يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج جديد للجرذ لجلطة الجيوب الوريدية الدماغية الحادة تم تأسيسه بمزيج من شبه الربط، كلوريد الحديد، والثرومبين

326 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69961

⸱

فبراير 13, 2026

 , 
1Department of Emergency, Xuanwu Hospital, Capital Medical University, 2Department of Neurology, The People's Hospital of Qingxian

في هذه المقالة

ملخص

النموذج الجديد للفئران لجلطة الجيوب الوريدية الدماغية الشديدة (CVST)، الذي يتم بناؤه بواسطة شبه ربط مع كلوريد الحديديين والثرومبين، يمكن أن يحاكي بشكل أكثر فعالية الآلية المرضية لمرض CVST الشديد لدى البشر.

الملخص

تخثر الجيوب الوريدية الدماغية (CVST) هو نوع مميز من السكتة الدماغية يصيب بشكل رئيسي الشباب، وخاصة النساء الحوامل. حوالي 60٪ من مرضى CVST يصابون باحتشاء دماغي وريدي أو نزيف، والذي يعرف بأنه CVST شديد. حاليا، تستخدم طرق مختلفة محليا ودوليا لتحفيز CVST في نماذج الحيوانات. ومع ذلك، تفشل هذه النماذج في تكرار الآليات الفسيولوجية المرضية الكامنة وراء CVST الشديد، مما يحد من البحث الأساسي حول هذه الحالة. يمكن تأسيس نموذج جرذ جديد لفيروس CVST الشديد من خلال شبه الربط مع كلوريد الحديديين والثرومبين. تم تحقيق شبه الربط عن طريق قياس تدفق الدم الدماغي (CBF) في المنطقة المعنية (ROI) قبل وبعد ربط الجيب السهمي العلوي (SSS) باستخدام جهاز تصوير التروية (PSI). يؤدي شبه ربط SSS إلى تجميد الدم داخل الجيب الوريدي. يؤدي التطبيق الموضعي لكلوريد الحديديك على سطح SSS إلى إصابة بطانة الجسم، بينما يؤدي الحقن المباشر للثرومبين في الجيوب الأنفية إلى خلق حالة فرط تخثر موضعية. تحاكي هذه الطريقة بشكل فعال المكونات الثلاثة الرئيسية لتكوين الجلطة: السكون، تلف البطانة، وفرط التخثر. يظهر النموذج الناتج عبئا خثريا كبيرا يشمل عدة جيوب وريدية في نفس الوقت. يبقى التجمد المستحث مستقرا لمدة أسبوع على الأقل. يظهر تلوين كلوريد 2,3,5-ثلاثي فينيل تيترازوليوم (TTC) أن هذا النموذج يمكنه باستمرار إنتاج احتشاء وريدي واسع النطاق في الدماغ، يستمر حتى 7 أيام. يمكن لهذا النموذج حتى أن يسبب نوبات صرع في الفئران، وهي قدرة لم تستطع النماذج السابقة تحقيقها. لوحظ اضطراب الحاجز الدموي الدماغي باستخدام صبغة إيفانز الزرقاء (EB). لذلك، فإن نموذج CVST الشديد الذي تم إنشاؤه من خلال الربط الجزئي مع إعطاء كلوريد الحديديين والثرومبين يكرر بشكل أدق التطور الفسيولوجي المرضي لمرض CVST الشديد لدى البشر، مما يثبت الاستقرار والموثوقية.

