بحثت هذه الدراسة في تأثير العلاج بالإبر الكهربائية (EA) على خلل الأوعية الدموية الناتج عن ارتفاع الملح. عكس EA الضرر الوعائي وخلل توازن الأمعاء، ربما عن طريق تعديل ميكروبات معوية محددة.
مقالة بحثية
* These authors contributed equally
بحثت هذه الدراسة في تأثير العلاج بالإبر الكهربائية (EA) على خلل الأوعية الدموية الناتج عن ارتفاع الملح. عكس EA الضرر الوعائي وخلل توازن الأمعاء، ربما عن طريق تعديل ميكروبات معوية محددة.
تهدف هذه الدراسة إلى دراسة الإمكانات العلاجية والآليات للوخز بالإبر الكهربائية (EA) في تخفيف خلل الأوعية الدموية الناتج عن الأنظمة الغذائية عالية الملح، مع التركيز على تعديل ميكروبيوم الأمعاء. قمنا بتقسيم 21 فأرا عشوائيا إلى مجموعات ضابطة طبيعية، ونموذج عالي الملح، وتدخل EA (n = 7 لكل مجموعة). تم تحفيز نموذج "متلازمة ركود الدم عالي الملح" في فئران ويستار بواسطة تروية داخل المعدة بنسبة 12٪ NaCl. أجريت العلاجات بين الساعة 17:00 و19:00 بتوقيت بكين: تم تقييد الفئران بقطعة قماش ناعمة، تلتها تحفيز EA لمدة 20 دقيقة عند BL23 وKI3. بعد التجربة، تم جمع عينات دم الفئران، والأوعية الدموية، والبراز. تم تقييم تأثيرات الأوعية الدموية من خلال اختبار وظيفة التخثر، والتحليل الدموي، والتقييم النسيجي الشرياني المرضي. تم استخدام تسلسل 16S rDNA لتحليل تركيب وتغيرات وفرة ميكروبيوم الأمعاء. كشفت النتائج أن تناول الملح المزمن العالي يعطل لزوجة الدم، ويؤذي سلامة بطانة الأوعية الدموية، ويسبب خلل ميكروبي في الأمعاء. ومن اللافت أن علاج EA عكس هذه التغيرات المرضية بشكل فعال. كما حدد تحليل الارتباط ميكروبيوتا معوية محددة (مثل لاكنوسبيراسيا ورومينوكوكاسيا) التي ترتبط بقوة بتغيرات في معايير لزوجة الدم (P < 0.05). لذلك، تستنتج هذه الدراسة أن الاعتلال الوعائي الناتج عن النظام الغذائي عالي الملح يمكن عكسه بواسطة علاج EA، والذي قد يعزى إلى قدرة EA على تنظيم ميكروبيوم الأمعاء المشاركة في استقلاب حمض الصفراء وتخليق الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة.
يلعب الملح الغذائي دورا حيويا في الحفاظ على توازن السوائل وتوازن الخلية، ومع ذلك فإن الإفراط في استهلاكه يمثل عامل خطر معروف لأمراض القلب والأوعية الدموية الدماغية1. توصي منظمة الصحة العالمية بتحديد تناول الصوديوم اليومي إلى أقل من 5 جرامات للبالغين الأصحاء2. أظهرت الأبحاث أن النظام الغذائي عالي الملح (HSD) يضعف وظيفة الأوعية الدموية، وأن أمراض القلب والأوعية الدموية، وهي أكثر الأمراض انتشارا في العالم، غالبا ما يصاحبها اعتلال الأوعية الدموية3. تؤكد هذه النتائج أن إصلاح تلف البطانة الوعائية الناتج عن HSD يشكل استراتيجية حاسمة لمنع تقدم أمراض القلب والأوعية الدموية. "متلازمة الجمود الدموي" (التي تتميز بحركة الدم الراكدة وتراكم الدم الداخلي) تتوافق مع خلل التخثر القابل للقياس في الطب الحديث. تشمل مؤشرات التحقق الحيوية الرئيسية قصر وقت البروثرومبين (PT) بشكل ملحوظ ووقت الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط (APTT)، بالإضافة إلى زيادة ملحوظة في الفيبرينوجين (FIB) ووقت التثرومبين (TT). تعكس هذه المؤشرات حالة فرط تخثر، تتوافق مباشرة مع الخصائص المرضية لحالة سبات الدم.
