قيمت هذه الدراسة مقايسة مستحدثة لتحديد النسيلية في BCR/TCR تعتمد على تسلسل الجيل القادم NGS (OriMIRACLE LTM) للكشف عن الحد الأدنى من المرض المتبقي MRD في الأورام اللمفاوية الخبيثة، بما في ذلك الورم النخاعي المتعدد (MM). وباستخدام الخطوط الخلوية والمسحات السريرية، أظهرت المقايسة معدل كشف بنسبة >90% وتوافقاً بنسبة 81.36% مع قياس التدفق الخلوي. وتوفر هذه المقايسة حساسية عالية، وتتنبأ بالانتكاس، وتدعم قرارات العلاج.
مقالة بحثية
مقايسات النسيلية باستخدام تسلسل الجيل التالي: التحقق السريري لمراقبة المرض المتبقي الأدنى في المايلوما المتعددة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يُعد الكشف عن الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) أمراً بالغ الأهمية في إدارة الأورام اللمفاوية الخبيثة. تقدّم هذه الدراسة OriMIRACLE LTM، وهو اختبار جديد لتقييم استنساخ مستقبلات الخلايا البائية (BCR) ومستقبلات الخلايا التائية (TCR) يعتمد على تسلسل الجيل القادم (NGS) للكشف عن MRD. لقد تحققنا من صحة الاختبار باستخدام خطوط خلوية وعينات سريرية، بما في ذلك لطخات متبقية من مرضى المايلوما المتعددة (MM). أظهر اختبار استنساخ BCR/TCR معدل كشف إيجابي يتجاوز 90% في الأورام اللمفاوية الخبيثة. كما أظهرت دراسات التحقق من الصحة لدى مرضى MM معدل توافق بلغ 81.36% (48/59) بين قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان (MFC) وتقييم الاستجابة السريرية في الكشف عن الخلايا الورمية. والجدير بالذكر أن 61.11% (11/18) من مرضى MM الذين كانت نتائجهم إيجابية لـ MRD بواسطة كل من NGS وMFC عانوا من تطور المرض أو انتكاسته. وأظهر المرضى الذين تم الكشف عن MRD لديهم بواسطة NGS فقط معدلات استجابة سريرية كاملة أقل، كما انتكس بعض مرضى MM الذين استجابوا للعلاج في البداية بعد التوقف عن العلاج. وتشير هذه النتائج إلى أن هذا الاختبار المعتمد على NGS يوفر كشفاً عالي الحساسية والنوعية لـ MRD في الأورام اللمفاوية الخبيثة، حتى في عينات اللطخات المتبقية المشتقة من مرضى MM. كما يُظهر مزايا تتفوق على MFC ويثبت قيمته في تتبع MRD. وفي الختام، تدعم الأدلة الحالية استخدام NGS كأداة تكميلية لـ MFC، خاصة في المرضى الذين تكون نتائجهم MFC⁻/NGS⁺، حيث يوفر NGS تصنيفاً أعمق للمخاطر. ومع ذلك، لا يزال تحديد عتبة التدخل المثلى يتطلب دراسات استشرافية.
المقدمة
يعد الورم النخاعي المتعدد (MM) نوعاً من الخباثة الدموية التي تتميز بتكاثر خلايا بلازمية نسيلية شاذة في نخاع العظم1. وفي الصين، شهد عام 2022 تشخيص ما يقرب من 22,450 حالة جديدة من الورم النخاعي المتعدد و17,360 حالة وفاة مرتبطة به2. وعلى الرغم من التقدم الملحوظ في علاج الورم النخاعي المتعدد على مدار العقد الماضي، والذي أدى إلى إطالة متوسط بقاء المرضى على قيد الحياة بشكل كبير، إلا أن غالبية المرضى يعانون في النهاية من الانتكاس3,4. وتؤكد هذه الزيادة الكبيرة الحاجة الماسة للمراقبة الدقيقة لفترة الهجوع، والتنبؤ المبكر بالانتكاس، والتدخلات العلاجية في الوقت المناسب.
لقد أثبتت الأدلة السريرية بشكل قاطع الأهمية التنبؤية لحالة الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) في الأورام الدموية الخبيثة5,6,7. وإدراكاً منها لهذه الأهمية، قامت المجموعة الدولية للعمل بشأن الورم النخاعي (IMWG) بدمج تقييم MRD ضمن معايير تقييم الاستجابة في عام 20168. وتتضمن الطرق الحالية لتقييم MRD في نخاع العظم تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام قليلات النوكليوتيد المحددة للأليل (ASO-PCR)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (dPCR)، وقياس التدفق الخلوي متعدد المعايير (MFC)، ومقايسات تسلسل الجيل القادم (NGS)8. وبينما يوفر ASO-PCR كشفاً حساساً، إلا أنه يستغرق وقتاً طويلاً ويصعب توحيده نظراً للحاجة إلى بادئات خاصة بكل مريض9,10. وبالمثل، فإن dPCR مقيد بتصميمه المحدد للأليل10,11. وقد لعب MFC دوراً فعالاً في الكشف عن MRD12، حيث يوفر معلومات سريعة على المستوى الخلوي، ولكنه يواجه تحديات في التوحيد القياسي وقابلية التكرار.
يمثل تسلسل الجيل القادم (NGS) نهجاً قابلاً للتكرار وعالي الحساسية يلغي الحاجة إلى البادئات الخاصة بكل مريض. وهو يتيح تحديداً وقياساً كمياً موثوقاً لإعادة ترتيب الغلوبولين المناعي الفريدة في الأورام الدموية الخبيثة13. وقد وافقت إدارة الغذاء والدواء (FDA) على استخدام نظام ClonoSEQ من شركة Adaptive Biotechnologies لاختبار الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) لدى المرضى المصابين بابيضاض الدم الليمفاوي الحاد (ALL)، والورم النخاعي المتعدد (MM)، وابيضاض الدم الليمفاوي المزمن (CLL)14,15,16. وتتضمن العديد من الإرشادات السريرية الدولية الآن تسلسل الجيل القادم (NGS) كطريقة موصى بها لمراقبة الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD). كما تدعم الإرشادات الصينية لتشخيص وعلاج الورم النخاعي المتعدد (المراجعة لعام 2020) تقييم الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) في مرضى الورم النخاعي المتعدد باستخدام طرق مثل قياس التدفق الخلوي من الجيل القادم (NGF) وتسلسل الجيل القادم (NGS)17.
