دراسة عشوائية مندلية لصفات الخلايا المناعية ومستقلبات البلازما في التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو

ملخص

باستخدام تحليلات العشوائية والوساطة المندلية ذات العينتين، تحدد هذه الدراسة 32 نمطا ظاهريا للخلايا المناعية و9 مستقلبات بلازما مرتبطة سببيا بالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو، وتدعم محور مناعي جزئي CD39+Treg-isovalerylcarnitine (C5)-HT. توفر بيانات التدفق الخلوي الأولية وبيانات الأيض إمكانية بيولوجية أولية تتوافق مع هذا المسار.

الملخص

التهاب الغدة الدرقية الهاشيموتو (HT) هو اضطراب مناعي ذاتي يصاب بالغدة الدرقية. بينما تشارك خلايا المناعة في مسببات المرض، لم يتم توضيح أدوارها المحددة بالكامل بعد. تم إجراء تحليل عشوائي مندلي (MR) من عينتين يدمج إحصائيات ملخصة دراسة الارتباط الجينومي (GWAS) من مجموعات بيانات عامة كبيرة لصفات الخلايا المناعية (ebi-a-GCST90001391 إلى ebi-a-GCST90002121)، ومستقلبات البلازما (GCST90199621-9020102)، وHT (ebi-a-GCST90018855). تم تقدير التأثيرات السببية باستخدام طرق التوازن العكسي (IVW)، مع تحليلات MR-Egger، والوسيط المرجح، وتحليل ترك واحد خارجي لتقييم التنوع العددي والمتانة. تم تطبيق تحليلات الرنين المغناطيسي ثنائية الاتجاه والوساطة لاختبار الاتجاهية وتحديد المسارات المحتملة التي توسطها المستقلبات. تم قياس خلايا التريج CD3⁺CD25⁺CD39⁺Treg في عينات دم محيطية باستخدام قياس تدفق الخلية. تم قياس إيزوفاليريلكارنيتين (C5) بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة المزدوجة للكتلة. حدد تحليل IVW 32 نمطا ظاهريا لخلايا المناعة مرتبطة بشكل كبير بخطر الهرمون (P < 0.05 بعد تصحيح FDR). أظهر تحليل الرنين المغناطيسي العكسي أن الهرمون مرتبط سببيا إيجابيا بصفتين مناعيتين، بينما كانت أربع خصائص مناعية (جميعها P < 0.05) مرتبطة عكسيا بالعلاج الهرموتي. أظهرت تحليلات الحساسية عدم وجود تعدد أفقي أو تباين في التنوع. بالإضافة إلى ذلك، حددت طريقة IVW بشكل مبدئي 9 مستقلبات بلازما مرتبطة سببيا بالعلاج الهرموني، بما في ذلك C5 المعزز للخطر (OR = 1.120، فترة الثقة 95٪: 1.032-1.215، P = 0.006) والإرغوثيونين الوقائي (OR = 0.958، فترة الثقة 95٪: 0.927-0.990، P = 0.010). حدد التوسط بالرنين المغناطيسي ذو الخطوتين C5 كوسيط مرشح يربط CD3⁺ CD39⁺ Treg ب HT (نسبة الوساطة 8.89٪، فاصل الثقة 95٪: 2.34٪-15.4٪، P = 0.008). رفع التدفق الخلوي مستويات CD39⁺Treg وC5 في بلازما لدى مرضى العلاج الهرموني، مع ارتباط إيجابي بين C5 ونسبة خلايا CD39⁺Treg. تؤسس هذه الدراسة روابط سببية جديدة بين الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية والعلاج الهرموني، وتسلط الضوء على مستقلبات البلازما، وخاصة C5، كعوامل محتملة في مسببات مرض الهرمون. تعمق هذه النتائج الفهم الميكانيكي لأمراض الغدة الدرقية المناعية الذاتية وقد توجه اكتشاف المؤشرات الحيوية والهدف العلاجي المستقبلي.

المقدمة

التهاب الغدة الدرقية الهاشيموتو (HT) هو مرض مناعي ذاتي شائع يهاجم فيه الجهاز المناعي الغدة الدرقية، مما يؤدي إلى قصور الغدة الدرقية ^1,2. أفادت دراسات حديثة عن زيادة سنوية مستمرة في معدل الإصابة بالعلاج الهرموني. في الصين، يقدر انتشاره بين 0.2٪ و1.3^٪. السبب الدقيق لهرمون الهرمون غير معروف، رغم أن مسببه يعتقد أنه يتضمن تفاعلا معقدا بين مكونات جينية وبيئية ومناعية ^4,5.

يتأثر تطور الهرمون بشكل كبير بالجهاز المناعي ^6,7,8. تستهدف الاستجابات المناعية الشاذة أنسجة الغدة الدرقية، مما يحفز إنتاج الأجسام المضادة الذاتية، بما في ذلك بيروكسيداز مضاد للغدة الدرقية (مضاد TPO) ومضاد للثيروجلوبوبولين (مضاد Tg^). تتفاعل هذه الأجسام المضادة الذاتية مع خلايا الغدة الدرقية، مما يحفز موت الخلايا المناعي وردود الفعل الالتهابية، مما يؤدي إلى ضعف وظيفة الغدة الدرقية¹⁰. المسارات الممرضة المحددة، وخاصة الإشارات الأيضية التي تدفع خلل الخلايا المناعية، لا تزال غير مفهومة بالكامل. تلعب الخلايا التائية التنظيمية (Tregs)، خاصة تلك التي تعبر عن CD39، دورا محوريا في الحفاظ على التحمل المناعي من خلال تحلل ATP خارج الخلية إلى أدينوسين مثبط للمناعة. يمكن أن تؤدي اضطرابات وظيفة التريج أو بيئتها الأيضية إلى انهيار التحمل الذاتي، ومع ذلك لا تزال العلاقة السببية بين مجموعات معينة من التريج والعلاج الهرموني غير واضحة 11,12,13,14,15,16.

غالبا ما تكون الدراسات الرصدية التقليدية محدودة بالمتغيرات المربكة وإمكانية حدوث سبب عكسي، مما يعقد القدرة على تحديد العلاقات السببية الحتمية بين الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية وهرموني¹⁷. علاوة على ذلك، وبما أن الهرموني مرض جهازي يتأثر بمجموعات مناعية مختلفة ووسطيات أيضية، فقد يغفل التركيز الضيق على المرشحين الفرديين المحركات الممرضة الجديدة¹⁸. لذلك، من الضروري اتباع نهج فحص واسع النطاق لتوفير مشهد غير متحيز وشامل للعوامل المناعية الأيضية التي تساهم في علاج العلاج الهرموني. قدمت التطورات الحديثة في دراسات الارتباط الجينومي (GWAS) بيانات شاملة حول الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية ومستقلبات البلازما، مما يوفر طرقا جديدة لاستكشاف الآليات الأساسية ل HT¹⁹. تتبع العشوائية المندلية (MR) مبادئ التعيين العشوائي للأمشاج المندلية والتوليفات الحرة¹⁶ والاستفادة من تعدد أشكال النيوكليوتيد الواحد (SNPs) كمتغيرات آلية (IVs) لاستنتاج التأثيرات السببية المحتملة للتعرضات على النتائج^20,21. تساعد هذه الطريقة في التخفيف من تأثير العوامل المربكة والسببية العكسية، والتي غالبا ما تعقد الدراسات الرصدية التقليدية^16،22.

في ضوء هذه التطورات، فإن هدف هذه الدراسة ذو شقين. أولا، تم إجراء تحليل استكشافي مولد فرضيات باستخدام إطار عمل من رنين مغناطيسي مكون من عينتين لفحص 731 نمطا ظاهريا للخلايا المناعية و1,400 استقلاب بلازما بشكل منهجي لتحديد عوامل خطر جديدة مرشحة لعلاج الهرمون. ثانيا، تم الانتقال إلى تحقيق قائم على الفرضيات لتقييم الدور الوسيط المحدد للمستقلبات المحددة، مثل إيزوفاليريل كارنيتين، في المسار الذي يربط الخلايا التائية التنظيمية بخطر الهرمون. لذلك، تدمج هذه الدراسة الفحص واسع النطاق للرنين المغناطيسي مع تحليل الوساطة والتحقق السريري الأولي لتوفير أدلة مدعومة جينيا تتوافق مع إطار مناعي أيضي مفترض (تريغ-ميتابوليت-HT)، مع التأكيد على الطبيعة الاستكشافية لهذه النتائج. من خلال تحديد هذه السلاسل السببية الدقيقة، يتم توفير رؤى جديدة حول تنظيم المناعة الذاتية للغدة الدرقية الأيضية، إلى جانب مرشحين قويين لاستهداف علاجي مستقبلي.

البروتوكول

تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية في مستشفى المنغوليا الداخلية المرتبط. تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا لإعلان هلسنكي والإرشادات الأخلاقية ذات الصلة. تم الحصول على موافقة مستنيرة كتابية من جميع المشاركين قبل بدء أي إجراءات متعلقة بالدراسة. شملت هذه الدراسة مجموعتين من المشاركين: مجموعة التهاب الغدة الدرقية لهاشيموتو (HT، n = 10) ومجموعة الضابط الصحية (صحي، n = 10). تم مطابقة المجموعتين من حيث العمر والجنس. تم جمع جميع عينات الدم الطرفية من المرضى الخارجيين أو من الأفراد الذين يخضعون لفحوصات صحية روتينية، مع سحب الدم في الصباح بعد صيام ليلي.

تصميم الدراسة

في هذه الدراسة، تم استخدام تحليل بالرنين المغناطيسي من عينتين وتحليل الوساطة لتقييم العلاقة السببية بين 731 نمطا ظاهريا للخلايا المناعية (7 مجموعات) والعلاج الهرموني، واستكشفت الدور التنظيمي المحتمل لمستقلبات البلازما في هذه العلاقة. تكون سير العمل التحليلي من 5 خطوات متسلسلة: (1) اختيار مجموعات بيانات GWAS للتعرض للأنماط الظاهرية المناعية؛ (2) اختيار مجموعة بيانات GWAS الناتج ل HT؛ (3) تحديد وتنسيق المتغيرات الآلية؛ (4) تحليل التصوير بالرنين المغناطيسي الأولي من عينتين والتحقق ثنائي الاتجاه؛ و(5) تحليل التصوير المغناطيسي بالوساطة ذات الخطوتين. يتم عرض نظرة عامة تخطيطية لتصميم الدراسة في الشكل التكميلي 1. في تحليل الرنين المغناطيسي، تعمل المتغيرات الجينية كبدائل للتعرضات القابلة للتعديل. للحصول على استنتاج سببي صحيح، يجب أن تستوفي المتغيرات الأداة (IVs) ثلاثة معايير أساسية: (1) مرتبطة بقوة بالتعرض للاهتمام؛ (2) هي مستقلة عن أي عوامل مربكة قد تؤثر على كل من التعرض والنتيجة؛ و(3) تؤثر على النتيجة فقط من خلال التعرض، دون مسارات سببية بديلة.

GWAS لمصدر بيانات HT

لضمان توافق مجموعات البيانات وتقليل التصنيف السكاني، تم اشتقاق جميع إحصاءات ملخص GWAS بشكل أساسي من أفراد من أصول أوروبية. قدمت قاعدة بيانات GWAS (https://gwas.mrcieu.ac.uk/) بيانات نتائج HT، وتم استخدام مجموعة بيانات ebi-a-GCST90018855. أجرت الدراسة GWAS على 395,640 أوروبيا (N_حالة = 15,654، N_{نقطة تحكم} = 379,986)، وبعد مراقبة الجودة وبعد الاستيفاء، تم تحليل 24,146,037 SNP. بالنسبة للمشوهات الخاصة ب HT (مثل الجنس، العمر)، تضمن GWAS الأصلي (ebi-a-GCST90018855) هذه المتغيرات الترافقة في نماذجه، كمعيار في خطوط أنابيب GWAS.

مصادر بيانات GWAS لخلايا المناعة

تم الحصول على إحصائيات ملخصة لأنظمة GWAS المتعلقة بصفات الخلايا المناعية من كتالوج GWAS، الذي يغطي مجموعات بيانات تحتوي على أرقام وصول من ebi-a-GCST90001391 إلى ebi-a-GCST90002121 (متوفر على https://www.ebi.ac.uk/gwas/). تم تضمين ما مجموعه 731 نمطا مناعيا في التحليل، بما في ذلك عدد الخلايا النسبي (n = 192)، المعامل الموركولوجي (MP) (n = 389)، معاملات التنشيط (AC، n = 118)، ومتوسط شدة التألق (MFI، n = 389) الذي يمثل درجة المستضد السطحي²³. تم توثيق تأثير ما يقرب من 22 مليون تعدد أشكال على 731 نمطا ظاهريا لخلايا المناعة في 3757 سردينيا من خلال التحليل الطبي المبكر على الخلايا المناعية.

مصادر بيانات GWAS لمستقلبات البلازما

تم استرجاع بيانات ملخصة GWAS لما مجموعه 1,400 استقلاب بلازما من كتالوج GWAS (https://www.ebi.ac.uk/gwas/studies/GCST90199621-90201020)، والتي تضم 1,091 تركيزا فرديا للمستقلبات و309 سمة بنسبة المستقلبات. تم اشتقاق مجموعات بيانات GWAS المستخدمة لتحليل الرنين المغناطيسي في هذه الدراسة من أفراد من أصول أوروبية. تم توفير الخصائص التفصيلية لبيانات استقلاب البلازما المستخدمة في GWAS في الجدول التكميلي 1.

مجموعات بيانات GWAS للأنماط الظاهرية للخلايا المناعية (المجموعة السردينية)، وHT (FinnGen/EBI-a-GCST90018855)، ومستقلبات البلازما (المجموعات الأوروبية) مستقلة ولا يوجد تداخل في العينات، كما أكدت منشورات الاتحاد المعني. هذا يفي بافتراض الاستقلالية للرنين المغناطيسي من عينتين.

اختيار المتغيرات الآلية (IVs)

تم افتراض أن الوريد الوريدية مرتبطة ارتباطا وثيقا بالتعرض مع بقائها مستقلة عن متغيرات النتيجة. بالإضافة إلى ذلك، كان يفترض أن عامل التعرض فقط له تأثير مباشر على النتيجة. لتحديد الوريدات الوريدية المناسبة، تم اختيار SNPs المرتبطة بعوامل التعرض مع مستوى دلالة محدد عند 5 × ^10-8. لأخذ التوازن في الربط (LD)، تم تجميع SNPs باستخدام عتبة R² مقداره 0.001 ضمن نافذة بحجم 10,000 كيلوبازي (kb). تم استبعاد المتغيرات التي تظهر R² > 0.001 ضمن هذه المسافة لضمان استقلالية المتغيرات الآلية المختارة وإلغاء الارتباطات المحتملة لل LD. استبعدت اختبارات التغاير SNPs ذات التنوع الكبير مع إحصائية F < 10. وأخيرا، للسيطرة على تأثير المراوغات على الأوريديات، تم أخذ P < 1×^10-5 لإزالة SNPs الباليندرومية وSNPs غير المتوافقة، وتم الاحتفاظ بSNPs الصالحة كمتغيرات أداتية.

تحليل العشوائية المندلية ذات العينتين

لتقييم العلاقة السببية ثنائية الاتجاه بين الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية والعلاج الهرموني، تم إجراء تحليلات عشوائية مندلية ذات عينتين وتحليلات MR بالوساطة. على وجه التحديد، تم تطبيق التصوير بالرنين المغناطيسي من عينتين لتقييم صفات متعددة مرتبطة بالخلايا المناعية. لهذه التحليلات، تم استخدام عدة طرق MR تكميلية، بما في ذلك الوزن العكسي للتباين (IVW)²⁴، وانحدار MR-Egger²⁵، ومقدر الوسيط المرجح (WME)²⁶، والتقدير البسيط القائم على الوضع²⁷، والتقدير الموزون القائم على الوضع. من بين هذه المواد، تم تصنيف IVW كنهج تحليلي أساسي، مع دلالة إحصائية تعرف ب P < 0.05. تم اختيار طريقة IVW كمقدر رئيسي للرنين المغناطيسي بسبب توازنها الأمثل بين الدقة وافتراض توازن التنوع المتعدد الحيوي. تعزز طريقة IVW الدقة من خلال تخصيص وزن أكبر للنقاط العصبية ذات التباينات الأصغر، مما ينتج تقديرات سببية أكثر موثوقية. تم استخدام انحدار MR-Egger لتقييم التنوع البصري، وهي عملية تؤثر فيها الجينات على عدة أنماط ظاهرية. إذا أشار الاعتراض إلى عدم وجود تعدد أفقي كبير (P > 0.05)، فإن هذا النهج جمع بين تقييم الاعتراض لتحديد التعدد الحيوي. تم تقييم التباين باستخدام إحصائية Q لطريقتي MR-Egger وIVW، التي تقيس مدى تأثير التنوع الجيني على النمط الظاهري، إذا كان P > 0.05 يشير إلى عدم وجود تباين ذي دلالة في تأثيرات التنوع الجيني. تم تطبيق عتبات معدلة ببونفيروني لأخذ 731 نمطا مناعيا (P < 6.84 × 10⁻⁵) و1,400 مستقلب (P < 3.57 × 10⁻⁵). نجت النتائج المهمة من التصحيح ما لم يذكر خلاف ذلك. بالإضافة إلى ذلك، تم تقييم السببية العكسية باستخدام نفس طريقة التصوير بالرنين المغناطيسي للتحقيق فيما إذا كانت خصائص الخلايا المناعية متأثرة بالعلاج الهرموني. في دراسة الرنين المغناطيسي العكسي، تم اعتبار الهرمون عامل التعرض وتم النظر في خصائص الخلايا المناعية المختلفة كنتيجة لذلك.

في هذه الدراسة، أجري تحليل الوساطة باستخدام إطار عمل من خطوتين للرنين المغناطيسي لاستكشاف ما إذا كانت مستقلبات البلازما تعمل كوسيط في المسار السببي الذي يربط الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية بالعلاج الهرموني. يسمح هذا النهج بتقسيم التأثير السببي الكلي لأنماط الخلايا المناعية على العلاج الهرموني إلى تأثير مباشر وتأثير غير مباشر ينتقل عبر الوسطاء الأيضيين المحددين. تم تقدير التأثير الكلي لخلايا المناعة على العلاج الهرموني أولا، تلاه تأثير الخلايا المناعية على المستقلبات (β1)، وتأثير المستقلبات على العلاج الهرموني (β2)، وتأثير الوسيط (β1*β2)، مع حساب التأثير المباشر كتأثير كلي ناقص تأثير الوسيط. التأثير الكلي (β_{الإجمالي}) = التأثير المباشر (β_{المباشر}) + التأثير غير المباشر (β_{غير المباشر})؛ التأثير غير المباشر = β1 × β2؛ النسبة الوسيطة (٪) = (β1 × β2)/β × 100٪، حيث β1 هو التأثير السببي لنمط الخلية المناعية على استقلاب البلازما، وβ2 هو التأثير السببي لاستقلاب البلازما على الهرمون. تم استخدام طريقة دلتا لتقدير فترات ثقة بنسبة 95٪ للتأثير غير المباشر. علاوة على ذلك، أجري تحليل بالرنين المغناطيسي الوسيط العكسي لدراسة التأثيرات السببية للهرمون الهرموني على المستقلبات والمستقلبات على الخلايا المناعية، بهدف تعزيز نتائج التصوير الأمامي وتعزيز موثوقية الاستنتاج السببي. تم إجراء جميع التحليلات بواسطة بيئة حوسبة إحصائية وحزم برمجيات متعلقة بالرنين المغناطيسي ذات الصلة، والتي تم إدراجها في جدول المواد.

CD3⁺CD4⁺CD25⁺CD39⁺ كشف Treg

تم خلط 50 ميكرولتر من الدم الكامل المضاد للتخثر جيدا في أنبوب اختبار يحتوي على 10 ميكرولتر لكل من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المستهدفة CD3 وCD4 وCD25 وCD39. تم حماية الخليط من الضوء والحفاظ عليه في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك، أضيف 2 مل من محلول FACS المخفف 1:10. تم حضن الأنبوب لمدة 10 دقائق إضافية في درجة حرارة الغرفة أثناء حمايته من الضوء أثناء التحلل. تم طرد الأنبوب بقوة ~300 x g لمدة 5 دقائق، وتمت إزالة المادة الفائقة. بعد إضافة 2 مل من محلول الفوسفات (PBS)، تم طرد الأنبوب مرة أخرى عند ~300 × جرام لمدة 5 دقائق. تمت إزالة المادة الفائقة، وأضيف 500 ميكرولتر PBS للكشف. تم إجراء الكشف باستخدام مقياس تدفق متعدد الليزر، وتم تحليله بواسطة برنامج الاقتناء والتحليل المصاحب للحصول على نسبة CD3⁺CD4⁺CD25⁺Tregs والمجموعة الفرعية التي تعبر عن CD39 (^CD3+CD4⁺CD25⁺CD39⁺Tregs).

قياس مستويات إيزوفاليريلكارنيتين (C5)

تم الحصول على بيانات مستويات C5 لدى المرضى من قسم المختبر السريري في مستشفى جامعة منغوليا الداخلية الطبية. تم قياس C5 بشكل خاص كجزء من تحليل الكروماتوغرافيا السائلة الروتينية – مطيافية الكتلة التاثنية (LC–MS/MS)، وفقا لإجراءات مختبرية موحدة وبروتوكولات مراقبة الجودة.

التحليل الإحصائي

تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام بيئة برمجية إحصائية. تمت مقارنة المتغيرات المستمرة باستخدام اختبار t للطالب للبيانات الموزعة بشكل طبيعي أو اختبار ويلكوكسون لجمع الرتبة للبيانات غير الموزعة بشكل طبيعي. تم تحليل المتغيرات التصنيفية باستخدام اختبار كاي-تربيع. تم استخدام تحليل الارتباط ببيرسون لإجراء تحليل ارتباط. تم اعتبار قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

التأثيرات السببية الجينية لأنماط الخلايا المناعية على العلاج الهرموني

بعد استبعاد العوامل المسببة المحتملة وغياب التكاثر المتعدد الأفقي (P > 0.05)، أجري تحليل بالرنين المغناطيسي من عينتين لتقييم التأثيرات السببية لأنماط الخلايا المناعية على خطر الإصابة بالعلاج الهرموتي. لكل نمط ظاهري لخلايا المناعة يستخدم كتعرض، تم حساب إحصائية F لتقييم قوة المتغيرات الأداتية. جميع الأجهزة تجاوزت العتبة التقليدية F > 10، مما يشير إلى انحياز ضعيف أدنى للجهاز. تم توفير إحصائيات F مفصلة للصفات المناعية الرئيسية التي نوقشت في النص الرئيسي في الجدول التكميلي 2. في المجمل، أظهرت 32 نمطا ظاهريا مرتبطا بالمناعة ارتباطات ذات دلالة مع خطر الهرمون (P < 0.05) (الشكل 1). وقد دعمت متانة هذه النتائج تحليلات مخطط التشتت (الشكل التكميلي 2A,B) وتحليلات الحساسية باستخدام نهج ترك واحد خارج (الشكل الإضافي 3A,B).

من بين النتائج الأساسية، أظهر النمط الظاهري للتريج هو الأكثر انتشارا، حيث أفرز اليوم الثالث على CD39+ تريغ (OR = 1.063؛ 95٪ CI: 1.023–1.105؛ P = 0.002) ونسبة Treg المنشطة ل CD39+ (OR = 1.081؛ فترة الثقة 95٪: 1.008–1.161؛ P = 0.030) تظهر كميزات رئيسية مرتبطة بالمخاطر تم إعطاؤها أولوية لاحقا لتحليل الوساطة. في مراحل نضج الخلايا التائية، أظهر اليوم الثالث على CM CD8br أكبر حجم تأثير بين السمات المرتبطة بالمخاطر (OR = 1.094؛ 95٪ CI: 1.040–1.150؛ P < 0.001)، بينما أظهر TD DN (CD4⁻CD8⁻) AC ارتباط وقائي ملحوظ (OR = 0.930؛ فترة الثقة 95٪: 0.881–0.982؛ P = 0.009). بين الأنماط الظاهرية لخلايا B، أظهرت مجموعات خلايا النخاع المعبر عن HLA-DR بشكل متسق تأثيرات تزيد من المخاطر، حيث وصل HLA DR على CD33dim HLA DR+ CD11b⁻ إلى OR = 1.095 (فترة الثقة 95٪: 1.032–1.162؛ P = 0.003). تلخص النتائج الكاملة عبر جميع الفئات الست لخلايا المناعة: مراحل نضج الخلايا التائية، ومرحلة نضج الخلايا التائية، وأنماط TBNK، والخلية الأحادية، وخلايا B، والخلايا النقاعية في الشكل 1.

وقد أكدت تحليلات الحساسية صحة النتائج بشكل أكبر. لم يتم اكتشاف دليل كبير على التباين والتعدد البصري الأفقي بناء على التقييمات الإحصائية ذات الصلة (الجدول التكميلي 3 والجدول التكميلي 4). وقد تم تأكيد هذه النتائج من خلال تحليل "ترك واحد خارج".

التأثيرات السببية لعلاج الهرمون على الخلايا المناعية

كشفت النتائج أن الهرمون مرتبط سببيا إيجابيا بميزتين مناعيتين: خلية T التنظيمية CD4 المفرزة (1.143: 1.023-1.277؛ P = 0.018) والخلايا المثبطة المشتقة من النخاع الأحادية الخلية (1.373: 1.058-1.782؛ P = 0.017). وعلى النقيض من ذلك، كان الهرمون مرتبطا سلبا سببيا بأربع سمات مناعية: تنشيط خلايا تائية تنظيمية CD4 (0.818: 0.679-0.987؛ P = 0.036)، خلية T التنظيمية المنشطة CD4+ (0.790: 0.676-0.924؛ P = 0.003)، خلية T التنظيمية المنشطة والراحة، CD4 (0.871: 0.780-0.974؛ P = 0.015) وخلية T CD25++ CD4+ (0.855: 0.747-0.980؛ P = 0.017) (الشكل 2). تشير هذه النتائج إلى علاقة متبادلة بين حالات تنشيط الهرمون الهرموني والتريج، والتي قد تعكس إعادة تشكيل المناعة المدفوعة بالأمراض. أكدت مخططات التشتت (الشكل التكميلي 4) وطريقة "ترك واحد خارج" (الشكل الإضافي 5) استقرار النتائج. كما أكدت تحليلات الحساسية النتائج أيضا. تم تأكيد قوة هذه النتائج من خلال تقييمات التباين والتعددية الأفقية (الجدول التكميلي 5 والجدول التكميلي 6). تدعم هذه الاستنتاجات تحليل "اترك الشخص الخارج".

التأثيرات السببية الجينية لمستقلبات البلازما على العلاج الهرموني

بعد اختيار المتغيرات الأداتية المناسبة واستبعاد اختلالات السلاسل والأدوات الضعيفة، تم تحديد ما مجموعه 34,843 SNP مرتبط بمستقلبات البلازما، مع وصول أقل إحصائية ل F إلى 19.50 (الجدول التكميلي 7). باستخدام طريقة IVW، وجد أن 9 مستقلبات بلازما مرتبطة سببيا بالهرمون. من بين هذه المواد، ارتبطت 4 مستقلبات إيجابيا بزيادة خطر الإصابة بالعلاج الهرموتي: نسبة الجلوكوز إلى المالتوز (1.195: 1.082-1.319؛ P < 0.001)، حمض التوروكوليك (1.190: 1.073-1.321؛ P = 0.001)، 5-هيدروكسي ميثيل-2-فورويلكارنيتين (1.127: 1.046-1.215؛ P = 0.002)، وC5 (1.120: 1.032-1.215؛ P = 0.006) (الجدول 1).

وعلى العكس، قد ترتبط 5 مستقلبات سلبية بخطر الإصابة بالهرموث، بما في ذلك إرغوثيونين (0.958: 0.927-0.990؛ P = 0.010)، نسبة الكارنيتين إلى البروبيونيل كارنيتين (C3) (0.895: 0.825-0.970؛ P = 0.007)، نسبة الأدينوزين 5'-ديفوسفات (ADP) إلى N-أستيل نورامينات (0.890: 0.823-0.963؛ P = 0.004)، نسبة الأرجينين إلى الجلوتامات (0.882: 0.802-0.968؛ P = 0.009)، و1-(1-إنيل-بالميتويل)-2-لينولويل-GPE (p-16:0/18:2) (0.873: 0.798-0.955؛ P = 0.003).

كما أكدت تحليلات الحساسية النتائج أيضا. تم تأكيد قوة هذه النتائج من خلال تقييمات التباين والتعددية الأفقية (الجدول التكميلي 8 والجدول التكميلي 9). تدعم هذه الاستنتاجات تحليل "اترك الشخص الخارج".

التوسط في خطر الهرمون المناعي بواسطة مستقلبات البلازما

استنادا إلى الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية ومستقلبات البلازما التي تم تحديدها سابقا، تم تطبيق استراتيجية تصوير بالرنين المغناطيسي من عينتين لتقدير التأثيرات الوسيطة المحتملة. في الخطوة الأولى، أجريت تحليلات الرنين المغناطيسي باستخدام 32 نمطا ظاهريا لخلايا المناعة كتعرض و9 مستقلبات بلازما كنتائج، كاشفة عن 12 رابطا سببيا ذا دلالة تشمل 10 أنماط ظاهرية لخلايا المناعة و8 مستقلبات بلازما، مع تقديرات تأثير مقابلة β1 من الخلايا المناعية إلى المستقلبات. من بين هذه العلاقات، تم تحديد الارتباط الأكثر أهمية بين اليوم الثالث على خلايا تريغ المفرزة CD39+ ومستويات C5 (1.050: 1.016-1.085؛ P = 0.004). في الخطوة الثانية، تم التعامل مع C5 كتعرض وHT كنتيجة. تم إجراء تحليلات بالرنين المغناطيسي، بما في ذلك اكتشاف الشاذ عن MR-PRESSO وتقييمات للتغاير والتعدد الأفقي. لم يتم اكتشاف أي SNPs شاذة أو دليل على التباين أو التنوع المتعدد (الجدول 2)، مما أتاح لنا تقدير التأثير السببي من استقلاب البلازما إلى HT (β2) (الشكل التكميلي 6).

في الخطوة النهائية من تحليل الرنين المغناطيسي، أجريت تحليلات وساطة لتوضيح ما إذا كان التأثير السببي لأنماط الخلايا المناعية على الهرمون يتم بواسطة مستقلبات البلازما. أشارت النتائج إلى أن ارتفاع مستويات C5 عمل كوسيط في المسار الذي يربط CD3 على خلايا Treg المفرزة CD39+ بخطر أعلى للإصابة بالعلاج الهرموني (الشكل التكميلي 7 والشكل 3). أظهرت اختبارات اكتشاف الشاذة MR-PRESSO، والتباين، والتعدد البصري عدم وجود نقاط SNP متحيزة ولا علامات على التباين أو التنوع الأفقي (الجدول 3، الجدول التكميلي 10، والجدول التكميلي 11). من بينهم، كانت نسبة الوسيط في مستويات C5 هي 8.89٪ (من 2.34٪ إلى 15.4٪) (P = 0.008). وأخيرا، أجريت تحليلات MR بالوساطة العكسية لاختبار افتراضات الاتجاه بدقة. بالنسبة للمستقلبات إلى الخلايا المناعية، لم يظهر التصوير العكسي للرنين المغناطيسي (مستويات C5 إلى CD3 على CD39+ الذي يفرز Treg) عدم وجود تأثيرات سببية ذات دلالة إحصائية (IVW P > 0.05 بعد تصحيح بونفيروني)، مما يدعم أحادية الاتجاه (الجدول 4). بالنسبة للعلاج الهرموني إلى المستقلبات، لم يظهر التصوير العكسي للرنين المغناطيسي (مستويات من الهرموني إلى C5) عن عدم وجود ارتباطات سببية (IVW P > 0.05 بعد تصحيح بونفيروني)، مما يدعم الاتجاهية المفترض (الجدول 5). نظرا للتأثير الكلي المتواضع وغياب الأدلة المتبادلة في الرنين المغناطيسي ثنائي الاتجاه، يجب اعتبار هذه النتائج الاستكشافية.

اختبار قياس تدفق الخلايا CD3⁺CD4⁺CD25⁺CD39⁺ كشف Treg

للتحقق من نتائج تحليل الأيضات، تم إجراء تحقق تجريبي في المختبر لتقييم خصائص التعبير لتريغ CD39⁺ والبلازما C5. تم استخدام قياس تدفق الخلايا لقياس خلايا التريج (CD3⁺CD4⁺CD25⁺) ومجموعاتها الفرعية CD39⁺ (CD3⁺CD4⁺CD25⁺CD39⁺) في الدم المحيطي من مرضى HT والأشخاص الأصحاء الضابطين. كما هو موضح في الشكل 4A–C، كانت كل من خلايا التريج (CD3⁺CD4⁺CD25⁺) وCD39⁺ Treg مرتفعة بشكل ملحوظ لدى مرضى العلاج الهرموني مقارنة بالأفراد الأصحاء (P < 0.001). أظهر التحليل المستهدف للتمثيل الغذائي بالبلازما باستخدام مطيافية الكتلة المتتالية أن مستويات C5 كانت أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة الهرمون (P < 0.001، الشكل 4D). بالإضافة إلى ذلك، كشف تحليل الارتباط من بيرسون عن ارتباط إيجابي بين مستويات C5 في البلازما وتكرار مجموعة CD39⁺Treg (الشكل 4E)، متوافقا مع المسار المفترض CD39⁺Treg-C5-HT الذي حدده MR. ومع ذلك، فإن التصميم المقطع العرضي وحجم العينة الصغير يمنعان الاستنتاج السببي من هذه البيانات وحدها.

توفر البيانات:

تم الحصول على إحصائيات ملخصة دراسة الارتباط الجينومي (GWAS) لالتهاب الغدة الدرقية لهاشيموتو من كتالوج GWAS (ebi-a-GCST90018855; https://gwas.mrcieu.ac.uk/). تم استرجاع إحصائيات ملخصة لصفات الخلايا المناعية من فهرس GWAS (ebi-a-GCST90001391 إلى ebi-a-GCST90002121؛ https://www.ebi.ac.uk/gwas/). تم الحصول على بيانات GWAS لمستقلبات البلازما من كتالوج GWAS (GCST90199621-GCST90201020؛ https://www.ebi.ac.uk/gwas/studies/GCST90199621-90201020). البيانات الداعمة لنتائج هذه الدراسة مقدمة في الملف التكميلي 1.

الشكل 1: رسم الغابات يوضح التأثيرات السببية لصفات الخلايا المناعية على التهاب الغدة الدرقية الهاشيموتو. مخطط الغابة يلخص التأثيرات السببية لجميع صفات الخلايا المناعية التي تم تقييمها في هذه الدراسة على التهاب الغدة الدرقية الهاشيموتو (HT). الاختصارات: nsnp، عدد تعدد أشكال النيوكليوتيدات الأحادية (SNPs); pval، قيمة P؛ OR، نسبة الاحتمالات؛ CI، فاصل الثقة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 2: مخطط الغابة يوضح التأثيرات السببية لالتهاب الغدة الدرقية الهاشيموتو على الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية. مخطط فورست يلخص التأثيرات السببية لعلاج الهرمون على أنماط خلايا المناعة المختلفة. الاختصارات: nsnp، عدد SNPs؛ pval، قيمة P؛ OR، نسبة الاحتمالات؛ CI، فاصل الثقة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 3: رسم الغابات يوضح تأثير الوساطة في إيزوفاليريلكارنيتين البلازما (C5) بين CD39+ والتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. مخطط الغابة يلخص التأثيرات السببية للبلازما C5 التي تتوسط العلاقة بين CD39+ وHT. الاختصارات: OR، نسبة الأرجحية؛ CI، فاصل الثقة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 4: تعبير عن خلايا T التنظيمية CD39+ ومستويات إيزوفاليريلكارنيتين (C5) في البلازما لدى مرضى التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. (أ) استراتيجية بوابات التدفق الخلوي للمنظمات T (Treg؛ خلايا CD3+CD4+CD25+) وخلايا Treg CD39+. (ب) إجمالي مستويات خلايا التريج. (C) مستويات خلايا Treg CD39+. (د) مستويات إيزوفاليريلكارنيتين (C5) في البلازما المقاسة بواسطة مطيافية الكتلة المتتالية. (ه) تحليل الارتباط من بيرسون بين مستويات إيزوفاليريلكارنيتين (C5) في البلازما ونسبة خلايا CD39+ Treg. الاختصارات: SSC-A، منطقة تشتت جانبية؛ FSC-A، منطقة التشتت الأمامية؛ FSC-H، ارتفاع التشتت الأمامي. P < 0.001 مقابل الضوابط الصحية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الجدول 1: التأثيرات السببية لتسعة مستقلبات بلازما مرتبطة بشكل كبير على التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو.  يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول 2: التأثير السببي لمستويات إيزوفاليريل كارنيتين (C5) على التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو (β₂). يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول 3: التأثير السببي لخلايا T التنظيمية CD3+CD39+ على التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول 4: التأثير السببي لمستويات إيزوفاليريلكارنيتين (C5) على خلايا T التنظيمية CD3+CD39+. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول 5: التأثير السببي لالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو على مستويات إيزوفاليريل كارنيتين (C5). يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل الإضافي 1: تصميم الدراسة وسير العمل التحليلي. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل الإضافي 2: مخططات التشتت التي تظهر تقديرات سببية للعلاقات بين 32 صفة من الخلايا المناعية والتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل الإضافي 3: تحليلات "اترك واحدا خارجا" تقيم متانة التأثيرات السببية ل 32 صفة مناعية على التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل الإضافي 4: مخططات التشتت التي تظهر التأثيرات السببية لالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو على ستة أنماط خلايا مناعية. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل التكميلي 5: تحليلات "اترك واحدة خارجية" تقيم متانة التأثيرات السببية لالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو على ستة أنماط خلايا مناعية. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل الإضافي 6: العلاقة السببية بين مستويات إيزوفاليريل كارنيتين (C5) وخطر التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. (أ) رسم الغابات يوضح التأثير السببي لمستويات إيزوفاليريلكارنيتين (C5) على خطر الهرمون (β₂). (ب) مخطط التشتت الذي يوضح تقدير التأثير السببي لكل SNP على مخاطر HT. (ج) مخطط القمع الذي يقيم تباين تقديرات العشوائية المندلية (MR) لتأثير مستويات C5 على خطر الهرمون. (د) تحليل ترك شخص واحد خارج يظهر أن تقدير المخاطر الكلي لم يتأثر بشكل جوهري بأي SNP فردي. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل التكميلي 7: العلاقة السببية بين خلايا T التنظيمية CD3+CD39+ وخطر التهاب الغدة الدرقية في هاشيموتو. (أ) مخطط الغابة الذي يوضح التأثير السببي الكلي لخلايا التيموت التنظيمية CD3+CD39+ على مخاطر الهرموث. (ب) مخطط التشتت الذي يوضح تقدير التأثير السببي لكل SNP على مخاطر HT. (ج) مخطط القمع يقيم تباين تقديرات الرنين المغناطيسي لتأثير الخلايا التائية التنظيمية CD3+CD39+ على مخاطر الهرمون. (د) تحليل ترك شخص واحد خارج يظهر أن تقدير المخاطر الكلي لم يتأثر بشكل جوهري بأي SNP فردي. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 1: خصائص مجموعات بيانات دراسات الارتباط على مستوى الجينوم لمستقلبات البلازما المستخدمة في تحليل العشوائية المندلية.  يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 2: خصائص المتغيرات الأداتية (SNPs) وإحصائيات F للأنماط الظاهرية الرئيسية لخلايا المناعة المستخدمة كتعرضات في تحليل العشوائية المندلية. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 3: تقييم التنوع العددي لتحليلات العشوائية المندلية لأنماط الخلايا المناعية على التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 4: تقييم التغاير لتحليلات مندلية العشوائية لأنماط الخلايا المناعية على التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 5: تقييم التنوع المتعدد لتحليلات العشوائية المندلية لالتهاب الغدة الدرقية في هاشيموتو على الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 6: تقييم التغاير لتحليلات العشوائية المندلية لالتهاب الغدة الدرقية في هاشيموتو على الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 7: تعدد أشكال النيوكليوتيدات الأحادي المرتبطة بمستقلبات البلازما. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 8: تقييم التنوع العددي لتحليلات العشوائية المندلية لمستقلبات البلازما في التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 9: تقييم التغاير لتحليلات مندلية العشوائية لمستقلبات البلازما في التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 10: تقييم التنوع الحيوي لتحليلات الوساطة لعلاقات النمط الظاهري للخلايا المناعية–التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو بواسطة مستقلبات البلازما. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول التكميلي 11: تقييم التغاير لتحليلات الوساطة لعلاقات النمط الظاهري للخلايا المناعية–التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو بواسطة مستقلبات البلازما. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الملف التكميلي 1: بيانات تدعم نتائج هذه الدراسة. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

المناقشة

في هذه الدراسة، تم تطبيق العشوائية المندلية لدراسة التأثير السببي للأنماط الظاهرية للخلايا المناعية على التهاب الغدة الدرقية الهاشيموتو (HT) واستكشاف الدور الوسيط المحتمل لمستقلبات البلازما. وجد أن اثنين وثلاثين نمطا مناعيا مرتبطا بخطر الهرمون، بما في ذلك الخلايا التغصنية، والخلايا التائية التنظيمية، ومراحل نضج الخلايا التائية، وخلايا B، وخلايا النخاع، مع تأثيرات تعزز المخاطر وتغطي الحماية. علاوة على ذلك، أظهرت 9 مستقلبات بلازما روابط سببية مع الهرمون، ولاحظت أيضا أن C5 قد يتوسط جزئيا في الارتباط بين تعبير CD3 على خلايا Treg التي تفرز CD39⁺ والعلاج الهرموني. يجب تفسير هذه النتائج كدليل على تأثيرات سببية محتملة مستنتجة من الأدوات الجينية، وليس تأكيدا ميكانيكيا مباشرا.

من بين الأنماط الظاهرية لداء الكربون الوضوح، ارتبط CD62L- بلازمايتويا DC ٪DC وHLA DR على DC البلازموسيتويدي بزيادة خطر الإصابة بالعلاج الهرموتي، بينما كان CCR2 على CD62L+ الميلويدي DC، وCD39+ على Treg المنشط بنسبة Treg، وCD62L على الوحيدة. تقدم الروابط المحددة بين الأنماط الظاهرية الخاصة للخلايا المناعية والعلاج الهرموني رؤى جديدة حول مسببات المرض. على سبيل المثال، وجد أن خطر الهرمون مرتبط بخصائص مثل HLA DR على DC البلازمامي وCD62L-بلازمايتويد، مما يشير إلى أن هذه الأنواع قد تكون ضرورية لبدء أو الحفاظ على التفاعلات المناعية الذاتية ضد الغدة الدرقية ²⁸. أظهرت العديد من الدراسات أن خلايا ظهارة الغدة الدرقية HLA DR+ تحفز الاستجابات المناعية داخل الغدة الدرقية لدى مرضى HT^{28، 29، 30، 31}. كشفت هذه الدراسة عن علاقة بين HLA DR على البلازماسيتويد وزيادة خطر الإصابة بالعلاج الهرموني، مما يشير إلى أن HLA DR على البلازماسيتويد قد يكون عاملا سببيا في الهرمون. وقد حددت دراسات سابقة جينات محورية ذات دقة تشخيصية عالية لعلاج الهرمون باستخدام طرق المعلوماتية الحيوية، وأظهرت الفحوصات المناعية أن تسرب الخلايا الأحادية يرتبط سلبا بالتعبير الجيني المحوري. ^أفاد شو وآخرون أن مستويات أعلى من تعبير CD62L على الخلايا الأحادية ارتبطت بانخفاض خطر الإصابة بالعلاج الهرموني، بما يتوافق مع النتائج الحالية. تحديدا، ارتبطت الأنماط الظاهرية مثل CCR2 على خلايا الغصن النخاعي CD62L+ وCD62L على الخلايا الأحادية بتأثير وقائي، مما يشير إلى أدوار تنظيمية أو مثبطة محتملة قد تخفف من المناعة الذاتية للغدة الدرقية.

تشير العديد من الأدلة إلى الدور الحاسم الذي يلعبه توازن خلايا Th17 وTreg في تقدم HT^33,34. حدد هذا التحقيق وجود علاقة سببية بين الهرمون وعدة خصائص تريغ. على وجه التحديد، كان خطر الإصابة بالعلاج الهرموني مرتبطا عكسيا بتعبير CD25 على خلايا T التنظيمية الراحة، بينما لوحظ ارتفاع نسبة Th17/Treg مع تقدم HT³⁵. تبرز الوظيفة المعقدة لخلايا الترا التنظيمية في الحفاظ على التحمل المناعي وتجنب اضطرابات المناعة الذاتية من خلال الارتباطات القوية بين أنماط Treg المختلفة مع ارتفاع وانخفاض خطر الإصابة بالهرمون. خلايا التريج مزدوجة، حيث قد تؤدي بعض المجموعات الفرعية إلى تفاقم الاستجابات المناعية الذاتية بينما تقوم أخرى بكبتها. وهذا يبرز الحاجة إلى مزيد من الأبحاث لتحديد أدوارهم بدقة في HT.

علاوة على ذلك، ضمن مراحل نضج الخلايا التائية، ومجموعات TBNK، والخلية الأحادية، ومجموعات الخلايا البائية، لوحظ نمط ثابت حيث تم ربط بعض الأنماط المناعية بخطر أعلى للإصابة بالعلاج الهرموتي، بينما بدا أن البعض الآخر يمنح تأثيرا وقائيا 32,36,37,38. يبرز هذا التورط المعقد لخلايا المناعة في تطور الهرمون. كما أجري تحليل بالرنين المغناطيسي العكسي لدراسة تأثير الهرمون على خصائص الخلايا المناعية. كشف التحليل أن الهرموني مرتبط بزيادة مستويات بعض الأنماط الظاهرية لخلايا المناعة، مثل إفراز خلايا تائية منظمة CD4 والخلايا التائية أحادية الخلية، وانخفاض مستويات أخرى، لا سيما الخلايا التائية المنظمة ل CD4 المنشطة وخلايا CD25+ CD4+ التائية.

ومن الجدير بالذكر أن تحليل الوساطة يبرز الدور السببي لمستويات C5 في التقدم من الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية إلى تطور الهرمونيتي. أظهرت دراسات سابقة أن مستويات C5 في البلازما تساهم في تطور الاعتلال العصبي المحيطي السكري³⁹ ، وهي مرتبطة بكل من ساركوبينيا وانخفاض مؤشر العضلات الهيكلية⁴⁰. بالإضافة إلى ذلك، من حيث أيض الدهون، لوحظت تركيزات أقل من إيزوفاليريلكارنيتين لدى الأفراد الذين لديهم نمط ظاهري هشاشة⁴¹. تشير نسبة الوساطة البالغة 8.89٪ التي لوحظت في هذه الدراسة إلى أن C5 قد يمثل رابطا ميكانيكيا مفترضا في مسار Treg–HT بين CD39⁺ ، ويستحق المزيد من البحث كمؤشر حيوي مرشح وهدف علاجي في الدراسات التجريبية والسريرية المستقبلية.

بينما توفر هذه الدراسة رؤى قيمة، هناك بعض القيود التي تستحق النظر. أولا، يعتمد نهج التصوير المغناطيسي على افتراض أن المتغيرات الآلية المستخدمة صحيحة وغير متأثرة بعوامل التداخل أو التنوع ^42,43,44. ثانيا، استندت تحليلات الرنين المغناطيسي الأولية إلى بيانات GWAS من أصول أوروبية، وتم اشتقاق GWAS للخلايا المناعية من مجتمع مؤسس سرديني قد يحد من بنية عدم التوازن المرتبطة المميزة لديهم من قابلية التعميم؛ هناك حاجة إلى دراسات مستقبلية على مجموعات متنوعة غير أوروبية لتأكيد التطبيق حسب كل سكان. ثالثا، حدد تحليل الوساطة C5 كعامل قد يمثل رابطا استكشافيا. من الضروري إجراء دراسات مستقبلية تشمل مجموعات أكثر تنوعا لتأكيد هذه الارتباطات واستكشاف التأثيرات المحتملة الخاصة بالسكان. وأخيرا، قدمت تجارب قياس تدفق الخلايا والتحقق من صحة البلازما أدلة داعمة لنتائج الرنين المغناطيسي؛ ومع ذلك، كان حجم العينة محدودا نسبيا. هناك حاجة إلى دراسات تجريبية وسريرية أكبر للتحقق من هذه التفاعلات المناعية الأيضية واستكشاف ما إذا كان استهداف خلايا CD39⁺Treg أو المسارات الأيضية المرتبطة بها قد يوفر فرصا علاجية جديدة للعلاج الهرموني.

الخاتمة

في الختام، تقدم هذه الدراسة رؤى جديدة حول العلاقات السببية بين الأنماط الظاهرية للخلايا المناعية، وخاصة CD39⁺ Tregs، وهرمون، مع تحديد C5 كوسيط مرشح في هذا المسار بناء على تحليل الوساطة الاستكشافي. تكشف هذه النتائج عن محور مناعي أيضي جديد، يقدم رؤى ميكانيكية وأهدافا محتملة لتطوير المؤشرات الحيوية والتدخل العلاجي في أمراض الغدة الدرقية المناعية الذاتية. يمكن للدراسات المستقبلية مع مجموعات مستقبلية أكبر أن تؤكد صحة هذه النتائج بشكل أكبر وتستكشف القيمة التطبيقية المحتملة للتعديل المناعي في علاج العلاج بالهرموث.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
CD25-PE monoclonal antibody	BD Biosciences	340938	Flow cytometry antibody for human CD25 detection
CD39-PE-Cy7 monoclonal antibody	BD Biosciences	567526	Flow cytometry antibody for human CD39 detection
CD4-FITC monoclonal antibody	BD Biosciences	340133	Flow cytometry antibody for human CD4 detection
D3-APC monoclonal antibody	BD Biosciences	555333	Flow cytometry antibody for human CD3 detection
FACS Lysing Solution	BD Biosciences	349202	Red blood cell lysis buffer for flow cytometry sample preparation
Flow cytometer	BD Biosciences	FACSCanto II	Multicolor flow cytometry instrument for immunophenotyping
Flow cytometry analysis software (FACSDiva)	BD Biosciences	—	Software for acquisition and analysis of flow cytometry data
gwasglue package	R package	—	Harmonization of GWAS datasets
ieugwasr package	R package	—	Interface to IEU GWAS database
Liquid chromatography–tandem mass spectrometry system (LC–MS/MS)	Thermo Fisher Scientific	—	Used for quantification of plasma isovalerylcarnitine (C5)
Phosphate-buffered saline (PBS)	Thermo Fisher Scientific	AM9624	Sterile PBS, pH 7.4, used for washing and resuspension
R software	Open source software	Version 4.4.1	Statistical analysis environment
TwoSampleMR package	R package	—	Mendelian randomization analysis package
VariantAnnotation package	Bioconductor	—	Variant data annotation