يوضح هذا البروتوكول طريقة لإنشاء جروح دائرية كاملة السماكة في الفئران وتعزيز شفاءها باستخدام رقعة نحاسية مرنة ترسل مجالا كهرومغناطيسيا منبضا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
يوضح هذا البروتوكول طريقة لإنشاء جروح دائرية كاملة السماكة في الفئران وتعزيز شفاءها باستخدام رقعة نحاسية مرنة ترسل مجالا كهرومغناطيسيا منبضا.
تشكل الجروح الجلدية المزمنة والواسعة تحديات سريرية كبيرة بسبب تأخر الشفاء وارتفاع خطر العدوى. العلاج بالمجال الكهرومغناطيسي النابض (PEMF) هو نهج غير جراحي يمكن أن يعزز إصلاح الأنسجة. تصف هذه الدراسة بروتوكول نموذج ملفوف الجرذان القابل للتكرار باستخدام رقعة لفائف نحاسية مطبوعة مرنة متصلة بوحدة تحكم PCB مخصصة لتوفير تحفيز PEMF موضعي للجروح الظهرية كاملة السماكة. كان الجرح المقابل يعمل كوسيلة تحكم غير معالجة. تم تقييم تقدم الشفاء من خلال التصوير الفوتوغرافي المنتظم وقياسات منطقة الجرح. يوفر البروتوكول نظاما عمليا وقابلا للتكيف لتقييم وتحسين العلاجات القائمة على PEMF في الجسم الحي عبر مختلف الحالات، مع التركيز على التطبيق الموضعي وتعديل المعلمات في الطب التجديدي. استند اختيار المعلمات إلى فحص CCK-8 المتعامد لانتشار الأرومات الليفية اختبر 0.25-1.3 مللي ترن، 10-40 هرتز، و30-90 دقيقة/يوم؛ حدد تحليل التأثير الرئيسي مستويات 1.3 mT، 30 هرتز، و60 دقيقة/يوم كأفضل مستويات، والتي تم اعتمادها للاختبار الحي .
تعد الجروح الجلدية المزمنة (مثل قرحة السكري) مصدر قلق صحي متزايد، وغالبا ما تؤدي إلى ضعف الشفاء أو العدوى أو البتر1. العلاجات التقليدية قد تكون طويلة الأمد ومكلفة، مما يدفع الاهتمام بالعلاجات المساعدة التي يمكن أن تسرع إصلاح الأنسجة2. العلاج بالمجال الكهرومغناطيسي هو أحد هذه الأساليب، وهو غير جراحي وأظهر تأثيرات مؤيدة للشفاء في كل من البيئات ما قبل السريرية والسريرية2،3،4،5. الحقول الكهرومغناطيسية النبضية (PEMFs) في نطاق التردد المنخفض جدا (~1-100 هرتز) يمكن أن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على جميع إجراءات الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في جامعة جيانغنان (JN. No2025-0630S0360-915[408]). طبقنا البروتوكول باستخدام ذكور فئران SD (عمرهم 6-8 أسابيع، حوالي 200-250 جرام). قبل التجارب، كانت الفئران تعيش بشكل فردي مع وصول مجاني إلى الطعام والماء، مع الحفاظ عليها على دورة ضوئية وظلامية مدتها 12 ساعة، وفقا لدليل العناية واستخدام الحيوانات المختبرية.
1. خلق جروح استئصالية كاملة السماكة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في هذا النموذج الكامل السماكة لجروح الفئران، أدى علاج PEMF اليومي عبر رقعة لفائف مرنة إلى إغلاق الجرح بشكل أسرع بكثير مقارنة بالمراقبين. لتقييم التأثير بدقة، تم تقسيم الفئران إلى ثلاث مجموعات بناء على التصميم التجريبي الموضح في قسم البروتوكول: مجموعة ضابطة داخل الشخص (حيث كان لكل فأر جرح معالج ب PEMF وجرح آخر غير معالج، تم جمع البيانات للتحليل)، ومجموعة تحكم وهمية (PATCH: جرح مغطى بملف غير مدعوم)، ومجموعة ضابطة غير معالجة (CTRL: العناية القياسية بالجروح فقط). الشكل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تشمل الخطوات الحاسمة إنشاء جروح كاملة السماكة متماثلة، وضمان استقرار رقعة الملف فوق حاجز معقم بدون فجوات، والحفاظ على تعرض يومي ثابت؛ يمكن أن تقلل الانحرافات من التوصيل الميداني وتزيد من التفاوت في نتائج الشفاء.
لهذا العمل عدة قيود يجب أخذها في الاعتبار عند تفسير النتائج وتقييم الإمكانات التحويلية. أولا، تم إثبات البروتوكول في فئران SD الذكور الأصحاء (6-8 أسابيع، 200-250 جرام) الذين يعانون من جروح استئصالية حادة، وبالتالي لا يعكس بالكامل بيئات الشفاء المتعثرة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن المؤلفون أنه لا توجد لديهم تضارب مصالح أو مصالح مالية في المنتجات أو الأجهزة المستخدمة في هذه الدراسة. الجهاز المخصص لنظام PEMF الموصوف لأغراض البحث وليس مرتبطا تجاريا.
نشكر الدكتور تشانغ على النقاشات العميقة والدكتورة فو على مساعدتها في رعاية الحيوانات وعلم الأنسجة. وقد دعم هذا العمل (2022YFC3006200) برنامج البحث والتطوير الوطني للمفاتيح في الصين. كما يشكر المؤلفون موظفي منشأة الحيوانات في كلية ووكسي للطب بجامعة جيانغنان على دعمهم خلال التجارب الحية المحيطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ألواح زراعة الخلايا ذات 96 بئر | باي دي | H908002 | لاختبار CCK-8 |
| شرائح المجهر المعالجة | سيتوتيستو | الرقم 80312-3161 | المعدات ل H& تلوين E/Masson |
| مسكن الألم (حقن هيدروكلوريد الليدوكائين) | هوامو | 70011657 | مسكن الأفيون، 4 ملغ/كغ (للتحكم في الألم) |
| جهاز التخدير | RWD علوم الحياة (شنتشن، كونواثن) | R520-Iso | جهاز تبخير إيزوفلوران مع إمداد الأكسجين |
| آلة التلوين الكيميائية المناعية الآلية | لايكا | 21.2201 | التلوين المناعي الكيميائي الآلي |
| ثقب الخزعة (20 مم) | إنتيجرا ميلتكس | #33-37 | ثقب جلدي دائري، قطره 2 سم |
| الكاميرا، الرقمية | هواوي ميت 70 برو | لا يوجد | ≥ 12 ميجابكسل لتصوير الجروح |
| الأجسام المضادة CD31 | أبكام | ab182981 | علامة البطانة لالتهاب الرحم الهوائي (الشكل 4B) |
| الجسم المضاد CD34 | أبكام | ab81289 | علامة البطانة لالتهاب الرحم الهوائي (الشكل 4B) |
| مجموعة عد الخلايا-8 (CCK-8) | بايوشارب | BS350B | يستخدم لفحص معلمات PEMF في المختبر (OD450) |
| طبق زراعة الخلايا (10 سم) | باي دي | H802004 | طبق زراعة الأنسجة بطول 10 سم (100 مم) لزراعة الأرواح الليفية |
| وسط زراعة الخلايا (مثل DMEM + FBS) | باي دي | L100-500 | لزراعة الأرومات الليفية في شاشة CCK-8 |
| حاضنة ثاني أكسيد الكربون | الترمو | BB150-2TCS-L | لزراعة الأرومات الليفية |
| لولب، نحاس مرن | مصنع خصيصا (داخليا) | لا يوجد | ملف مطبوع حلزوني (قطر 5 سم، بولي إيميد) |
| لوحة التحكم (مولد PEMF) | تصميم مخصص (تصميم داخلي) | لا يوجد | لوحة دوائر مخصصة تشغل ملف عند 30 هرتز، ~1.3 mT |
| مقص الشعر الكهربائي | وال أو أوستر (العناية بالحيوانات الأليفة) | موديل 9160 | ماكينة تنظيف الحيوانات لحلاقة الفرو |
| طوق إليزابيثي (قارض) | MukeBio | MK-EC-01 | منع تداخل الجرح |
| محطة التضمين | إبريديا هيستوستار | A81000002 | المعالجة لعلم الأنسجة (إذا تم إجرائها) |
| قناع الوجه | فيدينغ | V531596 | الحفاظ على التخدير |
| الأرومات الليفية (خط الخلية L929) | بروسيل | CL-0137 | الخلايا المستخدمة في فحص تكاثر CCK-8 |
| برامج محاكاة العناصر المحدودة (مثل COMSOL Multiphysics) | كومسول | CM010004 | محاكاة المجال المغناطيسي (الشكل 5B-C) |
| جبيرة شريط ألمنيوم مرنة | عزيزي | 1592 | الدعم لمنع إزاحة الملف |
| الملقط | ماجيستيك | 01625 | للتعامل مع الجلد والضمادات أثناء الجراحة |
| الهيماتوكسيلين والمواد إيوسين (H& ه) الجامعة للصباغة والختم التلقائي | DRS-Prisma-P+FILM | 61770249 | قابل للاستهلاك في التلوين الروتيني للنسيج |
| برنامج تحليل الصور | المعاهد الوطنية للصحة | الإصدار 1.54 | لقياس مساحة الجرح (مثل ImageJ) |
| برنامج تحليل الصور | المعاهد الوطنية للصحة | الإصدار 1.54 | لقياس مساحة الجرح (مثل ImageJ) |
| غرفة الحث | RWD علوم الحياة (شنتشن، كونواثن) | 802-00132-00 | تحفيز التخدير بالإيزوفلوران |
| كاميرا التصوير الحراري بالأشعة تحت الحمراء | HIKMICRO | H11 | درجة حرارة سطح ملف المراقبة (الشكل 5A) |
| مطهر اليود بوفيدون 10٪ | هينوت | لا يوجد | مطهر الجلد (يودوفور) |
| إيزوفلوران | RWD علوم الحياة (شنتشن، كونواثن) | 20037015 | مخدر استنشاق (درجة USP) |
| حقن ليدوكائين 10٪ | سانما | لا يوجد | لتخفيف الألم بعد العملية |
| مجموعة التلوين ثلاثية الألوان الخاصة بماسون | باسو | C250202 | مادة استهلاكية لتصوير الكولاجين/ECM |
| علامة الجلد الطبية والمسطرة | تونداوس | لا يوجد | تضمين الحجم في صور الجروح |
| قارئ الميكروبليت | الترمو | A51119500C | لقياس OD450 في اختبار CCK-8 |
| ميكروتوم | إبريديا HM 340E | 23900670 | التقسيم لعلم الأنسجة/التحليل الهوائي (إذا تم إجراءه) |
| مثبت نسيج متعدد الفورمالديهايد | السيرة الذاتية المشاركة | SB-C009 | تثبيت عينات الأنسجة الحيوانية |
| قفص سكن الفئران | فنغ تشياو | CP-JM | قفص سكن الفئران القياسي للسكن الفردي. |
| راتس، سبراج داولي (ذكر، 6&200؛ 8 أسابيع) | وي جينغيو سوتشو | SCXK2024-0004 | 200– 250 جم؛ مسكنا بشكل فردي؛ الاستخدام المعتمد من IACUC |
| المشرط | جينهوان | 35W0602 | لخلق جرح استئصالي |
| تغليف الفيلم شبه النافذ | ZD | س20189 | حاجز جرح بديل |
| برامج التحليل الإحصائي (مثل GraphPad Prism أو R) | برمجيات ماكييف | 10.6.9(890) | ANOVA ثنائي الاتجاه ومقارنات متعددة بعد الوقوع |
| الشاش المعقم | ZD | 3141626 | تضميد الجروح/الحاجز الواقي |
| ستائر جراحية معقمة | ZD | V271617 | لتغطية الحقل الجراحي بعد تجهيز الجلد |
| المقص الجراحي | ماجيستيك | 01627 | لخلق جرح استئصالي |
| الحقن والإبر | مينانك | 20193141643 | لإعطاء مسكنات تحت الجلد |
| ماسح الشرائح الكامل | 3DHISTECH | لا يوجد | المسح الرقمي للشرائح |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.