على حد علمنا، لا تعد تقنية NGS الطريقة المفضلة للكشف عن MRD في الأورام اللمفاوية الخبيثة في الممارسة السريرية بسبب قيود التكلفة والوقت. وعندما تكون نتائج MFC سلبية، غالبًا ما يكون من الضروري إجراء سحب إضافي لنخاع العظم للكشف عن MRD. ويمكن أن يفرض هذا الإجراء الإضافي أعباءً جسدية ونفسية كبيرة على المرضى، مما قد يحد من تطبيقه السريري على نطاق واسع.
في هذه الدراسة، قمنا بتطوير وتوصيف والتحقق من أداء مقايسة النسيلة لمستقبلات الخلايا B أو T (BCR/TCR) القائمة على تسلسل الجيل القادم (OriMIRACLE LTM). كانت الأهداف الأساسية لهذه الدراسة هي التحقق من حساسية ونوعية هذه المقايسة لتتبع الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) في الأورام اللمفاوية، حتى عند استخدام عينات اللطاخة المتبقية. يمكن لهذه الطريقة الاستفادة المباشرة من لطاخات نخاع العظم المتبقية من التشخيص الروتيني، وبذلك تتجاوز القيود المتأصلة في عينات اللطاخة. وحتى عندما يكون الحمض النووي (DNA) في اللطاخة مجزأً بسبب التثبيت والصباغة والتخزين طويل الأمد، أو موجوداً بكميات منخفضة للغاية، أو متحللاً جزئياً، يمكن الحصول على ملفات تعريف موثوقة للمجموعة المناعية من خلال استخلاص الحمض النووي المُحسّن وتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (multiplex PCR). وتتيح هذه الطريقة تتبعاً نسيلياً عالي الحساسية بحساسية تتراوح من 10⁻5 إلى 10⁻6، مما يتجاوز الحد الأدنى للكشف في تتبع MRD التقليدي القائم على قياس التدفق الخلوي. يسلط هذا العمل الضوء على إمكانات تقييم نسيلة BCR/TCR القائم على NGS في تعزيز تتبع MRD وتوجيه قرارات العلاج للمرضى الذين يعانون من الورم النخاعي المتعدد (MM)، مما قد يعالج القيود الحالية في الممارسة السريرية.
البروتوكول
أُجريت هذه الدراسة وفقاً لمبادئ إعلان هلسنكي، وقد تمت الموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات في المستشفى الأول التابع لجامعة غانان الطبية (رقم الموافقة الأخلاقية: 22SC-2023011201). كما تم الحصول على موافقة كتابية مستنيرة من جميع المشاركين قبل إدراجهم في الدراسة.
اختيار العينات
تم الحصول على عينات سريرية من 40 مريضاً شُخّصوا بأورام دم خبيثة متنوعة، بما في ذلك ALL وMM وCLL والليمفوما. بالإضافة إلى ذلك، تم جمع عينات مزدوجة من المرحلة المزمنة ومرحلة الانفجار لمرضى مصابين بابيضاض الدم النقوي المزمن. تم الحصول على العينات من المستشفى التابع الأول لجامعة غانان الطبية في جيانغشي بالصين، في الفترة ما بين ديسمبر 2016 وأغسطس 2022. وقد استُمدت هذه العينات من شفط نخاع العظم (BMA) أو الدم المحيطي. كما استُخدمت أربعة خطوط خلوية من الأورام اللمفاوية الخبيثة: خطوط B-ALL وهي REH وNALM6، وخط T-ALL وهو Jurkat، وخط الليمفوما H9، وجميعها تم الحصول عليها من مجموعة الثقافة النوعية الأمريكية (ATCC; Manassas, VA).
بالنسبة لدراسة التحقق التحليلي، تم تضمين مجموعة فرعية من لطخات نخاع العظم السريرية المتبقية والمزدوجة التي جُمعت قبل العلاج وبعده من 30 مريضاً تم تشخيصهم حديثاً أو عانوا من انتكاس في مرض MM. وقد أُجريت فحوصات MFC على عينات BMA في النقاط الزمنية المقابلة باستخدام قياس التدفق الخلوي رباعي الألوان.
صُبغت العينات بست مجموعات مختلفة من الأجسام المضادة رباعية الألوان (التخفيفات وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة): CD38/CD56/CD45/CD19، وCD38/CD138/CD45/CD34، وCD38/CD117/CD45/CD33، وCD38/CD22/CD45/CD20، وCD38/CD9/CD45/HLA-DR، وK/L/CD45/CD38. أُجري الصبغ لمدة 30 min عند 4 °C في الظلام، متبوعاً بغسلتين باستخدام PBS (طرد مركزي عند 500 × g لمدة 5 min عند 4 °C). في مختبرات علم الدم المناعي، تُحدد إيجابية MFC-MRD في نخاع العظم حالياً باستخدام عتبة 10-4 (خلية واحدة لكل 10,000 خلية). وتم التحقق من جودة اكتساب بيانات قياس التدفق الخلوي من خلال معاينة التشتت الأمامي/الجانبي والتأكد من وجود 10,000 حدث CD45+ على الأقل لكل أنبوب.
كشف النسيلية وتتبع الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) بواسطة مقايسة النسيلية القائمة على تسلسل الجيل القادم (NGS)
تم استخلاص DNA الجينومي (gDNA) من 200 µL من نضح نخاع العظم (BMA)، أو الدم المحيطي، أو لطخة متبقية كاملة (أعيد تعليقها في 200 µL من محلول PBS) باستخدام الطقم المناسب وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. كان من الضروري توفر تركيز أدنى لـ gDNA يبلغ 20 ng/µL ومحصلة إجمالية ≥ 1 µg. كما تم التحقق من أن نسبة A260/A280 تتراوح بين 1.8–2.0. تعمل هذه المقايسة على تضخيم gDNA باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المتعدد والمحدد للموقع باستخدام بادئات، يليه إضافة رمز شريطي (barcode) لمؤشر خصوصية التفاعل إلى تسلسل المستقبل المُضخم لتحديد العينة. بعد ذلك، يتم تجميع الحمض النووي المُضخم والموسوم بالرموز الشريطية لإعداد مكتبات التسلسل، والتي تخضع لـ NGS باستخدام منصة Illumina. تم التحقق من الحجم النهائي للمكتبة (350–450 bp) والتركيز (≥ 5 nM) بواسطة جهاز Bioanalyzer. تتم معالجة بيانات التسلسل باستخدام أنابيب معلوماتية حيوية مخصصة وتدابير صارمة لمراقبة الجودة. يتم تعيين القراءات لمستقبلات الخلايا البائية (BCRs) أو مستقبلات الخلايا التائية (TCRs) المعاد ترتيبها لكل عينة وتجميعها في تسلسلات مستقبلات نسيلية. ثم يتم تقييم هذه التسلسلات من حيث إمكاناتها المرتبطة بالمرض ومدى ملاءمتها للتتبع اللاحق. ولكي يُعتبر التسلسل مناسباً، يجب أن يشكل 10% على الأقل من جميع تسلسلات BCR في الموقع المحدد وأن يظهر تفردًا كافياً. عند تقييم تسلسل لتتبع MRD، يتم تحديد تفرده من خلال مقارنته بقاعدة بيانات شاملة لمجموعة الخلايا البائية أو التائية، مثل قاعدة بيانات ImMunoGeneTics (IMGT) (http://www.imgt.org). ويُستخدم تكرار التسلسل ضمن هذه القاعدة لتقييم تميزه. وبمجرد تحديد التسلسلات المناسبة المرتبطة بالمرض، تتم مقارنتها بالعينات اللاحقة لمراقبة MRD. وتُصنف العينات على أنها إيجابية لـ MRD (+) إذا وُجدت تطابقات في التسلسل، أو سلبية لـ MRD (-) إذا لم يتم اكتشاف أي تطابقات. يتم قياس تركيز كل تسلسل مراقب، مما يسمح بحساب أعداد الخلايا الخبيثة الإجماعية وإجمالي الخلايا ذات النواة على مستوى العينة. وتوفر النسبة بين هذه الأرقام تقديراً لتردد الخلايا الورمية داخل العينة، مما يقدم رؤى قيمة حول تطور المرض أو تراجعه. اعتُبر التسلسل النسيلي صالحاً للتتبع إذا تم اكتشاف 50 قراءة داعمة على الأقل وكان التسلسل يشكل ≥10% من إجمالي مجموعة BCR/TCR عند التشخيص.
تم التعامل مع جميع العينات المشتقة من البشر كعينات ذات خطر بيولوجي داخل كابينة سلامة بيولوجية (BSC) من الفئة الثانية مع استخدام معدات الوقاية الشخصية (PPE). كما تم تعقيم المستهلكات الملوثة بواسطة جهاز autoclave (121 °C، لمدة 20 min) قبل التخلص منها؛ وعولجت النفايات السائلة باستخدام محلول مبيض بتركيز 10%.
دراسات الدقة والحساسية
تم تحديد حد الكشف (LOD) باستخدام عينات سريرية وخطوط خلوية مقابل خلفية من الـ gDNA للدم المحيطي من متبرعين أصحاء. ولإثبات خطية الكشف، تم تدعيم الـ gDNA لخطوط خلوية في gDNA طبيعي لإنشاء نطاق من الترددات النسلية يمتد عبر عدة رتب مقدارية. وتحديدًا، تم تدعيم الخلايا الخبيثة بدءًا من 10 خلايا، تلتها تخفيفات تسلسلية بمقدار 10 أضعاف: 10، و100، و1,000، و10,000 خلية. حُسب حد الكشف (LOD) على أنه العدد المتوقع للخلايا الخبيثة المدخلة الذي يصل عنده منحنى probit الملائم إلى احتمالية كشف تبلغ 95%. كما تم تحليل الاتساق بين الترددات الملحوظة والمتوقعة باستخدام الانحدار الخطي. توفر هذه المعايير أساسًا قويًا لتقدير الحد الأدنى للمرض المتبقي (MRD) على مستوى العينة في دراسات التقييم اللاحقة. يحافظ هذا الإصدار المنقح على النبرة الأكاديمية مع تحسين الوضوح والإيجاز، كما يضمن الاستخدام الصحيح للمصطلحات العلمية والالتزام باتفاقيات الكتابة البحثية في مجال علوم الحياة والطب.
التحليل الإحصائي
اعتُبرت القيمة الاحتمالية p < 0.05 ذات دلالة إحصائية في الاختبارات ثنائية الجانب. تم تقييم الخطية وحسابها باستخدام معامل ارتباط بيرسون (r) في برنامج GraphPad Prism. أُجري التحليل الإحصائي باستخدام لغة R (الإصدار 3.6.1). يبدأ حساب البقاء على قيد الحياة بدون تقدم المرض (PFS) من الوقت الذي يحقق فيه المريض استجابة كاملة (CR)، أو استجابة جزئية (PR)، أو استجابة جزئية جيدة جداً (VGPR)، ويستمر حتى حدوث تقدم المرض (PD) أو الوفاة لأي سبب. استُخدم منحنى Kaplan-Meier لتحليل البقاء، واختبار log-rank لمقارنة الفرق في البقاء بين المجموعات الفرعية. كما أُجري تحليل Cox باستخدام التحليلات أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات.
النتائج
معالجة وخطية ودقة الكشف عن النسيلية
اعتمدت فحوصات نسيلية BCR/TCR على جولتين من تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (multiplex PCR) يليه تسلسل الجيل القادم NGS (الشكل 1). استطاعت فحوصات نسيلية BCR تحديد إعادة ترتيب IGH (VH-DH-JH أو DH-JH)، وIGK (Vκ-Jκ، وVκ-Kde، وintronRSS-Kde)، وIGL (Vλ-Jλ)، بالإضافة إلى انتقالات BCL1-IGH وBCL2-IGH باستخدام تفاعلات منفصلة أو تفاعل مختلط واحد معدل. بينما تمكنت فحوصات نسيلية TCR من الكشف عن إعادة ترتيب TCRB (Vβ-Dβ-Jβ) وTCRG (Vγ –Jγ). وأظهرت نسيلية BCR في الأورام اللمفاوية للخلايا البائية معدل كشف بلغ 93.94%، بينما أظهرت نسيلية TCR في الأورام اللمفاوية للخلايا التائية معدل كشف بلغ 90.91% (الجدول 1).
تم إثبات الخطية عبر نطاق واسع من مدخلات العينات (0.2 µg و 2 µg و 20 µg) بناءً على نتائج اختبارات الخطوط الخلوية، والتي شملت عدة رتب مقدارية. ولتحديد الخطية، تم تطعيم خلايا خبيثة في gDNA طبيعي باستخدام تخفيفات تسلسلية بمقدار 10 أضعاف (10 و 100 و 1,000 و 10,000 خلية). وقد لوحظت الخطية بميول تقديرية تتراوح من 0.93–1.06 عبر ترددات نسيليّة تتراوح من 1 إلى 10-6 (الشكل 2A). كما قُدِّر حد الكشف LOD بأن يكون بين 1 و 2 من الخلايا الخبيثة في كل من مقايسات نسيليّة BCR و TCR (الشكل 2B). علاوة على ذلك، تمكنت مقايسات نسيليّة BCR/TCR من الكشف عن النسيليّة في الليمفوما باستخدام عينات الأنسجة (BMA) والدم المحيطي المطابق (الجدول التكميلي 1).