المقدمة

جلطة الجيوب الوريدية الدماغية (CVST) هي شكل مميز من اضطرابات الأوعية الدموية الدماغية تختلف عن السكتة الشريانية. يحدث بشكل أكثر شيوعا لدى الشباب 1,2، خاصةعند النساء الحوامل، وقد ارتفع معدل إصابته بشكل مستمر في السنوات الأخيرة. تشير دراسة وبائية أجريت في أستراليا إلى أن معدل الإصابة السنوي ل CVST يتراوح بين 13.0 إلى 15.7 حالة لكلمليون فرد. في الولايات المتحدة، يظهر معدل الإصابة بفيروس CVST اتجاها تصاعديا مع التقدم في العمر. ومع ذلك، فإن سن الذروة للإصابة لدى النساء أقل مقارنة بالرجال5. بين عامي 2021 و2023، تم تشخيص 43 مريضا لكل مليون مريض زاروا أقسام الطوارئ في الولايات المتحدة ب CVST6. في البيئات السريرية، يعد جلطة الجيوب الأنفية المتعددة هو الشكل الأكثر شيوعا، حيث يشكل حوالي 57.14٪ من جميع الحالات. يتبع ذلك تدخل الجيب السهمي العلوي (SSS؛ 16.19٪)، والجيوب العرضي (11.43٪)، والجيوب السيني (8.57٪)4. تشمل المظاهر السريرية الرئيسية الصداع، الذي قد يصاحبه الصرع، واضطرابات الوعي، وأعراض عصبية بؤرية7،8،9. ومع ذلك، هذه المظاهر ليست محددة. حوالي 60٪ من مرضى CVST يصابون باحتشاء وريدي دماغي أو نزيف، ويصنف كاحتجاز وريدي دماغي10,11. على الرغم من أن علاج CVST يشمل العلاج بمضادات التخثر والتدخل الجراحي، إلا أن معدل الوفيات من CVST الشديد لا يزال مرتفعا عند 34.2٪9. قد يعزى هذا الارتفاع في الوفاة إلى حقيقة أن الآليات المرضية الكامنة وراء مرض CVST الشديد لم تفهم بالكامل بعد. لذلك، فإن النموذج الحيواني المناسب لمرض CVST الشديد هو أداة تجريبية أساسية للتحقيق في مسببه المرضي، وتطوره الفسيولوجي المرضي، والاستراتيجيات العلاجية المحتملة.12.

حاليا، يمكن تصنيف طرق تحفيز نماذج الحيوانات في CVST عموما إلى الأنواع التالية: الربط الدائم13,14، التحفيز الكيميائي 15,16,17، الأساليب التدخلية 18,19، زرع الطعوم المصنوعة ذاتيا 20,21,22، والتخثر الكهربائي ثنائي القطب 23,24. كان التثبيط الناتج عن نماذج الحيوانات السابقة قصير المدة ولم يتمكن من تحفيز عدة جلطات وريدية وريدية واحتشاء دماغي وريدي واسع النطاق في نفس الوقت. لذلك، أصبح تطوير نموذج CVST الشديد الذي يتضمن عدة جيوب وريدية في آن واحد أولوية عاجلة. يمكن لطريقة الربط الجزئي مع كلوريد الحديديين والثرومبين أن تؤسس نموذجا جديدا للفئران لسرطان القلب المزمنة الشديد. علاوة على ذلك، يحاكي نموذج CVST الشديد الجديد العملية الفسيولوجية المرضية البشرية لمرض CVST الشديد بدقة أكبر من خلال ثلاثة جوانب رئيسية: عبء جلطة الجيوب الوريدية، احتشاء الدماغ الوريدي، واضطراب الحاجز الدموي الدماغي. ينطبق هذا النموذج على الأبحاث حول الآليات الفسيولوجية المرضية واستراتيجيات العلاج لسرطان القلب الوعمي الشديد. يمكن استخدام هذا النموذج الجديد للفئران في المستقبل لدراسة الآلية الفسيولوجية المرضية لمرض CVST الشديد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي من قبل لجنة تجارب الحيوانات ورعاية الحيوانات التجريبية في جامعة كابيتال الطبية (AEEI-2020-119) في بكين، الصين، وتم إجراؤه وفقا للوائح لجنة رعاية واستخدام الحيوانات في المؤسسة.

