$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
شملت هذه الدراسة 30 مريضا جزئيا يعانون من التهاب الأسنان الغاضر الذين طلبوا رعاية صناعية في عيادة الأطراف الصناعية للأسنان، مركز طب الأسنان الجامعي السريري في كوسوفو، بين سبتمبر 2021 ومارس 2022. تم الحصول على الموافقة الأخلاقية من مجلس المراجعة المؤسسية (الموافقة رقم 378/19)، وتم الالتزام بجميع الإجراءات بمبادئ إعلان هلسنكي. تم الحصول على موافقة مكتوبة ومستنيرة من جميع المشاركين.
تم تحديد حجم العينة بناء على أبحاث سابقة، تشير إلى أن 11 إلى 30 مشاركا كافيون للحصول على نتائج مهمة في المعايير الميكروبية ودواعية اللثة بين مرتدي RPD21,23. بافتراض اختبار t ثنائي الذيل مع مستوى ألفا 0.05، أشار تحليل القدرة إلى أن حجم عينة مكون من 28 مشاركا سيوفر قدرة بنسبة 80٪ لاكتشاف فرق ذو دلالة إحصائية بهذا الحجم. لمراعاة احتمال الانسحاب، قمنا بتسجيل 30 مشاركا. علاوة على ذلك، كانت فترة متابعة لمدة ثلاثة أشهر كافية لملاحظة زيادة في الحمل البكتيري لدى هؤلاءالمرضى 24.
كان المرضى المؤهلون من المستخدمين لأول مرة للأجهزة الصناعية، حيث ظهروا بأسنان طبيعية مجاورة ومعادية. شملت معايير الاستبعاد: أعماق الفحص >4 ملم، حالة ضعف المناعة (مثل العلاج الكيميائي)، استخدام المضادات الحيوية خلال ال 90 يوما الماضية، التدخين المفرط (>25 سيجارة/يوم)، وضعف الإدراك يعيق فهم إجراءات اضطراب الشخصية الواقعية.
تلقى جميع المشاركين أجهزة RPD محفوظة بالمشبك مصنوعة بإطار معدني من الكوبالت-كروم وراتنج أكريليك (بولي ميثيل ميثاكريلات). تم تخصيص تصميم كل منطقة RPD بناء على تصنيف النزل الداخلي، وجودة الحافة المتبقية، والاعتبارات البيوميكانيكية.
إجراء جمع العينات
تم جمع العينات حصريا على أسنان الدعامة لأطقم الأسنان الجزئية القابلة للإزالة (RPDs) بين النقاط الزمنية T0 و T3. طلب من المشاركين أولا الغرغرة جيدا بالماء لإزالة أي بقايا غذائية. قبل جمع العينات، كان يتم عزل سن الدعامة المختار باستخدام لفائف قطنية للحفاظ على بيئة عمل جافة. تم إدخال نقطتين ورقيتتين معقمات (رقم 35؛ 04 مدبببة) في الثلب اللثي على الجوانب الوسطى والبعيدة من سطح الفقاع للسن وتركتا في مكانهما لمدة دقيقة واحدة. ثم تم نقل نقاط الورق إلى أنبوب دقيق معقم يحتوي على 1.5 مل من محلول ملحي عادي ونقلها إلى مختبر ميكروبيولوجي مخصص. تم تخزين العينات عند -20°م حتى عملية عزل الحمض النووي.
تحضير وتضخيم الحمض النووي البكتيري:
تم استخدام اختبار بارودونتوسكرين (جدول المواد) لتحديد T. denticola، T. forsythia، و P. gingivalis باستخدام RT-PCR26. يتكون الاختبار من: تحضير الحمض النووي؛ تضخيم PCR في الوقت الحقيقي باستخدام كواشف محددة (خليط لتضخيم البكتيريا الشاملة، وخليط للتضخيم البكتيري الانتهازي، وخليط لتضخيم الحمض النووي الجينومي البشري)؛ وتسجيل وتفسير نتائج التضخيم.
تم استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعة استخراج الحمض النووي (جدول المواد)، وفقا لإرشادات الشركة المصنعة لضمان جودة الحمض النووي المثلى. يستخدم الاختبار تحليل PCR النوعي في الوقت الحقيقي مع مزيج PCR مختوم بالبارافين. يشمل هذا المزيج جهاز تحكم داخلي للتحقق من صحة إجراء PCR وجهاز التحكم في أخذ العينات (SIC) لتقييم جودة الاستخلاص وتأكيد كمية كافية من الحمض النووي للتضخيم الدقيق.
تم إجراء تضخيم PCR باستخدام شرائط وأغطية متخصصة، مع كواشف تشمل محلول تاك-بوليميراز، وخليط رئيسي تحت طبقة البارافين، وعينة DNA، وزيت معدني. برنامج PCR هو كما يلي: (1) إزالة الطبعة الأولية عند 80 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، (2) إزالة الطبعة عند 94 درجة مئوية لمدة دقيقة و30 ثانية، (3) 5 دورات من 30 ثانية عند 94 درجة مئوية (إزالة الطبعة)، 15 دورة عند 64 درجة مئوية (ارتباط البادئات وإطالة، الكشف عن الفلورة)، (4) 45 دورة من 10 ثوان عند 94 درجة مئوية (إزالة الطبعة)، 15 ثانية عند 64°C (ارتباط البادئية وتمديدها، كشف الفلورة)، (v) 5 ثوان عند 94 °م (إزالة الفلورة النهائية).
تم إجراء كشف الفلورة على قناتي الكشف من فام وسيداس، باستثناء أنبوب No5 الذي يحتوي على العلامة (حيث تم اكتشاف التألق على قناتي Fam و Rox). تم إجراء عملية التضخيم باستخدام أجهزة تدوير حرارية في الوقت الحقيقي (جدول المواد). تم استخدام برنامج RealTime للجهاز (الإصدار 7.9) للتسجيل التلقائي، والتفسير، والتحليل الكمي لبيانات تضخيم PCR، مما مكن من تقدير حمل الممرض بدقة.
تم تمثيل الأحمال الميكروبية ك "Lg (مكافئات الجينوم/عينة)". تم تقديم النتائج في ثلاثة نطاقات في تقرير اختبار بارودونتوسكرين لكل مريض، بناء على مستويات الحمل البكتيرية كما يلي: P. gingivalis (طبيعي <5.0؛ متوسط ≥5.0؛ شديد >6.0)؛ T. forsythia (طبيعي <5.0؛ متوسط ≥5.0؛ شديد >5.5)؛ وT . denticola (طبيعي <3.5؛ متوسط ≥3.5؛ شديد >5.0).
الفحص السريري
شمل الفحص السريري فحصا مفصلا لحالة اللثة للأدمنت وغير الدعامة عند T0 وT3. تم تقييم مؤشر البلاك (PI) باستخدام مسبار أسنان وفقا لمعايير سيلنس-لو (0-3)27. تم تقييم حالة اللثة عند ست نقاط على سطح السن باستخدام مؤشر اللثة (GI) وفقا للمعايير التالية: 0، عدم وجود التهاب؛ 1، التهاب خفيف؛ 2، التهاب مع نزيف لثتي أثناء الفحص؛ 3، التهاب شديد مع احتمال نزيف لثتي تلقائي28.
تم قياس عمق الاستطلاع (PD) باستخدام مسبار ويليامز من حافة اللثة إلى نهاية عمق الجيب السريري29. تم تحديد حركة الأسنان (TM) عن طريق الجو الثنائي اليدوي في الاتجاهين الأفقي والعمودي، وفقا لمعيار ميلر30.
تلقى جميع المشاركين في الدراسة علاجا كافيا لالتهاب اللثة غير الجراحي قبل الفحص السريري، بما في ذلك إزالة البلاك السني والكتلة باستخدام التقشير بالموجات فوق الصوتية. كما تم تعليم المشاركين إجراءات نظافة الفم، مثل تنظيف الأسنان وتنظيف أطقم الأسنان، بالإضافة إلى تلقي نصائح حول إزالة أطقم الأسنان ليلا.
التحليل الإحصائي
تم تحليل البيانات باستخدام Microsoft Excel وIBM SPSS Statistics for Windows. تم حساب الإحصائيات الوصفية (المتوسط، الانحراف المعياري، والمدى) للعمر، والأحمال الميكروبية، ومؤشرات اللثة، بما في ذلك المؤشر السطحي، والهضمي، والاضطراب الفردي، والطب المغناطيسي. تم تقييم التغيرات في المعايير السريرية والميكروبيولوجية بين ما قبل (T0) و3 أشهر بعد الإدخال (T3) باستخدام اختبار ويلكوكسون لتحديد الرتبة الموقعة للبيانات غير المعلمية المزدوجة. تم استخدام اختبار فيشر الدقيق (محاكاة مونت كارلو، ثنائية الوجه) لتقييم البيانات التصنيفية المتعلقة بتصنيف الأحمال الميكروبية. تم استخدام معامل الارتباط الرتب (ρ) لسبيرمان لتقييم الروابط بين الأحمال الميكروبية ومعلمات اللثة. اعتبرت قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية لجميع التحليلات.