يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

توليد وتعديل جينات العضوية العنقية البشرية

731 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69617

⸱

مارس 10, 2026

 ,  ,  , 
1Department of New Biology, DGIST, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University Chilgok Hospital, 3Clinical Omics Institute, Kyungpook National University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University School of Medicine, 5New Biology Research Center, DGIST, 6Graduate Program in Biomedical Science & Engineering, DGIST

في هذه المقالة

ملخص

نقدم بروتوكولا مفصلا لتأسيس وتعديل الأعضاء العنقية البشرية وتعديلها وراثيا.

الملخص

سرطان عنق الرحم هو رابع أكثر أنواع السرطان شيوعا بين النساء وغالبا ما يؤثر على الرحم الإكتوسيرفيكس. يتميز الجسم الإكتوسيرفيكس الرحمي ببطانة ظهارة حرشفية طبقية، تتكون من خلايا قاعدية وخلايا متمايزة شبه قاعدية وفوق قاعدية. يشير التجدد الذي لوحظ بعد تخمير عنق الرحم إلى وجود نشاط قوي للخلايا الجذعية. ومع ذلك، فقد كان فهمنا لهوية وآليات تنظيم الخلايا الجذعية العنقية وعملية تحولها الخبيثة محدودا بسبب محدودية الوصول إلى أنسجة عنق الرحم ونقص الأنظمة المثلى لتقييم نشاط الخلايا الجذعية في الرحم الإectocervix. يمكن للكائنات العضوية العنقية البشرية التي تم تأسيسها مؤخرا أن تساعد في تجاوز هذه القيود وتوفر فرصا جديدة لدراسة فسيولوجيا عنق الرحم والأمراض المرضية. ومع ذلك، لا توجد طريقة موحدة لعزل وتأسيس الأعضاء العنقية البشرية. هنا، نصف طريقة لتأسيس الأعضاء الخارجية البشرية. على وجه التحديد، نقدم بروتوكولا لعزل الخلايا المفردة من الظهارة الخارجية البشرية. من خلال حضانة نسيج عنق الرحم في محلول إنزيمي محسن، نقوم بتقشير ظهارة عنق الرحم لتعظيم إنتاج الخلايا مع تقليل تلوث الخلايا الليفية. نحدد أيضا شروط زراعة الأعضاء العنقية البشرية باستخدام تركيبة وسط محسنة. بالإضافة إلى ذلك، نشرح إجراءات مرور وتعديل الأعضاء العنقية وجينيا. يوفر هذا البروتوكول نهجا عالي الكفاءة لتأسيس الأعضاء العنقية البشرية واستخدامها لدراسة الخلايا الجذعية والأمراض العنقية.

المقدمة

إكتوسيرفيكس الرحمي هو الموقع الأكثر شيوعا لسرطان عنق الرحم 1,2. على الرغم من أن سرطان عنق الرحم قد انخفض بعد إدخال لقاح فيروس الورم الحليمي البشري (HPV) في الدول المتقدمة، إلا أنه لا يزال رابع أكثر السرطان شيوعابين النساء على مستوى العالم 3,4. أيضا، تستمر معدلات الإصابة بالآفات ما قبل سرطانية عنق الرحم في الارتفاع في بعض الدول 5,6. بينما تتراجع آفة الظهارة الحرشفية منخفضة الدرجة (LSIL) من تلقاء نفسها، فإن الآفة الحرشفية داخل الظهارة عالية الدرجة تحمل خطر التقدم إلى السرطان الغازي وعادة ما تتطلب تدخلا جراحيا مثل الاستئصال أو التقطيع. يمكن أن تؤدي هذه الإجراءات إلى قصر حجم الإكتوسيرفيكس وزيادة خطر الإجهاض أو الولادة المبكرة 7,8. يمكن أن يساعد فهم أعمق لبيولوجيا عنق الرحم، إلى جانب تطوير العلاج التجديدي، في معالجة هذه التحديات، لكنه يتطلب أنظمة نماذج قوية وذات صلة فسيولوجية.

