مقالة منهجية

تمايز وتحفيز تراكم قطرات الدهون في الخلايا الدهنية البشرية كنموذج لدراسة السمنة في المختبر

274 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69759

⸱

مارس 20, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Cell Pathology, Faculty of Biotechnology, University of Wroclaw

في هذه المقالة

ملخص

يهدف البروتوكول المعروض إلى تطوير نموذج خلوي يحاكي السمنة البشرية. لتحقيق ذلك، يتم تمايز الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية إلى خلايا دهنية، ثم يتم تسمينها باستخدام خليط من الأحماض الدهنية المختارة.

الملخص

تغير التغيرات المرتبطة بالسمنة في نسيج الدهون ملفات الإفرازات المحلية وتؤثر على التفاعلات مع الخلايا المحيطة الأخرى، بما في ذلك الخلايا السرطانية. الاستمرار في توصيل المغذيات يغير عملية الأيض لخلايا الدهون، مما يجعلها تعمل كخزان للدهون. عادة ما تعتمد الأبحاث حول آليات السمنة على نماذج حيوانية، لكنها لا تسمح بتحليل العمليات الأيضية على المستوى الخلوي. لذا، هناك حاجة لتطوير نموذج موثوق في المختبر للسمنة البشرية يمكنه المساعدة في استكشاف التغيرات في وظيفة الخلايا الدهنية السمينة مقارنة بنظيراتها النحيلة. يقدم هذا العمل بروتوكولا لتمييز الخلايا الدهنية البشرية عن الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون، باستخدام مزيج من الأنسولين، إيزوبيوتيل-1-ميثيلزانثين، ديكساميثازون، والإندوميثاسين. لاحقا، تم حضانة الخلايا الدهنية المتمايزة مع مجموعة من الأحماض الدهنية، بما في ذلك اللينوليت، والبالميتات، والأوليات، لتعزيز تراكم الدهون. ونتيجة لذلك، تم إنشاء نموذج قيم يحاكي الخلايا الضخمة في ظروف السمنة، ويمكن استخدامه في دراسات إضافية.

المقدمة

يعتقد أن السمنة عامل خطر رئيسي لمجموعة واسعة من الأمراض، مثل اضطرابات الجهاز العضلي الهيكلي، أمراض القلب والأوعية الدموية، مقاومة الأنسولين، متلازمة الأيض، السكري، وأنواع مختارة من السرطان1. السمنة هي واحدة من أكثر مشاكل الصحة العامة وضوحا وأقل تقديرا، ولها أسباب متعددة العناصر. باختصار، السمنة تثار بسبب اختلال في التوازن بين السعرات الحرارية المستهلكة والمستهلكة، مما يؤدي إلى زيادة تخزين الدهون2. يؤدي فائض السعرات الحرارية إلى توسع مرضي وخلل في نسيج الدهون (AT)، وهو العنصر الأساسي في تحكم الجسم في توازن الطاقة.

الخلايا الدهنية هي المكون الخلوي الرئيسي في AT3. المساهم الرئيسي في نمو الحمض الدهني في ظروف السمنة هو تضخم الخلايا العضلية، أي زيادة حجم الخلايا الدهنية بزيادة كمية الدهون المخزنة في السيتوبلازم على شكل قطرات دهنية (LDs). حتى لو كانت السمنة اضطرابا مرضيا معقدا، يمكن أن تكون الدراسات حول الوظائف البيولوجية للخلايا الدهنية نموذجا لتحليل أسبابها واستكشاف استراتيجيات علاجية جديدة. هذا يبرز الحاجة إلى فهم أعمق للآليات الجزيئية التي تدفع التغيرات في وظيفة الخلايا الدهنية لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة تستهدف الأمراض المرتبطة بالسمنة.