تعد ميكروبيومات الأمعاء، التي تعيش في جميع أنحاء الجهاز الهضمي، منظمات رئيسية للعمليات المناعية الأيضية وتوازن الأمعاء، مع التأثير على مسارات فسيولوجية ومرضية متنوعة4. تشير الأدلة الناشئة إلى أن الإفراط في استهلاك الملح يسبب خلل في الأمعاء واختلال في التوازن الغذائي، مما يحفز تنشيط المناعة الالتهابية التي تظهر كالتهاب موضعي مع تعزيز تلف الدورة الدموية الدقيقة، وإعادة تشكيل الأوعية الدموية، وخلل البطانة الجهازية 1,5. تم الإبلاغ عن أن اضطراب HSD المزمن يسبب زيادة نسبية في مستويات البكتيرويدات المعوية، والرشاش، وأنواع بريفوتيلا في الفئران، وقد ارتبط بالمساهمة في تطور ارتفاع ضغط الدم والالتهاب الوعائي6.
الوخز بالإبر، وهو حجر الأساس في الطب الصيني التقليدي (TCM)، يستخدم إدخال الإبرة الدقيق في نقاط خزنة محددة كعلاج مكمل وبديل قائم على الأدلة في الممارسة السريرية. تعترف المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ومنظمة الصحة العالمية (WHO) بالعلاج بالإبر الصينية كتدخل موثق سريريا لحالات مرضية متعددة. تظهر الأدلة الناشئة أن الوخز بالإبر له آلية علاجية مزدوجة 7,8، تعدل تركيب ميكروبيوم الأمعاء مع كبح الوسطاء الالتهابيين الوعائيين، وبالتالي تخفف بشكل جماعي من التطور المرضي في الاضطرابات ذات الصلة. من المهم أن العلاج بالإبر الصينية فعال في خفض ضغط الدم واستعادة وظيفة البطانة في الأوعية الدموية التالفة9.
تم اختيار EA على الوخز بالإبر اليدوي بسبب معايير التحفيز الموحدة والقابلة للقياس، التي تقلل من التغير المعتمد على المشغل وتعزز قابلية تكرار النتائج. لذلك، درسنا تأثير علاج EA على ميكروبيوتا الأمعاء في الفئران المصابة بنموذج متلازمة الجمود الدموي عالي الملح (HSBS) وقمنا بتقييم فعالية EA على الاعتلال الوعائي الناتج عن ارتفاع الملح من خلال التغيرات النسيجية المرضية في الدم والريولوجيا الوعائية. لفهم دور ميكروبيوتا الأمعاء بشكل أفضل في تحسين الآفات الوعائية بواسطة العلاج المبكر المبكر، أجرينا تحليل ارتباط بين أجناس مختلفة من ميكروبيوم الأمعاء ومعدل قطع الدم الكامل وترسيب الدم.
لذلك افترضنا أن EA يخفف من الاعتلال الوعائي الناتج عن HSD من خلال استعادة توازن ميكروبيوم الأمعاء. لاختبار ذلك، هدفنا إلى: (1) قياس التأثيرات الوقائية للحمض النووي على وظيفة وتركيب الأوعية الدموية، و(2) تحديد الأنواع الميكروبية المميزة في الأمعاء التي يعدلها EA والتي ترتبط بهذه التحسينات. علاوة على ذلك، حدد تحليل بيرسون الارتباط علاقات مهمة بين الميكروبيونات والأوعية الدموية، خاصة بين تقلبات الأجناس الوفيرة بشكل مختلف والاضطرابات الدموية. حسب علمنا، هذه هي أول دراسة تستكشف آليات الحماية للحمض النووي في تحسين الاعتلال الوعائي الناتج عن النظام الغذائي عالي الملح من منظور ميكروبيوتا الأمعاء. يظهر التصميم التجريبي لهذه الدراسة في الشكل 1.

الشكل 1: مخطط تقني تجريبي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أجريت التجربة بأكملها في المركز التجريبي لكلية الطب الأساسي بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي. تمت الموافقة على جميع إجراءات رفاهية والتجارب من قبل لجنة أخلاقيات رعاية المختبرية في جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (الأخلاقيات رقم 2024078). أجريت التجارب وفقا لدليل NIH لرعاية واستخدام المخبرية (مراجعة 1986، المنشورات 86-23).