لقد طورت النماذج الحيوانية بشكل كبير فهمنا لتوازن عنق الرحم، وآليات الأمراض، واستراتيجيات العلاج. ومع ذلك، فإن اختلافاتها الجوهرية عن علم الأحياء البشري وعلم الأمراض تحد من قيمتها الانتقالية. كبديل، ظهرت العضوية كمنصات قوية لنمذجة بيولوجيا الإنسان وأمراضه. العضويات هي هياكل دقيقة ثلاثية الأبعاد مشتقة من الخلايا الجذعية تعيد تلخيص الأنسجة والتوقيعات الجزيئية لأنسجتها الأصلية 9,10,11. تم استخدامها لتحديد خلايا جذعية متنوعة للأنسجة البشرية عبر عدة أنسجة، بما في ذلك القصبة الهوائية، المريء، وعنق الرحم 12,13,14. علاوة على ذلك، تمكن الأعضاء من التلاعب الجيني، مما يسمح بنمذجة مسببات أمراض متنوعة، بما في ذلك السرطانات والتليف 15,16,17. بالإضافة إلى ذلك، تعد الأعضاء منصة فعالة لفحص فعالية وسمية الأدوية أو العلاجات الخلوية18، 19، 20، 21.

مؤخرا، أنشأت مجموعتان مستقلتان أنظمة عضوية عنق الرحم البشرية22,23. وبناء على هذه التقدمات، قمنا بتحسين كفاءة زراعة العضوية العنقية بشكل كبير وحددنا الخلايا الجذعية البشرية في عنق الرحم13. علاوة على ذلك، من خلال تقشير الظهارة العنقية، قمنا بتقليل احتواء الأرومات الليفية الموجودة تحت الظهارة العنقية. من خلال استخدام الأعضاء العنقية مع التلاعب الجيني، كشفنا دور المستقلبات الميكروبية ومساراتها في الحفاظ على توازن عنق الرحم ومنع تقدم السرطان قبل السرطان. لذا، فإن بروتوكول موحد ومحسن لتوليد وصيانة وتعديل وراثي للعضويات العنقية سيكون أداة أساسية لدراسة علم الأحياء والأمراض العنقية.

في هذا المقال، نقدم بروتوكولا مفصلا ومحسنا لتوليد ومرور الأعضاء العنقية البشرية. كما وصفنا بروتوكولا للتلاعب الجيني بهم عبر التقارب الكهربائي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على عزل الخلايا وزراعة الأعضاء باستخدام أنسجة عنق الرحم البشرية وأجريت وفقا لجميع اللوائح الأخلاقية ذات الصلة من قبل مجالس المراجعة الداخلية في DGIST، دايغو، كوريا، ومستشفى تشيلغوك كيونغبوك الوطني الجامعي، كيونغسانغبوك-دو، كوريا (DGIST-20210401-BR-112-01 و KNUCH-2020-12-020-001). تم توفير الأنسجة الخارجية للبشر من قبل قسم التوليد وأمراض النساء في مستشفى تشيلغوك كيونغبوك الوطني الجامعي. تم الحصول على أنسجة عنق الرحم السليمة من مرضى خضعوا لاستئصال الرحم بالمنظار الكامل بسبب أمراض الرحم الحميدة. تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المرضى.

1. العزل الخلوي الواحد من الأنسجة الخارجية

ملاحظة: يبدأ هذا البروتوكول بعينة خزعة من الإكتوسيرفيكس البشري بحجم يقارب 5 مم × 5 مم × 5 مم (الشكل 1).

