مقالة منهجية

نموذج ما قبل السريري لالتهاب العزل الزليلي باستخدام نسيج سيلاني بشري خارج الجسم الحي مع وظيفة وبنية محفوظة

DOI:

10.3791/69734

⸱

مارس 20, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Emergency Medicine, University of Iowa Health Care, 2Interdisciplinary Graduate Program in Immunology, University of Iowa, 3Department of Orthopedics and Rehabilitation, University of Iowa Health Care, 4Carver College of Medicine, University of Iowa, 5Office of Research and Development, Iowa City Veterans Affairs Health Care System, 6Department of Internal Medicine, University of Iowa Health Care, 7Iowa State University, 8Department of Veterinary Biosciences, Ohio State University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

طورنا نظام ترانسبول بشري خارج الجسم قادر على تقييم التغيرات الالتهابية الحادة والمعدية والبنيوية في السينوفيوم.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التهاب المفاصل هو حالة التهابية داخل المفاصل تؤدي إلى تلف الغضروف والألم وفقدان الحركة. تظهر التطورات الحديثة في أبحاث التهاب المفاصل بشكل خاص أن كبسولة المفصل (مثل السينوفيوم) مصدر مهم لهذا الالتهاب، لكن لا توجد نماذج بشرية تحاكي البنية الزللية الأساسية. ولمعالجة ذلك، تم إنشاء نظام التحليل الفضائي المشترك، أو JSAS. تم الحصول على السينوفيوم الأمامي أثناء العملية من المرضى الذين خضعوا لتجميل كامل للركبة (TKA). تم تشريح سينوفيوم وتقسيمه إلى نوى خزعة بحجم 3 مم. وضعت النوى في البئر العلوي لبئر عرضي بحجم 5 ميكرومتر أو 0.4 ميكرومتر مع 300 ميكرولتر من DMEM مع 10٪ FBS. في البئر السفلي، أضيف 600 ميكرولتر من الوسائط ويتم استبدالها كل يومين إلى ثلاثة أيام. تم تقييم القابلية للبقاء حتى 7 أيام في حالات الحضانة ذات فرط الأكسجين (50٪)، والجوية/القياسية (~21٪)، والفسيولوجية (5٪). شملت المنبهات في البئر السفلي بروتين الجاذب الكيميائي للخلية الأحادية 1 (MCP-1/CCL2)، وبوليبوسكاريد (LPS)، وN-أستيل سيستين، وS. aureus، وB. burgdorferi. تم تخزين الوسائط لعلاج ELISA، وتم تخزين الأنسجة لتحليل البرافين المثبت الفورمالين (FFPE). في الظروف القياسية، ظل السينوفيوم قابلا للحياة لمدة 3 أيام. عدل المنبه بنية ووظيفة البطانة الداخلية وخلايا الزلاب تحت البطانة، بما في ذلك فقدان حدود البلعم المقيمة، وتوسع الطبقة الفرعية، وزيادة تنظيم الخلايا الليفية الممرضة، وإنتاج السيتوكينات IL-1β وTNFα. هاجرت الخلايا المناعية والأرومات الليفية إلى الحجرة السفلية (مسام 5 ميكرومتر) في تحليل تدفق الخلايا الخلوية. هاجر B. burgdorferi المتنقل إلى الأنسجة عند حجم مسام 0.4 ميكرومتر، بينما لم يفعل S . aureus غير المتحرك. تم التعبير عن السيتوكينات ذات الصلة بكمية كافية ل ELISA. يعد JSAS نظاما معياريا قادرا على دراسة التغيرات الحادة في السينوفيوم البشري، مما يسمح بتعقيد البنى ثلاثية الأبعاد في نموذج ما قبل السريري مع الحفاظ على البنية والوظيفة ذات الصلة بيولوجيا.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصيب التهاب المفاصل أكثر من 20٪ من جميع البالغين في الولايات المتحدة و50٪ من الذين تزيد أعمارهم عن 65 عاما المصابينبأمراض مزمنة. كما أنه سبب رئيسي للإعاقة على مستوى العالم2. يشمل التهاب المفاصل ليس فقط تلف الغضروف، بل أيضا التهاب كبسولة المفصل أو السيلية الغزلية (مثل التهاب الغشاء الزليلي). من المرجح أن التهاب العزل الزليلي المزمن هو مصدر رئيسي للسيتوكينات الالتهابية التي تعزز تلف العظام والغضاريف في التهاب المفاصل العظمي والروماتويدي 3,4. لذلك، فإن فهم التغيرات المناعية داخل السينوفيوم من المرجح أن يكون ضروريا لتطوير خيارات علاجية جديدة وربما وقائية للمرضى المصابين بالتهاب المفاصل.

السينوفيوم هو بنية منظمة تتكون من طبقتين رئيسيتين: البطانة الخلوية الداخلية (IntL) والبطانة الفرعية (SubL). يتفاعل IntL مع السائل الزليلي (SF)، ويقوم SubL بإنتاج مكونات SF ويحتوي على هياكل وعائية5. داخل IntL، توجد كل من البلاعم والخلايا الزلية الشبيهة بالخلايا الليفية (FLS). البلعم في IntL هي خلايا مقيمة، تتجدد محليا بواسطة البلاعم الخلالية داخل الSubL 6. هذه البلعم الزليلي المقيمة (RSMs) منحازة إلى M2 بسبب تعبير CD206 وTREM2، وتم تحويلها إلى علامات ظهارية، وتعبر عن علامات الربط الضيق. قد يكون هذا الهيكل الفرعي من IntL مفتاحا للحفاظ وظيفيا وجسديا على توازن الفضاء المشترك 5,6. وقد لوحظ هذا في التهاب المفاصل الروماتويدي (RA). على سبيل المثال، عندما يتحلل IntL، يعاني مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي من أعراض النوبة، والتي تختفي عندما يعاد بناء البطانة 6,7. يرتبط الشفاء التلقائي بالتهاب المفاصل الروماتويدي بشكل خاص ب MerTK +CD206+ في البلعم الزلالية7. تم تحديد RSM أيضا في الطب النفسي لمرضى يعانون من ألم مفاصل حاد، حيث وجدوا أن شدة الأمراض المعدية أو الالتهابية مرتبطة بكمية RSMs والسيتوكينات الالتهابية8. للأسف، العلاقة بين هياكل IntL وSubL، والتغيرات الوظيفية في RSM وFLS، وإنتاج وسطاء التهابيين قد تتلف الغضاريف و/أو العظم، يصعب التساؤل عنها، خاصة عند البشر.

لاستعلام الآليات الأساسية لالتهاب العزلية في بيئات متعددة ذات صلة سريرية، تم تطوير نموذج بشري خارج الجسم يسمى نظام تحليل الفضاء المشترك (JSAS). ينتج هذا النظام نتائج قابلة للتكرار باستخدام عناصر معيارية للسماح بتقييم واسع لالتهاب المفاصل الالتهابي والمعدي. تصف هذه المقالة عمليات اكتساب الأنسجة من جراحات المفاصل المفتوحة الشائعة، مثل استبدال المفصل الكلي، تصميم JSAS، القياس النسيجي اللازم لقياس التغيرات الهيكلية الحادة في السينوفيوم، والاستجابات الوظيفية للنسيج، بما في ذلك بواسطة التألق المناعي (IF)، ومنظار RNA، واختبار العضلات المناعية المرتبطة بالإنزيمات (ELISA). يختلف JSAS عن النماذج البشرية الشائعة في المختبر من خلال الحفاظ على هياكل IntL وSubL، مما يسمح برؤية قريبة في الجسم الحي ، حول التهاب الغشاء الزليلي الحاد أو الحاد الذي يؤدي إلى تلف الغضروف. من خلال الحفاظ على البنية الطبيعية للسيلفيوم، يمكن تشريح القدرات الداخلية ل RSM وFLS لتقليل أو استمرار الالتهاب. كنموذج خارج الحي ، لا يتطلب تمايز الخلايا المناعية الطرفية إلى بلاعم زلية أو تبسيط السينوفيوم إلى 1-2 نوع من الخلايا المنفصلة فقط. يختلف عن النماذج الحيوانية مثل التهاب المفاصل الناتج عن الكولاجين (CIA) باستخدام أنسجة بشرية مريضة طبيعيا، مما يسمح بتقييم خاص بالممرضات ويكون ذا صلة بالبشر. أخيرا، يمكن محاكاة عدة التهابات، مما يسمح بنموذج لالتهاب المفاصل التسامي بالإضافة إلى التهاب المفاصل العظمي والالتهاب الالتهابي. القيد الرئيسي هو الزراعة لمدة 3 أيام في الظروف القياسية قبل بدء الموت المبرمج.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على موافقة المريض وبروتوكول معالجة الأنسجة من قبل مجلس مراجعة المؤسسات المحلي (IRB). المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. اكتساب الأنسجة والخزعة

  1. حدد المرضى قبل العملية بناء على جداول الجراح. استقطب المرضى الذين تتراوح أعمارهم بين 18 و65 عاما يخضعون لجراحة المفاصل المفتوحة، مثل تجميل مفصل الركبة الكلي (TKA) أو استئصال عظام الظنبوب (TTO، المعروف أيضا باسم فولكرسون)، والذين لا يتناولون أدوية تعديل المناعة الجهازي.
    ملاحظة: من الناحية المثالية، استبعد المرضى الذين خضعوا لأكثر من تنظير مفصل واحد أو أكثر من حقنة جلوكوكورتيكويد، حيث كان لديهم فشل أكبر أثناء الجراحة في جمع الأنسجة مقارنة بالفئات الأخرى بسبب التليف. نظرا لخطر انتقال العدوى، يجب تأجيل تجنيد المرضى الذين لديهم تاريخ من التهاب الكبد الوبائي C أو فيروس نقص المناعة البشرية (HIV) ما لم يكن ذلك مرتبطا بالنتائج. مارس ممارسات التعامل الآمن مع الأنسجة البشرية الطازجة في جميع الأوقات، بغض النظر عن حالة الأمراض المعدية.
  2. يقوم جراحو العظام بإجراء استئصال المفصل والتشريح كجزء من الإجراءات التشغيلية القياسية. تحديد السينوفيوم الأمامي القريب مباشرة من الأخدود التروكلياري واستخدام الكي الكهربائي لاستئصال السينوفيوم على شكل كتلة مع تجنب تشريح عضلة المفصل الجيني أو بالقرب من اللقاء الإنسي والجانبي. الاستئصال الحلقي محايد نسبيا لنتائج TKA، وفي الحالات الالتهابية قد يكون مفيدا 9,10. مرر السينوفيوم بشكل معقم لعضو فريق البحث وضعه في حاوية عينة معقمة مع محلول دولبيكو البارد المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (DPBS) على الجليد.
    ملاحظة: أوقف اكتساب الأنسجة إذا لاحظ الفريق الجراحي وجود شذوذات، أو إذا كان استئصال الزليلي الوزلي قد يؤثر على الإغلاق أو نتيجة الجراحة. الأخير على وجه الخصوص سيكون نادرا جدا في TKA، حيث يمكن استخدام استئصال السينوفيوم كإجراء شد لتخفيف الوصلات المشدودة.. تعتمد كمية الاستئصال على حجم التجربة. من الممكن الحصول على حوالي أربع نوى خزعة بحجم 3 مم لكل 1 سم2 من الأنسجة. في كثير من الحالات، من الممكن الحصول على 24 سممربع أو أكثر من الأنسجة. يعتمد وزن الأنسجة بشكل كبير على التشريح الجراحي، لذا فهو ليس موثوقا مثل مساحة السطح لتحديد كفاية التجربة. يوضح الشكل 1 الخطوات 1.2-1.7.
  3. أعد السينوفيوم إلى المختبر واغسل مرتين في DPBS بارد لمدة 10 دقائق على جهاز هزاز على اللوحة.
  4. انقل السينوفيوم إلى طبق بتري معقم بحجم 10 سم أو أكبر تحت ظروف معقمة في خزانة بمستوى السلامة البيولوجية 2 (BSL2) معتمدة من السلامة البيولوجية. أضف وسط Dulbecco البارد والمعقم ومنخفض الجلوكوز (DMEM) الذي يحتوي على بيروفات الصوديوم وL-جلوتامين، وهو ما يكفي لملء الطبق إلى منتصف الطريق. حدد البطانة الزليلي بواسطة طبقة IntL اللؤلؤية (الشكل 2A)، بدلا من الجانب المحمر (الشكل 2B).
    ملاحظة: ال IntL هش. احذر من تقشيرها، وإلا ستنفصل عن البطانة الفرعية (الشكل 2A، ممسكة بواسطة الهيموستات). قد يتغير اللؤلؤ بسبب تاريخ سابق من الهيمارثروزيس (يظهر باللون الأصفر البرتقالي بسبب الهيموسيديرين)، أو مؤشر كتلة الجسم المرتفع (مغطى بالدهون)، أو الالتهاب (الأحمر، الهش، والزغب). من الضروري جدا تحديد الهوية الدولية بشكل صحيح قبل المضي قدما. افحص بعناية بحثا عن علامات الاستئصال الجراحي، والكوي، والنزيف، والتخثر لتحديد أن الخطوات التالية لا تحدث في IntL.
  5. قم بإزالة الأنسجة الدهنية والسترومية الزائدة على الجانب المحروق لعزل السينوفيوم، مع الحفاظ على عمق الأنسجة حوالي 4-5 مم في جميع المناطق. يمكن استخدام مقص أو مشرط السوسن حسب التفضيل الشخصي. غير وسائط طبق البتري حسب الحاجة للحفاظ على مجال الرؤية.
    ملاحظة: يمكن استئصال الأنسجة الدهنية أو النسيج البتكوي الخلفي بسهولة. ومع ذلك، فإن صعوبة التشريح أو الشعور بمقاومة كبيرة تشير إلى احتباس الأرباط، أو استقلاب الأنسجة مثل ترسيب الغضروف غير المناسب، أو قطع ال IntL.
  6. وبعد التشريح إلى العمق المناسب، احصل على عينات خزعة بقطر 3 مم حسب الحاجة لإجراء نسختين تقنيتين على الأقل لكل حالة اختبار. قم بوضع البطانة الزليلي موجهة لأداة النواة بدلا من مواجهة سطح طبق بيتري. قد يستخدم ثقب خزعة عالي الجودة حوالي 10-15 مرة قبل الحاجة إلى استبدال بسبب التلهي، حيث أن ثقب الخزعة الباهت سيؤدي إلى تلف بنية البطانة الداخلية.
    1. قم بتنفيذ الحفر بحمل عمودي قوي ولف لطيف. إذا كان هذا يلتوي الأنسجة، تصبح أداة الخزعة باهتة وتحتاج إلى استبدال. استقر باليد غير المسيطرة باستخدام الملقط أو الهيموستاتات.
      ملاحظة: تم استخدام نوى بحجم 3 مم لتعظيم تدفق الدم النسيجي بالإضافة إلى عدد النوى لكل مريض وضمان تكرار تقني كاف لهذه التجارب. يمكن استخدام نوى بأحجام بديلة، لكن تم اختبار 3 مم فقط لهذا البروتوكول.
      ملاحظة: قد يؤدي احتجاز الدهون الزائدة بسبب التشريح غير الكاف إلى طفو اللب في JSAS، وهو أمر غير مثالي. إذا طفت النوى إلى السطح بدلا من البقاء مغمورة، عد إلى التشريح أو اختر نواة مغمورة.
  7. افتح طبق بتري ثاني واملأه ب 5-10 مل من الوسط الدافئ (37 درجة مئوية) مع 10٪ FBS. باستخدام الملقط المسطح أو غير المسنن، انقل النوى إلى هذا الطبق لغسل الحطام بتحريك ميكانيكي لطيف لمدة 1-2 ثانية. لا تضغط النواة بإحكام، وإلا قد يتلف البطانة الداخلية.
    ملاحظة: قد أتوقف هنا لمدة ≤24 ساعة بوضع أنسجة في الحاضنة عند الإعداد القياسي 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون.

2. إعداد نظام تحليل الفضاء المشترك (JSAS)

  1. جهز البئر السفلي ل JSAS بكمية 600 ميكرولتر من DMEM منخفض الجلوكوز الدافئ (37 درجة مئوية) مع 10٪ FBS. على الرغم من أن نسبة 1٪ من البنسلين-ستريبتوميسين قد تم اختبارها دون تأثير سلبي ملحوظ في هذا النظام، إلا أن المضادات الحيوية لا تضاف عادة إلى الأوساط إذا تم الحفاظ على العقم بشكل كاف.
    ملاحظة: إذا كانت البذور تتزامن مع بكتيريا أو خط خلوي يتطلب وسط مختلف، فقد يكون البئر السفلي وسط مختلف. تجنب الوسائط المضادة الحيوية إذا كانت تتزامن مع البكتيريا.
  2. إلى البئر السفلي، أضف المعالجة المفضلة. على سبيل المثال، ليبوبوليسكاريد (LPS). لتجنب اختلافات الأسمولية، ينصح ألا يتجاوز حجم المعالجة 2.5٪ من الحجم الكلي (مثلا، ≤15 ميكرولتر ل 600 ميكرولتر). قم بتقليل أي تغييرات في درجة الحموضة من العلاجات للحفاظ على درجة الحموضة بين 7.0-7.4. وإلا، استخدم التحكم في المركبة.
  3. اختر حجم المسام العرضية حسب النتيجة التجريبية المرغوبة (الشكل 3).
  4. أضف 300 ميكرولتر من DMEM منخفض الجلوكوز مع 10٪ FBS إلى الأنبوب العرضي.
  5. انقل النوى الفردية بلطف باستخدام ملقط معقم إلى وسط البئر العرضي. لا يمكن التحكم في اتجاه الأنسجة؛ ومع ذلك، فإن السمنة والطفو الطبيعي للنسيج البترومي تجعل بطانة النسيج الداخلي موجهة للأسفل لمعظم نواة الأنسجة.
    1. انظر النوى بعناية لأن عملية الحفر قد تعطل البطانة الداخلية، وتجنب استخدام النوى التي تبدو مهترئة في بداية التجربة. إذا كانت النواة عائمة، حسن التشريح واختر نواة بديلة.
      ملاحظة: فكر في مصفوفة الكولاجين إذا كان اتجاه الأنسجة مهما؛ ومع ذلك، سيؤثر ذلك على الوقت اللازم لتطوير تدرج كيميائي مع البئر القاعي.
  6. وضعها في الحاضنة عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربونلمدة زمنية مرغوبة.
    ملاحظة: أقدم وقت موصى به للتغيرات البيولوجية هو 8 ساعات. آخر نقطة زمنية مؤكدة للنشاط البيولوجي هي 3 أيام.

3. التحليل التجريبي والتفكيك

  1. في علم الأنسجة، استخدم ملقط معقم غير مسنن لنقل النسيج إلى 3-5 مل من الفورمالين المحايد (NBF) بنسبة 10٪ لتحليل الفورمالين المثبت بالبارافين (FFPE). قم بتخزين التخزين في NBF لمدة 3-7 أيام قبل التضمين والتقسيم.
    1. لا تدع النسيج يجلس لفترات طويلة، لأن ذلك يزيد من سوء التألق الذاتي. إجراء تحليل نسيج، بما في ذلك تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين (H&E)11 لقياس الشكل النسيج، والفلورة المناعية (IF)12، و/أو منظار RNAscope باستخدام IF13 وفقا للطرق القياسية.
      ملاحظة: احرص على عدم ثقب البئر العرضي بالملاقط عند إزالة الأنسجة. كن لطيفا جدا في تحريك الجذع، وإلا قد تنفصل البطانة الحديدية. ضع النواة بلطف في وضع التثبيت ولا تحرك. يجب استخدام NBF داخل غطاء بخار كيميائي معتمد، ويجب التخلص منه وفقا لإرشادات الصحة والسلامة البيئية المحلية (EHS)، ولا يجوز صبه في الأحواض. يتم وضع الأنسجة البشرية غير المستخدمة من التجربة في مبيض يزيد عن 10٪ لمدة 30 دقيقة، ثم توضع في احتواء ثانوي حسب متطلبات EHS المحلية، ثم تتخلص منها في صناديق خطر بيولوجي معنونة للحرق. يمكن صب محلول المبيض في الحوض إذا تمت الموافقة عليه من قبل هيئة الصحة والسلامة المحلية. اتبع الإرشادات المحلية، والتي قد تختلف حسب المؤسسة.
  2. تضمين النسخ التقنية في نفس كتلة FFPE. استخدم أشرطة كاسيت محجوزة لتجنب فقدان العينة. مقطع في المحور الطولي بسماكة 5 ميكرومتر. ضع ثلاثة أقسام متسلسلة على شريحة واحدة (الشكل الإضافي 1).
  3. تسحب صورة H&E عند 10x و40x باستخدام مجهر الحقل الساطع. حدد IntL كطبقة خلوية منظمة عند الواجهة بين الأنسجة والفراغ.
    1. احصل على 3 أقسام تمثيلية 10x و10 مقاطع تمثيلية 40x عبر ما لا يقل عن نسختين تقنيتين لكل حالة علاج، مع الحفاظ على IntL في مجال الرؤية. التقط الصور كصور TIFF عالية الدقة. إجراء تحليل القياس النسيجيري:
    2. قم بإجراء القياسات في ImageJ/FIJI. أولا، حدد المقياس باستخدام قائمة التحليل → تعيين المقياس. يتطلب مقياس التعيين استخدام شريحة معايرة مصورة على كل مجهر على حدة عند كل هدف. أولا، استخدم أداة الخط المستقيم لإنشاء خط بطول معروف بناء على صورة شريحة المعايرة. قم بتعيين المقياس بشكل عام.
      ملاحظة: عند 10x، المقياس هو 3 بكسل/ميكرومتر. عند 40x، المقياس هو 12 بكسل/ميكرومتر.
    3. قس سماكة SubL باستخدام صور 10x باستخدام أداة الخط المستقيم. قس السماكة كعمق سحري من سطح IntL إلى أسفل SubL (ميكرومتر). بعد رسم كل سطر، استخدم اختصار لوحة المفاتيح m لقياس طول الخط.
      1. متوسط ما لا يقل عن 5 قياسات لكل صورة 10x (الشكل 4A,B). يتم تحديد الانتقال بين النسيج الفرعي والنسيج البترومي بانتقال إلى مناطق أقل تنظيما وأقل خلوية تحتوي على الكولاجين والدهون (الشكل 4B). اقطع نقطة الانتقال بين حجرات الأنسجة.
    4. لقياسات 40x لسماكة IntL، خلوية IntL، سلامة IntL، وخلوية SubL، ابدأ بفتح ملف TIFF بحجم 40x في Adobe Photoshop (أو أي محرر صور مشابه). يعرف IntL بأنه طبقة بسماكة ~1-5 خلايا، منظمة في طبقة خلوية مميزة عند الواجهة بين النسيج والفراغ (مثل السائل الزليلي) (الشكل 4C).
    5. أنشئ طبقة جديدة. اختر أداة الحبل المضلع. باستخدام نقرة الفأرة لبدء الحبل وكذلك انحرافات التثبيت في الخط، قم بتقسيم الانتقال بين IntL وSubL عبر كامل الصورة. ثم واصل استخدام الحبل خارج العالم الدولي في المساحة الفارغة.
      1. أغلق الحبل بنقرة مزدوجة. اقلب المنطقة المحددة (اختر → العكس)، ثم املأ الفراغ باللون الأسود باستخدام أداة دلو الطلاء . هذا سيغطي جميع المناطق التي ليست IntL. احفظ هذه الصورة كJPG عالي الدقة يمثل IntL، ثم أخف الطبقة.
    6. أنشئ طبقة جديدة. تحت إعدادات الحبل المضلع، اختر ميزة التقاطع ، والتي ستحدد فقط مكان تقاطع منطقة الحبل الجديد مع مناطق الحبل القديمة. قم بتحريك الحبل حول طبقة الخطوط الفرعية عن طريق النقر عبر منتصف ال IntL، حول الحواف اليمنى واليسرى للصورة إلى الخلفية القماشية، ثم اقطع الانتقال بين النسيج الفرعي والنسيج اللاخلوي خلفه.
      1. إذا تجاوز أسفل ال SubL أبعاد صورة 40x، ببساطة اختر لوحة الخلفية حول الحافة المتبقية. مرة أخرى، اختر عكس هذه المنطقة كما في الأعلى، ثم استخدم أداة دلو الطلاء لملء باللون الأسود. احفظ هذه الصورة كملف JPG عالي الدقة يمثل SubL. احفظ هذه الصورة الطبقية كملف PSD للرجوع إليه لاحقا.
        ملاحظة: كريات الدم الحمراء شائعة في هذه الشرائح وقد تتداخل مع قياسات عدد الخلايا المستقبلية. إذا كانت هناك مناطق كبيرة من الأوعية الدموية، استخدم أداة الحبل متعدد الأضلاع، أو أداة فرشاة الطلاء، أو أدوات أخرى لصنع أقنعة على طبقة منفصلة تغطي هذه المناطق.
    7. في فيجي، افتح صورة قناع  IntL. قس سمك IntL (ميكرومتر) كحد أدنى من 5 قياسات على الصورة 40x باستخدام أداة الخط المستقيم كما في الخطوة 3.3.2-3.3.3.
    8. قس الطول الكلي (μm) لجهاز IntL باستخدام أداة الخط المجزأة. ثم قس طول المناطق السليمة فقط، أيضا باستخدام أداة الخط المجزأة (الشكل 4D,E). المقاطع غير السليمة في IntL تحدد بالفجوات بين الخلايا، والمظهر الذي أكله العث، وتكسر أو تقشر IntL من الأنسجة.
      1. احسب نسبة الحدود السليمة ل IntL في ك (IntL سليم/إجمالي IntL)*100. يجب مقارنة ذلك بنفس أدوات التحكم في نقاط الزمن لتعويض أي أثر في التقسيم.
    9. قس خلوية IntL باستخدام صورة قناع IntL. أولا، التحويل إلى 8-بت (نوع الصورة → النوع → 8-بت). ثم العتبة (الصورة → العتبة) لتقليل الضوضاء وزيادة التعرف على الخلية. في قائمة العتبة، قم بإلغاء تحديد الخلفية الداكنة واستخدم زر التبديل السفلي للتعديلات.
      1. تحديد العتبة يدويا لكل صورة، بمساعدة اختفاء الضوضاء (مثل الخلفية الأثرية) مع الاحتفاظ بعدد الأجسام النووية الأصلي. قارن باستمرار بين الصورة الأصلية للحفاظ على الدقة. عندما يتم تقليل الضوضاء (إيجابية كاذبة) ولكن إشارة الهيماتوكسيلين تعظم (الإيجابية النووية الحقيقية)، يكون من المناسب تحديد العتبة (الشكل التكميلي 2).
        ملاحظة: سيكون العتبة متسقا عبر مسح شريحة واحدة، لكنه يختلف بين صور الشرائح وأيضا بين صور فردية بحجم 10x أو 40x. كما سيختلف بين دفعات H&E، حيث من غير المرجح أن يكون عمق اللون ثابتا. لذا، فإن الماكروز البسيطة غير مناسبة إذا كانت هناك اختلافات في أي من الفئات التالية بين الصور: المريض، دفعة H&E، سمك القسم، ظروف الإضاءة (سطوع ضوء الغرفة أو المجهر/درجة حرارة اللون)، البرامج المستخدمة لالتقاط الصورة، المجهر المستخدم للحصول على الصورة، واستخدام خوارزميات توازن اللون الأبيض أو التوازن اللوني. هذه القائمة ليست شاملة. باستخدام مجهر AmScope T390B-3M مع كاميرا وبرنامج متوافقين، مع إضاءة المجهر القصوى في غرفة خافتة الإضاءة، وباستخدام إعدادات توازن بياض تلقائية، و10 صور عشوائية 40x تشمل 3 مرضى، تراوحت العتبة بين 96-182، بمتوسط 137. يعكس هذا النطاق الواسع الفروقات في مخططات 8-بت الأساسية، وليس تناقضات المستخدم. لذا، فإن ضمان الدقة البصرية بين الصورة الأصلية وصورة العتبة أمر أساسي، وليس الرقم الدقيق للعتبة. أتمتة هذه العملية خارج نطاق العلماء العاديين وستتطلب برمجة من محترف في تحليل الصور.
    10. استخدم تحليل الجسيمات (تحليل → تحليل الجسيمات) بحجم الخلية 8-150 ميكرومترمربع لتحديد وعد النوى كبديل لعدد الخلية. اختر أقنعة التراكب في الإعدادات لعرض الخلايا المحددة، مرة أخرى بالمقارنة مع الصورة الأصلية. وبما أن IntL هو في الأساس هيكل خطي وليس حجمي، قم بتطبيع هذا ال 100 ميكرومتر من طول IntL (مثل #cells/100 ميكرومتر). بلغ متوسط ذلك حوالي 13.19 خلية (النطاق 5.4-21.9، SD 3.9) لكل 100 ميكرومتر في الأنسجة الزلية المسترجعة حديثا.
      ملاحظة: تم تحديد النطاق من 8 إلى 150 ميكرومترمربع بناء على مقياس التعيين والمقارنة البصرية التكرارية للصورة ذات العتبة مع الصورة الأصلية. الحدود التي يتم تحديدها تجريبيا عبر مجموعة البيانات تتوافق مع افتراضات الشكل بناء على بلاعم ذات قطر خلية يتراوح بين حوالي 8-20 ميكرومتر14,15. تم استبعاد الأحجام الأكبر لأنها غالبا ما تمثل نوى متعددة منفصلة قريبة تقرأ كخلية واحدة.
      ملاحظة: قد يتم إنشاء سير عمل مماثل، على سبيل المثال، في QuPath.
    11. افتح قناع SubL مع استبعاد كريات الدم الحمراء (الشكل 4G). قم بتنفيذ تحويل 8-بت، والعتبة، وتحليل الجسيمات كما هو مذكور في الخطوات 3.3.9-10. وبما أن SubL هي طبقة حجمية، قم بتطبيع عدد الخلايا التي تم عدها حتى 100 ميكرومتر2 من مساحة SubL (مثل قياس المناطق غير المخفية) (الشكل 4H).
  4. لتحليل تدفق الخلايا الخلوية في البئر السفلي، قم بالطرد المركزي بحرارة 300 × جرام عند 4 درجات مئوية لمدة 10 دقائق والحفاظ على الحبيبات على الجليد. توقع ~20,000 خلية حية مهاجرة لكل نواة خزعة بقطر 3 مم عند 24 ساعة. تم نشر طرق قياس التدفق الخلوي سابقا8.
  5. بالنسبة ل ELISA، تستخدم وسط الطرد المركزي بسرعة قصوى (>5000 × g) لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية لإزالة أي خلايا أو بقايا خلية. خزن عند درجة الحرارة المطلوبة. تم نشر طرق ELISAسابقا في 8.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تحسين ظروف زراعة الأكسجين

تغذية الأنسجة الفسيولوجية تحتوي على حوالي 6٪-8٪ أكسجين، بينما تكون ظروف الحضانة القياسية لزراعة الخلايا عند مستويات الأكسجين الجوي (~21٪)16. بالمقارنة، قد يحسن فرط الأكسجة من فعالية زراعة الخلايا أو يكون ساما17. استلزم الاستخدام الكافي ل JSAS تحديد مبكر لفعالية الأنسجة الزلية؛ لذلك، تم تقييم الاستماتة المبرمجة بواسطة الكيمياء المناعية الكاسبيزي-3 أو التألق المناعي في اليوم 0، 1، 2، 3، 5، و7 في 3 ظروف أكس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أظهر هذا العمل قدرات JSAS، وبشكل خاص الحفاظ على الأنسجة الزللية الحية ذات البنية الزللية السليمة والاستجابة وظيفيا. كان هناك موت خلوي طفيف حتى 72 ساعة من الزراعة في معظم حالات الحضانة. لتقييم التغيرات المجهرية في البنية الزلية، تم وصف نظام قياس نسيجي فريد يحدد التغيرات الهيكلية في IntL وSubL. تشير هذه التغيرات إلى التهاب العزلية الحاد أو الحاد على المزمن. قد يكون هذا القياس مفيدا بشكل خاص عند اقترانه بالتحليلات الخلوية والميكانيكية، حيث تعتمد أنظمة التصنيف التقليدية على تسرب الخلايا اللم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا توجد تضارب مصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لم يكن هذا البروتوكول ممكنا بدون كرم المرضى الذين تبرعوا بأنسجة أدراجهم، ومهارة زملائنا في جراحة العظام، الذين هم مستعدون لجمع الأنسجة بأمان نيابة عن العمل. يحظى مركز K.I.C. بدعم من NIAMS K08 AR084605، ويحظى برنامج C.P.P. بدعم برنامج تطوير مهنة شؤون المحاربين القدامى [IK2BX004532]. تعترف هذه المجموعة باستخدام منشأة أبحاث المجهر المركزية بجامعة آيوا، وهي مورد أساسي تدعمه نائب رئيس الأبحاث في جامعة آيوا، وكلية كارفر للطب. تم الحصول على بيانات قياس التدفق الخلوي في منشأة قياس التدفق الخلوي، وهي منشأة بحثية أساسية لكلية كارفر للطب / مركز هولدن الشامل للسرطان في جامعة آيوا. يتم تمويل المنشأة من خلال رسوم المستخدم والدعم المالي السخي من كلية كارفر للطب، ومركز هولدن الشامل للسرطان، ومركز إدارة شؤون المحاربين القدامى الطبي في مدينة آيوا. وقد تم دعم الأبحاث الواردة في هذا المنشور من: المركز الوطني لموارد البحث التابع للمعاهد الوطنية للصحة بموجب الجائزة رقم 1 S10 OD034193-01؛ والمعهد الوطني للسرطان التابع للمعاهد الوطنية للصحة تحت الجائزة رقم P30CA086862.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10 cm Petri dishesCorningCLS430167
23srRNA RNAscope probeACD/Biotechne468211
24 well platesLife Sciences3524
3 mm biopsy punchesIntegra12460406
50 mL conicalsN/A
70% ethanol (for sterilization)N/A
Borrelia burgdorferiATCC35210 يجب استخدامه في المرحلة الأسية المتأخرة للحصول على الحد الأقصى من المُمْرِضية
BSK-HSigma-AldrichB8291
CD68 antibodyInvitrogen14-0688-821:1000
CO2 tank (standard conditions)N/A
Dulbecco's Phosphate buffered saline (Ca-/Mg-)Thermofisher14190144
fetal bovine serumBiotechneS11150Heat inactivated Lot: F22100
forceps (non-toothed)N/A
hemostatN/A
Humidified cell incubator (standard conditions)N/A
Hypoxia incubatorN/A
hypoxia tank (5% O2, 5% CO2, remainder N2, physiologic conditions)N/A
IL-4 antibodyThermofisherMA5-424701:100
iNOS antibodyThermofisherPA1-0361:100
Iris scissorsN/A
LipopolysaccharideSigma-AldrichL2630
low glucose DMEM (+Sodium pyruvate, +L-glutamine)Life Technologies11885084
MMP9 antibodyThermofisherMA5-327051:1000
Modular incubator chamber (hyperoxic conditions)Emrbient, IncMIC-101
Monocyte chemoattractant protein 1Peptrotech300-04-20UG
N-acetyl cysteineSigma-AldrichA9165يجب تحضيره طازجًا لكل تجربة ويكون متوازنًا في بيكربونات الصوديوم المكافئة pH من 7-7.4
OPG ELISAMilliporeRAB04841:1 dilution
Oxygen tank with liter per minute flow regulatorN/A
PDPN antibodyInvitrogen14-9381-821:100
Propidium IodideThermofisherJ66764.MC
RNAscope multiplex fluorescent V2 assayACD/Biotechne323100
sRANKL ELISAMyBioSourceMBS2626241:1 dilution
Staphylococcus aureus USA 300 MRSAATCCBAA-1717
SYBR GreenThermofisherS756310,000X stock
TNF antibodyThermofisherPA5-198101:100
transwell inserts - 0.4 um sizeMillicellPICM01250
transwell inserts - 5 um sizeCorningCLS3421

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fallon, E. A., et al. Prevalence of diagnosed arthritis - United States, 2019-2021. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 72 (41), 1101-1107 (2023).
  2. Allen, K. D., Thoma, L. M., Golightly, Y. M. Epidemiology of osteoarthritis. Osteoarthritis Cart. 30 (2), 184-195 (2022).
  3. Alivernini, S., Firestein, G. S., Mcinnes, I. B. The pathogenesis of rheumatoid arthritis. Immunity. 55 (12), 2255-2270 (2022).
  4. Mathiessen, A., Conaghan, P. G. Synovitis in osteoarthritis: Current understanding with therapeutic implications. Arthritis Res Ther. 19 (1), 18(2017).
  5. Culemann, S., Grüneboom, A., Krönke, G. Origin and function of synovial macrophage subsets during inflammatory joint disease. Adv Immunol. 143, 75-98 (2019).
  6. Culemann, S., et al. Locally renewing resident synovial macrophages provide a protective barrier for the joint. Nature. 572 (7771), 670-675 (2019).
  7. Alivernini, S., et al. Distinct synovial tissue macrophage subsets regulate inflammation and remission in rheumatoid arthritis. Nat Med. 26 (8), 1295-1306 (2020).
  8. Cyndari, K. I., Scorza, B. M., Zacharias, Z. R., Pessôa-Pereira, D., Strand, L. Resident synovial macrophages in synovial fluid: Implications for immunoregulation. Clin Immunol. 271, 110422(2024).
  9. Kooner, S. S., Clark, M. The effect of synovectomy in total knee arthroplasty for primary osteoarthritis: A meta-analysis. J Knee Surg. 30 (4), 289-296 (2017).
  10. Lipina, M., et al. Arthroscopic synovectomy of the knee joint for rheumatoid arthritis. Int Orthop. 43 (8), 1859-1863 (2019).
  11. Rosas, L., Mora, A. L., Rojas, M. Osu tristate sennet H&E staining of formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue sections. protocols.io. , (2023).
  12. Biologicals, N. Immunofluorescent IHC staining of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue protocol. , https://www.novusbio.com/support-by-application/Fluorescent-IHC-Staining-of-FFPE-Tissue (2025).
  13. Rnascope multiplex fluorescent reagent kit v2 with sample preparation and pretreatment. , Advanced Cell Diagnostics Inc. https://acdbio.com/rnascope-multiplex-fluorescent-v2-assay (2022).
  14. Fakoya, A. O., Naeem, A., Pierre, L. Statpearls. 20235, Treasure Island (FL). Internet (2024).
  15. Crapo, J. D., Barry, B. E., Gehr, P., Bachofen, M., Weibel, E. R. Cell number and cell characteristics of the normal human lung. Am Rev Respir Dis. 126 (2), 332-337 (1982).
  16. Carreau, A., El Hafny-Rahbi, B., Matejuk, A., Grillon, C., Kieda, C. Why is the partial oxygen pressure of human tissues a crucial parameter? Small molecules and hypoxia. J Cell Mol Med. 15 (6), 1239-1253 (2011).
  17. Pilarek, M., Grabowska, I., Ciemerych, M. A., Dąbkowska, K., Szewczyk, K. W. Morphology and growth of mammalian cells in a liquid/liquid culture system supported with oxygenated perfluorodecalin. Biotechnol Lett. 35 (9), 1387-1394 (2013).
  18. Coburn, J., et al. Lyme disease pathogenesis. Curr Issues Mol Biol. 42, 473-518 (2021).
  19. Mestas, J., Hughes, C. C. Of mice and not men: Differences between mouse and human immunology. Immunol. 172 (5), 2731-2738 (2004).
  20. Arvikar, S. L., Steere, A. C. Lyme arthritis. Infect Dis Clin North Am. 36 (3), 563-577 (2022).
  21. RNAscope multiplex fluorescent reagent kit v2 user manual. , Advanced Cell Diagnostics Inc. Newark, CA. (2022).
  22. Feng, J., Wang, T., Zhang, S., Shi, W., Zhang, Y. An optimized SYBR Green i/pi assay for rapid viability assessment and antibiotic susceptibility testing for Borrelia burgdorferi. PLoS One. 9 (11), e111809(2014).
  23. De Buys, M., Moodley, K., Cakic, J. N., Pietrzak, J. R. T. Staphylococcus aureus colonization and periprosthetic joint infection in patients undergoing elective total joint arthroplasty: A narrative review. EFORT Open Rev. 8 (9), 680-689 (2023).
  24. Ross, J. J. Septic arthritis of native joints. Infect Dis Clin North Am. 31 (2), 203-218 (2017).
  25. Kwon, H. -K., Yu, K. E., Lee, F. Y. Construction and evaluation of a clinically relevant model of septic arthritis. Lab animal. 52, 11-26 (2022).
  26. Carrel, M., Perencevich, E. N., David, M. Z. USA300 methicillin-resistant Staphylococcus aureus, United States, 2000-2013. Emerg Infect Dis. 21 (11), 1973-1980 (2015).
  27. Parlet, C. P., Brown, M. M., Horswill, A. R. Commensal staphylococci influence Staphylococcus aureus skin colonization and disease. Trends Microbiol. 27 (6), 497-507 (2019).
  28. Bünter, J. P., et al. Wild-type AGR-negative livestock-associated MRSA exhibits high adhesive capacity to human and porcine cells. Res Microbiol. 168 (2), 130-138 (2017).
  29. Patel, H., Rawat, S. A genetic regulatory see-saw of biofilm and virulence in MRSA pathogenesis. Front Microbiol. 14, 1204428(2023).
  30. Soong, G., et al. Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus adaptation to human keratinocytes. mBio. 6 (2), e00289-e00315 (2015).
  31. Ni, F., Zhang, Y., Peng, X. Correlation between osteoarthritis and monocyte chemotactic protein-1 expression: A meta-analysis. J Orthop Res. 15, 516(2020).
  32. Tsai, P. H., Liou, L. B. Effective assessment of rheumatoid arthritis disease activity and outcomes using monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) and disease activity score. Int J Mol Sci. 25 (21), 11374(2024).
  33. Boyce, B. F., Xing, L. Biology of rank, rankl, and osteoprotegerin. Arthritis Res Ther. 9 (Suppl 1), S1(2007).
  34. Asano, T., et al. Soluble RANKL is physiologically dispensable but accelerates tumour metastasis to bone. Nat Metab. 1 (9), 868-875 (2019).
  35. Kanzaki, H., et al. Soluble RANKL cleaved from activated lymphocytes by tnf-α-converting enzyme contributes to osteoclastogenesis in periodontitis. J Immunol. 197 (10), 3871-3883 (2016).
  36. Zahan, O. M., Serban, O., Gherman, C., Fodor, D. The evaluation of oxidative stress in osteoarthritis. Med Pharm Rep. 93 (1), 12-22 (2020).
  37. Ozcamdalli, M., et al. Comparison of intra-articular injection of hyaluronic acid and N-acetyl cysteine in the treatment of knee osteoarthritis: A pilot study. Cartilage. 8 (4), 384-390 (2017).
  38. Kim, H. R., Kim, K. W., Kim, B. M., Lee, K. A., Lee, S. H. N-acetyl-l-cysteine controls osteoclastogenesis through regulating Th17 differentiation and RANKL production in rheumatoid arthritis. Korean J Intern Med. 34 (1), 210-219 (2019).
  39. He, T., et al. Efficacy of n-acetylcysteine as an adjuvant therapy for rheumatoid arthritis: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Br J Hosp Med (Lond). 85 (11), 1-16 (2024).
  40. Tsikas, D., Mikuteit, M. N-acetyl-l-cysteine in human rheumatoid arthritis and its effects on nitric oxide (NO) and malondialdehyde (mda): Analytical and clinical considerations. Amino Acids. 54 (9), 1251-1260 (2022).
  41. Yeh, Y. T., Liang, C. C., Chang, C. L., Hsu, C. Y., Li, P. C. Increased risk of knee osteoarthritis in patients using oral N-acetylcysteine: A nationwide cohort study. BMC Musculoskelet Disord. 21 (1), 531(2020).
  42. Kaneko, Y., et al. Oral administration of N-acetyl cysteine prevents osteoarthritis development and progression in a rat model. Sci Rep. 9, 18741(2019).
  43. Coleman, M. C., et al. Sci Transl Med. 10 (427), eaan5372(2018).
  44. Drehmer, D., et al. Nitric oxide favours tumour-promoting inflammation through mitochondria-dependent and -independent actions on macrophages. Redox Biol. 54, 102350(2022).
  45. Fang, F. C., Vázquez-Torres, A. Reactive nitrogen species in host-bacterial interactions. Curr Opin Immunol. 60, 96-102 (2019).
  46. Winyard, P. G., et al. Measurement and meaning of markers of reactive species of oxygen, nitrogen and sulfur in healthy human subjects and patients with inflammatory joint disease. Biochem Soc Trans. 39 (5), 1226-1232 (2011).
  47. Xue, M., et al. Endogenous MMP-9 and not MMP-2 promotes rheumatoid synovial fibroblast survival, inflammation and cartilage degradation. Rheumatology (Oxford). 53 (12), 2270-2279 (2014).
  48. Piacenza, L., Zeida, A., Trujillo, M., Radi, R. The superoxide radical switch in the biology of nitric oxide and peroxynitrite. Physiol Rev. 102 (4), 1881-1906 (2022).
  49. Dikalov, S. I., Mayorov, V. I., Panov, A. V. Physiological levels of nitric oxide diminish mitochondrial superoxide. Potential role of mitochondrial dinitrosyl iron complexes and nitrosothiols. Front Physiol. 8, 907(2017).
  50. Krenn, V., et al. Grading of chronic synovitis: A histopathological grading system for molecular and diagnostic pathology. Pathol Res Pract. 198 (5), 317-325 (2002).
  51. Caplazi, P., et al. Mouse models of rheumatoid arthritis. Vet Pathol. 52 (5), 819-826 (2015).
  52. Kuyinu, E. L., Narayanan, G., Nair, L. S., Laurencin, C. T. Animal models of osteoarthritis: Classification, update, and measurement of outcomes. J Orthop Surg Res. 11, 19(2016).
  53. Felson, D. T., et al. Essential fatty acids and osteoarthritis. Arthritis Care Res (Hoboken). 76 (6), 796-801 (2024).
  54. Jarraya, M., et al. Prevalence of intra-articular mineralization on knee computed tomography: The multicenter osteoarthritis study. Osteoarthritis Cartilage. 31 (8), 1111-1120 (2023).
  55. Rai, M. F., Cai, L., Zhang, Q., Townsend, R. R., Brophy, R. H. Synovial fluid proteomics from serial aspirations of ACL-injured knees identifies candidate biomarkers. Am J Sports Med. 51 (7), 1733-1742 (2023).
  56. Rivellese, F., et al. Rituximab versus tocilizumab in rheumatoid arthritis: Synovial biopsy-based biomarker analysis of the phase 4 R4RA randomized trial. Nat Med. 28 (6), 1256-1268 (2022).
  57. Paggi, C. A., Teixeira, L. M., Le Gac, S., Karperien, M. Joint-on-chip platforms: Entering a new era of in vitro models for arthritis. Nat Rev Rheumatol. 18 (4), 217-231 (2022).
  58. Li, Z. A., et al. Synovial joint-on-a-chip for modeling arthritis: Progress, pitfalls, and potential. Trends Biotechnol. 41 (4), 511-527 (2023).
  59. Thompson, C. L., et al. Human vascularised synovium-on-a-chip: A mechanically stimulated, microfluidic model to investigate synovial inflammation and monocyte recruitment. Biomed Mater. 18 (6), acf976(2023).
  60. Thangadurai, M., Sethuraman, S., Subramanian, A. A 2d inflammatory co-culture model for investigating synovial fibroblast and macrophage interactions in rheumatoid arthritis. Sci Rep. 15 (1), 30105(2025).
  61. Rosso, F., Rossi, R., Cottino, U., Bonasia, D. E. Tibial tubercle osteotomy for patellofemoral malalignment and chondral disease provided good outcomes: A systematic review. J ISAKOS. 7 (2), 78-86 (2022).
  62. Kleuskens, M. W. A., Van Donkelaar, C. C., Kock, L. M., Janssen, R. P. A., Ito, K. An ex vivo human osteochondral culture model. J Orthop Res. 39 (4), 871-879 (2021).
  63. Schwab, A., et al. Ex vivo culture platform for assessment of cartilage repair treatment strategies. ALTEX. 34 (2), 267-277 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

ELISA

مقالات ذات صلة