نماذج الحيوانات هي الأقرب لتعكس الظروف الفسيولوجية، مما يجعلها مستخدمة على نطاق واسع للدراسات الحية للسمنة5. ومع ذلك، لا يزال استخلاص الاستنتاجات حول العمليات البيولوجية الأساسية على المستوى الخلوي تحديا كبيرا في مثل هذا النظام متعدد الطبقات، الذي يفضل استخدام نماذج الخلايا الدهنية في المختبر . غالبا ما يعتمد البحث في المختبر على نموذج خلايا الفأر 3T3-L1، الذي، تحت الظروف المناسبة، يكتسب نمطا ظاهرياشبيها بالخلايا الدهنية 6. ومع ذلك، وبسبب أصله، لا يمكن استخدام هذا النموذج في تحليلات أكثر تعقيدا، مثل ظروف الزراعة المشتركة مع الخلايا البشرية، ولا يمكن دائما ترجمة النتائج مباشرة إلى الخلايا الدهنية البشرية. ومن كل هذه الأسباب، يتم البحث عن نموذج يحاكي السمنة لدى البشر، ويبدو أن استخدام الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية (ADSCs) مع تمايزها اللاحق منطقي. لذلك، فإن هذا النموذج مناسب جدا لدراسة تضخم الخلايا الدهنية البشرية في المختبر بسبب تعقيده المنخفض. يسمح بمقارنة معلمات نوع واحد من مزرعة الخلية تحت ظروف مختلفة، وهو أمر غير ممكن في الجسم الحي بسبب وجود أنواع متعددة من الخلايا في الأنسجة الدهنية.

الخلايا الدهنية البشرية والخلايا الجذعية المشتقة من الدهون المعزولة من الحمض النووي هي الأمثلة الأكثر شيوعا لدراسة خلل هذا النسيج6. هذه الخلايا، بعد التمايز، تعد نموذجا جذابا لتعديل مستويات LD في الخلايا الدهنية من خلال زيادة السمنة. ومع ذلك، هناك عدد قليل نسبيا من الدراسات التي تفحص تضخم الخلايا البشرية 7,8,9، ومعظمها يستخدم نوعا واحدا فقط من الأحماض الدهنية (FA) لتحفيز تراكم LD.

يقترح هذا البروتوكول إضافة خلايا دهنية بشرية إلى مزيج من FAs (بالميتات، الأوليات، واللينوليت) لمحاكاة بيئات السمنة. يتيح ذلك تحقيق أداة تعتمد على الخلايا الدهنية البشرية المحملة بالدهون، والتي يمكن مقارنتها مباشرة بخلايا دهنية (ساذجة) في الضابطة. يمكن استخدام هذا النموذج لاحقا لدراسة التغيرات الظاهرية والوظيفية بين الخلايا الدهنية الطبيعية والضخمة التغذية، أو إذا لزم الأمر، لتجارب في ظروف الزراعة المشتركة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

استخدم تقنيات التعقيم لأداء جميع خطوات البروتوكول في غطاء زراعة خلايا التدفق الطبقي. راجع جدول المواد لمزيد من التفاصيل حول جميع المواد والمعدات. بروتوكول التمايز الموضح أدناه مناسب للخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية وقد يختلف بين أنواع الخلايا الأخرى وأصلها. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. إعداد ADSCs للتميز

