يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
هنا، تم تحقيق تصور ثلاثي الأبعاد لبنية الأوعية اللمفاوية في جلد الإنسان باستخدام المجهر الكونفوكالي أو اللوحي الضوئي بعد تطبيق ثلاث تقنيات مميزة لتنظيف الأنسجة. توفر الجمع بين هذه الطرق مع التلوين الكيميائي المناعي النسجي رؤية حول التغيرات الوظيفية في الأوعية اللمفاوية أثناء تطور الوذمة اللمفية.
الأوعية اللمفاوية للجلد، التي تتكون من الشعيرات الدموية وأوعية التجمع، لها أدوار رئيسية في إزالة النفايات والاستجابات المناعية، وهي ضرورية للحفاظ على توازن الأنسجة. ومع ذلك، فإن جلد الإنسان، بطبقاته الثلاث — البشرة، الأدمة، والدهون تحت الجلد — يحتوي على مصفوفة خارج الخلية كثيفة غنية بالكولاجين، مما يجعل تصور الشبكات اللمفاوية في ثلاثة أبعاد أمرا صعبا. لمعالجة هذا القيد، تقدم هذه الورقة ثلاث طرق مميزة، كل منها مصممة لتناسب جزيئات محددة ذات اهتمام وأهداف تجريبية، لتصوير اللمفاويات الجلدية البشرية ثلاثية الأبعاد باستخدام كواشف تنظيف الأنسجة مع المجهر الكونفوكالي أو المجهر الضوئي. من خلال استهداف جزيئات الوصلات اللاصقة في خلايا البطانة اللمفاوية عبر الكيمياء المناعية، تم تقييم التغيرات الهيكلية ذات الدلالات الوظيفية الواضحة، خاصة إعادة تشكيل الوصلات الدموية الشبيهة بالزر إلى السحاب، في أنسجة الجلد المستمدة من مرضى المصابين بالوذمة اللمفية الثانوية. تكشف هذه التقنية البصرية ثلاثية الأبعاد عن هياكل وعائية لا يمكن تمييزها من خلال تحليل مقطع الأنسجة التقليدي، مما يعزز فهم بنية الأوعية اللمفاوية ووظيفتها.
هناك اهتمام متزايد بوظيفة الأوعية اللمفاوية منذ الاعتراف بدورها في الحفاظ على توازن الجلد، إلى جانب تورطها المعروف في انتشار السرطان 1,2. تنقسم الأوعية اللمفاوية هيكليا إلى شعيرات دموية وأوعية تجمع، ولكل منها خصائص مميزة. تتكون الشعيرات الدموية اللمفاوية من بنية ذات طبقة واحدة تتكون من خلايا بطانة الغلاف اللمفاوي، وتعمل كمواقع أولية لجمع السوائل البينية، ومنتجات الفضلات، والخلايا المناعية. على النقيض من ذلك، تتمتع الأوعية اللمفاوية المجمعة ببنية ذات طبقتين مع خلايا عضلية ملساء تحيط بطبقة البطانة اللمفاوية، مما يمكن من نقل السائل اللمفاوي النشط الذي تجمعه شبكة الشعيرات الدموية ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم الحصول على عينات جلدية من أشخاص من مستشفى جامعة تشيبا (تشيبا، اليابان). تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تشمل البشر من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لمستشفى جامعة تشيبا ومركز شيسيدو العالمي للابتكار، وتم تقديم موافقة مكتوبة مستنيرة لجميع المشاركين. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. المعالجة المبدئية لعينات الجلد البشري
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الفرق في نفاذ الضوء للأنسجة الجلدية البشرية التي تم نقاؤها مع البشرة وبدون البشرة
يظهر الشكل 1 صورا ممثلة لعينات جلد بشري مع وبدون بشرة، بعد النفاذية والتنظيف باستخدام كاشف Rapiclear 1.52. إزالة الجلد تعزز شفافية الأنسجة عن طريق إزالة الميلانين، وهو ماص قوي للضوء، كما يؤكد ذلك زيادة وضوح الخط الأسود تحت العينات.
التصور الثلاثي الأبعاد على المستوى الكبير للأوعية اللمفاوية في جلد الإنسان
من خ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعد التصور ثلاثي الأبعاد لشبكات اللمفاوم في الأنسجة البيولوجية أمرا بالغ الأهمية لفهم خصائصها الهيكلية ووظائفها الفسيولوجية، بالإضافة إلى التغيرات المرضية. يقدم هذا البروتوكول ثلاث طرق مميزة لتنظيف الأنسجة محسنة لأنسجة جلد الإنسان، كل منها مصمم لأهداف رصدية محددة.
يعتبر إزالة البشرة خطوة حاسمة لإزالة الميلانين، الذي يقلل من شفافية الأنسجة ويتداخل مع التقييم النسيجي19. تماشيا مع ذلك، أظهر تلطيخ المناعي لعينات الجلد البشرية مع بقاء البشرة.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ك.ت.، إي.جي.، إن.آي.، وك.ك. هم موظفون في شركة شيسيدو المحدودة.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الأجسام المضادة المضادة ل CD31 | R& دي سيستمز | AF806 | التخفيف عند 1:200 |
| الأجسام المضادة المضادة لبودوبلانين | داكو | M3619 | التخفيف عند 1:100 |
| الجسم المضاد المضاد ل VE-كاديرين | تقنية الإشارة الخلوية | #2500 | التخفيف عند 1:100 |
| CUBIC-L | طوكيو للصناعة الكيميائية | T3740 | |
| CUBIC-R+(M) | طوكيو للصناعة الكيميائية | T3741 | |
| DMEM، انخفاض الجلوكوز، البيروفات | ثيرمو فيشر ساينتيفيك | 11885084 | |
| الأجسام المضادة الثانوية المضادة للفئران IgG (H+L) من نوع Donkey Anti-Moate IgG (H+L) عالية الامتصاص، Alexa Fluor 647 | ثيرمو فيشر ساينتيفيك | A-31571 | التخفيف عند 1:1000 |
| الأجسام المضادة الثانوية المضادة للأرانب الحمار (H+L) ذات امتصاص متقاطع عالي، أليكسا فلور 568 | ثيرمو فيشر ساينتيفيك | A10042 | التخفيف عند 1:1000 |
| الجسم المضاد الثانوي الممتص عبر الغلاف المضاد للخراف الحمار، أليكسا فلور 488 | ثيرمو فيشر ساينتيفيك | A-11015 | التخفيف عند 1:1000 |
| Rapiclear 1.52 | مختبر سونجين | RC152001 | |
| مجهر زايس لايتشيت Z.1 | كارل زايس | ||
| مجهر الليزر الكونفوكال ZEISS LSM 880 | كارل زايس |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.