المرضى والعينات المستخدمة للتحقق من صحة الكشف عن MRD
شمل التحقق من صحة الكشف عن MRD ما مجموعه 29 مريضاً مصاباً بـ MM، مع استبعاد مريض واحد بسبب تلف العينة. تألفت مجتمع الدراسة من 65.52% (19/29) من الذكور و34.48% (10/29) من الإناث، بمتوسط عمر يبلغ 65 عاماً (يتراوح بين 33-82) (الجدول 2). ومن بين هذه المجموعة، تم تصنيف 31.03% (9/29) من المرضى على أنهم ذوو مخاطر عالية، و24.14% (7/29) مخاطر قياسية، و37.93% (11/29) مخاطر منخفضة وفقاً لمعايير IMWG18. ومثلت مراحل النظام الدولي المعدل لتحديد مراحل المايلوما المتعددة (R-ISS) الأولى والثانية والثالثة نسبة 10.34% (3/29)، و48.28% (14/29)، و20.69% (6/29) من المرضى، على التوالي19.
مقارنة بين مقايسات NGS وMFC
أُجريت مقارنة زوجية مباشرة لتقييم الدقة الكمية لمقايسات OriMIRACLE LTM وMFC. وأظهرت النتائج دقة كمية متماثلة عبر النطاق المختبر، لا سيما عند ترددات MRD التي تزيد عن 10−4، مع قيمة Pearson R بلغت 0.73 (الشكل 3). تم الكشف عن الخلايا الورمية بواسطة مقايسات MFC وNGS في 59 عينة من 29 مريضاً مصاباً بـ MM، وبلغ الاتساق 81.36% (48/59). ويعكس هذا الاتساق وجود خلايا ورمية يمكن الكشف عنها عبر نقاط زمنية مختلفة، وليس تطابقاً حقيقياً بين الطرق. ومن بين العينات، كانت 62.07% (18/29) إيجابية لـ MRD بواسطة كل من مقايسات NGS وMFC، وكان مريض واحد سلبياً لـ MRD بكلتا الطريقتين، بينما كانت نتائج 11 مريضاً إيجابية لـ MRD بواسطة NGS وسلبية لـ MRD بواسطة MFC. ومن بين المرضى الذين ظهرت لديهم نتائج كشف غير متسقة، كان لدى ثلاثة منهم تردد كشف أقل من 10-4، بينما كان لدى ثمانية تردد كشف ضمن النطاق 10-2–10-4 (الشكل 3). يتم إجراء استخلاص DNA من عينات لطاخات نخاع العظم المتبقية للحصول على أكبر كمية ممكنة من DNA. وللكشف عن النسيلية قبل العلاج، تم اختبار متوسط مدخلات DNA بلغ 91.95 ng (حتى 100.0 ng). وتم استخلاص متوسط 1623.39 ng (تراوح بين 50.1–17400.0 ng) من DNA لاختبار MRD اللاحق (الجدول التكميلي 2). وقد كشف ذلك أن NGS يمكنه الكشف عن MRD حتى عندما تكون العينة المتبقية غير كافية، بينما فشلت MFC في الكشف عن MRD في بعض الحالات.
الصلاحية السريرية للكشف عن MRD بواسطة مقايسة NGS للفترة الرئيسية
تم الكشف عن المتواليات النسلية عند الخط الأساسي لدى جميع مرضى MM، تلا ذلك تقييم MRD (الشكل 4). تم تأكيد أن ثمانية عشر مريضاً كانوا MRD+ من خلال الكشف بواسطة NGS وMFC. ومن بين المرضى الذين كانوا MRD+ بواسطة كل من MFC وNGS، عانى 61.11% (11/18) لاحقاً من PD أو انتكاسة. وحقق 38.89% (7/18) من المرضى استقراراً في المرض (SD) أو PR خلال الدراسة. ومن بين المرضى الذين تم تأكيد أنهم MRD+ بواسطة NGS ولكنهم MRD− بواسطة MFC، لم يتمكن 36.36% (4/11) من تحقيق CR سريرياً في أحدث تقييم سريري (الجدول التكميلي 2). بالإضافة إلى ذلك، من بين جميع المرضى الذين كانت استجابتهم السريرية CR، عانى 37.50% (3/8) من المرضى من انتكاسة بعد التوقف عن العلاج. كما استكشفنا السمات السريرية الأولية ونتائج MFC فيما يتعلق بنتيجة PFS (الشكل التكميلي 1). وكشفت تحليلات PFS أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات أنها لم تكن مرتبطة بشكل كبير. وفي هذه الدراسة، لم يلاحظ وجود فرق معنوي في PFS عند تحليل نتائج MRD التي تم الحصول عليها من MFC فقط.
توافر البيانات
نظراً لقيود خصوصية المرضى والسياسات المؤسسية، فإن البيانات الخام غير متاحة للعموم. يتوفر ملخص للبيانات التي تم جمعها في الملف التكميلي 1.
الشكل 1: يتضمن تحليل النسيلية لـ BCR/TCR تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (multiplex PCR) يليه تسلسل الجيل القادم (NGS). قامت الجولة الأولى من تفاعل PCR بتضخيم منطقة CDR3 لجينات المستقبلات المناعية المعاد ترتيبها باستخدام بادئات خاصة بالموقع ومؤشرات خاصة بالعينة، وتمت إضافة مهيئات NGS خلال الجولة الثانية من تفاعل PCR. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2: تم تقييم خطية الكشف عن النسيلية عن طريق إضافة gDNA لخط خلوي إلى gDNA طبيعي عبر نطاق من الترددات النسيلية. (أ) خطية اختبارات النسيلية لـ BCR وTCR. (ب) تقدير حد الكشف (LOD) باستخدام عينات سريرية وخطوط خلوية مضافة إلى gDNA دم محيطي من متبرع سليم. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3: مقارنة زوجية لقياسات تردد الـ MRD بين الـ MFC ومقايسة NGS MRD. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 4: ديناميكيات MRD لمرضى MM والحالات السريرية المختلفة للمرضى. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| أنواع العينات | لا. | نوع المرض | النمط النسيلة السائد | |
| الخطوط الخلوية | تعبير RELH | 1 | ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد من النوع ب (B-ALL) | IGH, IGK |
| NALM6 | 2 | ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد من النوع ب (B-ALL) | IGH, IGK | |
| جوركايت | 3 | سرطان الدم اللمفاوي الحاد من الخلايا التائية (T-ALL) | TCRB, TCRG | |
| H9 | 4 | الليمفوما | TCRB, TCRG | |
| الأورام اللمفاوية الخبيثة السريرية للخلايا البائية | 5 | سرطان الدم اللمفاوي الحاد من النوع ب (B-ALL) | السلسلة الثقيلة للغلوبولين المناعي (IGH) | |
| 6 | ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد من النوع ب (B-ALL) | IGL | ||
| 7 | سرطان الدم الليمفاوي الحاد من النوع ب (B-ALL) | السلسلة الثقيلة للغلوبولين المناعي | ||
| 8 | سرطان الدم الليمفاوي الحاد من النوع ب (B-ALL) | لم يُكتشف | ||
| 9 | سرطان الدم الليمفاوي المزمن | IGH, IGK | ||
| 10 | سرطان الدم الليمفاوي المزمن | IGH, IGK | ||
| 11 | ابيضاض الدم النقوي المزمن في المرحلة المزمنة | IGH | ||
| 12 | ابيضاض الدم النقوي المزمن في مرحلة الانفجار الأرومي | IGH | ||
| 13 | ميليمولار | IGK | ||
| 14 | المجهر المتباين الطور (MM) | IGH, IGK | ||
| 15 | مضاعف الميليمتر (MM) | IGK | ||
| 16 | مضاعفات الميلامين (MM) | IGH | ||
| 17 | تعدد المايلين (MM) | سلسلة الغلوبولين المناعي الثقيلة (IGH) | ||
| 18 | MM | IGK | ||
| 19 | مضاعفات العضلات (MM) | IGH | ||
| 20 | مضاعفات الميلامين (MM) | IGH, IGK | ||
| 21 | مضاعفات المييلوما المتعددة (MM) | IGH, IGK | ||
| 22 | مضاعفات مجهرية (MM) | IGH | ||
| 23 | ليمفوما | IGH, IGK | ||
| 24 | الليمفوما | IGH, IGK, IGL | ||
| 25 | ليمفوما | IGH, IGK, IGL | ||
| 26 | ليمفوما | IGH, IGK, IGL | ||
| 27 | ليمفوما | IGH | ||
| 28 | الليمفوما | السلسلة الثقيلة للغلوبولين المناعي | ||
| 29 | ليمفوما | IGH, IGK, IGL | ||
| 30 | الليمفوما | IGH, IGK | ||
| 31 | الليمفوما | IGH, IGK | ||
| 32 | الليمفوما | IGH, IGK, IGL | ||
| 33 | الليمفوما | IGK | ||
| 34 | الليمفوما | IGH | ||
| 35 | اللمفوما | لم يتم الكشف عنه | ||
| الأورام اللمفاوية الخبيثة في الخلايا التائية السريرية | 36 | اللمفوما | معدل نمو الخلايا (TCGR) | |
| 37 | الليمفوما | TCRB, TCRG | ||
| 38 | الليمفوما | TCRB, TCRG | ||
| 39 | الليمفوما | TCRB, TCRG | ||
| 40 | الليمفوما | TCRB، TCRG | ||
| 41 | الليمفوما | TCRB, TCRG | ||
| 42 | الليمفوما | TCRB, TCRG | ||
| 43 | الليمفوما | TCRB, TCRG | ||
| 44 | الليمفوما | لم يتم الكشف عنه | ||
الجدول 1: الكشف عن النسيلة باستخدام فحوصات نسيلة BCR/TCR في 4 خطوط خلوية و40 عينة سريرية. B-ALL: ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد من الخلايا البائية؛ T-ALL: ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد من الخلايا التائية؛ CP-CML: ابيضاض الدم النقوي المزمن في المرحلة المزمنة؛ BP-CML: ابيضاض الدم النقوي المزمن في مرحلة الانفجار؛ CLL: ابيضاض الدم اللمفاوي المزمن؛ MM: الورم النخاعي المتعدد.
| الخاصية | الإجمالي (N = 29) |
| متوسط العمر، سنة (المدى) | 65 (33-82) |
| الجنس، n (%) | |
| ذكر | 19 (65.52) |
| أنثى | 10 (34.48) |
| نوع السلسلة الثقيلة، n (%) | |
| IgG | 14 (48.28) |
| IgA | 7 (24.14) |
| IgE | 1 (3.45) |
| نوع السلسلة الخفيفة، n (%) | |
| k | 19 (65.52) |
| λ | 8 (27.59) |
| الخلل الوراثي الخلوي، n (%) | |
| del17p | 2 (6.90) |
| del13q14 | 9 (31.03) |
| 1q21 gain/amp | 12 (41.38) |
| t (4;14) | 2 (6.90) |
| لا توجد اختلالات | 9 (31.03) |
| مرحلة ISS، n (%) | |
| I | 4 (13.79) |
| II | 13 (44.83) |
| III | 12 (41.38) |
| مرحلة R-ISS، n (%) | |
| I | 3 (10.34) |
| II | 14 (48.28) |
| III | 6 (20.69) |
| مفقود | 6 (20.69) |
| IMWG، n (%) | |
| عالي الخطورة | 9 (31.03) |
| خطورة قياسية | 7 (24.14) |
| منخفض الخطورة | 11 (37.93) |
| مفقود | 2 (6.90) |
الجدول 2: الخصائص الأساسية لمرضى الورم النخاعي المتعدد (MM) البالغ عددهم 29 والمشاركين في هذه الدراسة. k: كابا؛ λ: لامدا؛ DS: تصنيف دوري-سالمون؛ ISS: النظام الدولي لتحديد المراحل؛ R-ISS: النظام الدولي المطور لتحديد المراحل؛ IMWG: المجموعة الدولية للعمل على الورم النخاعي
الشكل التكميلي 1: تحليل البقاء على قيد الحياة بناءً على الخصائص السريرية ونتائج MFC. (أ) تحليلات أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات لـ PFS. (ب) منحنى Kaplan-Meier مع نتيجة MFC. (ج) منحنى Kaplan-Meier مع نتيجة NGS. يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.
الجدول التكميلي 1: الكشف عن النسيلية في اللمفوما باستخدام مقايسات نسيلية BCR/TCR في عينات الأنسجة والدم المحيطي المتطابق.NHL: لمفوما غير هودجكين؛ HGBL: لمفوما الخلايا البائية عالية الدرجة؛ FL: اللمفوما الجريبية؛ DLBCL: لمفوما الخلايا البائية الكبيرة المنتشرة؛ ITLPD-GI: اضطرابات التكاثر اللمفاوي التائية الخاملة في الجهاز الهضمي. يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.
الجدول التكميلي 2: نتائج الكشف عن الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) استنادًا إلى مقايسات MFC وNGS. ND: لم يتم الكشف عنه؛ استجابة جزئية: PR؛ استجابة كاملة: CR؛ مرض مستقر: SD؛ استجابة جزئية جيدة جدًا: VGPR. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الملف التكميلي 1: ملخص للبيانات الأولية التي تم جمعها في هذه الدراسة. يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.