  1. تحضير وسط نمو ADSCs (ADSCs GM): مكمل وسط النسر المعدل من Dulbecco يحتوي على 1 جم/لتر جلوكوز مع 10٪ مصل أبقار جنيني (FBS)، 2 ملليمول جلوتامين ومضادات حيوية - محلول مضاد للفطريات (100 U/mL بنسلين، 100 ميكروغرام/ملتر ستربتوميسين، 0.25 ميكروغرام/مل أمفوتيرسين B).
  2. سخن محلول ADSC GM، والمحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS)، ومحلول التربسين/EDTA إلى 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: يتم الحصول على ADSCs من مصادر تجارية. استخدم الخلايا في الممرات المبكرة. تؤدي الممرات المتعددة إلى انخفاض في قدرة التمايز في ADSCs10.
  3. إزالة الحمض المعدلة وراثيا من ADSCs المعدلة وراثيا من ADSCs التي تنمو في قارورة T75 مخصصة لزراعة الخلايا.
  4. اغسل بقايا ADSCs GM عن طريق شطف طبق زراعة الخلايا ب 5 مل من PBS.
  5. أزل كامل كمية PBS من القارورة.
  6. أضف 2 مل من التربسين/EDTA إلى طبق الزراعة وحضنه على حرارة 37 درجة مئوية حتى تنفصل الخلايا. راقب هذه العملية بمجهر مقلوب.
    ملاحظة: النقر على طبق الزراعة سيسرع انفصال الخلايا.
  7. قم بحظر نشاط التربسين بإضافة 6 مل من الأقراص المعدلة وراثيا الطازجة.
  8. نقل كامل حجم تعليق الخلية من طبق الزراعة إلى أنبوب مناسب للطرد المركزي.
  9. قم بطرد المركزي على الخلايا عند 300 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT).
  10. أزل السوبرناتانت.
  11. تعليق الخلايا في 2 مل من ADSCs GM المضافة حديثا.
  12. احسب كثافة الخلايا وقابليتها للبقاء باستخدام جهاز قياس الدم أو عداد الخلايا التلقائي.
    ملاحظة: يمكن تقييم بقاء الخلايا باستخدام صبغة تريبان بلو.
  13. زرع الخلايا في عدد الآبار المطلوب، 15,000 خلية/بئر، ولوحة بلاستيكية بسعة 96 بئر في 100 ميكرولتر من وسط نمو ADSCs.
    ملاحظة: خلايا البذور دائما في حالة تكرار للحصول على الخلايا الدهنية المخصصة للتحكم والحضانة مع ظروف FA. اعتمادا على نوع التجربة، يمكن زرع بذور ADSCs على أنواع مختلفة من الأطباق أو الأطباق البلاستيكية. كثافة البذور الموصى بها هي 30,000-60,000 خلية لكل سممربع. اعتمادا على عدد الخلايا المطلوبة للتحليلات أو التجارب التالية، قم بتعديل شكل طبق زراعة الخلايا لألواح مكونة من 6 أو 12 بئرا.
  14. زراعة الخلايا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في غلاف جوي رطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
  15. عندما تصل الخلايا إلى 100٪ من التقاء الخلايا (عادة بعد 24-48 ساعة من الطبق)، قم بتحفيز تمايزها إلى خلايا دهنية وفقا للتعليمات أدناه.
    ملاحظة: من المهم الوصول إلى مستوى عال من التقاء الخلايا قبل تحفيز التمايز. وفي حالات أخرى، قد يؤثر ذلك على كفاءة التفاضل. إذا استغرق الأمر أكثر من 48 ساعة للوصول إلى التقاء عالي، فغير الوسط كل 3-4 أيام لوسط نمو ADSC الطازج.

2. استثناء التمايز الديني

  1. تحضير وسط التمايز (DM): مكمل وسط DMEM/F12 ب 10٪ FBS، 2 ملليمولار جلوتامين، مضادات حيوية - محلول مضاد للفطريات (100 U/mL بنسلين، 100 ميكروغرام/ملليتر ستربتومايسين، 0.25 ميكروغرام/مل أمفوتريسين B)، 5 ميكروغرام/مل إنسولين، 0.5 ملليمولار 3-إيزوبيوتيل-1-ميثيلزانثين (IBMX)، 5 ميكرومولار ديكساميثازون، و200 ميكرومولار إندوميثاسين.
    ملاحظة: جهز DM فقط في الحجم المطلوب للاستخدام المباشر. لا تخزنها لفترة طويلة، واستخدم دائما DM طازج التحضير. قبل الاستخدام، سخن ال DM في حمام مائي إلى 37 درجة مئوية. قد يترسب IBMX والإندوميثاسين إذا أضيفا إلى الوسط عند درجة حرارة أقل من 37 درجة مئوية. لإذابته، سخن السائل في حمام مائي إلى 37 درجة مئوية.
  2. قم بإزالة وتخلص من حجم الوسط بالكامل من ال ADSCs المتداخلة بشكل معقم وتخلص.
    ملاحظة: يجب إزالة وسط نمو ADSC بالكامل قبل إضافة DM.
  3. أضف بحذر 100 ميكرولتر لكل بئر من DM إلى الخلايا التي تنمو في صفيحة بسعة 96 بئر.
    ملاحظة: لا تدع الخلايا تجف عند تغيير الوسط.
  4. حضن الخلايا في الحاضنة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربونلمدة 7 أيام.
  5. قم بإزالة وتخلص من كامل حجم DM من ملفات ADSC.
  6. أضف بحذر 100 ميكرولتر/بئر من DM الطازج إلى الخلايا التي تنمو في صفيحة بسعة 96 بئر.
  7. حضن الخلايا في الحاضنة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون2، خلال الأيام السبعة القادمة.
    ملاحظة: يمكن اكتشاف تقدم التمايز الدهني من خلال ملاحظة الحقل الساطع للفراغات الدهنية التي تظهر في الخلايا المستحثة.

