية المجدولة (معدل الوفيات 12.5٪). تكونت مجموعة SHAM من n = 6. وبالتالي، بلغ إجمالي عدد الحيوانات المستخدمة 30 (24 MCAO + 6 SHAM).

خضعت الفئران لعملية MCAO لمدة 60 دقيقة لتحفيز نقص التروية الدماغي (الشكل 1). بدأ إعادة التروية عن طريق إزالة الخيط داخل اللمعة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

من المهم توضيح أن الهدف الأساسي من هذه الدراسة كان التوحيد المنهجي وليس الاكتشاف البيولوجي. يعد تطوير بروتوكول MCAO موحد حيويا لتقليل التنوع بين المختبرات وتعزيز قابلية التكرار في أبحاث السكتة الدماغية الإقفاري. يعزز هذا البروتوكول الشفافية الإجرائية من خلال تدابير مراقبة جودة صارمة ويعالج النواقص التقنية الشائعة في نمذجة MCAO، بما في ذلك إدخال الخيوط الموحد، وتنظيم درجة الحرارة، والمعالجة النسيجة.

بينما يمثل الانخفاض الملحوظ في حجم الاحتشاء من 24 ساعة إلى 72 ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

وقد دعم هذا العمل مؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (رقم 7232269) وصندوق تطوير علوم وتكنولوجيا الطب الصيني التقليدي في بكين (رقم JJ-2023-93).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2% TTC staining solutionBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.T817025 g/bottle, ≥98 % purity
4% PFABeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.P1110500 mL ready-to-use
Absorbable sutureShandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.VCP345H5-0 Vicryl
Adson forcepsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-110101×2 teeth, 12 cm
Dumont curved forcepsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-1105211 cm length, 0.05 mm fine tip
Feedback heating padShenzhen Reward Life Science & Technology Co., Ltd.6900137 ± 0.3 °C closed loop
ImageJNational Institutes of Healthversion 1.53k
Iris scissorsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-14060Curved tip, 10 cm
Micro-vascular clipsShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.JD-160101.5 cm curved clip
Non-absorbable silkShanghai Pudong Jin-Huan Medical Products Co., Ltd.S-23046-0 Black silk thread
PASS software NCSS, LLC, Kaysville, UT, USAversion 15.0 Sample size calculation software 
Rat brain matrixShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.686102 mm coronal slots
Silicone-coated nylon filamentShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.60-12500.35 mm OD, 30 mm silicone tip, EO-sterile
Small-animal anesthesia machineShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.R500IEIsoflurane vaporizer, induction chamber & mask included
SPSSIBM Corp., Armonk, NY, USAversion 26.0 Statistical analysis software
Vannas micro-scissorsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-14058Curved tip, 8 cm

المراجع

  1. Walter, J., Oyere, O., Mayowa, O., Sonal, S. Stroke: a global response is needed. Bull World Health Organ. 94 (9), 1816-1834 (2016).
  2. Mira, K., Andreas, L. Global burden of stroke. Semin Neurol. 38 (2), 1649-2211 (2018).
  3. Stephen, J. M., David, J. W. Stroke: causes and clinical features. Medicine (Abingdon). 48 (9), 1561-1566 (2020).
  4. Narayanaswamy, V. Ischemic stroke: new insights from risk factors, mechanisms and outcomes. J Cardiovasc Dev Dis. 10 (12), 472(2023).
  5. Chao, L., Tao, S., Chen, J. Recent advances in nanomedicines for the treatment of ischemic stroke. Acta Pharm Sin B. 11 (7), 1767-1788 (2021).
  6. Marcelo, F., Leonardo, E. V., Brigitta, B., Elisabetta, P., Luciano, S. The nrf2 pathway in ischemic stroke: a review. Molecules. 26 (16), 5001(2021).
  7. Melissa, T. -L., Claire, L. G. A review of experimental models of focal cerebral ischemia focusing on the middle cerebral artery occlusion model. F1000Res. 10, 51752(2021).
  8. Lang, Z., et al. Animal models of ischemic stroke with different forms of middle cerebral artery occlusion. Brain Sci. 13 (7), 1007(2023).
  9. Rosalia, C., Rosanna, D. P., Emanuela, E., Salvatore, C. Middle cerebral artery occlusion by an intraluminal suture method. Methods Mol Biol. 1727, 1393-1401 (2018).
  10. Afshin, A. D., et al. Transfemoral approach to induce transient middle cerebral artery occlusion in rats: the use of commercially available endovascular wires. Neurocrit Care. 32 (2), 575-585 (2020).
  11. Seunghoon, L., et al. Middle cerebral artery occlusion methods in rat versus mouse models of transient focal cerebral ischemic stroke. Neural Regen Res. 9 (7), 1315-1318 (2014).
  12. Kitti, T., Nipon, C., Siripron, C. C. The effects of hyperbaric oxygen therapy on the brain with middle cerebral artery occlusion. J Cell Physiol. 236 (3), 21677-21694 (2021).
  13. Gary, P. M., et al. A comparative study of variables influencing ischemic injury in the longa and koizumi methods of intraluminal filament middle cerebral artery occlusion in mice. PLoS One. 11 (2), e0148503(2016).
  14. J, S., et al. Strain differences in intraluminal thread model of middle cerebral artery occlusion in rats. Physiol Res. 68 (1), 933937-933948 (2019).
  15. Chang, L., Xiaoqing, W., Yueru, Z., Songli, Y., Xiangshi, T. Study on the efficacy and pharmacological mechanism of innate immune sting pathway regulators in the treatment of ischemic brain injury. Pharmaceuticals. 18 (12), 1775(2025).
  16. Pei-Kang, L., et al. Neuroprotective effects of low-dose G-CSF plus meloxicam in a rat model of anterior ischemic optic neuropathy. Sci Rep. 10 (1), 66977(2020).
  17. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 1184-1191 (1989).
  18. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 1472-1476 (1986).
  19. David, W. H., et al. Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 30 (8), 1412-1431 (2010).
  20. Kudret, T., Raghu, V., Kurt, A. S., Robert, J. D. Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice. Neurosurgery. 56 (1 Suppl), 196-200 (2005).
  21. Ilya, L. G., et al. MRI guiding of the middle cerebral artery occlusion in rats aimed to improve stroke modeling. Transl Stroke Res. 9 (4), 12417-12425 (2018).
  22. Nathalie, P. D. S., et al. The IMPROVE guidelines (Ischaemia models: procedural refinements of in vivo experiments). J Cereb Blood Flow Metab. 37 (11), 17703488-17703517 (2017).
  23. Chintamani, N. J., Swatantra, K. J., Puvvada, S. R. M. An optimized triphenyltetrazolium chloride method for identification of cerebral infarcts. Brain Res Protoc. 13 (1), 1011-1017 (2004).
  24. Huaxin, S., Lihong, D., Xuan, L., Zhong, Y., Wei, Y. A modified transcranial middle cerebral artery occlusion model to study stroke outcomes in aged mice. J Vis Exp. (195), e65345(2023).
  25. Maria, S., et al. Modified middle cerebral artery occlusion model provides detailed intraoperative cerebral blood flow registration and improves neurobehavioral evaluation. J Neurosci Methods. 358, 109179(2021).
  26. Clemens, J. S. Ischemic stroke: experimental models and reality. Acta Neuropathol. 133 (2), 245-261 (2017).
  27. Bharti, M., Louise, D. M. Sexual dimorphism in ischemic stroke: lessons from the laboratory. Womens Health (Lond). 7 (3), 2222-2239 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

234 234 JoVE
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.