  1. ضع النسيج المخزع في طبق بتري بحجم 10 سم واغسله مرة واحدة باستخدام DPBS البارد جدا (بدون الكالسيوم والمغنيسيوم) لإزالة الدم والحطام.
    ملاحظة: تم نقل أنسجة عنق الرحم البشرية إلى المختبر خلال 3 ساعات بعد الجراحة في اختبار DMEM/F12 المتقدم البارد جدا وتمت معالجتها فور وصولها.
  2. انقل النسيج إلى أنبوب بحجم 1.5 مل يحتوي على 1 مل من محلول ديسباز (2.4 يوروم/مل) وحضن النسيج لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية مع تحريك خفيف على مدور الأنبوب (20 دورة في الدقيقة).
    ملاحظة: تم تحضير محلول ديسبازي (2.4 وحدة وحدة حركة/مل) حديثا قبل الاستخدام مباشرة عن طريق إذابة مسحوق ديسبازي إلى تركيز العمل في DPBS البارد جدا.
  3. انقل العينة إلى طبق بتري جديد بحجم 10 سم. افصل بعناية الطبقة الظهارية البيضاء عن بقية الأنسجة باستخدام الملقط.
  4. استخدم ملقط حاد لتقشير سطح الظهارة بلطف كغطاء سليم. انقل فورا الطبقة الظهارية المعزولة إلى أنبوب مخروطي بحجم 50 مل محفوظ على الثلج.
    ملاحظة: إذا لم يكن من السهل تقشير الظهارة السطحية، قم بكشط السطح باستخدام ملقط غير حاد.
  5. أضف 1 مل من محلول تفكيك معتمد على التربسين المؤتلف إلى العينة المقشرة أو المكشوطة وانقل الخليط بالكامل إلى أنبوب مخروطي بحجم 50 مل.
  6. احتفظ بالأنسجة المتبقية من الخطوة السابقة في الأنبوب المخروطي الآخر بحجم 50 مل.
  7. حضن أنبوب مخروطي بحجم 50 مل يحتوي على ظهارة عنق الرحم عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق مع تحريك خفيف على دوار الأنبوب (20 دورة في الدقيقة).
  8. أضف 10 مل من محلول الانسداد البارد الطازج (PBS مع 2٪ مصل العجل البقري (BCS)) إلى تعليق الخلية لإيقاف التفاعل الإنزيمي.
  9. قم بجهاز الطرد المركزي للأنبوب عند 450 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. أزل السوبرناتانت بعناية وتخلص منه.
    ملاحظة: إذا لوحظ الدم بصريا في النسيج المفكك أو بدا النسيج لزجا، تابع الخطوة التالية. وإلا، انتقل إلى الخطوة 1.13.
  10. أضف 1 مل من مخزن تحليل 1X RBC و20 ميكرولتر من DNase (مخزون 10 U/μL) إلى الحبيبة. حضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لتحليل خلايا الدم الحمراء وتحليل الحمض النووي اللزج.
  11. أضف 10 مل من محلول العزل البارد (PBS مع 2٪ مصل العجل البقري (BCS)) إلى تعليق الخلية لإيقاف التفاعل الإنزيمي.
  12. قم بجهاز الطرد المركزي للأنبوب عند 450 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. أزل السوبرناتانت بعناية وتخلص منه.
  13. اغسل حبيبات الخلية بمحلول حجب بارد (PBS مع مصل عجل البقري بنسبة 2٪ (BCS)).
  14. قم بعمل الطرد المركزي في الأنبوب عند 450 × جرام لمدة 5 دقائق. أزل السوبرناتانت بعناية وتخلص منه.
  15. أعد تعليق حبيبات الخلية في 200-500 ميكرولتر من وسط زراعة العضو.
  16. عد عدد الخلايا باستخدام مقياس الهيموسيتومتر مع محلول تريبان الأزرق. العائد المتوقع للخلايا يتراوح بين 50,000 و500,000 خلية لكل عينة خزعة.