3. زيادة الدهون في الخلايا الدهنية

  1. تحضير وسط زراعة الخلايا الدهنية مع مكمل FAs: مكمل وسط DMEM/F12 ب 10٪ FBS، 2 مللي مولار جلوتامين، مضادات حيوية - محلول مضاد للفطريات (100 U/mL بنسلين، 100 ميكروغرام/مل ستربتومايسين، 0.25 ميكروغرام/مل أمفوتريسين B)، 0.33 ملليمول لينوليت، 0.17 ملليمول بالميتات، و0.17 ملليمول أوليت.
  2. تحضير وسط زراعة الخلايا الدهنية للضابطة: مكمل وسط DMEM/F12 بنسبة 10٪ FBS، 2 ملليمولار جلوتامين، مضادات حيوية - محلول مضاد للفطريات (100 U/mL بنسلين، 100 ميكروغرام/مل ستريبتومايسين، 0.25 ميكروغرام/مل أمفوتريسين B)، 0.44٪ ألبومين مصل البقري (BSA)، و0.26٪ إيثانول (كما استخدم المركبان الأخيران كمذيبات FA).
    ملاحظة: جهز السيطرة والمكملة بوسطاء زراعة الخلايا الدهنية من FA فقط بالحجم المطلوب للاستخدام المباشر. لا تخزنها لفترة طويلة، واستخدم دائما وسائط محضرة حديثا. قبل الاستخدام، سخن الوسط في حمام ماء حتى تصل إلى 37 درجة مئوية.
  3. بعد ما مجموعه 14 يوما من التمايز، يتم إزالة وتخلص من حجم وسط DM بالكامل من الخلايا الدهنية المتمايزة على صفيحة تحتوي على 96 بئرا بعناية.
  4. أضف بحذر 100 ميكرولتر لكل بئر من وسط زراعة الخلايا الدهنية مع مضادات FA إلى نصف الآبار التي تنمو خلايا في صفيحة مكونة من 96 بئرا.
  5. أضف بحذر 100 ميكرولتر لكل بئر من وسط زراعة الخلايا الدهنية للتحكم في النصف الثاني من الآبار مع نمو الخلايا في صفيحة مكونة من 96 بئرا.
    ملاحظة: لا تدع الخلايا تجف عند تغيير الوسط.
  6. حضن الخلايا عند 37 درجة مئوية في غلاف جوي رطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربونلمدة 48 ساعة قادمة.
  7. بعد 48 ساعة، استخدم الخلايا الضابطة والخلايا التي تم حضنها مع FAs للتجارب اللاحقة.
    ملاحظة: في هذه المرحلة، يمكن استخدام الخلايا الدهنية المدمنة المحققة لأغراض تجريبية متعددة، مثل تلوين الخلايا، تحليل الأيض الخلوي، أو الزراعة المشتركة مع أنواع خلايا أخرى.

4. بقع قطرات الدهون

  1. تحضير وسط زراعة الخلايا الدهنية: مكمل وسط DMEM/F12 ب 10٪ FBS، 2 ملليمولار جلوتامين، ومضادات حيوية - محلول مضاد للفطريات (100 U/mL بنسلين، 100 ميكروغرام/مل ستربتومايسين، 0.25 ميكروغرام/مل أمفوتريسين B).
  2. تخفيف الصبغة الفلورية لتلوين LDs في وسط زراعة الخلايا الدهنية بتخفيف 1:1000.
  3. إزالة وتخلص من الحجم الكامل من وسط زراعة الخلايا الدهنية ووسط زراعة الخلايا الدهنية مع مكمل ب FAs من الخلايا التي تنمو في صفيحة بسعة 96 بئر.
  4. أضف بحذر 50 ميكرولتر لكل بئر من وسط زراعة الخلايا الدهنية مع صبغة فلورية.
    ملاحظة: لا تدع الخلايا تجف عند تغيير الوسط.
  5. احتضن الخلايا عند 37 درجة مئوية في جو رطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربونلمدة 15 دقيقة.
  6. اغسل صبغة الفلورة باستبداله بوسط زراعة الخلايا الدهنية بسعة 100 ميكرولتر لكل بئر.
  7. التقاط الصورة في قناة كشف الفلورة الخضراء (مثال 427 نانومتر/إيلمنيوم 585 نانومتر) باستخدام المجهر الفلوري.
    ملاحظة: هذا هو البروتوكول الخاص بتلوين الخلايا الحية. يمكن أيضا إجراء التلوين بعد تثبيت الفورمالديهايد للخلايا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تسمح الطريقة الموضحة هنا بتمييز الخلايا الدهنية البشرية إلى خلايا دهنية ناضجة، تليها زيادة تراكم الدهون، مما يحاكي الخلايا الضخمة التي لوحظت في ظروف السمنة. المسار الزمني لتمييز ADSCs البشري موضح في الشكل 1. في اليوم 0، عندما تصل الخلايا إلى 100٪ من التقاء (الشكل 1A)، تظهر ADSCs شكلا ممدودا يشبه المغازل. في هذه المرحلة، يمكن تطبيق بروتوكول التمايز باستخدام محفزات تحتوي على DM أديبوجين. بعد 24 ساعة، تخضع الخلايا لتغيرات شكلية، وي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

البروتوكول الحالي هو إجراء مكون من خطوتين قابل للتكرار لتمييز ADSCs، يليه الحضانة مع FAs لتحقيق نموذج خلوي يحاكي السمنة. الخطوة الحاسمة التي تحدد فعاليته هي عدد مرات ممرات ADSCs بعد عزلها. تؤدي الممرات المتعددة إلى انخفاض قدرة التمايز لهذه الخلايا10.

خلال تمايز الخلايا الدهنية، تنتقل الخلايا الدهنية من الخلايا المنقسمة إلى الخلايا الدهنية التي توقف النمو. توقف النمو في الخلايا قبل الدهنية هو خطوة أساسية لتحفيز التمايز1...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه لا توجد لديهم مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية قد تكون أثرت على العمل المبلغ عنه في هذه الورقة.

شكر وتقدير

تم تمويل المقال من قبل المركز الوطني للعلوم في بولندا، مع منح تلقتها دوروتا نوفاك (OPUS 22، رقم 2021/43/B/NZ3/01458) وألكسندرا سيميشييف (SONATA, 2020/39/D/NZ5/02330).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
3-إيزوبيوتيل-1-ميثيلزانثين (IBMX)ميركI5879
0.25٪ تريبسين/0.05٪ EDTA pH 7.2IITD PAN, Wrocfigure-materials-1آه، بولندا20-500
صفيحة ذات 96 بئرالترمو130188
مضادات حيوية - محلول مضاد للفطرياتسيغما-ألدرتشA5955
مصل البقر الألبومين (BSA)سيغما-ألدرتشA3294
عداد الخلايالا يوجدلا يوجد
الطرد المركزيلا يوجدلا يوجد
ديكساميثازونسيغما-ألدرتشD4902
دولبيكو الوسيط المعدل (DMEM)IITD PAN, Wrocfigure-materials-2آه، بولندا10-500يحتوي على 1 جم/لتر جلوكوز
خليط النسر المعدل من دولبيكو F12جيبكو11320-033
الإيثانولتشيمبور113964200#1L
مصل البقر الجنيني (FBS)جيبكوA5256701
الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية hADSCلونزاPT-5006
الحاضنةلا يوجدلا يوجد
إندوميثاسينسيغما-ألدرتشI8280-5G
الأنسولينسيغما-ألدرتشI9278
المجهر المقلوبلا يوجدلا يوجد
إل-جلوتامينسيغما-ألدرتش25030-024
حمض اللينوليك ملح الصوديومسيغما-ألدرتشL8134
فلورسنت ليبيد سبوتالبيوتيوم70065
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)الترمو10010023
سوديم أولياتسيغما-ألدرتشO7501
سوديم بالميتاتيسيغما-ألدرتشP9767
قارورة زراعة الخلايا T75الترمو130190
تريبان بلوسيغما-ألدرتش95896HJ

