مقالة منهجية

بروتوكول لجمع التعليق أحادي الخلية من قرنية الفئران

DOI:

10.3791/69844

⸱

أبريل 3, 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology, the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, 2School of Clinical Medicine, Guizhou Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نقدم بروتوكولا للحصول على تعليق خلية واحدة عالية الجودة من قرنيات الفأر الكاملة من خلال الهضم المتسلسل باستخدام الكولاجيناز A والتريبسين. تنتج هذه الطريقة خلايا مفردة قابلة للحياة ذات سلامة RNA عالية، مما يجعلها متوافقة مع التطبيقات اللاحقة مثل تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية وقياس خلية التدفقy.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باعتبارها الطبقة الخارجية من كرة العين، تلعب القرنية دورا حيويا في الحفاظ على توازن سطح العين والرؤية. مكنت التطورات الحديثة في تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية (scRNA-seq) من تحليل عالي الدقة لتباين خلايا القرنية، ومع ذلك لا يزال تحضير معلقات خلية واحدة عالية الجودة من نسيج القرنية تحديا بسبب بنيته الكثيفة والمعقدة. في هذه الدراسة، نؤسس بروتوكولا قويا لتوليد تعليق خلية واحدة من قرنية الفئران الكاملة. تتضمن العملية تقطيع القرنيات إلى شظايا دقيقة تليها هضم إنزيمي متسلسل باستخدام الكولاجناز A والتريبسين. تم تقييم جودة تعليق الخلية الناتج من خلال عدة مقاييس: تم استخدام التلوين الأزرق بتقنية التربان لتقييم بقاء الخلايا وعددها؛ مكنت التلوين المناعي الفلوري لبانسيتوكيراتين وكيراتوكان من تحديد وقياس أنواع خلايا القرنية الرئيسية؛ وتم التحقق من سلامة الحمض النووي الريبي باستخدام محلل حيوي. ينتج هذا البروتوكول باستمرار تحضيرات خلية واحدة مع أعداد خلايا عالية، وقابلية جدوى ممتازة (≥ 94.6٪)، ونسبة عالية من الخلايا المفردة (96.3٪)، مما يلبي المتطلبات المتوافقة مع التطبيقات اللاحقة المتطلبة، بما في ذلك scRNA-seq.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقع القرنية في الطبقة الخارجية من كرة العين، وهي ضرورية لوظائفها الحاجزة والانكسارية، بسبب هيكلها المنظم للغاية الذي يتكون من خمس طبقات مميزة: الظهارة، طبقة بومان، الستروما، غشية ديسكيميت، وبطانةالعين 1. ظهارة القرنية هي بنية حرشفية طبقية غير مقرحة وغير مقرحة توفر حاجزا ماديا ضد مسببات الأمراض الخارجية وتظهر قدرات قوية مضادة للميكروبات وتجددها. تتكون الجدة من ألياف كولاجينية محاذية بدقة، وتحافظ على شفافية القرنية ومعامل انكسار منتظم2. البطانة، وهي طبقة وحيدة الخلية، تنظم نقل السوائل بين السدى والأخلاط المائي، مما يحافظ على ترطيب القرنية وإمدادات المغذيات3. ومع ذلك، فإن هذا التعقيد البنيوي والخلوي المعقد قد شكل تاريخيا تحديات كبيرة للتحقيق في الوظائف البيولوجية للقرنية والآليات الأساسية4.

لدراسة التفاعلات بين الخلايا وتحديد العلامات الخاصة بنوع الخلية، تستخدم تقنيات مثل فرز التدفقالخلوي 5 وتسلسل الحمض النووي الريبي لخلية واحدة (scRNA-seq)6 على نطاق واسع. ومع ذلك، فإن العقبة التقنية الرئيسية المشتركة في كلا النهجين هي تحضير أنظمة تعليق عالية الجودة أحادية الخلية. تعد المعايير مثل إجمالي الإنتاجية للخلية، ونسبة الخلايا الفردية، وقابلية البقاء للخلايا ضرورية لموثوقية التطبيقات التالية التي تهدف إلى توصيف وظيفة خلايا القرنية وتعبير العلامة السطحية7. على الرغم من أهميتها، لا يزال هناك نقص في بروتوكولات موحدة وفعالة لتوليد تعليق خلية واحدة من قرنية الفأر الكاملة.

تم إثبات عدة طرق للحصول على معلقات خلية واحدة من نسيج القرنية. تم استخدام الهضم الإنزيمي المتسلسل باستخدام كولاجناز A أو التريبسين أو TrypLE لعزل الخلايا المفردة من قرنية الإنسان والفئران8. كما تم استخدام التريبسين المتكرر لتفكك القرنية⁷. بالإضافة إلى ذلك، تم تطبيق مجموعات تفكك الأنسجة التجارية التجارية، مثل تلك من Miltenyi Biotec، بنجاح لتوليد تعليقات أحادية الخلية في القرنية. في دراستنا المقارنة السابقة لطرق هضم القرنية المختلفة، أظهرنا أن العلاج المتسلسل بالكولاجناز والتريبسين يشكل النهج الأمثل. تنتج هذه الطريقة باستمرار أعدادا عالية من الخلايا، وقابلية بقاء ممتازة (≥94.6٪)، ونسبة عالية من الخلايا المفردة (96.3٪)، وسلامة RNA محفوظةجيدا 10.

في هذا البروتوكول، نقدم إجراء تفصيليا خطوة بخطوة لتوليد تعليق خلية واحدة عالية الجودة من قرنية الفأر الكاملة باستخدام هذه الاستراتيجية المحسنة للهضم الإنزيمي، استنادا إلى خبرتنا المثبتة ونتائجنا السابقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تزويد إناث فئران C57BL/6 (B6) التي تتراوح أعمارها بين 6-8 أسابيع من قبل مركز الحيوانات التجريبية في جامعة قويتشو الطبية. تم إيواء الحيوانات ضمن دورة إضاءة 12 ساعة و12 ساعة مظلمة مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء. تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل لجنة أخلاقيات الحيوانات التجريبية في جامعة قويتشو الطبية (الموافقة رقم 2305185) وأجريت وفقا لبيان ARVO الخاص باستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية.

1. التحضير

  1. تحضير الأدوات الجراحية: نظف زوجين من مقص العيون، وزوجين من ملقط العيون، وزوج واحد من ملقط الأنسجة، وأنبوب طرد مركزي واحد بحجم 2 مل عن طريق الشطف مرتين بالماء المقطر المزدوج (DDW). قم بتعقيم الأجهزة والأنابيب باستخدام جهاز تعقيم بالبخار. جفف جميع المكونات طوال الليل في فرن تقليدي عند 65 درجة مئوية.
  2. تحضير المحلول
    1. الوسط الهرموني التكميلي للظهارة (SHEM): جهز SHEM عن طريق إضافة DMEM/F12 بالمكونات التالية: 5٪ (v/v) مصل البقر الجنيني (FBS)، 0.5٪ (v/v) ثنائي ميثيل كبريتسي (DMSO)، عامل نمو البشرة للفأر 10 ng/mL، 5.5 ميكروغرام/ملتر ترانسفريرين، 0.5 ميكروغرام/ملتر هيدروكورتيزون، 1٪ (v/v) بنسلين-ستربتوميسين (100 U/mL بنسلين، 100 ميكروغرام/مل ستريبتومايسين).
      ملاحظة: يستخدم SHEM للحفاظ على بقاء الخلايا أثناء المعالجة. يمكن استبداله بوسائط بديلة مثل DMEM القاعدي أو محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) يحتوي على 10٪ على الأقل (v/v) FBS.
    2. محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)
      1. إذابة 22.4 جرام من مسحوق PBS في 2 لتر من الماء المقطر المزدوج (DDW) تحت التحريك باستخدام محرك مغناطيسي للحصول على 1× PBS.
      2. قم بعمل جهاز PBS قبل يوم واحد من جهاز التداخل وتركه يبرد.
      3. في الظروف المعقمة، انقل 47.5 مل من PBS المعقم 1× إلى أنبوب طرد مركزي بسعة 50 مل وأضف 2.5 مل من 1٪ (v/v) من البنسلين-ستريبتومايسين.
        ملاحظة: تحتوي تركيبة 1× PBS (2 لتر) على 137 مللي مولار NaCl، و8 ملليمولار Na2HPO4، و2 مللي مولار NaH2PO4، ودرجة حموضة 7.2.
    3. حلول الكولاجيناز A
      1. محلول المخزون: إذابة 1 جرام من مسحوق الكولاجنازيم A في 40 مل من DDW. قم بتعقيم المرشح عبر فلتر بحجم 0.2 ميكرومتر وخزنها عند -20 درجة مئوية.
      2. محلول العمل: تخفيف 1 مل من محلول الكولاجناز، محلول مخزن في 4 مل من DDW المعقم للحصول على تركيز نهائي 5 ملغ/مل.
    4. محلول التربسين: يذيب محلول التريبسين/EDTA المتوفر تجاريا بنسبة 0.25٪ (بدون جهد) (يحتوي على 0.91 مللي مول EDTA) على الجليد قبل الاستخدام.
    5. محلول تريبان بلو (0.4٪): أذاب 0.4 جرام من تريبان بلو في 100 مل من DDW. قم بالفلتر باستخدام ورق الفلتر وخزنها عند 4 درجات مئوية.
      ملاحظة: يستخدم محلول تريبان بلو بنسبة 0.4٪ لتقييم إجمالي عدد الخلايا، ونسبة الخلية الواحدة، وقابلية البقاء. قد يتم استبداله بمجموعات تلوين تجارية حية/ميتة أو أنظمة عد الخلايا الآلي.

2. تحضير قرنيات الفئران

  1. قم بتعقيم المجهر التشريح ومنطقة العمل بمسح بنسبة 75٪ إيثانول، ثم تعرض المنطقة لأشعة فوق البنفسجية داخل خزانة أمان بيولوجية لمدة 30 دقيقة.
  2. تحضير ما يلي في ظروف معقمة: طبق بتري بقطر 60 مم يحتوي على 5 مل من متوسط SHEM، وثلاثة أطباق بتري بقطر 60 مم يحتوي كل منها على 5 مل من 1× PBS مع 5٪ بنسلين-ستربتوميسين (P-S)، وثلاثة أطباق بتري بقطر 60 مم كل منها يحتوي على 5 مل من PBS العادي 1× PBS، وأنبوب طرد مركزي معقم بسعة 2 مل
  3. قم بالقتل الرحيم للفأر باستخدام اختناق ثاني أكسيد الكربون، يليه خلع عنقي الرحم.
  4. اغسلي رأس الفأر وجفونيه المغلقة جيدا عن طريق الغمر ثلاث مرات في PBS يحتوي على 5٪ P-S قبل البدء في إزالة الريشة.
  5. باستخدام مقص العيون، قم بعمل شق على القطب الخلفي لكل كرة عين ووضع العيون المعزولة بعناية في طبق بتتري يحتوي على وسط SHEM بارد جدا (الشكل 1A).
    ملاحظة: لتعظيم قدرة الخلية، يجب تبريد جميع المحاليل مسبقا إلى 4 درجات مئوية ويجب تنفيذ جميع خطوات التشريح على الجليد.
  6. انقل فورا طبق بترى مع العيون إلى خزانة أمان بيولوجية. اغسل كرات العين ثلاث مرات في 1× PBS يحتوي على 5٪ P-S، مع حضن لمدة 5 دقائق في كل غسلة.
  7. تحت المجهر التشريحي، افصل نسيج القرنية بعناية: باستخدام مقص وملاقط العيون، قم بعمل شق من القطب الخلفي باتجاه الحافة القرنية. افصل القرنية بلطف عن الصلبة والملتحمة على طول الحافة الليمبالية. قم بإزالة العدسة وقزحية العين تماما باستخدام زوجين من الملقط (الشكل 1B).
  8. باستخدام ملقط العيون، انقل نسيج القرنية إلى طبق بترى يحتوي على 1× PBS واغسل ثلاث مرات (5 دقائق لكل مرة) لإزالة أي نسيج غير قرني متبقي أو مضادات حيوية.
    ملاحظة: غالبا ما تلتصق القزحية بإحكام بالقرنية. تأكد من إزالته بلطف وبشكل كامل باستخدام الملقط لتجنب التلوث، مما يترك فقط نسيج القرنية الشفاف.
  9. باستخدام ملقط العيون، انقل نسيج القرنية المنظف إلى أنبوب طرد مركزي بسعة 2 مل وأضف 1 مل من محلول كولاجناز A (5 ملغ/مل).
  10. باستخدام مقص العيون، قم بتقطيع نسيج القرنية إلى قطع بحجم حوالي 0.5 مم × 0.5 مم مباشرة داخل الأنبوب.
  11. حضن الأنبوب الذي يحتوي على شظايا القرنية ومحلول الكولاجيناز A في حاضنة زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة (الشكل 2A-C).
  12. أثناء هضم الكولاجنايز A، راقب الأنسجة كل 10 دقائق. أنهي الهضم عندما لا تبقى شظايا كبيرة من الأنسجة عن طريق الانتقال إلى الطرد المركزي. قم بطرد العينة بحرارة 300 x g لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة باستخدام جهاز طرد مركزي. استنشق السوبرناتانت بحذر.
  13. أعد تعليق الحبيبة في محلول 0.25٪ من التربسين/EDTA بسعة 200 ميكرولتر.
  14. حضانة الأنبوب في حاضنة زراعة الخلايا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لهضم شظايا الأنسجة المتبقية.

3. عزل خلايا القرنية المفردة

  1. قم بتدوير الخليط بلطف (الأنسجة ومحلول التربسين/EDTA) بشكل متكرر باستخدام ماصة P1000 ذات طرف عريض لتفكيك النسيج إلى تعليق خلية واحدة.
  2. قم بطرد مركزي في نظام التعليق الخلوي بقوة 300 × g لمدة 5 دقائق ثم تخلص من السوبرناتانت. أعد تعليق الحبيبات الخلوية في 1 مل من PBS تحتوي على 0.04٪ ألبومين مصل البقري (BSA) للحصول على تعليق خلية واحدة.
    ملاحظة: بالنسبة للخلايا المخصصة للتسلسل أو قياس تدفق الخلايا، أعد تعليقها في PBS الخالي من المصل. بالنسبة للخلايا التي سيتم زراعتها، استخدم 1x PBS مع مكمل ل 0.04٪ BSA.
  3. قم بترشيح تعليق الخلية عبر مصفاة خلية مبللة مسبقا بسعة 40 ميكرومتر إلى أنبوب طرد مركزي جديد بسعة 50 مل لإزالة تجمعات الخلايا والحطام.
    ملاحظة: قم بترطيب مصفاة الخلايا مسبقا باستخدام PBS لتقليل فقدان الخلايا. إذا لزم الأمر، يمكن إعادة تمركز الخلايا المصفاة وإعادة تعليقها في حجم مرغوب للتركيز.

4. عد الخلايا

  1. امزج 9 ميكرولتر من تعليق الخلية مع 1 ميكرولتر من محلول Trypan Blue بنسبة 0.4٪ وامزج بلطف.
  2. قم بتحميل الخليط ببطء في غرفة قياس الدم عبر قناة التحميل المخصصة. عد الخلايا باستخدام طريقة الأربعة أرباع لتحديد إجمالي عدد الخلايا وقابليتها للبقاء ونسبة الخلايا الفردية. قم بإجراء نسختين تقنيتين على الأقل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تقييم جودة المعلقات أحادية الخلية بناء على إجمالي إنتاج الخلية، ونسبة الخلايا المفردة، وقابلية البقاء. تم صبغ التعليق بتقنية تريبان بلو وتحليله باستخدام مجهر التباين الطور عبر عدة مجالات (الشكل 3). من أربع عيون فئران (ثماني قرنيات)، تم الحصول على ما مجموعه 1.05 × 105 خلايا، بمتوسط قدرة على العيش للخلايا بلغ 94.6٪ ونسبة خلية واحدة تجاوزت 96.3٪. تؤكد هذه النتائج أن تعليق الخلية المحضر مناسب للتطبيقات اللاحقة مثل فرز خلايا التدفق وتسلسل الحمض النو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أدى إدخال تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية إلى زيادة ملحوظة في استخدام التقنيات الجينومية، والنسخية، والتفوق الوراثي، والبروتيومية في أبحاث العين 9,10,11,12. وبالتالي، أصبح تحضير معلقات خلية واحدة عالية الجودة أمرا بالغ الأهمية، حيث يسمح باكتشاف اختلافات الإشارات بين الخلايا الفردية ويوفر رؤى أعمق حول التغاير الخلوي، وهي مزايا لا توفرها التوصيف التقليدي ل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا يوجد لدى المؤلفين تضارب مصالح للكشف عنها.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرغب المؤلفون في التعبير عن امتنانهم واحترامهم لجميع الحيوانات التي ساهمت في تكوين خلاياها في هذه الدراسة. وقد دعمت هذه الدراسة جزئيا مشاريع العلوم والتكنولوجيا الإقليمية في قويتشو (QKHJC-ZK[2024]ZD043 [إلى S.O.]); صندوق العلوم الإقليمي لفوجيان للعلماء الشباب المتميزين (2023J06053 [إلى S.O])؛ مؤسسة العلوم الطبيعية في الصين (رقم 82101084 [إلى S.O.]؛ برنامج البحوث الأساسية في مقاطعة قويتشو (العلوم الطبيعية)(QKHJC-ZK[2025]MS-473) [إلى S.O.]؛ صندوق اتحاد البحوث الطبية لتطوير الصحة عالية الجودة في مقاطعة قويتشو (2024GZYKYJJKM0043) [إلى S.O.].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أليكسا فلور 594 حمار مضاد للأرنبأبكامab150064
أنتيكيراتينأبكامAB230175
مضاد البانسيتوكراتينثيرمو فيشر العلميAE1/AE3، أليكسا فلورTM 488
معقم الأوتوكلافآن شينLDZH-100KBS
مصل البقر ألبومين VسولاربيولوجياA8020
مرشح الخليةNEST25836940 & mu; m
جهاز الطرد المركزيإيبندورف إيه جي22331 هامبورغ
كولاجناز أروش10103578001
المجهر الكونفوكال  أوبركوخنزايس LSM 880
لوحة العدمارينفيلدM407859
أنبوب الطرد المركزيNEST6206112 مل، 50 مل
غطاء الغطاءمارينفيلدM407859
DAPIسولاربيولوجياC0065
المجهر التشريحيكارل زايسVISU150
DMEM/F12  الإعلامجيبكو11320033
DMSOسولاربيولوجياD8371
Fetal  بوفين  المصلجيبكو16140071
الهيدروكورتيزونسولاربيولوجياIH0100
إنهجيبكو23337619
عامل نمو البشرة في الفأرإنفيتروجينPMG8041
جراحة العيون  الملقطدوموت0208-5-PO
مقص جراحي للعيونFST15021-15
الفرنAISITEDH6000 II
البنسلين والبنسيلين الستربتوميسينجيبكو15070063100 مل
طبق بتريNEST70520160 مم
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتسولاربيولوجياP1010
الحاضنة الحراريةثيرمو فيشر العلمي3111
ترايتون-إكس 100سولاربيولوجياT8200
تريبان بلو سولاربيولوجياT8070
تريبسين/EDTA جيبكوR001100
طاولة التنظيف الفائقيو تشيVS-840-2
4٪ بارافورمالديهيدسولاربيولوجياP1110

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. Overview of the cornea:structure, function, and development. Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).
  2. Delmonte, D. W., Kim, T. Anatomy and physiology of the cornea. J Cataract Refract Surg. 37 (3), 588-598 (2011).
  3. Zhang, X., et al. Dry eye management:targeting the ocular surface microenvironment. Int J Mol Sci. 18 (7), 1398(2017).
  4. Dou, S., et al. Molecular identity of human limbal heterogeneity involved in corneal homeostasis and privilege. Ocul Surf. 21, 206-220 (2021).
  5. Adan, A., et al. Flow cytometry:basic principles and applications. Crit Rev Biotechnol. 37 (2), 163-176 (2017).
  6. Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines. Exp Mol Med. 50 (8), 1-14 (2018).
  7. Altshuler, A., et al. Discrete limbal epithelial stem cell populations mediate corneal homeostasis and wound healing. Cell Stem Cell. 28 (7), 1248-1261.e8 (2021).
  8. Kaplan, N., et al. Single-cell RNA transcriptome helps define the limbal/corneal epithelial stem/early transit amplifying cells and how autophagy affects this population. Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (10), 3570-3583 (2019).
  9. Collin, J., et al. A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells. Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).
  10. Liu, X., et al. Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas. Exp Eye Res. 233, 109544(2023).
  11. Espana, E. M., Birk, D. E. Composition, structure and function of the corneal stroma. Exp Eye Res. 198, 108137(2020).
  12. Topouzi, H., et al. Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles. Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).
  13. Zhang, T., et al. The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).
  14. Hewett, P. W. Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels. Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).
  15. Chen, W., et al. Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2. Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).
  16. Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells. Exp Eye Res. 212, 108767(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

A RNA

مقالات ذات صلة