1. تحضير الحيوانات

  1. قم بتعيين الفئران الذكور البالغة الأصحاء من جرذان سبراج-داولي (SD)، بوزن متوسط 300 ± 10 جرام، بشكل عشوائي إلى مجموعة التجربة أو مجموعة العمليات الوهمية. كانت جميع الحيوانات تتم رعايتها بدورة متناوبة من الضوء والظلام لمدة 12 ساعة مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء بحكم المرض.

2. تطبيق PSI

  1. استخدم PSI لمراقبة التغيرات المستمرة في تدفق الدم الدماغي (CBF) داخل SSS للفئران طوال عملية النمذجة. اختر منطقة دائرية ثابتة داخل SSS كمنطقة الاهتمام (ROI). من خلال مراقبة التغيرات في CBF في عائد الفائدة أثناء الجراحة، حدد اكتمال شبه الربط ونجاح تحفيز الجلطة.

3. تأسيس نموذج الفئران الحاد لفيروس CVST

  1. تخدير الفئران باستخدام 5٪ إنفلوران، باستخدام خليط غازي يتكون من 70٪ أكسيد النيتروز و30٪ أكسجين يتم توصيله عبر قناع تخدير. حافظ على تركيز الإنفلوران في نطاق 1٪-2٪ طوال العملية الجراحية. ضع الفئران المخدرة في وضعية الاستلقاء، مع تثبيت رؤوسها في منتصف الخط باستخدام إطار ستيريوتاكسي. حافظ على درجة حرارة الجسم عند 37 ± 0.5 درجة مئوية طوال فترة الجراحة باستخدام وسادة تسخين حرارية.
  2. قم بعمل شق طولي بطول 1.5 سم على طول منتصف منطقة جمجمة الجرذ. قم بتشريح الأنسجة تحت الجلد لكشف الجمجمة الأساسية.
  3. تحت الرؤية المجهرية، اصنع نافذة جمجمة طولية (10 × 4 مم) بين البريغما واللامبدا باستخدام مثقاب أسنان عالي السرعة. كشف SSS والقشرة الدماغية الثنائية مع الحفاظ على سلامة الجاف الأم. خلال عملية الحفر الجمجمية، قم بتبريد رأس الحفر باستمرار باستخدام محلول ملحي عادي لمنع الإصابة الحرارية في الجافة والقشرة الدماغية.
  4. بعد التعرض ل SSS، قيم CBF لعائد الاستثمار في SSS باستخدام PSI، وسجل البيانات المقابلة. شبه ربط SSS من الناحية الخلفية وذيلية باستخدام 8-0 غرز البولي أميد تحت المراقبة المجهرية.
    ملاحظة: عند ربط SSS، يجب أن تكون القوة معتدلة وليست مفرطة. وإلا، فلا يمكن تحقيق تأثير شبه ربط. من المثالي أن يتم إجراء الربط في إجراء مستمر واحد. قد تؤدي محاولات الربط المتكررة إلى ثقب SSS، مما يضر بنجاح تصنيع النماذج.
  5. استخدم مؤشر PSI لتقييم CBF للعائد على الاستثمار الموجود في الجزء المرتبط من SSS، مؤكدا أن CBF انخفض إلى حوالي 50٪ من ذلك قبل شبه الربط. سجل النتائج بشكل منهجي.
  6. في ظروف محمية من الضوء المناسب، اغمس خيط حرير 3-0 بطول 7 مم في كلوريد الحديدي 40٪ واستخدمه لتغطية سطح موقع ربط SSS لمدة 5 دقائق. اغسل الحقل بمحلول ملحي عادي بعد إزالة خيط الحرير.
  7. حقن محلول ثرومبين بسعة 0.1 مل (500 يو/مل) في تجويف الجيوب الأنفية للجزء المربوط باستخدام حقن دقيق خلال دقيقة واحدة. كرر الحقن مرتين إضافيتين متتاليتين، لتحصل على جرعة جرعة إجمالية تبلغ 150 وحدة إجمالية. لم يؤدي ارتجاع الجلثوبين إلى مساحة فوق الجافية إلى ضعف الجلطة.
    1. لتسهيل حقن الثرومبين في ال SSS، قم بثني إبرة الحقن الدقيق بلطف قبل الإدخال. يسمح هذا التعديل بالتحكم الأفضل في زاوية الإبرة أثناء الثقب ويساعد في منع الاختراق غير المقصود عبر SSS.
  8. أعد تقييم CBF للعائد على الاستثمار باستخدام PSI بعد حقن الثرومبين. تأكد من أن النتائج تؤكد انخفاضا كبيرا في CBF مقارنة بما يلي شبه الربط، مما يشير إلى نجاح تحفيز الجلطة. سجل البيانات بشكل منهجي لمزيد من التحليل.
  9. أغلق نافذة العظم بشمع العظام، ثم خياطة الشق. بعد الجراحة، أعط كل فأر كيتوبروفين (5 ملغ/كغ) تحت الجلد لتخفيف الألم بعد العملية.
  10. في مجموعة العمليات الوهمية، قم بإجراء بصم الجمجمة فقط، دون أي تدخلات جراحية إضافية.

4. عبء جلطة الجيوب الوريدية واحتشاء الدماغ

  1. قيم عبء جلطة الجيوب الأنفية الوريدية في ثلاث نقاط زمنية: يوم واحد، ويومان، و7 أيام بعد تأسيس النموذج. التضحية بالفئران وأداء تروية القلب باستخدام محلول ملحي عادي في أوقات مختلفة.
  2. إجراء عملية فتح الجمجمة لتقييم مدى تأثير الجلطة الوريدية في الجيوب الوريدية بصريا. عزل الجلطة وخضوعها للتحليل الكمي. قم باستئصال نسيج الدماغ وتقسيمه إلى شرائح تاجية بسماكة 2 مم.
  3. اغمر الشرائح في محلول 2٪ من الحمل واحتضنه في حمام ماء بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة لتسهيل التلوين. بعد ذلك، يتم تقييم احتشاء الورد الدماغي بصريا وقياس حجم الاحتشاء باستخدام برنامج ImageJ للتحليل الإحصائي لاحقا.
    حجم الاحتش الداخلي = مساحة الانتشاء بوحدة ملم مربع × سمك [2 مم]

5. اضطراب نفاذية الحاجز الدموي الدماغي (BBB)

  1. في اليوم الثاني بعد الجراحة، يتم اختيار فئران عشوائيا من كل من مجموعة النموذج ومجموعة العمليات الوهمية وإعطاء حقنة وريدية بمحلول 2٪ من زهرة إيفانز بلو (EB) عبر الوريد الذيلي.
  2. بعد ساعتين من إعطاء الحقنة بنجاح، قم بقتل الفئران، وحقن الجرذان بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) عبر البطين الأيسر. اجمع أنسجة الدماغ وقسمها إلى شرائح بسماكة 2 مم لتقييم مدى اختراق الدماغ الخارجي.

6. التحليل الإحصائي

  1. إجراء تحليل إحصائي باستخدام برنامج SPSS 17.0. قدم بيانات القياس كمتوسط ± انحراف معياري. استخدم تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) أو اختبار t مستقل للعينات لمقارنات المجموعات.
  2. لتحليل المتغيرات المستمرة المقاسة في عدة نقاط زمنية ضمن نفس المجموعة، استخدم مقاييس متكررة ANOVA لتقييم الفروق بين المجموعات عبر نقاط الزمن. تم اعتبار قيمة p أقل من 0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

عملية النمذجة
يصور الشكل 1A رمز SSS للفأر، كما هو موضح بالسهم. تم ربط الجزء الخلفي والذيلي من الهيكل الصلبي الصلبي شبه المربوط (الشكل 1B)، تليها تطبيق خيط مشبع بالكلوريد الحديدي على سطح المناطق المربوطة (الشكل 1C). تم حقن الثرومبين لاحقا في الأجزاء المربوطة لتحفيز الجلطة. المنطقة التي يرمز إليها السهم، حيث تم حقن الثرومبين، تحولت إلى اللون الأسود (الشكل 1D

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نموذج جرذ جديد لمرض CVST شديد تم بناؤه بواسطة شبه ربط مع كلوريد الحديديين والثرومبين لا يحاكي فقط حالة الجمود الدموي وإصابة البطانة، بل أيضا حالة فرط التجلط في الدم، أي أنه يحاكي العناصر الثلاثة لتكوين الجلطة25. وما هو أكثر إثارة هو أن نموذج الفئران الذي تم تطويره باستخدام هذه الطريقة قادر على إظهار نوبات صرع. تمثل نوبات الصرع مظهرا سريريا ملحوظا لدى مرضى CVST، حيث تحدث في حوالي 12٪ إلى 31.9٪ من الحالات. ومن الجدير بالذكر أن المرضى الموالين من CVST الشديد الذين يع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه لا توجد لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

نشكر معهد الأمراض الدماغية الحرجة في جامعة كابيتال الطبية على دعمهم الفني. وقد دعمت هذه الدراسة مؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (رقم 7182064).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
كلوريد 2,3,5-تريفينيل تيترازوليومسيغما-ألدرتش
40٪ كلوريد الحديد شركة تيانجين تشييوان للكاشف الكيميائي، الصين
إيفانز بلو  سيغما-ألدرتش
وسادة التدفئة  هارفارد أبريتوس هوليستون، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية50-7061-f, 
مثقاب الأسنان عالي السرعة  سايشين، بوسان، كوريا الجنوبيةسترونغ-207B
مقياس الليزر النقاط  نظام بيري كام PSI، السويد
المجهركارل تسايس، برلين، ألمانيا
خياطة البولي أميد  مصنع نينغبو تشنغخه للأجهزة الدقيقة، الصين
الإطار المجسمديفيد كوبف إنسترومنتس، توجونغا، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية
الثرومبينشركة تشانغ تشون لي يونشانغ للأدوية المحدودة، الصين