والنظام الغذائي
ذكور وإناث فئران ويستار الخالية من مسببات الأمراض الخاصة (SPF)، التي تتراوح أعمارها بين 6-8 أسابيع، كان وزنها 200 ± 20 جرام. كانت جميع الفئران تعيش في غرف جيدة التهوية بدورة من الضوء إلى الظلام لمدة 12 ساعة، وكان بإمكانها الوصول المجاني إلى الطعام والماء.
النماذج والمجموعات
تم تحفيز نماذج بناء على الخبرة البحثية السابقة10. بعد فترة تأقلم مدتها 7 أيام، تم توزيع 21 فأر ويستار (توزيع 50٪ من الذكور/الإناث) عشوائيا إلى ثلاث مجموعات تجريبية (n = 7/مجموعة) باستخدام مولد الأرقام العشوائية في Excel، مع الحفاظ على توازن تقريبي لعدد الفئران الذكور والإناث في كل مجموعة لتقليل تأثير الجنس على النتائج11. السيطرة الطبيعية (NC): تلقيت تشويش معدي يومي (1 مل/100 جم) من الماء المنقي. نموذج عالي الملح (HS) وتدخل EA (EA): تم إعطاء محلول NaCl بنسبة 12٪ (1 مل/100 جم) عبر القياس اليومي. تم الحفاظ على جميع التدخلات لمدة 30 يوما متتالية.
علاج EA
بدأ العلاج في اليوم التالي للنمذجة الناجحة. تم اختيار EA على الوخز بالإبر اليدوي بسبب معايير التحفيز الموحدة والقابلة للقياس، التي تقلل من التغير المعتمد على المشغل وتعزز قابلية تكرار النتائج. تم تحديد مواقع BL23 (شينشو، خط الزوال المثانة) وKI3 (تايكسي، خط الزوال الكلى) بناء على معايير تحديد مواقع نقاط الوخز بالإبر للفئران في جمعية الصينية للعلاج بالإبر الصينية وحركة الوخز12. يقع BL23 على بعد 6 مم جانبيا من الخط الأوسط الظهري، أسفل الفقرة القطنية الثانية. كان KI3 يقع عند نقطة الانخفاض المتوسطة بين أعلى نقطة في المطرق الإنسي والحد الخلفي لوتر أخيل. تمت إزالة الشعر المحلي عند نقاط الإبرة وتعقيمه. تم استخدام إبر الوخز بالإبر المعقمة القابلة للاستخدام مرة واحدة (0.18 مم × 13 مم) لثقب نقاط الإبر عموديا، مع أعماق إدخال 4-6 مم ل BL23 و3-5 مم ل KI3. كان مشبك القطب الموجب لجهاز الوخز بالإبر الكهربائية متصلا بمقبض إبرة الإبرة عند BL23 من جهة واحدة، ومشبك القطب السالب بمشبك KI3 على نفس الجانب. معلمات جهاز الوخز بالإبر الكهربائية: شكل الموجة: موجة كثيفة متفرقة (10/50 هرتز)؛ التردد: 5 ثوان للموجة المتفرقة، 10 ثوان للموجة الكثيفة؛ الشدة: 1-2 مللي أمبير، معدلة حسب استجابات الجرذان المتشنجة والمؤلمة (الصراخ، سلوكيات المقاومة)؛ عرض النبض: ≤ 1 MS. بروتوكول التحفيز: تم إجراء التدخل يوميا من الساعة 17:00 إلى 19:00 (بتوقيت بكين)، واستمر 20 دقيقة في كل مرة. الدورة: تتكون دورة العلاج الواحدة من 7 أيام، مع 4 دورات ويوم واحد من الراحة بين كل دورة. العملية المحددة موضحة في الشكل 2 (تم إنشاؤها باستخدام BioGDP.com13).

