يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
* These authors contributed equally
أسست هذه الدراسة نموذجا جديدا للبيجل في الجسم الحي لقصر الكلى المتوسط المزمن مع الرجفان الأذيني عبر الانصمام الكلوي عبر القسطرة وتسريع الإيقاع الأذيني، وأظهرت أن هذا المزيج أضعف بشكل كبير وظيفة بطانة الأذين الأيسر، وزاد من نشاط التخثر، ورفع خطر الجلطة من خلال المسارات الالتهابية والمسارات التي تتوسط RAAS.
يمثل التزامن بين الرجفان الأذيني (AF) وقصور الكلى (RI) ظاهرة سريرية معقدة ذات انتشار عالي. بحثت هذه الدراسة في تأثير التهاب الريثيوم المزمن المتوسط مع الرجفان الأذيني على وظيفة بطانة الأذين الأيسر في كلاب البيجل. تم تحفيز التهاب المفاجئ المزمن عن طريق الانصمام عبر القسطرة في الفرع الرئيسي من الشريان الكلوي الأيسر باستخدام حبيبات الإسفنج الهلامية، مع الحفاظ على الحيوانات لمدة 3 أشهر للسماح بتطور تلف الكلوية المزمن. تم تحفيز الرجاء الأذيني لاحقا بواسطة تنظيم ضربات الأذين السريع المستمر (طول الدورة الأساسية، 60 مللي ثانية؛ الجهد، 4 أضعاف عتبة الإيقاع الانبساطية؛ 180 دقيقة). تم تقييم التغيرات النسيجية باستخدام صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين. تم فحص المعايير المرتبطة بوظيفة البطانة، والتخثر، والتحلل الليفي، والالتهاب، ونشاط نظام رينين-أنجيوتنسين-ألدوستيرون (RAAS) في أنسجة البلازما والقلب باستخدام اختبار التوربينت المناعي المرتبط بالإنزيم، وتفاعل متسلسل بوليميراز كمي في الوقت الحقيقي، وإزالة الطلاء الغربي. أظهرت النتائج نجاحا في تأسيس نموذج تلف الكلى المزمن مع التهاب التهاب الكلى المتوسط، وأكد ذلك ارتفاع كبير في الكرياتينين في البلازمين، ونيتروجين اليوريا، وانخفاض في إزالة الكرياتينين. تأثرت وظيفة بطانة الأذين الأذينية اليسرى بشكل ملحوظ في كلاب البيجل التي كانت مع مزيج من RI والرجفان الأذيني، مصحوبة بتأثيرات مكثفة وانخفاض في تحلل الفيبرين. ارتفعت مؤشرات الالتهاب بعد إجراء الالتهاب المفاجئ أو تحفيز الرجفان الأذيني، وتم تعزيزها أكثر في مجموعة RI+AF المجمعة. بالإضافة إلى ذلك، ارتفع نشاط RAAS، الذي يتضح من زيادة مستويات الرينين والألدوستيرون، بعد الالتهاب الأذيني وزاد أكثر عند الجمع مع الرجفان الأذيني. باختصار، نجحت هذه الدراسة في تأسيس نموذج حيواني في الجسم الحي لالتهاب الريثيوم المزمن المتوسط مع الرجفان الأذيني في البيجل، مما أظهر أن هذا المزيج أثر بشكل كبير على وظيفة بطانة الأذين اليسرى وزيادة خطر الجلطة.
الرجفان الأذيني (AF)، وهو الشكل الأكثر شيوعا لاضطراب نظم القلب المزمن، يرتبط ارتباطا وثيقا بالنتائج السريرية غير المواتية. نظرا للخصائص المرضية الجهازية للرجفان الأذيني، غالبا ما يشارك هذا الاضطراب في تداخل فسيولوجي مرضي معقد مع مجموعة من الأمراض المصاحبة، بما في ذلك التدهور المعرفي، والاكتئاب، والانسداد الجهازي1. تم تحديد مرض الكلى المزمن (CKD) كعامل خطر مستقل لكل من تطور الرجفان الأفيني وحدوث الأحداث الجلطية الخثرية. حوالي 15٪ إلى 20٪ من المرضى الذين تم تشخيصهم بمرض الكلى المزمن يعانون من الرجفان الأذيني، بينما تتراوح نسبة المرضى الذين يتلقون علاج استبدال الكلى الذين يطورون الرجفان الأذيني بين 15٪ إلى 40٪. وفي الوقت نفسه، حوالي 30٪ إلى 60٪ من المرضى الذين تم تشخيصهم بالرجفان الأذيني يظهرون في نفس الوقت قصور كلوي خفيف إلى متوسط (RI)3. لذلك، أصبح التداخل بين الرجفان الأذيني والتهاب المفاجئ الدهني ظاهرة سريرية معقدة ذات انتشار عال بين المرضى. تزيد العلاقة ثنائية الاتجاه بين الرجفان الأذيني والتهاب الرجفان الرجيني بشكل كبير من خطر حدوث الرجفان الأذيني كما تزيد من تطور ضعف الكلى، مما يساهم في نهاية المطاف في أسوأ النتائج السريرية4.
في دراسات سابقة، غالبا ما استخدمت الفئران لتأسيس نماذج RI؛ ومع ذلك، فإن حجم قلبها الصغير يجعلها غير مناسبة للتجارب الكهربائية الفيزيولوجية القلبية. أما الكلاب، فغالبا ما تستخدم في نماذج الحيوانات متوسطة والكبيرة لمرض قصور الكلى، حيث يعد استئصال الكلى الطريقة الأساسية للنمذجة5. ومع ذلك، يرتبط هذا النهج بمعدل نجاح محدود في النمذجة. والأهم من ذلك، بما أن استئصال الكلى لا يسبب ضررا مباشرا للكلى في النسيج الكلوي، فإنه يفشل في محاكاة العمليات المرضية لقصور الكلى بشكل فعال. لذلك، فإن إنشاء نموذج حيواني مناسب مع RI وAF أمر ضروري. ومن الجدير بالذكر أن ليانغ زي وآخرون نجحوا في تأسيس نموذج RI خفيف في البيجل من خلال انصمام فروع صغيرة من الشريان الكلوي في الكلى اليسرى لمدة أسبوعين باستخدام حبيبات الإسفنج الجيلاتينية، والتي كانت مرتبطة ب AF6؛ ومع ذلك، تعتبر فترة المراقبة التي تستمر أسبوعين عموما غير كافية لمحاكاة مرض الكلى المزمن السريري، حيث أن السمات المميزة لاعتلال الكلى المزمن، بما في ذلك تصلب الكبيبات والتليف الأنبوبي التداخل النبي، تتطلب فترات طويلة من تلف الكلى المتصل بالكلى لتطور بشكل كامل في نماذج الحيوانات 7,8. هذا يبرز الحاجة إلى نموذج مزمن بفترة مراقبة أطول يعكس بشكل أكثر دقة الطبيعة التدريجية لمرض الكلى المزمن السريري.
لذلك، هدفت الدراسة الحالية إلى تأسيس نموذج حيواني للالتهاب الكلوي المزمن المتوسط مع الرجفان الأذيني من خلال إجراء انصمام عبر القسطرة للجذع الرئيسي للشريان الكلوي الأيسر في البيجل والحفاظ على الحيوانات لمدة 3 أشهر للسماح بتطور أمراض مزمنة في الكلى. بالإضافة إلى ذلك، استكشفنا سبب خلل بطانة الأذين الأيسر في ظل هذه الحالات المرضية، مختبرين فرضية أن الجمع بين التهاب بطانة الأذين الأذيني المتوسط المزمن والرجفان الأفذيني سيضعف بشكل تآزري وظيفة بطانة الأذين الأيسر من خلال زيادة الالتهاب وتنشيط RAAS، مما يزيد من خطر الجلطة خارج أي من الحالتين فقط. قد توفر هذه النتائج فهما أعمق لعلاج التهاب المفاجئ المزمن مع الرجوفان الأذيني وتضع أساسا لمزيد من الدراسات حول فوائد علاج مضادات التخثر لدى مرضى الرجوفان الأذيني والالتهاب المفاجئ (RI).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أجريت هذه الدراسة وفقا للتوصيات الواردة في دليل العناية واستخدام الحيوانات المخبرية الصادر عن المعاهد الوطنية للصحة (المنشور رقم 85-23، معدل 1996). تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية في مستشفى أنجين في بكين (الموافقة رقم 81700293). تمت مراجعة بروتوكول الدراسة والموافقة عليه من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية في مؤسستنا. تم بذل كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات وتقليل عدد الحيوانات المستخدمة في الدراسة. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. نموذج الحيوان وتصميم التجارب
2. انصمام الشريان الكلوي لتحفيز التهاب العصب المزمنة المتوسطة
تم إدخال قسطرة 5F متعددة الأغراض عبر الغلاف الشرياني وتقدمت تحت توجيه فلوروسكوبي بذراع C إلى الشريان الأبهر البطني. تم إجراء قنعة انتقائية للشريان الكلوي الأيسر، وأجري تصوير الأوعية الدموية للشريان الكلوي الأساسي عن طريق حقن 5–8 مل من وسط تباين غير أيوني بمعدل 3 مل/ث لرؤية شجرة الشريان الكلوية الكاملة. تم التحقق من تموضع القسطرة بنجاح من خلال عرض كامل الشريان الكلوي الأيسر وفروعه في الصور الوعائية.
بعد ذلك، تم تحفيز التهاب المفاجئ عن طريق القسطرة في الفرع الرئيسي من الشريان الكلوي الأيسر باستخدام حبيبات إسفنج جيلاتين ممتصة (قطرها 50 ملغ). تم تحضير حبيبات الإسفنج الجيلاتين كخليط عن طريق خلط حوالي 50 ملغ من الحبيبات مع خليط بنسبة 1:1 من وسط التباين والمحلول الملحي العادي إلى حجم إجمالي يقارب 2–3 مل. تم حقن مادة الانصمام ببطء عن طريق الحقن اليدوي عبر القسطرة لمدة تقارب 2–3 دقائق تحت مراقبة فلوروسكوبية مستمرة. تم تأكيد نجاح الانصمام من خلال إعادة تصوير الأوعية الدموية للشريان الكلوي الأيسر، الذي أظهر غياب تعتيم الشريان البعيد في الفروع المنسدلة. بعد تأكيد تصوير الأوعية، تمت إزالة القسطرة والغمد، وتم إصلاح الشريان الفخذي بخياطة بولي بروبيلين 6-0. تم إغلاق الجرح الجراحي في طبقات، وسمح للحيوانات بالتعافي تحت مراقبة دقيقة.
بالنسبة لمجموعة الضابطة ومجموعة الرجفان الأذيني (إجراء صوري)، أجريت نفس عملية القسطرة، وتم حقن كمية متساوية (2–3 مل) من المحلول الملحي الطبيعي في الشريان الكلوي الأيسر عبر القسطرة متعددة الأغراض بعد تصوير الشريان الكلوي.
3. تحفيز الرجفان الأذيني عن طريق تنظيم ضربات الأذين السريع
بعد ثلاثة أشهر من إجراء الرجوع الصناعي (أو الإجراء الوهمي)، تم تحفيز الرجفان الأذيني في مجموعة الرجفان الأذيني ومجموعة الرجفان المفرغ (RI+AF). تم تحفيز الرجفان الأذيني في إجمالي 12 كلبا بيغل (n = 6 في مجموعة AF و n = 6 في مجموعة RI+AF). بعد إعادة التخدير والوصول إلى الأوعية الدموية كما هو موضح أعلاه، تم تقطيب الوريد الفخذي الأيمن لإدخال القسطرة. تم تقديم قسطرة قطب رباعي القطب 6F (انظر جدول المواد) تحت توجيه فلوروسكوبي ووضعت على الجدار الجانبي للبذين الأيمن. تم تأكيد تحديد القسطرة الصحيح من خلال تسجيل جرائم كهربائية أذينية مميزة على القناة داخل القلب، مما أظهر انحرافات أذينية واضحة وحادة. تم تحديد عتبة الإيقاع الانبساطي عن طريق تقليل جهد خرج المحفز تدريجيا بمقدار 0.1 فولت من 5 فولت حتى ملاحظة فقدان احتجاز الأذين؛ تم تسجيل أقل جهد حقق التقاط أذيني متسق بنسبة 1:1 كعتبة الإيقاع الانبساطية. تم توصيل الإيقاع الأذيني السريع (طول الدورة الأساسي، 60 مللي ثانية، يعادل معدل إيقاع 1000 نبضة في الدقيقة؛ عرض النبضة الخارجة، 2 مللي ثانية؛ الجهد، 4 أضعاف عتبة الإيقاع الانبساطية، عادة ما يعادل 2–4 فولت) بشكل متواصل لمدة 180 دقيقة باستخدام محفز القلب لتحفيز الذكاء الاصطناعي، كما وصفسابقا 9. تم تأكيد نجاح تحفيز الأذينين من خلال ظهور فترات R-R غير منتظمة مستمرة على تخطيط القلب السطحي واستمرار الجهود الأذينية السريعة وغير المنظمة في التخطيطية داخل القلب لمدة لا تقل عن دقيقة واحدة بعد توقف قصير عن التوقف. حققت جميع كلاب البيجل ال12 (100٪) قوة قوة آذينية مستدامة عند إكمال بروتوكول الإيقاع. تراوح متوسط مدة الرجفان الأذيني المستمر بعد توقف تنظيم ضربات القلب بين 3–8 دقائق قبل التحول القلبي التلقائي إلى إيقاع الجيوب الأنفية.
من المهم ملاحظة أنه، على عكس بروتوكولات تنظيم ضربات الانفجار (عادة دفعات 3–10 ثوان) المستخدمة لتقييم قابلية الرجفان الأذيني، تم تصميم نهج الإيقاع الأذيني المستمر لمدة 180 دقيقة المستخدم في هذه الدراسة خصيصا لنمذجة الرجفان الأذيني المستمر واستثارة إعادة تشكيل جزيئية مبكرة. تم تأسيس هذا البروتوكول وتم التحقق منه بشكل واسع في أبحاث الرجفان الأنفسي للكلاب 9,10.
4. تصميم التجارب وتوزيع المجموعة
تم توزيع الحيوانات التجريبية عشوائيا إلى أربع مجموعات (n = 6 لكل مجموعة): مجموعة التحكم، مجموعة RI، مجموعة الرجفان الأذيني، ومجموعة RI مع مجموعة الرجفان الأذيني (RI+AF). خضع البيغل في مجموعة RI ومجموعة RI+AF لإجراء الانصمام الصناعي في البداية (RI)، وتلقى البيغل في مجموعة الضابطة ومجموعة الرجفان الأذينية حقنة وهمية من محلول ملحي طبيعي في الشريان الكلوي. بعد ثلاثة أشهر، تم تحفيز الرجفان الأذيني في مجموعتي الرجفان الأذيني وRI+AF كما هو موضح أعلاه. يتم عرض نظرة عامة تخطيطية على التصميم التجريبي الكامل والجدول الزمني في الشكل 1.
5. تحديد تصريح الكرياتينين
تم تحديد إزالة الكرياتينين (CCr) باستخدام طريقة إزالة الكرياتينين الداخلية لمدة 30 دقيقة11. بعد التخدير لفترة وجيزة، تم إدخال قسطرة فولي في المثانة البولية تحت ظروف معهرة، وتم تفريغ المثانة بالكامل. ثم بدأت فترة جمع البول التي تستمر 30 دقيقة، حيث يتم جمع كل البول عبر القسطرة إلى وعاء تجميع معاير. في نهاية فترة الجمع التي استمرت 30 دقيقة، تم تفريغ المثانة مرة أخرى لضمان تعافي البول الكامل. في الوقت نفسه، تم سحب عينة دم من الوريد الوداجي لتحديد الكرياتينين في البلازما. تم حساب CCr باستخدام الصيغة القياسية: CCr (mL/min/kg) = (تركيز الكرياتينين في البول × حجم البول) / (تركيز الكرياتينين في البلازما × وقت الجمع)، وتم تطبيعه مع وزن الجسم.
6. جمع عينات الأنسجة والدم
تم جمع عينات دم من الوريد الوداجي في البداية وقبل التضحية في أنابيب فاصلة المصل الخالية من EDTAو11. في النهاية، تم إعدام جميع كلاب البيغل بحقن وريدي لجرعة قاتلة من الصوديوم بنتوباربيتال بجرعة 150 ملغ/كجم قبل التعافي من التخدير. تم استخراج الكلى للفحص النسيجي. تم استخراج القلوب، وتم تشريح الزائدة الأذينية اليسرى (LAA) بعناية، وتجميدها في النيتروجين السائل خلال 5 دقائق من الاستئصال، وتخزينها عند −80 درجة مئوية حتى التحليل الجزيئي. تم اختيار LAA لتحليل الأنسجة لأنه الموقع الأكثر شيوعا لتكون الجلطة لدى مرضى الرجفان الأذيني، وبالتالي يمثل الموقع التشريحي الأكثر صلة سريريا لتقييم وظيفة البطانة وخطر الجلطة.
7. الملاحظة النسيجة
تم تثبيت أنسجة الكلى في بارافورمالديهيد متعادلة 10٪ لمدة 24 ساعة، ثم جففت عبر سلسلة إيثانول متدرجة (70٪، 80٪، 90٪، 95٪، و100٪ إيثانول، ساعة لكل منها)، وتم تطهيرها بالزيلين (تغييرين، 30 دقيقة لكل منهما)، وتم دمرها في البارافين، وقطعها إلى شرائح بسماكة 5 ميكرومتر باستخدام ميكروتوم دوار. بعد ذلك، تم تلطيخ الشرائح بطبقة HE لملاحظة التغيرات النفسية النفسية. تحديدا، تم إزالة البارافين من الأقسام في الزيلين (تغييرين، 10 دقائق لكل منهما)، وأعيد ترطيبها عبر سلسلة إيثانول متتالية، ثم صبغت بمحلول الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق، ثم تم تمايزها بحمض الهيدروكلوريك-إيثانول بنسبة 1٪ لمدة 30 ثانية، وشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة 10 دقائق، وصبغها بمحلول الإيوزين لمدة دقيقتين، ثم تجفيفها، وإزالتها، وركزت على البلسم المحايد. تم فحص المقاطع تحت مجهر ضوئي بتكبيرات 100× و400×.
8. اختبار المقاومة المناعية المرتبطة بالإنزيمات (ELISA)
تم طرد عينات الدم عند 3000 × جرام عند 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة، ثم تم جمع المادة الفائقة (البلازما) وتخزينها عند −80 درجة مئوية حتى التحليل. تم فحص مستويات الكرياتينين، النيتروجين اليوري، عامل فون ويلبراند (vWF)، الثرومبومودولين (TM)، ثنائي ميثيل الجينين غير المتماثل (ADMA)، أكسيد النيتريك (NO)، مثبط تنشيط البلازمينجين-1 (PAI-1)، منشط بلازمين للأنسجة (t-PA)، عامل نخر الورم-α (TNF-α)، بروتين C عالي الحساسية (hs-CRP)، إنترلوكين-6 (IL-6)، رينين، وألدوستيرون (ALD) باستخدام مجموعات ELISA التجارية وفقا لتعليمات الشركات المصنعة. باختصار، أضيف 100 ميكرولتر من عينة البلازما أو المعيار إلى ألواح ميكرو مغطاة بالأجسام المضادة ب 96 بئر، وحضنتها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين، وغسلت أربع مرات باستخدام مخزن الغسيل، وحضنت بأجسام مضادة للكشف البيوتينيله لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية، ثم غسلت مرة أخرى، وحضنت بتركيب ستربتافيدين-HRP مترافقة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، تلاها تطوير ركيزة TMB لمدة 15–20 دقيقة في الظلام. تم إيقاف التفاعل بمحلول توقف بسعة 50 ميكرولتر، وتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الميكرولوتين. تم فحص جميع العينات بنسخ.
9. PCR الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)
تم استخراج الحمض النووي الريبي الكلي من أنسجة LAA باستخدام كاشف تريزول، تلاها الكشف عن نقاء وتركيز الحمض النووي الريبي باستخدام مقياس طيف عند نسب امتصاص 260/280 نانومتر (النطاق المقبول 1.8–2.0). تم نسخ ما مجموعه 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي إلى حمض نووي مكمل (cDNA) باستخدام مجموعة كاشف RT من PrimeScript. تم إجراء تفاعل النسخ العكسي عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، تلاه إيقاف التشغيل عند 85 درجة مئوية لمدة 5 ثوان. ثم تم إجراء PCR الكمي في الوقت الحقيقي على نظام PCR باستخدام SYBR Green Master Mix. تكون برنامج الدورة الحرارية من إزالة الطبيعة الأولية عند 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، تلتها 40 دورة إزالة الطبيعة عند 95 درجة مئوية لمدة 10 ثوان، والتلدين/التمديد عند 60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. تم اكتشاف إشارة الفلورة في نهاية كل خطوة تمديد باستخدام قناة SYBR الخضراء. تم تحديد قيم دورة العتبة (Ct) تلقائيا بواسطة برنامج الأجهزة. تم تحديد تغيرات الطيات في مستويات mRNA باستخدام طريقة 2−ΔΔCt . كان β-أكتين يعمل كعنصر تحكم داخلي. تم فحص جميع العينات بثلاث نسخ.
10. البلوتينغ الغربي
تم استخراج البروتين الكلي من أنسجة LAA باستخدام اختبار التحليل المناعي الإشعاعي (RIPA) لمحلول تحلل (يتكون من 50 ملليمولار تريس-HCl، درجة الحموضة 7.4، 150 ملليمولار NaCl، 1٪ NP-40، 0.5٪ دي أوكسي كولات الصوديوم، 0.1٪ SDS، مع مزيج من مثبط البروتيز والفوسفاتاز؛ انظر جدول المواد). تم تحاسة المناديل على الجليد وطرد مركزها عند 12,000 × جرام عند 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة، وتم جمع المادة الفائقة. تم قياس تركيز البروتين باستخدام مجموعة اختبار بروتين BCA. بعد ذلك، تم تعريض كميات متساوية من البروتين (30 ميكروغرام لكل مسار) ل 12٪ SDS-PAGE للفصل عند 80 فولت لمدة 30 دقيقة (جل التكديس)، تليها 120 فولت لحوالي 60 دقيقة (هلام المعالج)، ثم نقلت إلى أغشية بولي فينيليدين فلورايد (PVDF) عند 300 مللي أمبير لمدة 90 دقيقة في مخزن النقل (25 ملليمول تريس، 192 ملليمولار جليسين، 20٪ ميثانول). تم حجب الأغشية بحليب خالي من الدهون بنسبة 5٪ مذاب في TBST (محلول ملحي مخزن بتريس-مع 0.1٪ Tween-20) في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين، ثم تم فحصها بأجسام مضادة أولية (انظر جدول المواد لمصادر الأجسام المضادة، أرقام الكتالوج، والتخفيفات) عند 4 درجات مئوية خلال الليل. في اليوم التالي، تم غسل الأغشية ثلاث مرات باستخدام TBST (10 دقائق لكل منها) وحضنتها بالجسم المضاد الثانوي المتوافق مع HRP (انظر جدول المواد) لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. بعد ثلاث غسلات إضافية من TBST (كل منها 10 دقائق)، تم رؤية البقع باستخدام مجموعة إضاءة كيميائية محسنة (ECL) باستخدام نظام تصوير كيميائي للتومع. عمل إنزيم غليسراالديهيد-3-فوسفات ديهيدروجيناز (GAPDH) كعنصر تحكم داخلي. تم إجراء تحليل الكثافة القياسية باستخدام برنامج ImageJ، وتم تطبيع مستويات تعبير البروتين النسبية إلى GAPDH. كانت الأوزان الجزيئية التقريبية للبروتينات المكتشفة كما يلي: vWF (~260 كيلو دالتون)، TM (~60 كيلو دالتون)، إنزيم أكسيد النيتريك الداخلي (eNOS، ~130 كيلو دالتون)، إنزيم أكسيد النيتريك المحفز (iNOS، ~130 كيلو دالتون)، PAI-1 (~45 كيلو دالتون)، t-PA (~70 كيلو دالتون)، وGAPDH (~36 كيلو دالتون). تم توفير صور كاملة الطول وغير مقصوصة لمنطقة البقعة الغربية في الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2.
11. التحليل الإحصائي
تم تحليل جميع القيم باستخدام برنامج إحصائي ورسوم بيانية وتعرض كمتوسط ± انحراف معياري (SD). تم تقييم توزيع البيانات الطبيعي باستخدام اختبار شابيرو-ويلك قبل التحليل المعلمي. تم تقييم تجانس التباين باستخدام اختبار ليفين. بالنسبة للبيانات التي تلبي افتراضات الطبيعية وتجانس التباين، تم إجراء مقارنة الفروقات باستخدام تحليل أنوفي أحادي الاتجاه تلاها اختبار دنيت بعد الوقوع للمقارنات المتعددة مع مجموعة الضبط. بالنسبة للبيانات التي لا تحقق افتراض الطبيعية، تم تطبيق اختبار كروسكال-واليس غير المتري تلاه اختبار دان بعد الواقع. في هذه الدراسة، استوفت جميع المتغيرات افتراضات الطبيعية والتباين المتساو؛ لذلك، تم تطبيق التحليلات البرامترية طوال الوقت. في برنامج التحليل، تم إدخال البيانات في جداول بيانات مجمعة، وتم اختيار تحليل ANOVA أحادي الاتجاه من قائمة تحليلات الأعمدة، وتم اختيار اختبار دانيت للمقارنات اللاحقة، وتم تحديد عتبة الدلالة عند p < 0.05.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
نموذج حيواني لالتهاب الريثيوم المزمنة المتوسطة والرجوفان الأفيزيائي
يتم عرض مخطط مخطط لتصميم التجارب والجدول الزمني في الشكل 1. كشفت الصور الممثلة لتصوير الشريان الكلوي الأيسر قبل وبعد الانصمام عبر القسطرة، كما هو موضح في الشكل 2A,B، أن فروع الشريان الكلوي الصغيرة تم إغلاقها بنجاح بعد الانصمام عبر القسطرة، كما يتضح من غياب تعتيم الشريان البعيد عند تكرار تصوير الأوعية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أسست هذه الدراسة نموذجا حيوانيا في الجسم الحي ، حيث يجمع بين الرجوع الأذيني المتوسط والرجفان الأذيني، واستكشفت مسببات خلل بطانة الأذين الأيسر تحت هذه الظروف المرضية. النتائج الرئيسية لهذه الدراسة هي كما يلي: أولا، أدى انصمام الشريان الكلوي الرئيسي الأيسر لمدة 3 أشهر في البيجل إلى تحفيز RI متوسط بنجاح. ثانيا، تم تأسيس نموذج AF بشكل فعال في البيجل. ثالثا، تأثرت وظيفة بطانة الأذين الأيسر بشكل ملحوظ في الحيوانات المصاحبة بكل من التهاب الريثوجين الأذيني والرجفيون، مصحوبة بتأثيرات مجه...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.
وقد دعم هذا العمل المشروع الرئيسي للأمراض المزمنة غير المعدية - المشروع الوطني للعلوم والتكنولوجيا (رقم 2024ZD052500، رقم 2024ZD0521504)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 81700293 ورقم 81970272)، وتمويل البحث عالي المستوى من مستشفى أنجين في بكين (مشروع التمويل رقم 2025AZB5005).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 6-0 Polypropylene suture | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | لإصلاح الشريان الفخذي |
| 5F Multipurpose catheter | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | لقسطرة الشريان الكلوي والانسداد |
| 6F Quadripolar electrode catheter | St. Jude Medical | 401443 | لإيقاع الأذين الأيمن |
| 6F Vascular introducer sheath | Terumo | RS*A60K10SQ | لدخول الشريان الفخذي |
| ABI 7500 Real-Time PCR System | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | للعزل الحراري لـ qRT-PCR وكشف الفلورسنت |
| Absorbable gelatin sponge granules (50 mg diameter) | Jinling Pharmaceutical | — | لانسداد الشريان الكلوي عبر القسطرة؛ مُعد كمحلول مع وسيط التباين والملح المائي (1:1) |
| ADMA ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E09297c | لقياس الأرجينين ثنائي الميثيل غير المتماثل في البلازما |
| Aldosterone ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E08014c | لقياس الألدوستيرون في البلازما |
| BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher Scientific | 23225 | لتحديد كمية تركيز البروتين |
| Beagles (male, 4–5 years, 10–12 kg) | Shanghai Jiao Tong University Agricultural Experimental Animal Farm Co., Ltd. | — | كلاب بيغلز ذكور سليمة؛ تُحفظ فردية تحت ظروف قياسية |
| C-arm Fluoroscopy System | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | للتوجيه الفلوري أثناء القسطرة والتصوير الوعائي |
| Chemiluminescence Imaging System | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | لرؤية نطاقات الغربلة الغربية |
| Creatinine ELISA Kit (canine) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C011-2-1 | لقياس الكرياتينين في البلازما |
| Cuffed endotracheal tube (ID 7.0–8.0 mm) | Covidien (Medtronic) | 86449 | للقسطرة داخل القصبية والتهوية الميكانيكية |
| DF-5A Cardiac Stimulator | Suzhou Dongfang Electronic Technology Research Institute | DF-5A | لإيقاع الأذين السريع؛ الإعدادات: BCL 60 مللي ثانية، عرض النبض 2 مللي ثانية، الجهد 4× العتبة |
| ECL Western Blotting Substrate | Thermo Fisher Scientific | 32106 | مجموعة الإضاءة الكيميائية المحسنة لرؤية البقع |
| EDTA Anticoagulant Tubes | BD Vacutainer | 367835 | لجمع الدم (فصل البلازما) |
| eNOS Primary Antibody (rabbit) | Cell Signaling Technology | 32027 | تخفيف 1:1000؛ للغربلة الغربية (~130 كيلو دالتون) |
| Eosin Y Solution (aqueous) | Solarbio | G1100 | لإعادة صبغ H&E (دقيقتان) |
| Foley Urinary Catheter (8 Fr) | C.R. Bard | 0165SI08 | لجمع البول الموقوت أثناء تحديد CCr |
| GAPDH Primary Antibody (rabbit) | Cell Signaling Technology | 5174 | تخفيف 1:1000؛ عنصر تحكم داخلي للغربلة الغربية (~36 كيلو دالتون) |
| GraphPad Prism (version 8.0) | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com؛ لتحليل إحصائي (ANOVA أحادي الاتجاه، اختبار Dunnett) |
| Hematoxylin Solution (Harris) | Solarbio | G1140 | لصبغ نواة H&E (5 دقائق) |
| Heparin Sodium Injection (unfractionated) | Changzhou Qianhong Biopharma | H32022088 | 4000 وحدة دولية مخففة في 10 مل من محلول ملحي طبيعي؛ لمنع التخثر أثناء القسطرة |
| HRP-conjugated Goat Anti-Mouse IgG Secondary Antibody | Cell Signaling Technology | 7076 | تخفيف 1:5000؛ للغربلة الغربية |
| HRP-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG Secondary Antibody | Cell Signaling Technology | 7074 | تخفيف 1:5000؛ للغربلة الغربية |
| hs-CRP ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E08557c | لقياس بروتين C المتفاعل عالي الحساسية في البلازما |
| IL-6 ELISA Kit (canine) | R&D Systems | CA6000 | لقياس إنترلوكين-6 في البلازما |
| ImageJ Software (version 1.53) | National Institutes of Health | — | https://imagej.nih.gov/ij/؛ لتحليل كثافة الغربلة الغربية |
| iNOS Primary Antibody (rabbit) | Abcam | ab178945 | تخفيف 1:1000؛ للغربلة الغربية (~130 كيلو دالتون) |
| Lactated Ringer's Solution | Baxter | 2B2324 | محلول وريدي؛ يُضخ بمعدل 5-10 مل/كجم/ساعة أثناء العمليات |
| Light Microscope | Olympus | BX53 | للفحص النسيجي المجهري لأقسام الكلى المصبوغة بـ HE |
| Mechanical Ventilator (veterinary) | Midmark | Matrx Model 3000 | حجم الزفير 15 مل/كجم؛ معدل التنفس 12-15 نفس/دقيقة |
| Microplate Reader | BioTek | Synergy HTX | لقياس امتصاص ELISA عند 450 نانومتر |
| Neutral Buffered Paraformaldehyde (10%) | Solarbio | P1110 | لتثبيت أنسجة الكلى (24 ساعة) |
| NO ELISA Kit (canine) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A012-1-2 | لقياس أكسيد النيتريك في البلازما |
| Non-ionic Iodinated Contrast Medium (Iohexol) | GE Healthcare | Omnipaque 350 | 5-8 مل لكل حقنة بمعدل 3 مل/ثانية لتصوير الشريان الكلوي |
| PAI-1 ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E13043c | لقياس مثبط ناشط البلازمينوجين 1 في البلازما |
| PAI-1 Primary Antibody (rabbit) | Abcam | ab66705 | تخفيف 1:1000؛ للغربلة الغربية (~45 كيلو دالتون) |
| Paraffin Wax | Leica Biosystems | 39601006 | لتضميد الأنسجة |
| PrimeScript RT Reagent Kit | Takara Bio | RR037A | للنسخ العكسي من RNA إلى cDNA |
| Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail | Thermo Fisher Scientific | 78440 | يُضاف إلى سائل RIPA لاستخلاص البروتين |
| Pulse Oximeter (veterinary) | Nonin Medical | 9847V | للمراقبة المستمرة لأكسجين الدم أثناء العمليات |
| PVDF Membranes (0.45 μm) | Millipore | IPVH00010 | لنقل البروتين في الغربلة الغربية |
| Renin ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E08700c | لقياس الرينين في البلازم |