2. البذور والزراعة العضوية الخارجية

  1. أعد تعليق 500-2000 خلية صالحة في حجم نهائي يبلغ 50 ميكرولتر من وسط الزراعة العضوية (التركيب الموضح في قائمة المواد) في أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل. تم تقييم فعالية الخلية من خلال استبعاد تريبان بلو قبل البذر.
  2. أضف 50 ميكرولتر من مصفوفة الغشاء القاعدي (مثل ماتريجيل) إلى تعليق الخلية. اخلط بلطف على الثلج لتجنب تكون الفقاعات، ثم قم بتوزيع خليط 100 ميكرولتر داخل إدخال مزرعة الخلايا الموضوع في صفيحة ب 24 بئرا. تم تنفيذ جميع الإجراءات المتعلقة بالتعامل مع مصفوفة الغشاء القاعدي على الجليد أو عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمنع التجلي المبكر ما لم يذكر خلاف ذلك.
  3. حضن اللوح لمدة 20-30 دقيقة عند 37 درجة مئوية حتى يتصلب خليط مصفوفة الغشاء القاعدي.
  4. بمجرد أن يتجمد الخليط، أضف 400 ميكرولتر من وسط الزراعة العضوية إلى البئر أسفل الإدخال.
  5. قم بزراعة الأعضاء لمدة أسبوع إلى أسبوعين حتى يصل متوسط قطرها إلى 150-250 ميكرومتر (القطر الأقصى حوالي 500 ميكرومتر).
    ملاحظة: عندما تصل الأعضاء إلى الحجم المناسب وتظهر نمط التركيب المجهري المتمركز الشبيه بقشرة البصل، فكر في الانتقال إذا لزم الأمر.

3. تفكك العضويات وإعادة الزرع

  1. أضف 1 مل من محلول الديسباز (2.4 U/mL) فوق إدخال مزرعة الخلية وقم بتفكيك مصفوفة الغشاء القاعدي بلطف باستخدام ماصة.
  2. نقل خليط مصفوفة الغشاء القاعدي إلى أنبوب بسعة 15 مل وحضانه لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية.
  3. أضف 10 مل من محلول الانسداد البارد الطازج (PBS مع 2٪ مصل العجل البقري (BCS)) إلى تعليق الخلية لإيقاف التفاعل الإنزيمي.
  4. قم بجهاز الطرد المركزي للأنبوب عند 450 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  5. أزل المادة الفائقة وأعد تعليق الحبيبة في 200 ميكرولتر من TrypLE Express.
  6. حضانه لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.
  7. أضف 1 مل من محلول العزل البارد المثلج (PBS مع 2٪ مصل العجل البقري (BCS)) وامسح الماصة بلطف لتعادلية الإنزيم.
  8. قم بترشيح التعليق عبر مصفاة خلية بحجم 40 ميكرومتر للحصول على خلايا مفردة.
  9. قم بجهاز الطرد المركزي للأنبوب عند 450 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. أزل السوبرناتانت بعناية وتخلص منه.
  10. أعد تعليق حبيبات الخلية في 200-500 ميكرولتر من وسط زراعة العضو.
  11. عد عدد الخلايا باستخدام مقياس الهيموسيتومتر مع محلول تريبان الأزرق. العائد المتوقع للخلايا يتراوح بين 50,000 و500,000 خلية لكل بئر من إدخال زراعة الخلايا المكون من 24 بئرا.
  12. ثم يعيد تعليق 500-2000 خلية في 50 ميكرولتر من وسط زراعة العضوية (التركيب الموصوف في قائمة المواد). أضف 50 ميكرولتر من مصفوفة الغشاء القاعدي إلى تعليق الخلية. اخلط بلطف، وتجنب تكون الفقاعات، ووزع خليط 100 ميكرولتر داخل إدخال زراعة الخلايا الموضوع في صفيحة بسعة 24 بئرا.
  13. حضن اللوح لمدة 20-30 دقيقة عند 37 درجة مئوية حتى يتصلب خليط مصفوفة الغشاء القاعدي.
  14. بمجرد أن يتجمد الخليط بالكامل (عادة بعد 20-30 دقيقة عند 37 درجة مئوية)، أضف 400 ميكرولتر من وسط الزراعة العضوية إلى البئر أسفل الإدخال الداخلي.
  15. زراعة الأعضاء لمدة أسبوع إلى أسبوعين في وسط زراعة العضوية (التركيب الموضح في قائمة المواد) باستخدام طريقة ثلاثية الأبعاد مدمجة في المصفوفة خارج الخلية. حافظ على الزراعة عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO₂ في حاضنة مرطبة. استبدل الوسط كل يومين إلى ثلاثة أيام وراقب النمو حتى يصل متوسط قطر الأعضاء إلى 150-250 ميكرومتر.
  16. امرر العضويات للجولة التالية عندما تصل إلى الحجم المناسب وتظهر نمط التركيب المجهري المتجمع لبنى تشبه قشرة البصل إذا لزم الأمر.

4. التلاعب الجيني في العضويات العنقية البشرية عن طريق الحفر الكهربائية

ملاحظة: يعتمد هذا البروتوكول على استخدام جهاز لونزا أماكسا 4D-Nucleofector ومجموعة P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X (#V4XP-4032).

  1. بعد العزل من تعليق خلايا عنق الرحم البشرية، انقل 100,000-200,000 خلية إلى كل أنبوب بسعة 1.5 مل.
  2. قم بطرد المركزي بالأنابيب عند 450 × جرام لمدة 3 دقائق عند 4 درجات مئوية. أزل السوبرناتانت بعناية وتخلص منه.
  3. أعد تعليق حبيبات الخلية في 20 ميكرولتر من خليط محلول النووي فيكتور/مكمل من مجموعة P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X. يتم تحضير الخليط بدمج 16.4 ميكرولتر من محلول النوكليوفيكتور و3.6 ميكرولتر من المكملات لكل أنبوب.
  4. أضف 300 نانومتر من أوليغو siRNA الضابط أو المستهدف إلى كل أنبوب يحتوي على الخلايا المعلقة. اخلط بلطف عن طريق استخدام الماصات.
    ملاحظة: يجب ألا يتجاوز حجم أوليغو siRNA 2 ميكرولتر لكل أنبوب.
  5. انقل بعناية خليط النوى (20 ميكرولتر من الخلايا المعلقة في خليط محلول النوية/مكمل + حتى 2 ميكرولتر siRNA؛ إجمالي 20-22 ميكرولتر) إلى أوعية النسيج الكهربائي من مجموعة P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X.
  6. انقر بلطف على أوعية النيوكليوكوفيت لضمان تغطية العينة لأسفل الكوفيت.
  7. أغلق غطاء أوعية النيوكليوكوفيت وضعه في مثبت وحدة نووية رباعية الأبعاد مفعلة.
    ملاحظة: تأكد من التوجيه الصحيح لأوعية النيوكليوكوفيت في المثبت.
  8. ابدأ عملية النوى النوية. قم بضبط رمز النبض EA-125 لكل كوفيت باستخدام عملية الخلية الأساسية P4.
  9. بعد الانتهاء، قم بإزالة أوعية النيوكليوكوفيت بعناية من المثبت.
  10. حضن الأوعية النيوكليوفيتية في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق للسماح للخلايا بالاستقرار.
  11. افتح غطاء أوعية النيوكليوكوفيت، أضف 180 ميكرولتر من وسط زراعة العضوية المسخن مسبقا بدرجة حرارة 37 درجة مئوية إلى كل كوفيت، وانقل تعليق الخلية بلطف إلى أنبوب جديد بسعة 1.5 مل لإعادة التعليق.
  12. خذ حجما من تعليق الخلية يحتوي على 500-2000 خلية وأعيد تعليقه في وسط زراعة العضوية إلى حجم نهائي يبلغ 50 ميكرولتر.
    ملاحظة: لا تتخلص من الخلايا المتبقية من الخطوة 4.12. سيتم استخدامها في الخطوة 4.14.
  13. زراعة العضويات باتباع البروتوكول في الطريقة 2: زرع وزراعة العضوية الإكتوسيرفكس. قارن تأثيرات siRNA من خلال تقييم عوامل متنوعة، بما في ذلك عدد وحجم وبنية الأعضاء العضوية الناتجة.
  14. تخلص الخلايا المتبقية من الخطوة 4.12 إلى لوحة تثبيت منخفضة جدا بسعة 96 بئر وحضانة لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية.
  15. بعد 48 ساعة، انقل الخلايا إلى أنبوب بسعة 1.5 مل وجهاز طرد مركزي بقوة 450 × جرام لمدة 3 دقائق. تخلص من السوبرناتانت.
  16. استخدم الحبيبات الخلوية لتجارب PCR في الوقت الحقيقي لتأكيد تراجع الجينات المستهدفة وتقييم أي تغييرات في التعبير الجيني.
    ملاحظة: يجب التعامل مع جميع الأنسجة العنقية البشرية وتعليق الخلايا كمادة محتملة معدية. تنفيذ جميع الإجراءات المتعلقة بالعينات البشرية الأولية في خزانة سلامة حيوية معتمدة وفقا لممارسات BSL-2 ووفقا للوائح الأخلاقية والسلامة الحيوية المؤسسية. ارتد معدات الحماية الشخصية المناسبة (معطف مختبر، قفازات، وحماية للعين) وقم بتعقيم أسطح العمل والمعدات بعد الاستخدام بمطهر معتمد من المؤسسة. قد تسبب الكواشف الإنزيمية (مثل إنزيمات الديسباس والتفكك مثل TrypLE Express) تهيج الجلد والعين وقد تولد رذاذا أثناء الرش بالماصة؛ تجنب توليد الهباء الجوي (رذاذ)، وحافظ على تغطية الأنابيب كلما أمكن، واشطف فورا بالماء تحسبا للتلامس مع اتباع إجراءات التعرض المؤسسية وإرشادات الشركة المصنعة لنظام SDS. التخلص من جميع النفايات البيولوجية (بما في ذلك المواد التي تحتوي على المصفوفات والبلاستيك الملوث) وفقا للإرشادات المؤسسية. بالنسبة لاحتراق الرياح المغناطيسي الصناعي، اتبع تعليمات السلامة الكهربائية من الشركة المصنعة: تأكد من تثبيت الكوفيتات بشكل صحيح وإغلاق الغطاء بالكامل قبل بدء النبضات، تجنب تشغيل الجهاز بالقفازات المبللة أو بالقرب من الانسكابات، فحص الجهاز وملحقاته بحثا عن التلف، وتجنب الاتصال المباشر بأقطاب الكوفيت فور النبض.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الزراعة العضوية العنقية ثلاثية الأبعاد

تم تفكيك الأنسجة الخارجية السرفية البشرية المعزولة حديثا إلى خلايا منفردة بالترتيب المذكور أعلاه، ثم تم تغطيتها فوق إدخالات زراعة خلايا ب 24 بئرا وزرعت لتشكيل عضويات عنق الرحم كما هو موضح في هذا البروتوكول (الشكل 1). تنمو العضويات العنقية البشرية حتى قطر 500 ميكرومتر من خلايا منفردة خلال أسبوعين (الشكل 2A). معدل نجاح إنتاج الأعضاء العضوية يزيد عن...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه المخطوطة، نصف بروتوكول تأسيس وتمرير الأعضاء العنقية البشرية. كما نوفر بروتوكولا للتلاعب بها جينيا، مما يدفع دراسة علم بيولوجيا عنق الرحم وعلم الأمراض بشكل كبير. على الرغم من أننا قمنا بتحسين البروتوكول خصيصا للعضويات العنقية في الرحم البشري، إلا أنه يمكن تطبيق بروتوكولنا على أنظمة عضوية أخرى مع تعديلات طفيفة.

تشمل المعلومات الأساسية لإنشاء وتحسين زراعة العضوية تركيبة وسائط مفصلة لتحقيق أقصى كفاءة مع مكونات قليلة، بالإضافة إلى بروتوكول تفكيك خلية واحدة ي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

وقد تم دعم هذا العمل بمنحة من وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية (RS-2024-00439434 ل Y. Jeong).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مجموعة P4 للخلية الأولية 4D-Nucleofector XلونزاV4XP-4032
لوحة تثبيت فائقة الارتفاع ب 96 بئرSPL39796
مصفاة الخلايا 40 وميكرو؛ mSPL93040
أنبوب مخروطي 50 مل 500/صندوقأخصائي النطق واللغةSPL50050
أنبوب مخروطي بسعة 15 ملسارستيدت62.554.502
أنبوب كريو بيور 1.8 مل - أبيضسارستيدت72.379P
37 & درجة؛ C، 5٪ ثاني أكسيد الكربون  الحاضنةإبندورف9734IQ905476
إدخال مزرعة الخلاياSPL37024
أماكسا 4D-NucleofectorلونزاAAF-1003X
مخزن حجب (2٪ BCS في DPBS)جيبكو / ويلجينBCS: 26010074; DPBS: LB001-02
مسحوق ديسباس IIجيبكو17105041
DNAse IالإنزينوميكسM059L
ماتريجيلكورنينغ356231
مخزن تحليل RBCبيوسيسانغR2015
TrypLE Expressجيبكو12605
مخزن الغسيل (HBSS)جي بي آيBL003-1
DMEM/F12 المتقدمجيبكو12634028
مكمل جلوتاماكسجيبكو35050-061
البنسلين – ستريبتوميسينبيوويستL0022-100
هيبسجيبكو15630-080
مكمل فيتامين B27جيبكو17504044
نوجينبيبروتك118214
ن-أسيتيل-إل-سيستينسيغماA9165
Y-27632تقنيات الخلايا الستيمية72307
FGF2بيبروتك100-18B-50UG
FGF7بيبروتكAF-100-19-250UG
A83-01سيليكشمS7692 
فورسكولينسيغماF6886
نيوريغولين 1بيبروتك100-03-50UG
NGFبيبروتكAF-450-01-100UG
ر-سبوندينسينوبيولوجيا11083-HNAS
HGFبيبروتيك100-39H-250ug
FGF10بيبروتيك100-26
بيتريديش 35 مم & nbsp;SPL10035
<وصفة الوسائط العضوية>القوية
<قوي>اسم<قوي>شركة<القوة>رقم الكتالوج<قوي>تركيز
DMEM/F12 المتقدمجيبكو12634028
مكمل جلوتاماكسجيبكو35050-0611x
البنسلين – ستريبتوميسينبيوويستL0022-1001x
هيبسجيبكو15630-08010 مللي مولار
مكمل فيتامين B27جيبكو17504044مرة واحدة<بر/> بدون فيتامين أ
نوجينبيبروتك118214100 نانوغرام/مل
ن-أسيتيل-إل-سيستينسيغماA91651 مللي مولار
Y-27632تقنيات الخلايا الستيمية7230710 ميكرومتر
FGF2بيبروتك100-18B-50UG50 نانوغرام/مل
FGF7بيبروتكAF-100-19-250UG25 نانوغرام/مل
FGF10بيبروتيك100-26100 نانوغرام/مل
A83-01سيليكشمS7692 500 نانومتر
فورسكولينسيغماF688610 μ M
نيوريغولين 1بيبروتك100-03-50UG50 نانوغرام/مل
NGFبيبروتكAF-450-01-100UG20 نانوغرام/مل
ر-سبوندينسينوبيولوجيا11083-HNAS100 نانوغرام/مل
HGFبيبروتيك100-39H-250ug25 نانوغرام/مل

المراجع

  1. Singh, D., et al. Global estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2020:a baseline analysis of the WHO Global Cervical Cancer Elimination Initiative. Lancet Glob Health. 11 (2), e197-e206 (2023).
  2. Worldwide cancer data. , World Cancer Research Fund International. https://www.wcrf.org/cancer-trends/worldwide-cancer-data/ (2022).
  3. Cohen, P. A., Jhingran, A., Oaknin, A., Denny, L. Cervical cancer. Lancet. 393 (10167), 169-182 (2019).
  4. Kwak, K., Hwang, S. S. Predicted cervical cancer prevention: impact of National HPV Vaccination Program on young women in South Korea. Cancer Res Treat. 56 (3), 898-908 (2024).
  5. Kim, J., Lee, D., Son, K. B., Bae, S. The burden of cervical cancer in Korea:a population-based study. Int J Environ Res Public Health. 17 (17), 6308(2020).
  6. Chang, H. K., Seo, S. S., Myong, J. P., Yu, Y. L., Byun, S. W. Incidence and costs of cervical intraepithelial neoplasia in the Korean population. J Gynecol Oncol. 30 (3), e37(2019).
  7. Anwar, A., et al. Pregnancy outcome after electrosurgical cervical cone biopsy using Fischer cone biopsy excisor. J Matern Fetal Neonatal Med. 29 (3), 477-481 (2016).
  8. Pils, S., Eppel, W., Seemann, R., Natter, C., Ott, J. Sequential cervical length screening in pregnancies after loop excision of the transformation zone conisation: a retrospective analysis. BJOG. 121 (4), 457-462 (2014).
  9. Lee, C. J., Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. Advanced animal replacement testing strategies using stem cell and organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 107-125 (2025).
  10. Jeong, Y. Methods to identify epithelial stem cells. Organoid. 2, e24(2022).
  11. Dutta, D., Heo, I., Clevers, H. Disease modeling in stem cell-derived 3D organoid systems. Trends Mol Med. 23 (5), 393-410 (2017).
  12. Jeong, Y., et al. Identification and genetic manipulation of human and mouse oesophageal stem cells. Gut. 65 (7), 1077-1086 (2016).
  13. Myeong, J., et al. Microbial metabolites control self-renewal and precancerous progression of human cervical stem cells. Nat Commun. 16 (1), 2327(2025).
  14. Rock, J. R., et al. Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 12771-12775 (2009).
  15. Rajkumar, S., et al. Loss of ubiquitin-specific protease 11 mitigates pulmonary fibrosis in human pluripotent stem cell-derived alveolar organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 205-213 (2025).
  16. Ko, K. P., et al. Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion. Gastroenterol. 165 (3), 613-628 (2023).
  17. Choi, Y. J., et al. YAP1 regulates esophageal stem cells' self-renewal and differentiation. Biochem Biophys Res Commun. 726, 150280(2024).
  18. Oh, B., Kim, J., Kim, N., Jeong, Y. Lung cancer organoid system to evaluate the cytotoxicity of natural killer cells. Int J Stem Cells. 18 (1), 99-106 (2025).
  19. Han, K., et al. Synergistic drug combinations for cancer identified in a CRISPR screen for pairwise genetic interactions. Nat Biotechnol. 35 (5), 463-474 (2017).
  20. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NFE2L2 mutations in the chemotherapeutic response of patients with non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 26 (1), 274-281 (2020).
  21. Zhang, S., et al. Genetically defined, syngeneic organoid platform for developing combination therapies for ovarian cancer. Cancer Discov. 11 (2), 362-383 (2021).
  22. Lohmussaar, K., et al. Patient-derived organoids model cervical tissue dynamics and viral oncogenesis in cervical cancer. Cell Stem Cell. 28 (8), 1380-1396 (2021).
  23. Chumduri, C., et al. Opposing Wnt signals regulate cervical squamocolumnar homeostasis and emergence of metaplasia. Nat Cell Biol. 23 (2), 184-197 (2021).
  24. He, X. C., et al. PTEN-deficient intestinal stem cells initiate intestinal polyposis. Nat Genet. 39 (2), 189-198 (2007).
  25. Wang, S., et al. Pten deletion leads to the expansion of a prostatic stem/progenitor cell subpopulation and tumor initiation. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1480-1485 (2006).
  26. Yanagi, S., et al. Pten controls lung morphogenesis, bronchioalveolar stem cells, and onset of lung adenocarcinomas in mice. J Clin Invest. 117 (10), 2929-2940 (2007).
  27. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NRF2 and TP53 mutations in lung squamous cell carcinoma development and radiation resistance. Cancer Discov. 7 (1), 86-101 (2017).
  28. Liu, C., et al. Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression. Sci Adv. 9 (4), eadd8977(2023).
  29. Koster, S., et al. Modelling Chlamydia and HPV co-infection in patient-derived ectocervix organoids reveals distinct cellular reprogramming. Nat Commun. 13 (1), 1030(2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

عنق الرحم الخارجي البشريزراعة العضوانياتعزل الخلايا المفردةالظهارة الحرشفية المطبقةالتثقيب الكهربائينشاط الخلايا الجذعيةالصبغ المناعي الفلوريفحص العقاقير
توليد وتعديل جينات العضوية العنقية البشرية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.