المراجع

  1. Lin, X., Li, H. Obesity: Epidemiology, pathophysiology, and therapeutics. Front Endocrinol. 12, 706978(2021).
  2. Wen, X., et al. Signaling pathways in obesity: Mechanisms and therapeutic interventions. Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 298(2022).
  3. Sharma, S., Muthu, S., Jeyaraman, M., Ranjan, R., Jha, S. K. Translational products of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells: bench to bedside applications. World J Stem Cells. 13 (10), 1360-1381 (2021).
  4. Guerreiro, V. A., Carvalho, D., Freitas, P. Obesity, adipose tissue, and inflammation answered in questions. J Obes. 2022, 2252516(2022).
  5. Kleinert, M., et al. Animal models of obesity and diabetes mellitus. Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 140-162 (2018).
  6. Ruiz-Ojeda, F. J., Rupérez, A. I., Gomez-Llorente, C., Gil, A., Aguilera, C. M. Cell models and their application for studying adipogenic differentiation in relation to obesity: A review. Int J Mol Sci. 17 (7), 1040(2016).
  7. Małodobra-Mazur, M., et al. Metabolic differences between subcutaneous and visceral adipocytes differentiated with an excess of saturated and monounsaturated fatty acids. Genes. 11 (9), 1-16 (2020).
  8. Ishaq, A., Tchkonia, T., Kirkland, J. L., Siervo, M., Saretzki, G. Palmitate induces DNA damage and senescence in human adipocytes in vitro that can be alleviated by oleic acid but not inorganic nitrate. Exp Gerontol. 163, 111798(2022).
  9. Berger, E., Géloën, A. Insulin prevents fatty acid induced increase of adipocyte size. Adipocyte. 11 (1), 510-528 (2022).
  10. Eom, J., et al. Visualization and quantification of mesenchymal cell adipogenic differentiation potential with a lineage specific marker. J Vis Exp. (133), e57153(2018).
  11. Pietraszek-Gremplewicz, K., et al. Response of primary human adipocytes to fatty acid treatment. J Cell Mol Med. 29 (10), e70622(2025).
  12. Zhu, D., Shi, S., Wang, H., Liao, K. Growth arrest induces primary-cilium formation and sensitizes IGF-1-receptor signaling during differentiation induction of 3T3-L1 preadipocytes. J Cell Sci. 122 (15), 2760-2768 (2009).
  13. Rosen, E. D., et al. PPARγ is required for the differentiation of adipose tissue in vivo and in vitro. Mol Cell. 4 (4), 611-617 (1999).
  14. Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 20 (10), 1793-1804 (2011).
  15. Styner, M., Sen, B., Xie, Z., Case, N., Rubin, J. Indomethacin promotes adipogenesis of mesenchymal stem cells through a cyclooxygenase independent mechanism. J Cell Biochem. 111 (4), 1042-1050 (2010).
  16. Klemm, D. J., et al. Insulin-induced adipocyte differentiation: activation of CREB rescues adipogenesis from the arrest caused by inhibition of prenylation. J Biol Chem. 276 (30), 28430-28435 (2001).
  17. Inthanon, K., Sririwichitchai, R., Davies, N. M. Rapid screening of adipogenic responses to EGCG in non-induced L929 adipocytes using image-based analysis compared to the conventional 3T3-L1 method. J Appl Pharm Sci. 15 (5), 138-148 (2025).
  18. Abbasi, K., Mehdizadeh, A., Hamishehkar, H., Nouri, M., Darabi, M. Fatty acid composition of lipid fractions in white- and brown-like adipocytes derived from human mesenchymal stem cells. Adipocyte. 14 (1), 2566481(2025).
  19. Pieters, V. M., et al. A three-dimensional human adipocyte model of fatty acid-induced obesity. Biofabrication. 14 (4), 045009(2022).
  20. Watt, M. J., Hoy, A. J., Muoio, D. M., Coleman, R. A. Distinct roles of specific fatty acids in cellular processes: implications for interpreting and reporting experiments. Am J Physiol Endocrinol Metab. 302, 1-3 (2012).
  21. Alsabeeh, N., Chausse, B., Kakimoto, P. A., Kowaltowski, A. J., Shirihai, O. Cell culture models of fatty acid overload: problems and solutions. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1863 (2), 143-150 (2018).
  22. Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. Obesity-induced changes in adipose tissue microenvironment and their impact on cardiovascular disease. Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة