مقالة منهجية

بروتوكول دراسة تنظيم هونوكيول لإشارات بيتا 1/SMAD المحول لعامل النمو في نماذج الشيخوخة الضوئية للجلد المستحثة بالأشعة فوق البنفسجية A

DOI:

10.3791/70099

⸱

مايو 8, 2026

 ,  ,  , 
1Plastic Surgery Center, the 988th Hospital of Joint Logistic Support Force of Chinese People's Liberation Army

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يحقق هذا البروتوكول فيما إذا كان الهونوكيول يحسن الشيخوخة الضوئية الناتجة عن UVA في الخلايا الليفية الجلدية البشرية وجلد الفئران من خلال تنشيط مسار TGF-β1/Smad وتقليل تعبير MMP.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هونوكيول (HNK)، وهو مكون رئيسي مشتق من ماغنوليا أوفيسيناليس، لديه القدرة على علاج أمراض الجلد. حاليا، تأثير وآلية عمل HNK على تلف الأشعة الضوئية الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية A (UVA) في الجلد غير واضحة. تم بناء نموذج تلف التعتيخة الضوئية لخلايا HDF وجلد الفئران الخالي من الشعر باستخدام التحفيز UVA. تم فحص تأثير HNK على قابلية بقاء الخلايا الطبيعية HDF وخلايا HDF الناتجة عن UVA من خلال اختبار قابلية العيش للخلايا. تم قياس مستويات SOD، GSH، CAT، وMDA في خلايا HDF باستخدام مجموعات مختلفة، وتم قياس مستويات ROS باستخدام DCFH-DA وDihydroethidium. رصد تلوين SA-β-galactosidase وTUNEL شيخوخة واستمتاع الخلايا المبرمجة في خلايا HDF، كما قيم تدفق الخلايا تطور دورة الخلية. تم تقييم الضرر النسيجي المرضي للجلد من خلال التلوين المرضي. بالإضافة إلى ذلك، تم استخدام التألق المناعي والبلوت الغربي لتقييم مستويات البروتين المرتبط بمسار Ki67، الكولاجين، ماتريكس ميتالوبروتيناز (MMP)، وTGF-β1/Smad. علاج HNK (2.5-10 ميكرومول) لم يكن له تأثير سلبي على بقاء خلايا HDF الطبيعية لكنه خفف من تلف خلايا التعتيم الدهمي الناتج عن UVA، مما قلل من الإجهاد التأكسدي والموت المبرمج. تسبب UVA في شيخوخة خلايا HDF، وتسبب في توقف طور S، وخفض من تنظيم Ki67، وانخفاض محتوى الكولاجين، وزيادة تعبير MMP، بينما خفف HNK بشكل فعال من هذه التشوهات الناتجة عن UVA. بالإضافة إلى ذلك، تسبب UVA في تجاعيد أعمق، وانخفاض محتوى الماء ومحتوى الكولاجين، وزيادة سماكة الظهارة في جلد الفئران، بينما أدى الحقن تحت الجلد ل HNK إلى تخفيف الضرر المرضي لأنسجة الجلد وزيادة محتوى الماء والكولاجين. علاوة على ذلك، قام HNK بتنشيط مسار TGF-β1/Smad، وأثر مثبط TGF-β1 SB431542 على تأثير الحماية ل HNK ضد تلف الشيخوخة الضوئية في خلايا HDF. في الختام، لدى HNK القدرة على أن يكون دواء لتخفيف تلف الشيخوخة الضوئية عن طريق تقليل تعبير MMP عبر تنشيط مسار TGF-β1/Smad، وبالتالي تثبيط التقدم في العمر الضوئي الناتج عن UVA في خلايا HDF وجلد الفئران.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عملية شيخوخة الجلد معقدة وتنقسم إلى شكلين رئيسيين: الشيخوخة الطبيعية والشيخوخة الضوئية1. تشير الدراسات إلى أن ما يصل إلى 80٪ إلى 90٪ من شيخوخة الجلد ناتج عن عوامل خارجية في البيئة (مثل الأشعة فوق البنفسجية، تلوث الهواء)، ومن بينها تقدم العمر الضوئي الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية على المدى الطويل الأكثر خطورة 2,3. تنقسم الأشعة فوق البنفسجية إلى UVC، UVB، وUVA. نظرا لأن UVC لا يمكنه اختراق طبقة الأوزون، يركز البحث الحالي حول الشيخوخة الضوئية على UVA (320-400 نانومتر) وUVB (280-320 نانومتر)4،5،6. مقارنة بالأشعة فوق البينية (UVB)، يحتوي UVA على طاقة أقل، لكنه أكثر اختراقا، يمر عبر البشرة ويصل عميقا إلى الجلد، وهو سبب مهم لشيخوخة الجلدبشكل خطير. أظهرت دراسات سابقة أن الضرر الناتج عن إشعاعUVB بقوة 57 mJ/cm2 و20 J/cm 2 UVA لخلايا HaCaT قابل للمقارنة8. تسبب شيخوخة الجلد بالضوء تغيرات في وظيفة وبنية الجلد، وتظهر بشكل خاص في ترهل نسيج سطح الجلد، وتعمق التجاعيد، وفقدان الكولاجين، وظهور لون بشرة رمادي مرئي للعين المجردة؛ في الحالات الشديدة،يمكن أن تحدث مجموعة متنوعة من الآفات والأورام الحميدة وما قبل السرطانية. إلى جانب زيادة الأبحاث حول الشيخوخة ومكافحة الشيخوخة، أصبحت المخاطر الصحية الناتجة عن الشيخوخة الضوئية واحدة من أهم القضايا الصحية حول العالم. لذلك، من الضروري دراسة العمليات الفسيولوجية المرضية الكامنة وراء تلف الشيخوخة الضوئي الناتج عن UVA، بهدف تطوير خيارات علاجية جديدة لعلاجها.

مستخرج من عشبة ماغنوليا أوفيسيناليس، وهي عشبة طبية صينية تقليدية، يعد هونوكيول (HNK) مركبا حيويا مهما بصيغة كيميائية C18H18O211. يظهر HNK أنشطة دوائية متنوعة، ومجموعة الهيدروكسيل الفينولي الخاصة به حساسة جدا للأكسدة ولها تأثيرات قوية على مضادات الأكسدة وإزالة الجذور الحرة12. بالإضافة إلى ذلك، لدى HNK تأثيرات دوائية مضادة للبكتيريا، ومضادة للالتهابات، ومضادة للفيروسات، ومضادة للأورام، ومضادة للاكتئاب، وحماية عصبية، ومضادة لفشل المبيض المبكر 13,14,15,16. تم تحديد أن HNK الفموي آمن بشكل أساسي في الدراسات الحيوانية والدراسات السريرية، ولم يتم تحديد أي آثار جانبية ذات دلالة كبيرة 17,18,19. وجدت الدراسات الحديثة أن HNK يمنع سرطان الجلد الناتج عن UVB20، ويثبط الاستجابة الالتهابية للجلد الناتج عن UVB وفرط مثيلة الحمض النووي21، مما يشير إلى استخدامه المحتمل في علاج حالات الجلد. مقارنة بالعوامل المضادة للشيخوخة الضوئية المستخدمة على نطاق واسع، بما في ذلك فيتامين C وريسفيراترول، يتمتع HNK بخصائص مميزة ومتفوقة: بنيته المحبة للدهون تمنح نفاذية عبر الجلد أفضل من فيتامين C22 المحبة للماء؛ ويظهر استقرارا ضوئيا أعلى وتوافرا حيويا في الجسم الحي مقارنة بريسفيراترول23. تدعم هذه النتائج قبل السريرية فكرة أن HNK لديه إمكانات انتقالية واعدة كمرشح آمن وفعال لمنتجات العناية بالبشرة والتدخلات السريرية ضد تلف الجلد الضوئي الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية. ومع ذلك، لم يتم الإبلاغ حتى الآن عن تأثير علاج HNK على تلف شيخوخة البشرة الناتجة عن الشيخوخة الضوئية الناتجة عن UVA.

عامل النمو المتحول-β1 (TGF-β1) هو سيتوكين متعدد الوظائف ضروري لنمو وتطور الخلايا، وإصلاح الأنسجة وتجددها، ونمو وتطور الخلايا والأنسجة والأعضاء24,25. لقد ثبت أن TGF-β1 يرسل إشارات إلى الخلية بشكل أساسي عبر أعضاء عائلة بروتينات Smad، مما يؤدي إلى تنظيم محدد لنسخ الجينات المستهدفة في المراحل النهائية. عندما يتم تنشيط إشارات TGF-β1، ينتج عنه فسفرة Smad2 و Smad326,27. أظهرت الدراسات الحديثة وجود علاقة قوية بين مسار TGF-β1/Smad والتليف الجلدي ونمو الأشعة الضوئية28,29. تم الإبلاغ عن أن الهدف الثديي للراباميسين ينشط مسار TGF-β1/Smad في أنسجة جلد الفئران، مما يعزز تخليق السيراميدات، وهي مهمة للحفاظ على رطوبة الجلد والحفاظ على حاجز الجلد30. ومن الجدير بالذكر أنه تم الإبلاغ عن أن HNK عدل مسار TGF-β1/Smad في الخلايا النجمية الكبدية، مما حسن بدوره تليف الكبد31. لذلك، تم إنشاء نماذج خلوية وفأرية لإصابة الشيخوخة الضوئية الناتجة عن UVA، مع علاج HNK بمقدار 2.5–10 ميكرومولار في خلايا HDF وتدخل HNK بمقدار 5 ملغ/كغ أو 10 ملغ/كغ في الفئران عديمة الشعر، لاستكشاف تأثيرات HNK على تلف الشيخوخة الضوئية ودوره المحتمل في تعديل مسار TGF-β1/Smad. هدفت هذه الدراسة إلى تطوير استراتيجيات علاجية جديدة لتلف الجلد الضوئي الناتج عن UVA.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت جميع تجارب زراعة الخلايا وفقا لإرشادات السلامة الحيوية المؤسسية وأجريت تحت ظروف مختبرية للسلامة البيولوجية المستوى 2 (BSL-2). أجريت تجارب على الحيوانات بعد موافقة لجنة أخلاقيات الحيوان في مستشفى 988 التابع لقوة الدعم اللوجستي المشتركة لجيش التحرير الشعبي الصيني (رقم الموافقة: 2023-089).

تم إجراء جميع الإجراءات التجريبية وفقا لمعايير مؤسسية ووطنية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. في نهاية التجربة، تم إعدام الفئران بجرعة زائدة من بنتوباربيتال الصوديوم (100 ملغ/كغ، حقن داخل الصفاق). تم بذل كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات أثناء الإسكان والعلاج وإجراءات أخذ العينات. المواد الكيميائية والمواد الكيميائية والمعدات والبرمجيات المستخدمة في البروتوكول مدرجة في جدول المواد.

1. زراعة الخلايا والمعالجة

  1. زراعة الخلايا الليفية الجلدية البشرية (HDF) في وسط زراعة الأرومات الليفية. حافظ على الزراعة عند 37 درجة مئوية في بيئة مشبعة بالرطوبة مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
  2. استبدل وسط الزراعة كل 3 أيام، ومر HDF بنسبة 1:3 عند التلاقط.
  3. تعريض HDF بمصابيح UVA (طيف الانبعاث: 320-400 نانومتر) بجرعة 5 جول/سم2.
  4. أعد تغذيته بوسط جديد مباشرة بعد 30 دقيقة من التعرض للأشعة فوق البنفسجية. كرر الأشعة فوق البنفسجية مرة واحدة يوميا لمدة 8 أيام متتاليةلمدة 32 أيام.
  5. عالج HDF بجرعات 2.5، 5، 10، 20، أو 40 ميكرومولار HNK لمدة 24 ساعة أو 48 ساعة في تجارب فحص الجرعات33. عالج HDF ب 2.5 أو 5 أو 10 ميكرومولار HNK لمدة 24 ساعة تليها إشعاع UVA (5 جول/سم2) في التجارب اللاحقة.
  6. تعرض HDF ل 10 ميكرومولار HNK لمدة 4 ساعات، ثم حضن بمث SB431542 بط TGF-β1 بقوة 10 ميكرومولار لمدة 24 ساعة، وأخيرا إشعاع UVA (5 جول/سم2) في مجموعة HNK+SB431542.

2. تقييم صلاحية الخلايا

  1. قم بتلقيح HDF في ألواح زراعة الخلايا بسعة 96 بئر بكثافة 1×104 خلايا/بئر.
  2. بعد معالجات مختلفة، أضف 10 ميكرولتر من كاشف ملح التترازوليوم القابل للذوبان في الماء بنسبة 10٪ لكل بئر إلى حجم نهائي يبلغ 100 ميكرولتر لكل بئر، وحضن الخلايا عند حرارة 37 درجة مئوية لمدة 1.5 ساعة في الظلام.
  3. قس قيم OD450 للخلايا باستخدام قارئ الميكروبلايت.

3. تحديد مستويات الديسوتاز الفائق الأكسيدي (SOD)، والمالوندياليديهيد (MDA)، والكاتالازات (CAT)، والجلوتاثيون (GSH)

  1. اغسل HDF ب 1 مل PBS مبرد مسبقا (0.01 م، pH 7.4)، أضف محلول تحضير عينة SOD بسعة 200 ميكرولتر (من مجموعة اختبار SOD) لتحليل الخلايا على الثلج لمدة 15 دقيقة.
  2. قم بعمل الطرد المركزي للليزات عند 8000 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية، وجمع المادة الفائقة كعينة للاختبار.
  3. استخدم مجموعة اختبار بروتين BCA (حمض البيسينكونينيك) لتحديد تركيز البروتين في الفائق، وضبط العينة إلى 50 ميكروغرام بروتين إجمالي في حجم 50 ميكرولتر.
  4. اخلط عينة بروتين 50 ميكروغرام مع مخزن اختبار SOD إلى حجم تفاعل نهائي يبلغ 200 ميكرولتر، وحضن الخليط عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في الظلام، ثم قس قيمة OD450.
  5. خذ نفس المادة الفائقة للحللة الخلوية المستخدمة في اختبار SOD، وقس مستويات CAT، GSH، وMDA باستخدام مجموعات الفحص المعنية.

4. قياس مستويات ROS الخلوي

  1. عالج خلايا HDF بظروف مختلفة، واغسله مرتين ب 500 ميكرولتر PBS، وامزج جيدا مع 500 ميكرولتر من مسبار الأكسجين التفاعلي التفاعلي 10 ميكرومول، وحضن عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة بعيدا عن الضوء.
  2. قم بالطرد المركزي على حرارة 1000 × جرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لجمع الخلايا، ثم شطفها مرتين ب 500 ميكرولتر PBS.
  3. أعد تعليق الخلايا في وسط زراعة الخلايا بسعة 500 ميكرولتر، ثم تحليل التلوين باستخدام قياس تدفق الخلية.
  4. تسجيل شدة الفلورة باستخدام برنامج تحليل القياس الخلوي التدفقي، ثم حساب مستويات ROS بناء على شدة الفلورة الأعلى التي تتوافق مع فلورة خضراء أقوى.

5. تلوين β-جالاكتوسيداز مرتبط بالشيخوخة (SA-β-galactosidase)

  1. زرع HDF في صفائح زراعة خلايا ذات 6 آبار بكثافة 1×106 خلايا/بئر وزراعة حتى الالتصاق. بعد علاجات مختلفة، اغسل HDF مرة واحدة ب 2 مل PBS.
  2. أضف 1 مل من مادة تصبغ β جالاكتوسيداز إلى كل بئر، وحضن الخلايا في درجة حرارة الغرفة مع المادة المثبتة لمدة 15 دقيقة.
  3. اغسل الخلايا ثلاث مرات بمحلول 2 مل من PBS، أضف محلول تلوين بسعة 1 مل لكل بئر، ثم حضن الخلايا عند حرارة 37 درجة مئوية طوال الليل في الظلام.
  4. راقب وصور الخلايا باستخدام مجهر ضوئي (حيث تظهر الخلايا المتقدمة في السن باللون الأزرق).

6. اختبار دورة الخلية

  1. زرع HDF في صفائح ذات 6 آبار عند 1×106 خلايا/بئر؛ بعد علاجات مختلفة، اشطف الخلايا مرتين ب 2 مل من PBS.
  2. قم بالطرد المركزي على حرارة 1000 × جرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لجمع الخلايا، أضف 1 مل من الإيثانول بنسبة 70٪ (مثبت للخلايا)، وامزج بلطف عن طريق التقطيع بالماصات. ضع الخلايا الثابتة في ثلاجة بدرجة حرارة 4°C لمدة 12 ساعة.
  3. تحضير 500 ميكرولتر لكل عينة من محلول تلوين الخلية عن طريق خلط يوديد البروبيديوم (PI، التركيز النهائي 50 ميكروغرام/مل) وRNaseA (التركيز النهائي 200 ميكروغرام/مل) في PBS. عرض الخلايا لمحلول صبغ بسعة 500 ميكرولتر، وحضن الخلايا في الظلام عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  4. تقييم شدة الفلورة باستخدام قياس تدفق التومومترية. قم بتحليل دورة الخلية باستخدام جهاز قياس تدفق الخلوي.

7. تلوين اللحن

  1. تعرض خلايا HDF من مجموعات معالجة مختلفة لجرعة 1 مل من 4٪ بارافورمالديهيد وحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
  2. أضف 1 مل من PBS يحتوي على 0.3٪ ترايتون X-100 إلى الخلايا وحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
  3. اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS، ثم أضف محلول اختبار TUNEL بسعة 500 ميكرولتر باتجاه الأسفل لتغطية الخلايا بشكل متساو. حضانه عند 37°C في الظلام لمدة 1.5 ساعة.
  4. أضف 200 ميكرولتر من محلول التلوين DAPI لتغطية الخلايا، وحضن المحلول بعيدا عن الضوء لمدة 10 دقائق عند 25 درجة مئوية.
  5. أغلق الخلايا بوسط تثبيت لحفظ إشارة الفلورة، ثم راقبها وصورها باستخدام مجهر فلوري (تظهر خلايا TUNEL الإيجابية فلورة خضراء).

8. التلوين بفلورة المناعة

  1. يتم دمج خلايا HDF من مجموعات علاج مختلفة في صفائح بسعة 12 بئرا. عندما تصل كثافة الخلايا إلى 50٪-60٪، تعرض الخلايا ل1 مل من 4٪ بارافورمالديهايد، واحتضن الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 25 دقيقة.
  2. أضف 1 مل من ألبومين مصل البقري بنسبة 5٪ (BSA) بشكل قطري لسد سطح الخلية، وحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
  3. أضف 500 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية Ki67 (1:300)، كولاجين I (1:100)، ميتالوبروتيناز المصفوفة (MMP)-1 (1:50)، أو MMP-3 (1:100) باتجاه الانخفاض، وحضن عند 4°C خلال الليل.
  4. في اليوم التالي، حضن الخلايا ب 500 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي الموسوم بفلوريساين إيزوثيوسيانات (FITC) (1:100) عند 37°C بعيدا عن الضوء لمدة ساعة واحدة.
  5. أضف 200 ميكرولتر من محلول التلوين DAPI لتغطية الخلايا، واحتضن المحلول بعيدا عن الضوء لمدة 10 دقائق، وراقب باستخدام مجهر فلوري، وتحليل ذلك باستخدام برنامج تحليل الصور (خلايا الكولاجين I وMMP-1 الإيجابية تظهر فلورة حمراء، وخلايا Ki67 وMMP-3 الموجبة تظهر فلورة خضراء).

9. إليسا

  1. أضف 100 ميكرولتر من طبقة زراعة خلايا HDF إلى آبار صفائح مجموعة ELISA MMP-1 أو MMP-3، وحضن عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين.
  2. اغسل الآبار 3 مرات ب 200 ميكرولتر من PBS، ثم أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد المقابل لكل بئر وحضن على حرارة 37 درجة مئوية في الظلام لمدة ساعة.
  3. اشطف الآبار 3 مرات باستخدام 200 ميكرولتر من محلول الغسيل (المرفق في المجموعة)، هز المحلول الزائد، وحضن العينات ب 100 ميكرولتر من ستريبتافيدين-HRP لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في الظلام.
  4. بعد الشطف ب PBS، أضف 100 ميكرولتر من الركائز A و B حسب تعليمات المجموعة وحضن عند 37°C في الظلام لمدة 10 دقائق.
  5. أضف 50 ميكرولتر من محلول النهايت، اخلط جيدا، قيم قيمة OD450 باستخدام قارئ الميكروبلايت، وحساب التركيز.

10. بناء نموذج الفأر الناتج عن تلف العمر بالتصوير

  1. تؤوث فئران إناث SKH1 عديمة الشعر بدرجة SPF (15-20 جرام، عمرها 4-5 أسابيع) عند درجة حرارة 22 درجة مئوية مع رطوبة 55٪-60٪ وتسمح بالوصول المستقل إلى الطعام والماء. قم بتعقيم المرافق بانتظام، بما في ذلك حاويات الطعام وزجاجات الماء وأنابيب الشرب.
  2. قم بتعيين الفئران عشوائيا لمجموعة التحكم (n=6) ومجموعة النموذج (n=18). إشعاع فئران مجموعة النماذج التي تحتوي على UVA بسرعة 0.35 جول/سممربع لمدة 8 أسابيع34؛ فئران مجموعة التحكم المنزلية في نفس البيئة دون إشعاع UVA.
  3. قسم فئران مجموعة النموذج بالتساوي إلى 3 مجموعات فرعية (n=6 لكل مجموعة).
  4. أعطوا حقن تحت الجلد من HNK بجرعة 5 ملغ/كجم أو 10 ملغ/كغ في حجم 100 ميكرولتر مرتين في الأسبوع لمجموعتين فرعيتين أثناء إشعاع UVA (سجل كمجموعة 5 ملغ/كجم من HNK ومجموعة 10 ملغ/كغ HNK على التوالي). أعط حقن تحت الجلد بكمية 100 ميكرولتر محلول ملحي مرتين في الأسبوع للمجموعة الفرعية الثالثة أثناء الإشعاع UVA (سجل كمجموعة UVA).
  5. تقييم تكوين تجاعيد الجلد ومحتوى الماء بعد النمذجة الناجحة35.
  6. قم بقتل الفئران باستخدام بنتوباربيتال الصوديوم (100 ملغ/كجم) داخل الصفاق، ثم جمع أنسجة الجلد الظهرية لإجراء تجارب إضافية.

11. قياس محتوى كولاجين الجلد I

  1. اجمع 50 ملغ من أنسجة جلد الفأر الظهري، وطحنها جيدا في النيتروجين السائل، ثم قم بتحليل المحلول باستخدام 500 ميكرولتر من محلول تحلل RIPA المبرد مسبقا لمدة 30 دقيقة على الثلج.
  2. قم بعمل الطرد المركزي للليزات عند 8000 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية، ثم اجمع السوبرناتينت، وقس محتوى الكولاجين باستخدام مجموعة اختبار ببتيد برو كولاجين I C وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

12. صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE)

  1. ثبت أنسجة جلد الفأر في 10 مل من 4٪ بارافورمالديهايد في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة، ثم جفف في الإيثانول التدرج (50٪، 75٪، 95٪، 100٪، لكل منها لمدة 5 دقائق)، ثم أضعه في البارافين، وقسم إلى شرائح بحجم 4 ميكرومتر.
  2. اخبز الشرائح على درجة حرارة 65°م لمدة 8 ساعات، ثم أزيل البارافين في الزيلين مرتين لمدة 10 دقائق لكل واحدة، ثم أعد ترطيبه بالإيثانول التدرج في درجة حرارة الغرفة.
  3. صبغ الشرائح بمحلول الهيماتوكسيلين لمدة 8 دقائق، وشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة دقيقة واحدة، ثم التمايز بمحلول التمايز لمدة 30 ثانية، وصبغ الإيوزين لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
  4. جفف الشرائح الملونة بالإيثانول التدرجي، ونظفه في الزيلين، وأغلقه بوسط مثبت، وراقب تحت المجهر (تظهر نواة الخلية زرقاء بنفسجية، بينما تظهر السيتوبلازم وألياف الكولاجين وكريات الدم الحمراء وردية بدرجات متفاوتة).

13. صبغة الماسون

  1. صبغ أقسام البارافين في أنسجة جلد الفئران باستخدام مجموعة تلوين ماسون ثلاثية الألوان36. قم بإزالة البارافين من شرائح البارافين في الزيلين مرتين لمدة 10 دقائق لكل منهما، أضف محلول تلوين هيماتوكسيلين من الحديد ويغيرت، وصبغ القطع لمدة 10 دقائق.
  2. قم بالتميز بمحلول تمايزية الإيثانول الحمضي لمدة 30 ثانية، ثم اشطفه بماء الصنبور الجاري لمدة 5 دقائق، ثم صبغ بمحلول صبغة بونسو-فوشين بشكل قطري لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. قم بعمل الطلاء العكسي باستخدام محلول ماسون الأزرق ثم اشطفه بالماء المقطر لمدة دقيقة واحدة.
  3. تحضير محلول عمل حمضي ضعيف بنسبة ماء مقطر: محلول حمضي ضعيف (مقدم في الطقم) = 2:1؛ أضف 1 مل من محلول الحمض الضعيف يعمل بشكل قطري واغسل لمدة 30 ثانية على درجة حرارة الغرفة.
  4. اسكب سائلا زائدا، أضف 1 مل من محلول حمض الفوسفوموليبد قطريا، وعالج لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة. أضف 1 مل من محلول الحمض الضعيف يعمل بشكل قطري، ثم اغسل لمدة 30 ثانية.
  5. اسكب سائلا زائدا، أضف محلول صبغ أزرق أنيلين 1 مل قطريا وصبغ لمدة دقيقة. أضف 1 مل من محلول الحمض الضعيف يعمل بشكل قطري واغسل لمدة 30 ثانية.
  6. جفف بسرعة في 95٪ إيثانول لمدة سنتين. جفف الإيثانول المطلق مرتين، 10 ثوان في كل مرة.
  7. بعد التجفيف، قم بإزالة الأجزاء من الزيلين، وركبها مع صمغ محايد. راقب توزيع ألياف الكولاجين في كل مجموعة تحت المجهر (تظهر ألياف الكولاجين زرقاء، بينما ألياف العضلات، السيتوبلازم، وكريات الدم الحمراء حمراء زاهية، وتظهر نوى الخلايا زرقاء سوداء بوضوح).

14. قياس مستويات ROS في نسيج الجلد

  1. خذ أجزاء مجمدة من نسيج جلد الفأر (تم تحضيرها خلال ساعة من الاستئصال)، وزع محلول تنظيف بمقدار 1 مل قطريا على كامل سطح القسم، واتركها على درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
  2. اهز محلول الغسيل، ثم أضف 1 مل من مسبار الأكسجين التفاعلي 10 ميكرومولار باتجاه الأسفل لتغطية الأقسام بشكل متساو؛ حضن عند 37 درجة مئوية بعيدا عن الضوء لمدة 30 دقيقة.
  3. اشطف الأقسام مرتين ب PBS، أضف شرائح تغطية، وراقب باستخدام مجهر فلوري (المناطق الموجبة لROS تظهر فلورة حمراء؛ كلما انخفض مستوى ROS، كانت إشارة الفلورة الحمراء أضعف).

15. اختبار المؤشرات الكيميائية الحيوية

  1. اجمع مصل الفئران وحضر ملاحظات الكشف وفقا لتعليمات مجموعات الفحص المعنية.
  2. قياس أنشطة إنزيم الأسبارتات ترانس أميناز (AST) وترانسامنازيم الألانين (ALT) في مصل الفئران باستخدام المجموعات المعنية.
  3. حدد مستويات اليوريا النيتروجين (BUN) والكرياتينين (CRE) في الدم في مصل الفئران باستخدام المجموعات المختلفة.

16. البقعة الغربية

  1. اجمع 50 ملغ من الأنسجة أو 1×10 أو 6 خلايا، وقم بتحليل العينات على الجليد لمدة 30 دقيقة باستخدام محلول تحلل RIPA بسعة 200 ميكرولتر للحصول على البروتينات.
  2. استخدم الطرد المركزي عند 8000 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية واجمع السوبرناتانت. قيم محتوى البروتين في الخلايا والأنسجة باستخدام مجموعة اختبار تركيز بروتين BCA.
  3. إجراء الرحلان الكهربائي لعينات البروتينات على جل SDS-PAGE بنسبة 12٪، ونقل البروتينات المفصولة إلى أغشية PVDF عند 4 درجات مئوية.
  4. قم بحجب أغشية PVDF مع 5٪ BSA لمدة 3 ساعات في درجة حرارة الغرفة. اشطف الأغشية ب TBST (يحتوي على 20 ملليموتر تريس-HCl، 150 ملليمولار NaCl، و0.1٪ Tween-20) ثلاث مرات، ثم حضن الأشجار طوال الليل عند 4°C مع الأجسام المضادة الأساسية: P53 (1:1000)، P21 (1:1000)، P16 (1:1000)، كولاجين I (1:1000)، سيكلين A2 (1:500)، كيناز السيكلين المعتمد 2 (CDK2، 1:1000)، MMP-1 (1:500)، MMP-3 (1:1000)، TGF-β1 (1:1000)، Smad2 (1:1000)، Smad3 (1:1000)، p-Smad2 (1:1000)، أو p-Smad3 (1:1000).
  5. في اليوم الثاني، اغسل الأغشية ب TBST ثلاث مرات، ثم حضن ب 1 مل من IgG المضاد للأرانب (1:10000) في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. قم بتطبيق 500 ميكرولتر من مادة الكواشف الكيميائي المعزز (ECL) بشكل متساو على الأغشية، ثم مسحها ضوئيا باستخدام نظام تصوير هلامي.
  6. قم بتحليل القيم الرمادية باستخدام برنامج تحليل الصور. عبر عن مستوى التعبير النسبي كنسبة قيمته الرمادية إلى قيمة GAPDH.

17. التحليل الإحصائي

  1. بالنسبة للاختبارات القائمة على الخلايا في المختبر ، تتكرر جميع التجارب بشكل مستقل ثلاث مرات (n=3، النسخ البيولوجية).
  2. في تجارب الحيوانات الحية ، يتم تضمين 6 فئران لكل مجموعة (n=6)، وهو ما يتوافق مع مبادئ 3R لرفاهية وأخلاقيات الحيوانات المختبرية.
  3. جميع النتائج تعبر عنها كمتوسط ± انحراف معياري. قم بإجراء التحليل الإحصائي باستخدام برامج التحليل الإحصائي. تم اختبار طبيعية البيانات باستخدام اختبار شابيرو-ويلك.
  4. بالنسبة للبيانات الموزعة عاديا، استخدم تحليل النوفاين أحادي الاتجاه للمقارنة بين المجموعات المتعددة، يليه اختبار توكي بعد الوقوع للمقارنات الزوجية بين المجموعات. بالنسبة للبيانات غير الموزعة بشكل طبيعي، تطبيق اختبار كروسكال-واليس غير الماميراتي. تشير P< 0.05 إلى وجود فرق كبير.
  5. قم بإنشاء الرسوم البيانية باستخدام برامج رسم بياني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يخفف HNK من تلف الإجهاد التأكسدي في خلايا HDF الناتج عن UVA
تم فحص تأثيرات تركيزات مختلفة من علاج HNK لمدة 24 أو 48 ساعة على مدى 24 أو 48 ساعة على مدى بقاء خلايا HDF بواسطة اختبار حيوية الخلايا لفحص التركيز المناسب ومدة العلاج. أظهرت النتائج أن 2.5 و5 و10 ميكرومولار من HNK لم تؤثر بشكل كبير على بقاء خلايا HDF الطبيعية بعد 24 أو 48 ساعة من العلاج، مما أظهر أن HNK غير سام للخلايا الطبيعية عند هذه الجرعات. ومن الجدير بالذكر أن HNK عند تركيزات 2.5 و5 و10 ميكرومولار خفف من...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الضوء فوق البنفسجي هو أحد العوامل البيئية التي تضر الخلايا والكائنات الحية. أفادت دراسات سابقة أن الأشعة فوق البنفسجية، بقوته العالية للاختراق، هي النوع الرئيسي من الضوء فوق البنفسجي الذي يصل إلى سطح الأرض38. الخلايا الليفية هي خلايا وظيفية مهمة في الأدمة، ويمكن أن يؤدي تقدمها في العمر بشكل مباشر أو غير مباشر إلى شيخوخة الجلد. يستخدم تلف الشيخوخة الضوئية الناتج عن UVA في نموذج خلايا HDF ونموذج الفأر عديم الشعر على نطاق واسع في دراسة شيخوخة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤكد المؤلفون أنه لا توجد لديهم تضارب مالي في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مجموعة اختبار نشاط ALTبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينP2711Mمجموعة كشف نشاط أنزيم ترانس أميناز
مجموعة اختبار Amplex Red CREبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0291Sمجموعة كشف الكرياتينين
وسيط تركيب مكافحة التزعيمبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينP0126وسط تثبيت حفظ إشارات الفلورة
مجموعة اختبار نشاط ASTبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينP2715Sمجموعة كشف نشاط إنزيم الأسبارتات ترانس أميناز
مجموعة اختبار بروتين BCAبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينP0012مجموعة تحديد تركيز البروتين
BSAسيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكيةV900933كاشف حجب للارتباط غير المحدد
مجموعة اختبار BUNبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0574Sمجموعة كشف النيتروجين لليوريا في الدم
مجموعة اختبار الأشعة المقطعيةبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0051مجموعة كشف نشاط الكاتالاز
كاشف CCK-8سيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية96992محلول اختبار بقاء الخلايا وهو ملح رباعي الحبيب في الماء
الأجسام المضادة CDK2إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةPA5-79024الجسم المضاد الأساسي للكشف عن CDK2
عامل المضيء الكيميائي ECLميدكيم إكسبريس، مونماوث جنكشن، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكيةHY-K1005كاشف كشف التوألؤ الكيميائي المحسن
الأجسام المضادة للكولاجين Iإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةPA1-26204الأجسام المضادة الأساسية للكشف عن الكولاجين I
الجسم المضاد للسيكلين A2إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةPA5-34682الجسم المضاد الأساسي للكشف عن سيكلين A2
حل التلوين DAPIسيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكيةD9542صبغة التلوين النووي
مسبار فلوري DCFH-DAميدكيم إكسبريس، مونماوث جنكشن، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكيةHY-D0940مسبار فلوري للأنواع التفاعلية من الأكسجين
حل التفاضلبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينC0161sكاشف لخطوة تمايز الهيماتوكسيلين
مسبار ديهيدروإيثيديومبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0063مسبار أنواع الأكسجين التفاعلي
وسط زراعة الأرومات الليفيةشركة سنسيل للتكنولوجيا الحيوية، المحدودة، ووهان، هوبي، الصينSNPM-H342وسط الزراعة الكامل لنمو الأرومات الليفية
IgG المضاد للأرانب المصنف من FITCإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةF-2765الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بفلوريسين إيزوثيوسيانات (FITC)
قياس التدفق الخلويعلوم الأحياء في كلية الأعمال، سان خوسيه، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةBD FACSCaliburTMمقياس تدفق الخلايا
برنامج فلوجوعلوم الأحياء في كلية الأعمال، سان خوسيه، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةالإصدار 10.8برنامج تحليل قياس التدفق الخلوي
مجهر الفلورةلايكا، هايدلبرغ، ألمانيامدير اللعبة IL LEDالمجهر لتصوير الفلورة
الأجسام المضادة GAPDHإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةPA1-987الجسم المضاد الداخلي للتحكم لتطبيع البروتين
نظام التصوير الهلاميإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةiBright CL1500نظام التصوير لاكتشاف البروتينات
الماعز المضاد للأرانب IgGإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية31460الجسم المضاد الثانوي للكشف المناعي
برنامج Graphpad Prism 9.0جراف باد سوفتوير، سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةبريزم 9.0برامج رسم الرسم البياني
مجموعة اختبار GSHبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0053مجموعة كشف محتوى الجلوتاثيون
مجموعة التلوين العاليةبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينC0105Sمجموعة التلوين النسيجي لتحليل شكل الأنسجة
HNKميدكيم إكسبريس، مونماوث جنكشن، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكيةHY-N0003هونوكيول، مركب نشط بيولوجيا
الخلايا الليفية الجلدية البشريةشركة سنسيل للتكنولوجيا الحيوية، المحدودة، ووهان، هوبي، الصينSNP-H342الخلايا الليفية البشرية الأولية
برنامج IBM SPSS Statistics 26.0شركة آي بي إم، أرمونك، نيويورك، الولايات المتحدة الأمريكيةإحصائيات IBM SPSS 26.0برنامج التحليل الإحصائي
برنامج ImageJوين راسباند، المعهد الوطني للصحة النفسية، الولايات المتحدة الأمريكيةالإصدار 1.54Hبرنامج تحليل الصور
الأجسام المضادة Ki67إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةMA5-14520الأجسام المضادة الأساسية لاكتشاف علامات تكاثر الخلايا
المجهر الضوئيلايكا، هايدلبرغ، ألمانياDM3000المجهر البصري لتصوير الحقل الساطع
طقم تلوين ماسون ثلاثي الألوانسولاربيو، بكين، الصينG1340مجموعة تلوين الكولاجين والأنسجة الضامة
مجموعة اختبار MDAبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0131Sمجموعة كشف مستوى المالوندياليديهيد (علامة بيروكسيد الدهون)
قارئ اللوحة الدقيقةثيرمو فيشر ساينتفيك، والثام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية1410101أداة قياس الامتصاص للاختبارات القائمة على الخلايا
الأجسام المضادة MMP-1إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةPA5-27210الجسم المضاد الأساسي للكشف عن ماتريكس ميتالوبروتيناز-1
مجموعة ELISA من MMP-1التكنولوجيا الحيوية المرتبطة بالإنزيمات، شنغهاي، الصينml038199الكشف الكمي عن MMP-1 في العينات البيولوجية
الأجسام المضادة MMP-3أبكام، كامبريدج، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكيةab52915الجسم المضاد الأساسي للكشف عن ماتريكس ميتالوبروتيناز-3
مجموعة ELISA من MMP-3التكنولوجيا الحيوية المرتبطة بالإنزيمات، شنغهاي، الصينml105322الكشف الكمي ل MMP-3 في العينات البيولوجية
علكة محايدةبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينC0173وسيط التركيب
الجسم المضاد P16إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةPA5-20379الجسم المضاد الأساسي لاكتشاف بروتين P16
الأجسام المضادة P21إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةMA5-14949الجسم المضاد الأساسي للكشف عن بروتين P21
الأجسام المضادة P53أبكام، كامبريدج، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكيةab131442الجسم المضاد الأساسي للكشف عن بروتين P53
بارافورمالديهايدسولاربيو، بكين، الصينP1110كاشف تثبيت الخلايا والأنسجة
PIبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينST512يوديد بروبيديوم لتلوين الحمض النووي في تحليل دورة الخلية
مجموعة اختبار ببتيد Pro-Colagen I Cتاكارا، طوكيو، اليابانMK101مجموعة كشف تخليق الكولاجين
الأجسام المضادة p-Smad2إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية44-244Gالأجسام المضادة الأساسية للكشف عن Smad2 الفوسفوري
الأجسام المضادة p-Smad3إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية44-246Gالأجسام المضادة الأساسية للكشف عن Smad3 المفسفر
أغشية PVDFإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية88520غشاء نقل البروتين للبتل الغربي
مخزن تحليل RIPAبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينP0013Bمحلول استخلاص البروتين لمحللات الخلايا والأنسجة
RNaseAبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينST579الريبونوكلياز لإزالة الحمض النووي الريبي أثناء تلوين الحمض النووي
مجموعة تلوين SA-β-galactosidaseبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينC0602مجموعة كشف الشيخوخة الخلوية
SB431542ميدكيم إكسبريس، مونماوث جنكشن، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكيةHY-10431TGF-β 1 مثبط مسار الإشارة
جل SDS-PAGEإنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةWG1403BX10جل البولي أكريلاميد للرحلان الكهربائي للبروتينات
فئران SKH1 بلا شعرفيتالريفر، بكين، الصيننموذج حيواني لدراسات شيخوخة الجلد بالفوتو
الجسم المضاد Smad2إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية51-1300الجسم المضاد الأساسي للكشف عن Smad2
الأجسام المضادة Smad3إنفيتروجين، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية51-1500الجسم المضاد الأساسي للكشف عن Smad3
مجموعة فحص SODبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينS0101Sمجموعة كشف نشاط إنزيم الأكسجين الفائق
TGF-β 1 جسم مضادأبكام، كامبريدج، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكيةAB215715الأجسام المضادة الأساسية ل TGF-&beta؛ 1 كشف
ترايتون X-100سيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكيةX-100منظف غير أيوني لنفاذية غشاء الخلية
حل اختبار تونيلبيوتايم بيوتكنولوجي، شنغهاي، الصينC1086كاشف كشف الاستماتة المبرمج لتجزئة الحمض النووي
زيلينسيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية247642مذيب عضوي لإزالة البارافينين للأنسجة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gu, Y., Han, J., Jiang, C., Zhang, Y. Biomarkers, oxidative stress and autophagy in skin aging. Ageing Res Rev. 59, 101036 (2020).
  2. Chaudhary, M., Khan, A., Gupta, M. Skin ageing: pathophysiology and current market treatment approaches. Curr Aging Sci. 13 (1), 22-30 (2020).
  3. Lephart, E. D. Equol’s anti-aging effects protect against environmental assaults by increasing skin antioxidant defense and ECM proteins while decreasing oxidative stress and inflammation. Cosmetics. 5 (1), 16 (2018).
  4. Gromkowska-Kępka, K. J., Puścion-Jakubik, A., Markiewicz-Żukowska, R., Socha, K. The impact of ultraviolet radiation on skin photoaging—review of in vitro. studies. J Cosmet Dermatol. 20 (11), 3427-3431 (2021).
  5. Tsai, T. Y., et al. Djulis supplementation against oxidative stress and ultraviolet radiation-induced cell damage: the influence of antioxidant status and aging of skin in healthy subjects. J Cosmet Dermatol. 21 (7), 2945-2953 (2022).
  6. McCormick, E., et al. Topical nanoencapsulated cannabidiol cream as an innovative strategy combating UV-A-induced nuclear and mitochondrial DNA injury: a pilot randomized clinical study. J Am Acad Dermatol. 91 (5), 855-862 (2024).
  7. Ansary, T. M., Hossain, M. R., Kamiya, K., Komine, M., Ohtsuki, M. Inflammatory molecules associated with ultraviolet radiation-mediated skin aging. Int J Mol Sci. 22 (8), 3974 (2021).
  8. Deng, H., et al. Pterostilbene's protective effects against photodamage caused by UVA/UVB irradiation. Pharmazie. 73 (11), 651-658 (2018).
  9. Ho, C. Y., Dreesen, O. Faces of cellular senescence in skin aging. Mech Ageing Dev. 198, 111525 (2021).
  10. Bocheva, G., et al. Protective role of melatonin and its metabolites in skin aging. Int J Mol Sci. 23 (3), 1238 (2022).
  11. Rauf, A., et al. Honokiol: a review of its pharmacological potential and therapeutic insights. Phytomedicine. 90, 153647 (2021).
  12. Cardullo, N., Monti, F., Muccilli, V., Amorati, R., Baschieri, A. Reaction with ROO• and HOO• radicals of honokiol-related neolignan antioxidants. Molecules. 28 (2), (2023).
  13. Prasher, P., et al. Honokiol and its analogues as anticancer compounds: current mechanistic insights and structure-activity relationship. Chem Biol Interact. 386, 110747 (2023).
  14. Xin, L., et al. Honokiol alleviates radiation-induced premature ovarian failure via enhancing Nrf2. Am J Reprod Immunol. 90 (4), e13769 (2023).
  15. Faysal, M., et al. Neuropharmacological potential of honokiol and its derivatives from Chinese herb Magnolia species: understandings from therapeutic viewpoint. Chin Med. 18 (1), 154 (2023).
  16. Fan, X. X., et al. Honokiol improves depression-like behaviors in rats by HIF-1α-VEGF signaling pathway activation. Front Pharmacol. 13, 968124 (2022).
  17. Du, E., et al. Dietary honokiol supplementation improves antioxidant capacity, enhances intestinal health, and modulates cecal microbial composition and function of broiler chickens. Poult Sci. 103 (7), 103798 (2024).
  18. Sarrica, A., Kirika, N., Romeo, M., Salmona, M., Diomede, L. Safety and toxicology of magnolol and honokiol. Planta Med. 84 (16), 1151-1164 (2018).
  19. Zhuang, Q., et al. A validated ultra-HPLC-MS/MS method for determination of honokiol in human plasma and its application to a clinical pharmacokinetic study. Bioanalysis. 11 (11), 1085-1098 (2019).
  20. Guillermo, R. F., et al. Time- and dose-response effects of honokiol on UVB-induced skin cancer development. Drug Discov Ther. 6 (3), 140-146 (2012).
  21. Prasad, R., Singh, T., Katiyar, S. K. Honokiol inhibits ultraviolet radiation-induced immunosuppression through inhibition of ultraviolet-induced inflammation and DNA hypermethylation in mouse skin. Sci Rep. 7 (1), 1657 (2017).
  22. Dikalov, S., Losik, T., Arbiser, J. L. Honokiol is a potent scavenger of superoxide and peroxyl radicals. Biochem Pharmacol. 76 (5), 589-596 (2008).
  23. Shen, C. Y., Jiang, J. G., Yang, L., Wang, D. W., Zhu, W. Anti-ageing active ingredients from herbs and nutraceuticals used in traditional Chinese medicine: pharmacological mechanisms and implications for drug discovery. Br J Pharmacol. 174 (11), 1395-1425 (2017).
  24. Kim, K. K., Sheppard, D., Chapman, H. A. TGF-β1 signaling and tissue fibrosis. Cold Spring Harb Perspect Biol. 10 (4), (2018).
  25. Lodyga, M., Hinz, B. TGF-β1—a truly transforming growth factor in fibrosis and immunity. Semin Cell Dev Biol. 101, 123-139 (2020).
  26. Liu, H., et al. TGF-β/Smads signaling pathway, Hippo-YAP/TAZ signaling pathway, and VEGF: their mechanisms and roles in vascular remodeling-related diseases. Immun Inflamm Dis. 11 (11), e1060 (2023).
  27. Huang, Y., et al. HIF-1α switches the functionality of TGF-β signaling via changing the partners of Smads to drive glucose metabolic reprogramming in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 398 (2021).
  28. Xie, X., et al. Iguratimod inhibits skin fibrosis by regulating TGF-β1/Smad signalling pathway in systemic sclerosis. Eur J Clin Invest. 52 (8), e13791 (2022).
  29. Guo, K., et al. Compound collagen peptide powder improves skin photoaging by reducing oxidative stress and activating TGF-β1/Smad pathway. Photochem Photobiol. 100 (6), 1874-1893 (2024).
  30. Yamane, T., et al. mTOR inhibition by rapamycin increases ceramide synthesis by promoting transforming growth factor-β1/Smad signaling in the skin. FEBS Open Bio. 6 (4), 317-325 (2016).
  31. Kataoka, S., et al. Honokiol acts as a potent anti-fibrotic agent in the liver through inhibition of TGF-β1/SMAD signaling and autophagy in hepatic stellate cells. Int J Mol Sci. 22 (24), 13678 (2021).
  32. Jang, H. Y., et al. Fisetin inhibits UVA-induced expression of MMP-1 and MMP-3 through the NOX/ROS/MAPK pathway in human dermal fibroblasts and human epidermal keratinocytes. Int J Mol Sci. 24 (24), 16212 (2023).
  33. Zheng, X., et al. Honokiol attenuates mitochondrial fission and cell apoptosis by activating Sirt3 in intracerebral hemorrhage. Chin Med J (Engl). 136 (6), 719-731 (2023).
  34. Xia, Y., Zhang, H., Wu, X., Xu, Y., Tan, Q. Resveratrol activates autophagy and protects from UVA-induced photoaging in human skin fibroblasts and the skin of male mice by regulating the AMPK pathway. Biogerontology. 25 (4), 649-664 (2024).
  35. Kim, J., Lee, N., Chun, Y. S., Lee, S. H., Ku, S. K. Krill oil's protective benefits against ultraviolet B-induced skin photoaging in hairless mice and in vitro. experiments. Mar Drugs. 21 (9), (2023).
  36. Zhang, C., et al. Combination of lyophilized adipose-derived stem cell concentrated conditioned medium and polysaccharide hydrogel in the inhibition of hypertrophic scarring. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 23 (2021).
  37. Sun, G., et al. Panax ginseng Meyer cv. Silvatica phenolic acids protect DNA from oxidative damage by activating Nrf2 to protect HFF-1 cells from UVA-induced photoaging. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115883 (2023).
  38. Fadadu, R. P., Wei, M. L. Ultraviolet A radiation exposure and melanoma: a review. Melanoma Res. 32 (6), 405-410 (2022).
  39. Wlaschek, M., Maity, P., Makrantonaki, E., Scharffetter-Kochanek, K. Connective tissue and fibroblast senescence in skin aging. J Invest Dermatol. 141 (4 Suppl), 985-992 (2021).
  40. Duan, Y., et al. Handelin reduces ultraviolet A-induced photoaging by inhibiting reactive oxygen species generation and enhancing autophagy. Tohoku J Exp Med. 259 (3), 189-198 (2023).
  41. Liu, S., et al. Oral supplementation of sea cucumber and its hydrolysate mitigates ultraviolet A-induced photoaging in hairless mice. J Sci Food Agric. 102 (5), 1987-1994 (2022).
  42. Liu, S., et al. Gly-Pro protects normal human dermal fibroblasts from UVA-induced damages via MAPK-NF-κB signaling pathway. J Photochem Photobiol B. 237, 112601 (2022).
  43. Lu, Z., et al. Hesperetin attenuates UVA-induced photodamage in human dermal fibroblast cells. J Cosmet Dermatol. 21 (11), 6261-6269 (2022).
  44. Michel, P., et al. Anti-inflammatory, antioxidant and photoprotective activity of standardised Gaultheria procumbens L. leaf, stem, and fruit extracts in UVA-irradiated human dermal fibroblasts. J Ethnopharmacol. 319 (Pt 2), 117219 (2024).
  45. Fu, H., et al. Tremella fuciformis polysaccharides inhibit UVA-induced photodamage of human dermal fibroblast cells by activating and up-regulating Nrf2/Keap1 pathways. J Cosmet Dermatol. 20 (12), 4052-4059 (2021).
  46. Park, C., et al. Honokiol ameliorates oxidative stress-induced DNA damage and apoptosis of C2C12 myoblasts by regulating ROS generation and the mitochondrial pathway. Anim Cells Syst. 24 (1), 60-68 (2020).
  47. Chen, Q., et al. Metformin attenuates UVA-induced skin photoaging by suppressing mitophagy and the PI3K/AKT/mTOR pathway. Int J Mol Sci. 23 (13), 6969 (2022).
  48. Wang, M., Guo, Y., Wan, M., Chen, Z., Zhong, J. L. TAZ reduces UVA-mediated photoaging through regulation of cell proliferation in skin fibroblasts. Photochem Photobiol. 99 (1), 153-159 (2023).
  49. Han, S., et al. Inhibitory effect of seawater pearl hydrolysate on UVA-induced photoaging of human skin fibroblasts. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1558288 (2022).
  50. Alam, A., et al. Computational development of new inhibitors for apoptosis stimulating protein of p53 (iASPP) using pharmacophore modeling, docking, and MD simulation approaches. J Cancer Biomol Ther. 1 (2), 1-9 (2024).
  51. Bai, G. L., et al. Rapamycin protects skin fibroblasts from UVA-induced photoaging by inhibition of p53 and phosphorylated HSP27. Front Cell Dev Biol. 9, 633331 (2021).
  52. Zhang, J., Yu, H., Man, M. Q., Hu, L. Aging in the dermis: fibroblast senescence and its significance. Aging Cell. 23 (2), e14054 (2024).
  53. Liu, H., Dong, J., Du, R., Gao, Y., Zhao, P. Collagen study advances for photoaging skin. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 40 (1), e12931 (2024).
  54. Fisher, G. J., et al. Skin aging from the perspective of dermal fibroblasts: the interplay between adaptation to the extracellular matrix microenvironment and cell autonomous processes. J Cell Commun Signal. 17 (3), 523-529 (2023).
  55. Li, F., et al. Discovery of matrix metalloproteinase inhibitors as anti-skin photoaging agents. Eur J Med Chem. 267, 116152 (2024).
  56. Song, M. J., et al. Downregulation of carnitine acetyltransferase by promoter hypermethylation regulates ultraviolet-induced matrix metalloproteinase-1 expression in human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 116 (2), 70-77 (2024).
  57. Choi, S. I., et al. Eisenia bicyclis extract repairs UVB-induced skin photoaging in vitro and in vivo.: photoprotective effects. Mar Drugs. 19 (12), (2021).
  58. Kim, M. K., et al. Dual role of enhancer of zeste homolog 2 in the regulation of ultraviolet radiation-induced matrix metalloproteinase-1 and type I procollagen expression in human dermal fibroblasts. Matrix Biol. 119, 112-124 (2023).
  59. Xue, N., Liu, Y., Jin, J., Ji, M., Chen, X. Chlorogenic acid prevents UVA-induced skin photoaging through regulating collagen metabolism and apoptosis in human dermal fibroblasts. Int J Mol Sci. 23 (13), (2022).
  60. Meng, L., et al. NPRC deletion attenuates cardiac fibrosis in diabetic mice by activating PKA/PKG and inhibiting TGF-β1/Smad pathways. Sci Adv. 9 (31), eadd4222 (2023).
  61. Li, W., et al. Echinacoside exerts anti-tumor activity via the miR-503-3p/TGF-β1/Smad axis in liver cancer. Cancer Cell Int. 21 (1), 304 (2021).
  62. Xiang, D., et al. Physalin D attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis by blocking TGF-β/Smad and YAP signaling. Phytomedicine. 78, 153294 (2020).
  63. Jiang, H., Zhou, X., Chen, L. Asiaticoside delays senescence and attenuates ROS generation in UV-exposed cells through regulation of the TGF-β1/Smad pathway. Exp Ther Med. 24 (5), 667 (2022).
  64. Tong, T., Park, J., Moon, Y., Kang, W., Park, T. α-Ionone protects against UVB-induced photoaging in human dermal fibroblasts. Molecules. 24 (9), 1688 (2019).
  65. Liu, X. Y., Hwang, E., Park, B., Xiao, Y. K., Yi, T. H. Photoprotective and anti-inflammatory properties of vina-ginsenoside R7 ameliorate ultraviolet B-induced photodamage in normal human dermal fibroblasts. Appl Biochem Biotechnol. 189 (3), 729-744 (2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

TGF Beta Smad HDF

مقالات ذات صلة