المراجع

  1. Silvis, S. M., de Sousa, D. A., Ferro, J. M., Coutinho, J. M. Cerebral venous thrombosis. Nat Rev Neurol. 13 (9), 555-565 (2017).
  2. Ferro, J. M., Aguiar de Sousa, D. Cerebral venous thrombosis: an update. Curr Neurol Neurosci Rep. 19 (10), 74(2019).
  3. Kashkoush, A. I., et al. Cerebral venous sinus thrombosis in pregnancy and puerperium: A pooled, systematic review. J Clin Neurosci. 39 (5), 9-15 (2017).
  4. Devasagayam, R., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. Cerebral venous sinus thrombosis Incidence Is Higher Than Previously Thought: A Retrospective Population-Based Study. Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).
  5. Payne, A. B., et al. Epidemiology of cerebral venous sinus thrombosis and cerebral venous sinus thrombosis with thrombocytopenia in the United States, 2018 and 2019. Res Pract Thromb Haemost. 6 (2), e12682(2022).
  6. Ruderman, A., Hogan, A., Epley, C., Courtney, D. M., Milman, B. Epidemiology of Cerebral Venous Sinus Thrombosis: 2021-2023. Cureus. 17 (10), e93654(2025).
  7. Singh, R. J., Saini, J., Varadharajan, S., Kulkarni, G. B., Veerendrakumar, M. Headache in cerebral venous sinus thrombosis revisited: exploring the role of vascular congestion and cortical vein thrombosis. Cephalalgia. 38 (3), 503-510 (2018).
  8. Mahale, R., et al. Acute seizures in cerebral venous sinus thrombosis: what predicts it. Epilepsy Res. 123 (7), 1-5 (2016).
  9. Luo, Y., Tian, X., Wang, X. Diagnosis and treatment of cerebral venous thrombosis: a review. Front Aging Neurosci. 30 (1), 102(2018).
  10. Kowoll, C. M., et al. Severe cerebral venous and sinus thrombosis: Clinical course, imaging correlates, and prognosis. Neurocritical care. 25 (3), 392-399 (2016).
  11. Stam, J., Majoie, C. B. L. M., van Delden, O. M., van Lienden, K. P., Reekers, J. A. Endovascular thrombectomy and thrombolysis for severe cerebral sinus thrombosis: A prospective study. Stroke. 39 (5), 1487-1490 (2008).
  12. Yenigün, M., Jünemann, M., Gerriets, T., Stolz, E. Sinus thrombosis: do animal models really cover the clinical syndrome. Ann Transl Med. 3 (10), 138(2015).
  13. Frerichs, K. U., et al. Cerebral sinus and venous thrombosis in rats induces long-term deficits in brain function and morphology--evidence for a cytotoxic genesis. J Cereb Blood Flow Metab. 14 (2), 289-300 (1994).
  14. Li, G., et al. A new thrombosis model of the superior sagittal sinus involving cortical veins. World Neurosurg. 82 (1/2), 169-174 (2014).
  15. Röttger, C., et al. A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes. Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).
  16. Chen, C., et al. Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis. Neuroscience. 306 (10), 39-49 (2015).
  17. Wei, Y., Deng, X., Sheng, G., Guo, X. B. A rabbit model of cerebral venous sinus thrombosis established by ferric chloride and thrombin injection. Neurosci Lett. 662 (1), 205-212 (2018).
  18. Wang, J., et al. A new model of reversible superior sagittal sinus thrombosis in rats. Brain Res. 1181 (11), 118-124 (2007).
  19. Wang, J., et al. Development of a new model of transvenous thrombosis in the pig superior sagittal sinus using thrombin injection and balloon occlusion. J Neuroradiol. 37 (2), 109-115 (2010).
  20. Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes. J Neurosci Methods. 203 (1), 130-135 (2012).
  21. Bourrienne, M. C., et al. A Novel Mouse Model for Cerebral Venous Sinus Thrombosis. Transl Stroke Res. 12 (6), 1055-1066 (2021).
  22. Mu, S., et al. A novel rat model for cerebral venous sinus thrombosis: verification of similarity to human disease via clinical analysis and experimental validation. J Transl Med. 20 (1), 174(2022).
  23. Sakaki, T., Kakizaki, T., Takeshima, T., Miyamoto, K., Tsujimoto, S. Importance of prevention of intravenous thrombosis and preservation of the venous collateral flow in bridging vein injury during surgery: an experimental study. Surg Neurol. 44 (2), 158-162 (1995).
  24. Cokluk, C., Aydin, K., Yemisci, M., Colakoglu, S., Kaplan, S. Cortical anastomotic veins occlusion in the rat including the assessment of cerebral swelling. J Neurosci Methods. 156 (1-2), 203-210 (2006).
  25. Kyrle, P. A., Eichinger, S. Deep vein thrombosis. Lancet. 365, 1163-1174 (2005).
  26. Lindgren, E., et al. Acute symptomatic seizures in cerebral venous thrombosis. Neurology. 95 (12), e1706-e1715 (2020).
  27. Li, W., Nieman, M., Sen Gupta, A. Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models. J Vis Exp. (115), e54479(2016).
  28. Rahal, J. P., Malek, A. M., Heilman, C. B. Toward a better model of cerebral venous sinus thrombosis. World Neurosurg. 82 (1-2), 50-53 (2014).
  29. Duan, J., et al. Identifying Biomarkers Associated with Venous Infarction in Acute/Subacute Cerebral Venous Thrombosis. Aging Dis. 12 (1), 93-101 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

TTC

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.