يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

اختبار الماموسفير يكشف عن الجذع الناتج عن API 5 في خطوط خلايا ظهارية الثدي غير المسببة للورم

742 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69999

⸱

فبراير 24, 2026

 , 
1Biology Department, Indian Institute of Science Education and Research

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول طريقة إعداد اختبار تكوين الغلاف المابوسيري لدراسة جذع السرطان الناتج عن مثبط الاستماتة 5 (Api5) في الخلايا الظهارية للثدي غير المسببة للأورم. يتم تحليل الليزاتات المجمعة من الماموسفيرات من الجيل الأولي للبحث عن مؤشرات جذع مختلفة لتقييم تحفيز خصائص شبيهة بالخلايا الجذعية.

الملخص

لا يزال سرطان الثدي هو أكثر أنواع السرطان انتشارا بين النساء حول العالم، مع أعلى معدلات الإصابة والوفيات حسب العمر. على الرغم من التقدم في العلاجات التي تستهدف سرطان الثدي، يظهر 20٪ من المرضى انتكاسة للمرض، وقد يعزى ذلك إلى مجموعة من الخلايا الجذعية السرطانية المقاومة للعلاج (CSCs). يمكن لهذه الخلايا الوعائية أن تنجو من العلاجات التقليدية بالبقاء في مرحلة السكون أو تستمر بسبب الاستئصال غير الكامل للكتلة الورمية، مما يؤدي إلى عودة المرض في مرحلة لاحقة. لذلك، ركزت الأبحاث الحديثة على تحديد وعزل واستهداف هذه المجموعة المقاومة من الخلايا. في المختبر، يعمل اختبار تكوين الماموسفير كنظام زراعة تعليق ثلاثي الأبعاد قوي لإثراء وتكاثر الخلايا الجذعية داخل تجمعات ظهارة الثدي. هنا، نقدم نهجا يستخدم اختبار الغلاف الجذعي لتقييم النمط الظاهري الشبيه بالخلايا الجذعية السرطانية الذي يتم تمكينه في خلايا ظهارة الثدي غير الورمية بسبب فرط التعبير عن مثبط الاستماتة 5 (Api5). يتضمن البروتوكول انتشار الماموسفيرات عبر ممرات متسلسلة لتقييم كفاءة تكوين الماموسفير وقدرتها على التجدد الذاتي. بالإضافة إلى ذلك، يتم فحص محللات البروتين المجمعة من الماموسفيرات للكشف عن علامات الجذع المثبتة عبر التحليل المناعي. يتيح هذا الاختبار دراسة منظمات جديدة، مثل Api5، لخصائص الخلايا الجذعية السرطانية في مجموعات خلايا ظهارة الثدي. يمكن تكييف النهج الموضح لدراسات مقارنة للتدخلات الجزيئية أو لفحص العوامل العلاجية التي تستهدف الخلايا الدماغية الدماغية في المختبر.

المقدمة

أدى ارتفاع سرطانات الثدي المقاومة للعلاج الكيميائي إلى تركيز متزايد على تحديد واستهداف السبب الأساسي لمقاومة العلاج والانتكاس، وهو مجموعة من خلايا السرطان تعرف باسم الخلايا الجذعية السرطانية. تتميز هذه الخلايا بقدرتها على التهرب من التمايز والبقاء ساكنة، مما يمكنها من مقاومة طرق علاج السرطان المختلفة 1,2. يمكن استخدام عدة طرق لتحديد الخلايا الجذعية لسرطان الثدي، بما في ذلك اختبار تكوين الماموسفير 3,4,5، وفرز الخلايا بناء على علامات سطحالخلية 6,7، والعزل بناء على خصائص التدفق، واختبارات الورم في الجسم 7، وتقييم معدلات النوى للخلايا الجذعية مثل أكتوبر4 8، نانوغ9، Sox210 وBMI11. عادة ما يتطلب تحديد وعزل الخلايا الجذعية السرطانية مزيجا من واحد أو أكثر من هذه الأساليب.