الشكل 2: الجدول الزمني التجريبي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
جمع العينات والتحضير
بعد شهر من الجافاج، تم جمع دم وريدي الحجاجي من الفئران قبل تدخل EA. تم استخراج عينات البلازما بالطرد المركزي عند 1000 × جرام لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. في نهاية العلاج، تم جمع فضلات طازجة من كل مجموعة من الفئران. تم تخدير الفئران بنسبة 10٪ من الإيزوفلوران المستحلب (30 ملغ/كغ) وتم إعدامهم. تم فتح تجويف البطن، وتم جمع حوالي 5 مل من الدم من الشريان الأبهر البطني لقياس لزوجة معدل القص الكامل للدم (WBSRV) خلال 4 ساعات. تم جمع أنسجة الأبهر البطني لإجراء تحليل نسيجي مرضي. تم تخزين جميع العينات عند -80 درجة مئوية للاستخدام لاحقا.
اختبار WBSRV
بعد الانتهاء من النمذجة، تم جمع حوالي 4-5 مل من الدم الكامل من الشريان الأبهر البطني للفئران باستخدام إبرة جمع الدم ووضعها في أنابيب مضادات تخثر الهيبارين الصوديوم. تم هز الأنابيب بلطف لضمان خلط عينات الدم مع مضاد التخثر. خلال 4 ساعات، تم قياس معدل ترسيب الدم الأحمر ونسبة ترسيب الدم الحمراء (ESR) باستخدام محلل أمراض الدم الآلي بالكامل.
علم الأنسجة الوعائية
تم تثبيت الأنسجة الوعائية في محلول بارافورمالديهايد بنسبة 4٪ لمدة لا تقل عن 24 ساعة وتم تقسيمها بسماكة 3 ميكرومتر لتلوين الهيماتوكسيلين-إيوزين (HE). تم التقاط الصور بتكبير 100× و400×.
تسلسل 16S rDNA
تم استخراج الحمض النووي الجينومي من عينات براز كل مجموعة. تم استخدام تسلسلات البرايمر V3-V4 (341F: 5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'؛ 805R: 5'-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3') لتضخيم PCR للحمض النووي الكلي. كان برنامج تضخيم PCR كما يلي: إزالة الطبيعة قبل الطبيعة عند 98 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، إزالة الطبيعة عند 98 درجة مئوية لمدة 10 ثوان، التلدين عند 54 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، والتمديد عند 72 درجة مئوية لمدة 45 ثانية، مع إجمالي 32 دورة، تلتها تمديد نهائي عند 72 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. تم تنقية وقياس منتجات PCR. تم تنفيذ تسلسل النهاية المزدوجة (2×250 bp) على منصة NovaSeq 6000 للتسلسل المستمر. تم دمج وتصفية قراءات الطرف المزدوج للحصول على بيانات عالية الجودة. باستخدام إضافة DADA2 في QIIME 2، تم إجراء تصفية طول وإزالة الضوضاء. أدت هذه العملية إلى توليد متغيرات تسلسل الأمبليكون (ASVs) وجداول وفرة ASV، تلتها إزالة ASVs المفردة. تم إجراء التعليقات التصنيفية وتحليل الوفرة بناء على ملف تسلسل ASV باستخدام قاعدة بيانات SILVA للتحقيق في اختلافات الأنواع وتركيبة المجتمع عبر العينات. تم تقييم تنوع الأنواع والتغيرات في الوفرة النسبية من خلال تحليلات التنوع α والتنوع β، وتم إجراء تصور بيانات على هذا الموقع الإلكتروني (https://www.omicstudio.cn/home).