المناقشة
شهدت السنوات الأخيرة تحسينات ملحوظة في النتائج السريرية للأورام اللمفاوية الخبيثة، مما حفز البحث عن مؤشرات بديلة قادرة على التنبؤ بنقاط نهاية البقاء على قيد الحياة في مرحلة مبكرة وتسريع تقييم العلاجات الجديدة20. وقد أكد تحليل شمولي (meta-analysis) شمل 8,098 مريضاً القيمة الإنذارية القوية لسلبية الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) في تعزيز فرص البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل لدى مرضى المايلوما المتعددة (MM)21. علاوة على ذلك، برزت إعادة الترتيب النسيلي لمستقبلات الخلايا البائية (BCR) ومستقبلات الخلايا التائية (TCR) كمؤشرات تشخيصية ومتابعة حاسمة لـ MRD، مما يوجه قرارات العلاج في أورام الجهاز اللمفاوي الخبيثة22.
تدعم الأدلة المتزايدة تفوق تقييم استنساخ BCR/TCR القائم على تقنية NGS مقارنة بالمقايسات القائمة على MFC وPCR، لا سيما عند توفر عينات DNA كافية. توفر تقنية NGS حساسية أعلى ومعايرة أبسط10,23,24,25,26، وقد تم تحديدها كعامل إنذار قوي لكل من PFS والبقاء على قيد الحياة بشكل عام عند بدء العلاج الوقائي27.
في هذه الدراسة، طورنا مقايسة قائمة على تقنية NGS، والتي أظهرت معدل كشف إيجابي يتجاوز 90% لكل من استنساخ BCR وTCR في الأورام اللمفاوية الخبيثة. ويُقدر حد الكشف (LOD) للمقايسة بين خلية خبيثة واحدة وخليةين لكل من مقايسات استنساخ BCR وTCR، وهو ما يضاهي الحساسية العالية لمقايسة clonoSEQ التي يصل حد الكشف فيها إلى 1.903 خلية خبيثة16. وقد لاحظنا وجود خطية بميول تقديرية تتراوح من 0.93 إلى 1.06 عبر ترددات استنساخ من 1 إلى 10-6، مما يشير إلى تناسب قوي بين ترددات الاستنساخ الملاحظة والمتوقعة. وبعد وضع طرق كشف معيارية وإتمام التحقق المختبري، أجرينا تحققاً سريرياً لضمان ملاءمة المقايسة لمراقبة MRD السريرية.
كشفت هذه الدراسة عن وجود توافق بنسبة 81.36% (48/59) بين المقايسة القائمة على NGS وMFC. وأظهرت كلتا الطريقتين حساسية بنسبة 100% في تحديد الخلايا الورمية في الحالات التي تم تشخيصها حديثاً أو حالات الانتكاس. أما بالنسبة لمراقبة ما بعد العلاج، فلم نجد ارتباطاً معنوياً بين حالة MRD التي تم تقييمها بواسطة MFC وPFS، ويرجع ذلك على الأرجح إلى صغر حجم العينة. وبناءً على ذلك، أجرينا تحليلاً شاملاً لجميع الحالات.
من بين المرضى الـ 18 الذين تم تحديدهم على أنهم إيجابيو الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) باستخدام كلتا الطريقتين، تماشيت نتائج MRD مع تقييمات الاستجابة السريرية. عانى تسعة من هؤلاء المرضى من تطور المرض (PD) أو الانتكاس، وحقق أربعة منهم استقراراً في المرض (SD)، وحقق أربعة استجابة جزئية (PR)، وتوفي مريض واحد. يشير هذا إلى أنه بالنسبة للمرضى الذين تظهر نتائجهم إيجابية MRD بكلتا الطريقتين، فإن تطور المرض أو الانتكاس يُلاحظ بشكل شبه دائم. وتوحي هذه البيانات بأن إيجابية MRD في كل من مقاييس تسلسل الجيل القادم (NGS) وتدفق الخلايا متعدد الألوان (MFC) تعكس في الغالب فعالية محدودة أو إنذاراً سيئاً لدى هؤلاء المرضى. ومن بين المرضى الـ 11 الذين كانت نتائجهم إيجابية MRD بواسطة NGS ولكن سلبية MRD بواسطة MFC، فشلت نسبة 36.36% في تحقيق استجابة كاملة (CR). وتؤكد هذه النتائج قدرة NGS على الكشف عن MRD بترددات تتراوح من 10-2 إلى 10-6، حتى مع وجود عينات متبقية محدودة، بينما فشل MFC في الكشف عن MRD في بعض الحالات. وهذا يدعم بشكل أكبر الحساسية والنوعية العاليتين لتقنية NGS في الكشف عن MRD مقارنة بـ MFC.
لقد أثبتت الأبحاث السابقة أن حالة الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) التي يتم تقييمها بواسطة قياس التدفق الخلوي متعدد المعلمات (MFC) تعد مؤشراً قوياً للبقاء على قيد الحياة بدون تقدم المرض (PFS) ومعدل البقاء الإجمالي لدى مرضى الورم النخاعي المتعدد (MM)، مما يؤكد أهمية مراقبة MRD في توجيه قرارات العلاج وتقييم الإنذار بعد عملية زراعة الخلايا الجذعية الذاتية28. وتبرز النتائج الواردة هنا بشكل أكبر أهمية فحوصات تسلسل الجيل القادم (NGS)، كما يتضح من حالتين (المريضان 11 و14) حيث ظهرت نتائج MRD سلبية بواسطة MFC ولكنها إيجابية بواسطة NGS. ومن الضروري ملاحظة أن وقف العلاج في مثل هذه الحالات قد يؤدي إلى خطر الانتكاس، مما يؤكد الحاجة إلى التقييم الدقيق للاستجابة للعلاج عند ملاحظة نتائج MRD متضاربة.
تكسر هذه الدراسة الاعتماد على طرق NGS وMFC الحالية على عينات سحب نخاع العظم الطازجة أو الخلايا المجمدة، وتثبت بشكل منهجي ولأول مرة أن لطخات نخاع العظم المتبقية، حتى المصبوغة منها والتي تُترك بعد التشخيص الروتيني، يمكن أن تعمل كمواد بدء موثوقة للكشف عن MRD عالي الحساسية. ويعالج هذا بشكل مباشر الفجوات السريرية والمنهجية التالية: (1) يتجنب الحاجة إلى استخراج أحجام كبيرة من سائل نخاع العظم لمراقبة MRD، خاصة لدى المرضى المسنين أو أولئك الذين يصعب أخذ عينات منهم؛ (2) يتيح التحليل الاسترجاعي للطخات المؤرشفة، وبذلك يتم الاستفادة من الموارد الباثولوجية المتاحة لإنشاء أدلة إنذارية قائمة على MRD في المجموعات التاريخية؛ و(3) مع حساسية كشف تتراوح بين 10-5-10-6، فإنها تتفوق بمراحل على MFC التقليدي (الذي يتراوح عادةً بين 10-4-10-5) وتتجاوز السلبيات الكاذبة الناتجة عن مشكلات جودة العينات في MFC، مما يوفر أداة تقييم MRD قائمة على DNA وقابلة للتتبع للممارسة السريرية.
تم تحديد عدة خطوات حاسمة لضمان نجاح وموثوقية المقايسة. كان الكشط اللطيف للمسحات المتبقية متبوعاً بالتطبيق الفوري للمنظم (buffer) أمراً ضرورياً للحصول على عائد كافٍ من gDNA. كما تطلب الأمر تحديد كمية دقيقة من DNA المدخل (100 ng لكل تفاعل، ضمن نطاق ±10%) لتجنب فقدان الأليلات (allele dropouts) أو التضخيم المتحيز. وقد ساهم التجميع متساوي المولات للمنتجات المرمزة (2 nM) في تحقيق عمق تسلسل موحد، كما ساعد التطبيق المتسق لعتبات المعلوماتية الحيوية (تردد نسيلة ≥10% عند التشخيص، ونسبة عدم تطابق ≤5% للتتبع) في منع تسجيل نتائج إيجابية كاذبة لـ MRD. بالإضافة إلى ذلك، تم إدخال عدة تعديلات على البروتوكول القياسي لمعالجة المشكلات التجريبية الشائعة؛ فعندما انخفض تركيز المكتبة النهائي إلى أقل من 5 nM، أضيفت جولة ثانية من PCR بـ 2–4 دورات إضافية بحذر لتجنب تحيز التضخيم المفرط. وبالنسبة للعينات التي فشل فيها تتبع النسيلة بسبب عدم التطابق المفرط (>5%)، تم تحديث قاعدة بيانات IMGT المرجعية، وتم تخفيف سماحية عدم التطابق مؤقتاً إلى 8% للتحليل الاستكشافي، رغم أن 5% ظلت هي الحد الفاصل القياسي للتقارير السريرية. وفي حال انخفض عمق التسلسل إلى أقل من 50,000 قراءة لكل عينة، تم إجراء إعادة التجميع وإعادة التسلسل دون تكرار خطوة PCR.
بشكل عام، يثبت هذا التحقق من الصحة في الواقع العملي أن عينات لطاخات نخاع العظم المتبقية تعطي نتائج اختبار متسقة وموثوقة عبر مختلف إعدادات العلاج. وفي المناطق التي تعاني من نقص الموارد الاقتصادية، حيث يتم إجراء خزعة نخاع العظم والتدفق الخلوي متعدد المعلمات (MFC) بشكل روتيني بدلاً من تسلسل الجيل القادم (NGS)، تشير النتائج إلى إمكانية النظر في استخدام NGS لإجراء تقييم جزيئي إضافي عندما تكون النتائج الأولية سلبية. ويعد استخدام العينات المتبقية أمراً ملائماً في مثل هذه الحالات، حيث يلغي الحاجة إلى تكرار سحب نخاع العظم، مما يقلل من العبء الواقع على المريض.
بينما تهدف دراستنا الواقعية المستمرة إلى توسيع حجم العينة لإجراء المزيد من التحليلات، فإننا نقر بوجود عدة قيود. فقد تحدث نتائج سلبية كاذبة، خاصة عندما يكون محتوى DNA المستخلص غير كافٍ، كما لوحظ في الكشف الثاني عن MRD للمريض 10. بالإضافة إلى ذلك، تتأثر نسبة النسيلات التي يتم اكتشافها بواسطة NGS بتقدير كمية الخلايا، مما قد يؤدي إلى تقدير مبالغ فيه لنسب خلايا MRD. ويركز التحقق بشكل أساسي على عينات نخاع العظم، ومع ذلك، فإن الأهمية طويلة المدى لـ NGS-MRD تكمن في المتابعات المتعددة بعد العلاج، حيث قد يكون الدم المحيطي أكثر ملاءمة، ولم يتم إجراء التحقق من عينات الدم المحيطي بعد. ونظراً لمحدودية عدد عينات التحقق السريرية، والتسجيل العشوائي للمرضى، وتنوع النهج العلاجية في هذه الدراسة الواقعية، فقد تبين أن جمع عينات MRD متتالية أمر صعب. وبناءً على ذلك، ركزنا على تقييم أهمية استجابات MRD المبكرة فيما يتعلق بالتطور اللاحق، ولم نتمكن من إثبات تأثير حالة MRD المستمرة على النتائج طويلة المدى. علاوة على ذلك، لم يتم إدراج NGF في التحليل المقارن؛ ورغم إجراء مقارنة منهجية بين NGS و MFC التقليدي، فإن NGF، كواحد من طريقتي MRD الموصى بهما من قبل IMWG (والأخرى هي NGS)، كان من شأنه تقديم رؤية إضافية حول أداء المقايسة. فضلاً عن ذلك، فإن حجم العينة صغير نسبياً (n = 40)، والمجموعة غير متجانسة، حيث تشمل أمراضاً خبيثة دموية متنوعة. لذا، فإن هناك حاجة إلى دراسات مستقبلية واسعة النطاق ومتعددة المراكز تدمج NGF وتركز على مرض خبيث واحد، مثل الورم النخاعي المتعدد، لتأكيد استنتاجاتنا وتوسيع نطاقها.
بعد التوصيف الدقيق والتحقق من أداء مقايسة استنساخ BCR/TCR القائمة على تسلسل الجيل القادم (NGS)، أثبتنا أنها تمتلك إمكانات كطريقة عالية الحساسية والدقة وعملية لتقدير ومراقبة الحد الأدنى من المرض المتبقي (MRD) في عينات لطاخة نخاع العظم المتبقية من مرضى الورم النخاعي المتعدد (MM).
الإفصاحات
يصرح المؤلفون بأنه لا يوجد تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا البحث من خلال منحة من المؤسسة الوطنية للعلوم في إدارة العلوم والتكنولوجيا بمقاطعة جيانغشي (رقم 20232BAB206059)، ومشروع أبحاث العلوم والتكنولوجيا التابع لإدارة التعليم بمقاطعة جيانغشي (رقم GJJ211518)، ومشروع خطة العلوم والتكنولوجيا التابع للجنة الصحة بمقاطعة جيانغشي (رقم 202310782)، ومشروع خطة العلوم والتكنولوجيا التوجيهية لمكتب العلوم والتكنولوجيا في غانزو بمقاطعة جيانغشي (رقم GZ2020ZSF027)، ومشروع خطة العلوم والتكنولوجيا التابع للإدارة الإقليمية للطب الصيني التقليدي في مقاطعة جيانغشي (رقم 2024B0710)
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Anti-CD19 | Abcam | AB134114 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD20 | Abcam | AB64088 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD22 | Abcam | AB32123 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD33 | Abcam | AB134115 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD34 | Abcam | AB81289 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD38 | Abcam | AB183326 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD45 | Abcam | AB40763 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD56 | Abcam | AB75813 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-CD9 | Abcam | AB2215 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| Anti-HLA-DR | Abcam | AB20181 | التخفيف وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة |
| GraphPad Prism | GraphPad | https://www.graphpad.com/ | |
| Illumina NovaSeq 6000 | Illumina | NovaSeq 6000 | https://www.illumina.com/systems/sequencing-platforms/novaseq.html |
| قاعدة بيانات ImMunoGeneTics (IMGT) | ImMunoGeneTics (IMGT) database | http://www.imgt.org/ | |
| خطوط خلايا الأورام اللمفاوية الخبيثة | ATCC | https://www.atcc.org/ | خطوط B-ALL هي REH و NALM6، وخط T-ALL هو Jurkat، وخط اللمفوما H9 (DSMZ) |
| قياس التدفق الخلوي متعدد المعلمات | BECKMAN COULTER | CytoFLEX | |
| مقايسة OriMIRACLE LTM | Origimed Co., Ltd., Shanghai, China | ||
| لغة R | R Foundation for Statistical Computing | الإصدار 3.6.1 |
المراجع
- van de Donk N, Pawlyn C, Yong KL. Multiple myeloma. Lancet. 2021;397(10272):410-27.
- Xia C, et al. Cancer statistics in China and United States, 2022: Profiles, trends, and determinants. Chin Med J. 2022;135(5):584-90.
- Ricciuti G, Falcone A, Cascavilla N, Martinelli G, Cerchione C. Autologous stem cell transplantation in multiple myeloma. Panminerva Med. 2020;62(4):220-4.
- Feng D, Sun J. Overview of anti-BCMA CAR-T immunotherapy for multiple myeloma and relapsed/refractory multiple myeloma. Scand J Immunol. 2020;92(2):e12910.
- Ontario Health. Minimal residual disease evaluation in childhood acute lymphoblastic leukemia: A clinical evidence review. Ont Health Technol Assess Ser. 2016;16(7):1-52.
- Yanamandra U, Kumar SK. Minimal residual disease analysis in myeloma: When, why and where. Leuk Lymphoma. 2018;59(8):1772-84.
- Bassan R, Brüggemann M, Radcliffe HS, Hartfield E, Kreuzbauer G, et al. A systematic literature review and meta-analysis of minimal residual disease as a prognostic indicator in adult B-cell acute lymphoblastic leukemia. Haematologica. 2019;104(10):2028-39.
- Kumar S, et al. International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma. Lancet Oncol. 2016;17(8):e328-e346.
- Dogliotti I, Drandi D, Genuardi E, Ferrero S. New molecular technologies for minimal residual disease evaluation in B-cell lymphoid malignancies. J Clin Med. 2018;7(9).
- Drandi D, et al. Highly sensitive MYD88(L265P) mutation detection by droplet digital polymerase chain reaction in Waldenström macroglobulinemia. Haematologica. 2018;103(6):1029-37.
- Camus V, et al. Digital PCR for quantification of recurrent and potentially actionable somatic mutations in circulating free DNA from patients with diffuse large B-cell lymphoma. Leuk Lymphoma. 2016;57(9):2171-9.
- Riva G, et al. Multiparametric flow cytometry for MRD monitoring in hematologic malignancies: Clinical applications and new challenges. Cancers. 2021;13(18).
- Anderson KC, et al. Minimal residual disease in myeloma: Application for clinical care and new drug registration. Clin Cancer Res. 2021;27(19):5195-212.
- ClonoSEQ cleared for residual cancer testing. Cancer Discov. 2018;8(12):OF6.
- Walzer S, Krenberger S, Vollmer L, Hewitt T, Eckert B. A cost impact analysis of clonoSEQ® as a valid and CE-certified minimal residual disease (MRD) diagnostic compared to no MRD testing in multiple myeloma in Germany. Oncol Ther. 2021;9(2):607-19.
- Ching T, et al. Analytical evaluation of the clonoSEQ assay for establishing measurable (minimal) residual disease in acute lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, and multiple myeloma. BMC Cancer. 2020;20(1):612.
- Chinese Society of Hematology. The guidelines for the diagnosis and management of multiple myeloma in China (2020 revision). Zhonghua Nei Ke Za Zhi. 2020;59(5):341-6.
- Chng WJ, et al. IMWG consensus on risk stratification in multiple myeloma. Leukemia. 2014;28(2):269-77.
- Hagen P, Zhang J, Barton K. High-risk disease in newly diagnosed multiple myeloma: Beyond the R-ISS and IMWG definitions. Blood Cancer J. 2022;12(5):83.
- Rawstron AC, et al. Minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry in multiple myeloma: Impact on outcome in the Medical Research Council Myeloma IX Study. J Clin Oncol. 2013;31(20):2540-7.
- Munshi NC, et al. A large meta-analysis establishes the role of MRD negativity in long-term survival outcomes in patients with multiple myeloma. Blood Adv. 2020;4(23):5988-99.
- Brüggemann M, et al. Standardized next-generation sequencing of immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations for MRD marker identification in acute lymphoblastic leukaemia: A EuroClonality-NGS validation study. Leukemia. 2019;33(9):2241-53.
- Medina A, et al. Comparison of next-generation sequencing (NGS) and next-generation flow (NGF) for minimal residual disease (MRD) assessment in multiple myeloma. Blood Cancer J. 2020;10(10):108.
- Kruse A, Abdel-Azim N, Kim HN, Ruan Y, Phan V, et al. Minimal residual disease detection in acute lymphoblastic leukemia. Int J Mol Sci. 2020;21(3).
- Kriegsmann K, et al. Comparison of NGS and MFC methods: Key metrics in multiple myeloma MRD assessment. Cancers. 2020;12(8).
- Takamatsu H. Comparison of minimal residual disease detection by multiparameter flow cytometry, ASO-qPCR, droplet digital PCR, and deep sequencing in patients with multiple myeloma who underwent autologous stem cell transplantation. J Clin Med. 2017;6(10).
- Perrot A, et al. Minimal residual disease negativity using deep sequencing is a major prognostic factor in multiple myeloma. Blood. 2018;132(23):2456-64.
- de Tute RM, et al. Minimal residual disease after autologous stem-cell transplant for patients with myeloma: Prognostic significance and the impact of lenalidomide maintenance and molecular risk. J Clin Oncol. 2022;40(25):2889-900.