مثبط الاستماتة 5 (Api5) هو بروتين مضاد للاستماتة تم اكتشاف أنه يرفع تنظيمه في عدة سرطانات، بما في ذلك سرطان الثدي12، 13، 14، سرطان عنق الرحم15، 16، 17، سرطان الدم اللمفاوي المزمن لخلايا B18، وسرطان الرئة غير صغيرالخلايا 19. تم العثور على مستويات عالية من Api5 مرتبطة بمقاومة العلاج الكيميائي في عنق الرحم16 وسرطان الثدي الثلاثي السلبي12. هناك أدلة متزايدة على أن مقاومة العلاج والانتكاسة غالبا ما تكون مدفوعة بالخلايا الجذعية السرطانية20,21. كشفت دراسة مثيرة للاهتمام أجراها سونغ وآخرون أن التعبير المفرط عن Api5 في خلايا سرطان عنق الرحم يؤدي إلى ارتفاع مستويات النانوغ، مما يساهم في زيادة جذوع السرطان. أظهرت دراسات سابقة من مختبرنا أن الإفراط في التعبير عن Api5 يؤدي إلى تحول خلايا ظهارية الثدي غير الورمية التي تنمو في مزارع ثلاثية الأبعاد المدعومة من ماتريجيل. تظهر هذه الخلايا المحولة قطبية مضطربة، وزيادة في التكاثر، ونموا مستقلا عن التثبيت، ونمط ظاهري جزئي يشبه الانتقال الظهاري إلى الميزنكيمي (EMT). تم الاحتفاظ بالتغيرات الظاهرية التي لوحظت عند الإفراط في التعبير عن Api5 في الثقافات ثلاثية الأبعاد بعد تفكيك الكرويدات إلى مزارع أحاديةالطبقة 14. نظرا لأن Api5 يرتفع في سرطانات الثدي الثلاثية السلبية المقاومة للعلاج الكيميائي، نفترض أن Api5 قد ينظم أيضا خصائص جذع السرطان في خلايا ظهارة الثدي.

في هذا السياق، نصف اختبار تكوين الغلاف الماموسفير لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية من الخلايا الطهارية الثدية غير المصابة بالورم متفرعة ثلاثية الأبعاد والتي تحولت بفعل فرط تعبير Api5، يليه اختبار الطلاء الغربي لعلامات الخلايا الجذعية لتأكيد هوية هذه الخلايا. يتضمن اختبار الغلاف الماموسفير زراعة خلايا ظهارية الثدي تحت ظروف غير ملتصقة وغير متمايزة، مما يمكن من إثراء الخلايا الشبيهة بالجذع/الخلايا السلفية في هياكل ثلاثية الأبعاد تعرف بالماموسفيرات. الخلايا الظهارية للثدي التي لا تمتلك خصائص جذعية عادة ما تخضع لأنويكس؛ ومع ذلك، فإن الخلايا ذات الخصائص الشبيهة بالجذع تنتج الماموسفيرات 4,5. تم تطوير هذه الطريقة في الأصل بواسطة دونتو وآخرون3 واستلهمت من اختبار الغلاف العصبي، الذي يستخدم لدراسة وتحديد الخلايا الجذعية العصبية والأصول السابقة23. يسمح اختبار الماموسفير الموضح هنا بتقييم نشاط الخلايا الجذعية وقدرتها على التجديد الذاتي في وسط منخفض مدعوم بفيتامين ب27 بدون فيتامين أ وعامل نمو البشرة البشري المؤتلف. الخلايا المتفرجة ثلاثية الأبعاد التي تعبر بشكل مفرط عن Api5 تزرع بشكل متفرق على صفائح مغطاة بالبولي (2-هيدروكسي إيثيل ميثاكريلات) (pHEMA). وهذا يسمح للخلايا بالنمو في ظروف غير الالتصاقة، بحيث يكون كل ماموسفير لاحق من أصل استنساخي. يسمح للماموسفيرات بالنمو حتى اليوم السابع، وبعده يتم حساب كفاءة تكوين الماموسفير. لتمييز الخلايا الجذعية الحقيقية عن الخلايا غير الجذعية التي تفقد قدرتها على التكاثر مع مرور الوقت، يتم إجراء أجيال لاحقة من تكوين الغلاف الماموسفير (ماموسفير الماموسفير الميكاني). الانتقال المتسلسل للماموسفيرات يتضمن فصل الكرات التي جمعت من التوليد الأولي وإعادة طلاء الخلايا المفردة لتشكيل ماموسفيرات ثانوية (وبعدية). هذا يحدد ما إذا كانت الخلايا يمكنها بدء تكوين الكرة بشكل متكرر ويتم قياسه كقدرة التجديد الذاتي للخلايا5.

يمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد الخلايا الجذعية لسرطان الثدي في الخلايا الظهارية للثدي المصابة بالورم أو المتحولة. يمكن أيضا تكييف هذه الطريقة لعزل الخلايا الجذعية لسرطان الثدي عن عينات المرضى. يمكن للنظام المساعدة في تحديد أهداف جديدة ضد الخلايا الجذعية لسرطان الثدي التي قد تكون مرتبطة بمقاومة العلاج الكيميائي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. تغطية ألواح زراعة الأنسجة ب Poly(2 -hydroxyethyl methacrylate)، pHEMA

  1. قم بإذابة 1.2 جرام من pHEMA (الوزن الجزيئي ̴ 300,000) في 100 مل من 95٪ إيثانول عن طريق التحريك المستمر عند 65 درجة مئوية لتحضير محلول pHEMA بنسبة 1.2٪ (انظر جدول المواد).
  2. قم بطلاء ألواح زراعة الأنسجة القياسية ب pHEMA عن طريق تطبيق 1 مل لكل بئر من صفيحة ذات 6 آبار. يمكن تعديل حجم محلول pHEMA بناء على حجم وعاء زراعة الأنسجة.
  3. اترك الأطباق لتجف في الفرن عند درجة حرارة 40 درجة مئوية تحت ظروف معقمة.
  4. تعرض الألواح للأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة، تليها ثلاث مرات غسيل باستخدام محلول دولبيكو الملحي الفوسفوري (DPBS)، قبل استخدامها لإعداد اختبار تكوين الماموسفير (ماموسفير الماموسفير).

2. زرع الماموسفيرات من الجيل الأولي

  1. زراعة خلايا MCF10A المتفرخة ثلاثية الأبعاد (التحكم والتعبير الزائد عن Api5) تم الحصول عليها من خلال فصل اليوم 16 من زراعة ثلاثية الأبعاد في وسط النمو14.
    ملاحظة: تركيب وسط النمو: ارتفاع السكر DMEM بدون بيروفات الصوديوم مع مكمل بمصل حصان 5٪، 10 ميكروغرام/مل إنسولين، 0.5 ميكروغرام/مل هيدروكورتيزون، 20 نانوغرام/مل عامل نمو بشري مؤتلف، 100 نانوغرام/مل من سم الكوليرا، و200 وحدة/مل بنسلين-ستربتوميسين (انظر جدول المواد).
  2. أزل الوسط المستهلك، وغسل الخلايا ب 1 مل من DPBS، ثم أضف 500 ميكرولتر من 0.05٪ تريبسين-إيدتا وحضن على حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة ترطبة 5٪CO2 لمدة 12-15 دقيقة حتى تصبح جميع الخلايا تربسينية.
  3. بعد إزالة جميع الخلايا، أضف 2 مل من وسط إعادة التعليق لتحييد نشاط التربسين وقم بتدوير تعليق الخلية عند 112 × جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: تركيب وسط إعادة التعليق: DMEM عالي الجلوكوز بدون بيروفات الصوديوم مع 20٪ سيروم حصان، و200 وحدة/مل بنسلين-ستريبتومايسين.
  4. استنشق المادة الفائقة وأعد تعليق الحبيبات الخلوية في 1 مل من وسط الماموسفير الكثيف. مرر نظام التعليق الخلوي عبر إبرة 25 جيجابايت للحصول على تعليق خلية واحدة.
    ملاحظة: تركيب وسط الماموسفير: DMEM/F12 مغذى بعامل نمو بشري 20 نانوغرام/مل (EGF)، مكمل واحد × B27 بدون فيتامين A، و200 وحدة/مل بنسلين-ستريبتوميسين (انظر جدول المواد).
  5. باستخدام جهاز قياس الدم الخلوي، عد عدد الخلايا وحساب حجم تعليق الخلايا المطلوب لزراعة 0.2 × 10إلى 4 خلايا في كل بئر.
    ملاحظة: حافظ على كثافة بذور منخفضة لتحديد كفاءة تكوين الماموسفير بدقة، وبالتالي تقليل تأثير تجمع الخلايا. عند جمع محللات البروتين لإزالة المناعة، يمكن زيادة كثافة الخلايا إلى ما يصل إلى 2.5 × 10إلى 5 خلايا في كل بئر.
  6. قم بتخفيف حجم تعليق الخلية المطلوب في 2 مل من وسط الماموسفير والبذور في كل بئر من صفيحة مكونة من 6 آبار. خلايا البذرة في ثلاث نسخ لكل حالة.
  7. حضانة عند حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة ترطبة بنسبة 5٪CO2 لمدة 7 أيام.
  8. بعد سبعة أيام من الزراعة، قم بعد عدد الماموسفيرات التي يزيد قطرها عن 50 ميكرومتر في كل بئر يدويا، إما باستخدام مجهر مزود بجراتيكول أو باستخدام شبكة ربعية تحت مجهر ضوئي.
  9. صور الماموسفيرات باستخدام كاميرا رقمية مركبة على مجهر ضوئي بتكبير 20x.
  10. احسب كفاءة تكوين الماموسفير (MFE) باستخدام الصيغةالتالية 5
     المعادلة 1

3. زرع الماموسفيرات من الجيل الثانوي

  1. اجمع الماموسفيرات التي تشكلت في الجيل الأول في أنبوب وجهاز طرد مركزي بسعة 15 مل بحرارة 300 × جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  2. استنشق السوبرناتانت، تاركا حبيبات الماموسفير خلفك.
  3. اغسل الحبيبة باستخدام DPBS.
  4. أضف 200 ميكرولتر 0.05٪ تريبسين-إيدتا إلى حبيبة الماموسفير وحضن على حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة ترطبية بتركيز 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 2-3 دقائق. مرر الماموسفيرات في محلول التريبسين عبر إبرة 25 جيلون ثلاث مرات للحصول على تعليق خلية واحدة.
  5. أضف 0.5 مل من وسط إعادة التعليق لتحييد نشاط التريبسين وقم بتدوير تعليق الخلية عند 112 × جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  6. استنشق المادة الفائقة وأعد تعليق الحبيبات الخلوية في 0.5 مل من وسط الماموسفير الكثيف.
  7. باستخدام جهاز قياس الدم الخلوي، عد عدد الخلايا وحساب حجم تعليق الخلايا المطلوب لزرع 0.2 ×10 4 خلايا في كل بئر.
    ملاحظة: حافظ على كثافة منخفضة للخلايا لتقييم قدرة التجدد الذاتي، وبالتالي تقليل تأثير تجمع الخلايا.
  8. قم بتخفيف حجم تعليق الخلية المطلوب في 2 مل من وسط الماموسفير والبذور في كل بئر من صفيحة مكونة من 6 آبار. خلايا البذرة في ثلاث نسخ لكل حالة.
  9. حضانة عند حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة ترطبة بنسبة 5٪CO2 لمدة 7 أيام.
  10. بعد 7 أيام من الزراعة، عد عدد الماموسفيرات التي يزيد قطرها عن 50 ميكرومتر في كل لوحة باستخدام مجهر مزود بشبكة جراتيكيل أو ربعية.
  11. صور الماموسفيرات باستخدام كاميرا رقمية مركبة على مجهر ضوئي بتكبير 20x.
  12. احسب سعة التجديد الذاتي باستخدام الصيغةالتالية 5
    المعادلة 2

4. البلويت الغربي لاكتشاف التغيرات في مؤشرات تعدد القدرات عند فرط التعبير في Api5

  1. اجمع الماموسفيرات التي تشكلت في الجيل الأول في أنبوب 15 مل وجهاز طرد مركزي بحرارة 300 × جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  2. استنشق السوبرناتانت، تاركا حبيبات الماموسفير خلفك.
  3. اغسل الحبيبة باستخدام DPBS.
  4. جمع الحبيبات في مخزن RIPA البارد جدا للحصول على بروتين ليزات وإجراء الحقن المناعي وفقا للبروتوكولالقياسي 24.
    ملاحظة: تركيب مخزن RIPA: 50 ملليمولار تريس-HCl (درجة حموضة 8.0)، 150 ملليمولار NaCl، 1٪ ترايتون X-100، 0.5٪ ديكسيكولات الصوديوم، 0.1٪ كبريتات الصوديوم الدودسيل (SDS)، 1 ملليمول إيثيلين ديامين تترا أسيتيك حمض (EDTA)، 1 ملليمول فينيل ميثيسلفونيل فلوريد (PMSF)، 10 ملليمولار فلوريد الصوديوم، 1 ملليمول أورثوفاناديت.
  5. استكشاف مؤشرات الجذع - أكتوبر 3/4، نانوغ، Sox2، وBMI1، وGAPDH للتحكم في التحميل (انظر جدول المواد لتخفيف الأجسام المضادة).
  6. قم بقياس مستويات البروتين باستخدام التحليل الكثافة القياسية على ImageJ. اختر المنطقة المعنية في صور البقعة الغربية وأنشئ ملف كثافة لكل مسار.
  7. تطبيع الكثافات النسبية للبروتين المعني مقارنة بتلك الموجودة في GAPDH لكل مسار. احسب تغير الطية لكل بروتين.
  8. رسم تغير الطي في مستويات البروتين باستخدام أي برنامج رسم بياني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لتقييم كفاءة تكوين الماموسفير في ظروف غير الالتصاقة، تم زرع خلايا التحكم والخلايا MCF10A المفككة ثلاثية الأبعاد المفرطة عبر Api5 على ألواح مغلفة ب polyHEMA وفقا للبروتوكول. أظهرت الخلايا التي تعبر عن Api5 زيادة بمقدار 1.58 ضعف في متوسط كفاءة تكوين الماموسفير مقارنة بالعناصر الضابطة (الشكل 1B,C). تظهر هذه الزيادة أن زيادة التعبير عن Api5 تزيد من نسبة الأصول الشبيهة بالخلايا الجذعية التي تبقى وتتكاثر في ظروف غير ملتصقة وخالية من المصل، مما يؤدي إلى تكوين كرات مشتقة من النسخ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بينما توفر الزراعة أحادية الطبقة لخطوط الخلايا السرطانية المعروفة أو الخلايا المشتقة من الأورام رؤى حول المسارات الجزيئية المختلفة التي تنظم الأنماط الظاهرية للسرطان، لا يمكن إجراء أبحاث تركز على الخلايا الجذعية السرطانية في الزراعة ثنائية الأبعاد. نظرا لأن الخلايا الجذعية السرطانية يعتقد أنها عامل مساهم رئيسي في الانتكاس بعد استراتيجيات العلاج الحالية، فمن الضروري إنشاء تحاليل قوية لدراسة هذه الخلايا 1,20,21

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يصرح المؤلفون بعدم وجود تضارب محتمل في المصالح.

شكر وتقدير

وقد دعمت هذه الدراسة منحة من SERB-POWER (SPG/2021/002661-G) وجزئيا بتمويل IISER، مركز بوني. تم تمويل S.B. من خلال زمالة UGC-SRF. نود أن نشكر البروفيسور ريموند سي. ستيفنز (معهد سكريبس للأبحاث، الولايات المتحدة الأمريكية) على توفير خلايا MCF10A بسخاء، والدكتور أبيجيث ك. (شركة أهامون بيوسينسز الخاصة المحدودة) على مساهماته القيمة في المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.05% Trypsin EDTA  Invitrogen25300062
37 °C humidified incubatorNew BrunswickGalaxy 170 R
Anti-Bmi1 Rabbit pAbABclonalA134721:1000 dilution, overnight incubation at 4 °C
Anti-GAPDH antibodySigmaG9545-200UL1:10000 dilution, 1 h incubation at room temperature
Anti-Nanog Rabbit mAbABclonalA226251:5000 dilution, overnight incubation at 4 °C
Anti-Oct3/4 Antibody (C-10)Santa Cruzsc-52791:300 dilution, overnight incubation at 4 °C
Anti-Sox2 Antibody (E-4)Santa Cruzsc-3658231:300 dilution, overnight incubation at 4 °C
B-27 Supplement (50x), minus vitamin AInvitrogen12587010
CentrifugeBeckman CoulterAllegra X-15R
Cholera toxin Sigma C8052-1MG 1 mg/mL stock in dH2O
DMEM/F12Thermo11330032
Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS)Invitrogen14190-144
Epidermal growth factor (EGF) Sigma E9644-0.2MG 100 mg/mL stock in dH2O
Ethanol absolute 99.9%Jebsen & Jessen GmbH & Co. Germany58051 L05
Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (EDTA)SRL43272
High glucose DMEM without sodium pyruvateInvitrogen11965126
Horse Serum  Invitrogen16050122
Hydrochloric acid (HCl)QualigensQ29145Used to adjust pH of Tris-HCl (pH 8.0)
Hydrocortisone Sigma  H08881 mg/mL stock in ethanol
ImageJ Image processing software
ImageQuant LAS 4000 Cytiva
Immobilon Western chemiluminiscent HRP substrateMerckWBKLS0500
Insulin Sigma I1882 10 mg/mL stock in 1% glacial acetic acid
Nikon Eclipse TS-100 microscopeNikonBM-1919
MCF10A cellsGift from Prof. Raymond C. Stevens (Scripps Research Institute, USA)
Penicillin-Streptomycin Lonza 17-602E
Phenylmethysulphonyl fluoride (PMSF)Sigma78830-5G
Plotting software GraphPad Prism 10
Poly(2-hydroxyethyl methacrylate) (pHEMA)Santacruzsc-2532841.2% pHEMA in 95% ethanol
Sodium chloride (NaCl)SRL41721
Sodium deoxycholateAmresco0613-100G
Sodium dodecyl sulphate (SDS)SRL54468
Sodium fluoride (NaF)HiMediaRM1081-500G
Sodium orthovanadateSigma-AldrichS6508-10G
Tris bufferSRL71033
Triton X-100SigmaT8787-250ML

المراجع

  1. Li, X., et al. Intrinsic resistance of tumorigenic breast cancer cells to chemotherapy. J Natl Cancer Inst. 100 (9), 672-679 (2008).
  2. Creighton, C. J., et al. Residual breast cancers after conventional therapy display mesenchymal as well as tumor-initiating features. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (33), 13820-13825 (2009).
  3. Dontu, G., et al. In vitro propagation and transcriptional profiling of human mammary stem/progenitor cells. Genes Dev. 17 (10), 1253-1270 (2003).
  4. Grimshaw, M. J., et al. Mammosphere culture of metastatic breast cancer cells enriches for tumorigenic breast cancer cells. Breast Cancer Res. 10 (3), R52(2008).
  5. Shaw, F. L., et al. A detailed mammosphere assay protocol for the quantification of breast stem cell activity. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 17 (2), 111-117 (2012).
  6. Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (7), 3983-3988 (2003).
  7. Ponti, D., et al. Isolation and in vitro propagation of tumorigenic breast cancer cells with stem/progenitor cell properties. Cancer Res. 65 (13), 5506-5511 (2005).
  8. Kim, R. J., Nam, J. S. OCT4 expression enhances features of cancer stem cells in a mouse model of breast cancer. Lab Anim Res. 27 (2), 147-152 (2011).
  9. Lu, X., Mazur, S. J., Lin, T., Appella, E., Xu, Y. The pluripotency factor nanog promotes breast cancer tumorigenesis and metastasis. Oncogene. 33 (20), 2655-2664 (2014).
  10. Leis, O., et al. Sox2 expression in breast tumours and activation in breast cancer stem cells. Oncogene. 31 (11), 1354-1365 (2012).
  11. Paranjape, A. N., et al. Bmi1 regulates self-renewal and epithelial to mesenchymal transition in breast cancer cells through Nanog. BMC Cancer. 14 (1), 785(2014).
  12. Bousquet, G., et al. High expression of apoptosis protein (Api-5) in chemoresistant triple-negative breast cancers: an innovative target. Oncotarget. 10 (61), 6577-6588 (2019).
  13. Basset, C., et al. Api5 a new cofactor of estrogen receptor alpha involved in breast cancer outcome. Oncotarget. 8 (32), 52511-52526 (2017).
  14. Kuttanamkuzhi, A., Panda, D., Malaviya, R., Gaidhani, G., Lahiri, M. Altered expression of anti-apoptotic protein Api5 affects breast tumorigenesis. BMC Cancer. 23 (1), 374(2023).
  15. Cho, H., et al. Apoptosis inhibitor-5 overexpression is associated with tumor progression and poor prognosis in patients with cervical cancer. BMC Cancer. 14 (1), 545(2014).
  16. Jang, H. S., et al. API5 induces cisplatin resistance through FGFR signaling in human cancer cells. Exp Mol Med. 49 (9), e374(2017).
  17. Song, K. H., et al. Apoptosis inhibitor 5 increases metastasis via Erk-mediated MMP expression. BMB Rep. 48 (6), 330-335 (2015).
  18. Krejci, P., et al. The antiapoptotic protein Api5 and its partner, high molecular weight FGF2, are up-regulated in B cell chronic lymphoid leukemia. J Leukoc Biol. 82 (6), 1363-1364 (2007).
  19. Koci, L., et al. Apoptosis inhibitor 5 (API-5; AAC-11; FIF) is upregulated in human carcinomas in vivo. Oncol Lett. 3 (4), 913-916 (2012).
  20. Phi, L. T. H., et al. Cancer stem cells (CSCs) in drug resistance and their therapeutic implications in cancer treatment. Stem Cells Int. 2018 (1), 5416923(2018).
  21. Zhou, H. M., Zhang, J. G., Zhang, X., Li, Q. Targeting cancer stem cells for reversing therapy resistance: mechanism, signaling, and prospective agents. Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 62(2021).
  22. Song, K. H., et al. API5 confers cancer stem cell-like properties through the FGF2-NANOG axis. Oncogenesis. 6 (1), e285(2017).
  23. Reynolds, B. A., Weiss, S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).
  24. Bodakuntla, S., Libi, A. V., Sural, S., Trivedi, P., Lahiri, M. N-nitroso-N-ethylurea activates DNA damage surveillance pathways and induces transformation in mammalian cells. BMC Cancer. 14 (1), 287(2014).
  25. Pastrana, E., Silva-Vargas, V., Doetsch, F. Eyes wide open:a critical review of sphere-formation as an assay for stem cells. Cell Stem Cell. 8 (5), 486-498 (2011).
  26. Eyre, R., et al. Patient-derived mammosphere and xenograft tumour initiation correlates with progression to metastasis. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 21 (3-4), 99-109 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Api5
اختبار الماموسفير يكشف عن الجذع الناتج عن API 5 في خطوط خلايا ظهارية الثدي غير المسببة للورم
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.