التحليلات الإحصائية
تم إجراء تحليلات إحصائية باستخدام SPSS 26.0. تم اعتبار قيمة P < 0.05 ذات دلالة إحصائية. بالنسبة للبيانات ذات التباينات المتجانسة، تم استخدام تحليل النوفاع الجنوي أحادي الاتجاه للمقارنات بين المجموعات، تليها اختبارات الفرق الأقل دلالة بعد الوقوع (LSD) إذا وجدت فروق ذات دلالة. للبيانات ذات التباين غير المتجانس، تم استخدام تحليل النوفاع غير البارامتري أحادي الاتجاه حسب الرتب. تم تطبيق تحليل اختبار مان-ويتني U لتقييم التغيرات في تركيب ميكروبيوم الأمعاء وبنية المجتمع. تم استخدام تحليل الارتباط التصنيفي لبيرسون لتقييم الارتباطات بين بكتيريا الأمعاء ذات وفرة تفاضلية ومؤشرات أخرى. تم استخدام تحليل الارتباط ببيرسون لأن البيانات كانت تتوافق مع افتراضات الطبيعية والخطية، والتي تم التحقق منها بواسطة اختبار شابيرو-ويلك واختبار دوربين-واتسون. تم توليد الرسوم البيانية الإحصائية والخرائط الحرارية باستخدام GraphPad Prism 10.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
التحقق من صحة نموذج
تلعب معايير التخثر الأربعة دورا محوريا في أبحاث الآفات الوعائية من خلال مراقبة اضطرابات وظيفة التخثر المرتبطة ارتباطا وثيقا بالتغيرات المرضية الوعائية. أظهر تقييم ما بعد النمذجة لدم الضفيرة الوريدية الرجعية الحجاجية تغييرات كبيرة في معايير التخثر (PT، APTT، FIB، TT) بين مجموعات HS/EA مقابل مجموعات NC (الشكل 3). تم توفير قيم اختبار محددة في الجدول التكميلي 1. وهذا يشير إلى أن HSD قد يحفز وظيفة تخثر غير طبيعية في الفئران.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تعد الآفات الوعائية عاملا حاسما في تطور وظهور أمراض القلب والأوعية الدموية المختلفة واضطرابات الأيض. تشمل آثارها الضارة خلل في الأوعية الدموية، وتجلط الدم غير الطبيعي، وترسيب الدهون، وتكون اللويحات التي قد تؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم، والجلطة، وتطور اللويحات الشريانية، مما يؤدي في النهاية إلى أمراض القلب والأوعية الدموية المختلفة14، 15، 16. لذلك، فإن التدخل في الوقت المناسب لوقف تقدم الآفات الوعائي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب مصالح.
تم تمويل هذا البحث من قبل إدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (رقم المنحة 2024NSFSC0717). شكرا ل Figdraw على المساعدة المقدمة في تحضير التمثال.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| إبر الوخز بالإبر | شركة سوتشو لمصنع المستلزمات الطبية المحدودة. | 242059 | 0.18 &مرة؛ 13 مم |
| مجموعة اختبار وقت الترومبوبلاستين الجزئي المنشط (APTT) (طريقة التخثر) | شركة بكين سيليشر تكنولوجي إنك. | R21D24C4 | |
| خرز AMPure XP | جينوميات بيكمان كولتر | A63881 | |
| محلل التخثر التلقائي | شركة بكين سيليشر تكنولوجي إنك. | SF-8050 | |
| مجموعة اختبار الفيبرينوجين (FIB) (طريقة التخثر) | شركة بكين سيليشر تكنولوجي إنك. | R31D24D2 | |
| مختبر الريولوجيا الدموية الأوتوماتيكي بالكامل | شركة بكين سيليشر تكنولوجي إنك. | SA-5600 | |
| جراف باد بريزم 10 | شركة جراف باد سوفتوير | ||
| H& محلول التلوين الإلكتروني | شركة ووهان سايوير للتكنولوجيا الحيوية المحدودة | G1005 | |
| مجموعة قياس كمية مكتبة إلومينا | كابا بيوساينسز | 7960166001 | |
| إيزوفلوران | علم الحياة للدفع الخلفي | R510-22-10 | 100 مل |
| مجموعة استخراج الحمض النووي الجينومية للبراز المعتمد على الخرزات المغناطيسية | بيوتيك | AU46111-96 | |
| مجهر نيكون إكليبس Ci-L القائم للضوء الأبيض | نيكون | ||
| QIIME 2 | https://qiime2.org/ | ||
| جهاز الوخز بالإبر الإلكتروني SDZ-II Huatuo | شركة سوتشو لمصنع المستلزمات الطبية المحدودة. | SDZ-II | |
| قاعدة بيانات سيلفا | الإصدار 138، https://www.arb-silva.de/ | ||
| كلوريد الصوديوم | شركة تشنغدو جينشان للمواد الكيميائية المحدودة. | 20231008 | 500 جرام |
| فئران ويستار SPF | شركة SPF (بكين) للتكنولوجيا الحيوية، المحدودة. | SCXK (بكين) 2024-0001 | |
| مجموعة اختبار وقت التخثر (TT) (طريقة التخثر) | شركة بكين سيليشر تكنولوجي إنك. | R4D24E1 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن